CC BY
98
l93
ФАРМАЦИЯ
УДК 615.G3; 615.і; 615.017; 616.61 © М.Н. Кодакова, А.В. Дубищев, 2GG9
М.Н. Кодакова, А.В. Дубищев СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА РАСТИТЕЛЬНЫХ
ПРЕПАРАТОВ СЕМЕЙСТВА ИВОВЫХ
Самарский государственный медицинский университет, г. Самара
Выявление новых диуретиков среди растительных источников, в частности препаратов семейства Ивовых, является весьма актуальной задачей. В опытах на крысах установлено, что почек осины настой, коры осины отвар, тремулоидин стимулируют экскреторную функцию почек и оказывают нефропротекторное действие при острой гентамициновой нефропатии. Экстракт ивы остролистной сухой существенно не влияет на выделение почками воды, электролитов, креатинина и не оказывает защитного эффекта при токсической нефропатии. Антидиуретическое и антисалуретическое действия салицина усугубляют поражение почек при токсическом действии гентамицина. Обсуждается значение стимулированной экскреторной реакции в повышении резистентности почек к повреждающим агентам.
Ключевые слова: почек осины настой, коры осины отвар, коры ивы остролистной сухой экстракт, тремулоидин, салицин, функция почек.
M.N.Kodakova, A.V.Dubishchev COMPARATIVE EVALUATION OF PHARMACOLOGICAL EFFECTS OF PLANT PREPARATIONS OF THE WILLOW FAMILY
The identification of new diuretics among plant sources particularly preparations of the Willow family is an urgent problem. Experiments on rats have shown that aspen bud tincture, aspen barks broth, tremuloidine stimulate the excretory function of the kidneys and produce nephroprotective effects in acute gentamycin nephropathy. The dry willow extract does not influence the excretion of water, electrolits, creatinine by the kidneys and has no protective effect in toxic nephropathy. Antidiuretic and antisaluretic effects of salicine aggravate the kidney lesions in toxic effect of gentamycin. The role of stimulating excretory reactions for the renal resistance to damaging agents is determined.
Key words: aspen bud tincture, aspen barks broth, dry willow extract, tremuloidine, salicine, function of the kidneys.
Изучение лекарственных растений как источника биологически активных веществ позволило получить и широко внедрить в медицинскую практику целый ряд новых высокоэффективных лечебных препаратов. Выявление новых диуретиков среди растительных источников, в частности препаратов семейства Ивовых, является весьма актуальной задачей. Диуретические препараты должны обладать достаточно высокой специфической активностью, не вызывать выраженных побочных электролитных нарушений, быть доступными и дешёвыми [3].
К семейству Ивовых относятся хорошо известные представители - тополь, осина, ива. Почки, кора и листья растений содержат богатый набор биологически активных соединений, представляющих собой флавоноиды, фенилпропанои-ды и простые фенолы [2,5].
В коре осины доминирующим соединением является вещества фенольной природы. При исследовании коры осины методом колоночной хроматографии было выделено вещество, структурный анализ которого с помощью ЯМР-анализа и масс-спектрометрии позволил идентифицировать это вещество как тремулоидин [4]. В настоящее время изучается более детально состав коры, почек и листьев ивы и тополя. Из коры ивы выделено индивидуальное вещество гликозид салицин, который также представляет интерес как биологически активное вещество.
Целью нашего исследования является выявление и изучение диуретической и электролитовыделительной активности сложных препаратов и индивидуальных веществ, полученных из растений семейства Ивовых, в нормальных условиях и при моделировании почечной недостаточности с выяснением механизма их действия.
Материал и методы
Изучению подверглись отдельно следующие препараты: почек осины настой, коры осины отвар, коры ивы остролистной сухой экстракт, тремулоидин, салицин. Эксперименты проведены на лабораторных крысах обоего пола массой 170250 г. Контрольной группе животных перорально вводили водопроводную воду из расчёта 3 мл на 100 г массы тела. Параллельно опытные группы животных получали почек осины настой и коры осины отвар в дозе 100 мг/кг и коры ивы остролистной сухой экстракт в дозе 50 мг/кг внутрижелу-дочно; тремулоидин в дозе 50 мг/кг, салицин в дозе 10 мг/кг инъецировались подкожно. Наблюдение и сбор мочи проходил в течение 4 часов. В моче определяли концентрацию калия, натрия методом пламенной фотометрии на ПАЖ-1, креатинина - колориметрически на колориметре ФЭК -56М при длине волны возбуждения 492 нм [1]. Было бы целесообразно исследовать экскреторную активность препаратов при экспериментальной токсической нефропатии и оценить их нефропро-текторные свойства. Для этого моделировалась
острая гентамициновая токсическая нефропатия, вызываемая семидневным внутрибрюшинным введением крысам антибиотика в дозе 50 мг/кг. После инъекции антибиотика животные получали водную нагрузку в указанном объеме и помещались в обменные клетки на сутки для сбора мочи. Определялась экскреция воды, натрия, калия. Для оценки тяжести почечной недостаточности на 4, 6 и 8-е сутки экспериментального периода в моче определялось содержание креатинина, мочевины, общего белка.
Результаты и обсуждение
Оказалось, что почек осины настой в дозе 100 мг/кг, введенный внутрижелудочно, увеличивает диурез с 1,03±0,05 до 1,7±0,09 мл (Р=0, в 1,7 раза) за 4 часа наблюдения (рис. 1). Одновременно возрастает экскреция натрия с 123,45±4,92 до 201,4± 15,8,7 мкМ (Р=0, в 1,6 раза) (рис. 2). Параллельно повышается за этот период и калиурез с 94,0±3,33 до 138,3±6,24 мкМ (Р=0, в 1,5 раза). В меньшей степени возрастает выведение из организма креатинина (с 0,37±0,01 мг в контроле до 0,5±0,01 мг в опыте, Р=0,0001, в 1,3 раза).
Коры осины отвар в дозе 100 мг/кг обладает аналогичным эффектом. Препарат в дозе 100 мг/кг массы тела также стимулирует диурез (с 0,54±0,04 мл в контроле до 1,06±0,06 мл в опыте, Р=0, в 1,9 раза) (рис. 1), натриурез (с 92,44±3,57 мкМ в контроле до 187,9± 12,95 мкМ в опыте, Р=0,001, в 2 раза) (рис. 2), калиурез (с 24,1±1,39 мкМ в контроле до 57,67±3,48 мкМ в опыте, Р=0, в 2,3 раза), креатининурез (с 0,22±0,01 в контроле до 0,43±0,02 мг в опыте, Р=0, в 1,9 раза).
Тремулоидин, выделенный из осины, при подкожном введении в дозе 50 мг/кг, оказывает существенное влияние на экскреторную функцию почек. При этом значительно возрастает выведение из организма воды, диурез возрастает с 1,8±0,04 мл в контроле до 2,94±0,24 мл в опыте (Р=0,001, в 1,6 раза) (рис. 1). Параллельно увеличивается экскреция натрия с 225,2± 19,01 до 375,65±42,14 мкМ (Р=0,007, в 1,8 раза) (рис. 2). Препарат стимулирует и креатининурез с 0,81 ±0,03 до 1,28±0,12 мг (Р=0,004,в 1,6 раза).
Другое индивидуальное вещество - глико-зид салицин, полученное из коры ивы остролистной, оказывает противоположное действие на экскреторную функцию почек. Диурез уменьшается с 2,14±0,25 мл в контроле до 1,48±0,16 мл в опыте (Р=0,049 в 1,4 раза) (рис. 1), натриурез - с 219,56±14,31 до 153,82±10,88 мкМ (Р=0,002, в 1,4 раза) (рис. 2), креатининурез - 0,89±0,08 до 0,56±0,04 мг (Р= 0,004, в 1,5 раза).
Коры ивы остролистной сухой экстракт в дозе 50 мг/кг при аналогичных условиях эксперимента не влиял на выведение из организма воды, электролитов, креатинина. Показатели диуреза, натриуреза, калиуреза, креатининуреза в контроле и опыте существенно не отличаются.
В результате проведенных экспериментов установлено, что почек осины настой, коры осины отвар, тремулоидин увеличивают экскреторную функцию почек, экстракт ивы остролистной сухой
- не действует, а салицин даже угнетает выведение почками воды, электролитов, креатинина.
мл/4 часа
3
2.5
2
1.5 1 У
0.5 0 1
п
и
(В контроль □ опыт
!
Рис. 1. Влияние препаратов семейства Ивовых на почечную экскрецию воды
Рис. 2. Влияние препаратов семейства Ивовых на почечную экскрецию натрия
Одновременное введение почек осины настоя с гентамицином в течение 7 дней ослабляет гентамициновую полиурию на 4, 5, 6 и 7-е сутки наблюдения, а выведение калия, наоборот, усиливает в указанные сроки. На 8-е сутки наблюдения отличий в реакции опытной и контрольной групп нет. Характерно, что препарат стимулирует выведение креатинина на 4, 6 и 8-е сутки эксперимента, экскрецию мочевины на 8 сутки, временно на 6 -е сутки, ослабляя протеинурию. Следовательно, почек осины настой оказывает благоприятное действие, усиливая выведение из организма калия и метаболитов белкового обмена и ослабляя повреждение почек на 6-е сутки.
Аналогичное действие на функцию почек при гентамициновой нефропатии оказывает коры осины отвар.
Более выраженный протекторный эффект оказывает тремулоидин, назначаемый подкожно ежедневно в течение 7 дней параллельно вводимому гентамицину (таблица 1, О - опыт, К — контроль, Р - значение достоверности). Характерно, что препарат существенно стимулирует экскрецию воды, натрия, калия в течение экспериментального периода. О нормализации выделительной функции почек свидетельствует и возрастание выведения креатинина, мочевины и уменьшение выделения белка с мочой на 6-е сутки.
Препарат коры ивы остролистной сухой экстракт имеет слабое защитное действие. Экскреторная функция по дням изменяется разнонаправленно, а критерии поражения почек - выведение креатинина, мочевины, белка - изменяются в отдельные дни неоднозначно.
Салицин усиливает нефротоксическое дей- сутки происходит уменьшение выведения из орга-
ствие гентамицина, особенно сильно выраженное низма креатинина и мочевины. Протеинурия пре-
на 2 сутки (табл. 2). В это время существенно сни- паратом не коррегируется. жена экскреция воды, натрия, калия. На 6 и 8-е
Таблица 1
Влияние тремулоидина в дозе 50 мг/кг на экскреторную функцию ____________________________________________нефротоксических почек________________________________________
Показатель Дни эксперимента
2 3 4 5 б 7 8
.Диуре^ мл/100 г О 3,0б±0,20 1,б2±0,19 3,51±О,10 5,12±0,28 4,52±0,45 3,95±0,33 3,S1±0,33
К 3,59±0,32 0,55±0,б 1,98±0,14 3,13±0,19 2,85±0,2б 1,34±0,24 2,24±0,21
Р 0,000 0,000 0,000 0,008 0,000 0,002
Натрий, мкМ/ 100 г О 21б,91±9,71 403,57±б8,б1 532,03±51,5б б54,14±88,41 711,б4±49,75 231,85±27,23 292,89±43,51
К 319,б3±43,42 158,54±20,75 3б5,13±55,92 380,83±32,25 339,1S±51,10 131,б5±24,02 128,52±17,20
Р 0,047 0,007 0,00043 0,01б 0,000 0,014 0,005
Калий, мкМ/ 100 г О 57,8б±4,82 71,88±9,49 73,84±б,14 57,7б±б,27 54,17±4,3б 104,13±14,бб 12б,53±5,4б
К бб,9±9,43 32,00±4,01 51,11±S,31 37,35±5,57 30,30±3,25 41,33±8,50 92,б9±8,70
Р 0,003 0,044 0,027 0,001 0,003 0,00б
Креатини н, мкМ/100 г О 22,19±0,84 21,50±1,40 27,99±1,57
К 15,03±1,S3 17,34±1,43 13,44±1,14
Р 0,004 0,050 0,000
Мочевина мкМ/100 г О 1,95±0,19 2,41 ±0,21 0,57±0,10
К 1, 15±0,19 1, 15±0,10 0,б1 ±0,05
Р 0,009 0,000
Общий белок, мг/100 г О 0,91±0,04 0,S1 ±0,03 0,58±0,07
К 0,S1 ±0,08 0,98±0,04 0,81±0,07
Р 0,009 0,044
Таблица 2
Влияние салицина в дозе 10 мг/кг на экскреторную функцию нефротоксических почек_____________________________
Показатель Дни эксперимента
2 3 4 5 б 7 8
Диyре3, мл/100 г О 3,89±0,2б 0,27±0,0б 2,83±1,34 2,95±0,23 2,б4±0,20 1,90±0,11 1,53±0,24
К 3,59±0,32 0,55±0,0б 1,9S±0,14 3,13±0,19 2,85±0,2б 1,34±0,24 2,24±0,21
Р 0,00б 0,043 0,0047
Натрий, мкМ/ 100 г О 372,43±130,2б 33,87±15,79 308,77±4б,б1 285,22±44,01 324,55± 1б,9б 13б,98±9,09 113,48±25,80
К 319,б3±132,б3 158,54±64,83 3б5,13±55,92 380,83±32,25 339,1S±51,10 131,б5±24,02 128,52±17,20
Р 0,000
Калий, мкМ/ 100 г О 84,8±13,02 13,75± 13,43 44,01±8,00 2б,85±3,71 25,40±2,44 42,44±8,10 72,08± 12,29
К бб,9±9,43 32,00±54,81 51,11±S,31 37,35±5,57 30,30±3,25 41,33±8,50 92,б9±8,70
Р 0,009
Креатини н, мкМ/100 г О 13,75±1,73 11,70±1,10 8,7б±1,87
К 15,03±1,S3 17,34±1,43 13,44±1,14
Р 0,007 0,050
Мочевина мкМ/100 г О 1,00±0,1б 0,71±0,09 0,39±0,07
К 1, 15±0,19 1, 15±0,10 0,б1±0,05
Р 0,008 0,025
Общий белок, мг/100 г О 0,78±0,22 1,04±0,11 0,50±0,09
К 0,81±0,08 0,98±0,04 0,81±0,07
Р 0,02б
Следовательно, наиболее оптимальным эффектом обладает тремулоидин. Высокий уровень креатининуреза, мочевинуреза и ослабление про-теинурии на 6-й день под действием препарата свидетельствует о сохранности клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции. Более слабое влияние оказывает почек осины настой, коры осины отвар, экстракт ивы остролистной сухой. Салицин не только не обладает протекторными свойствами, но и усугубляет нефротоксичность гентамицина.
Заключение
Таким образом, из упомянутых фитопрепаратов заслуживает внимание тремулоидин, который обладает наибольшими протективными свойствами. Это проявляется в нормализации экскреторной функции почек в самый опасный период
развития острой токсической почечной недостаточности - 2-8 дни.
Анализ полученных результатов показывает, что защитный эффект фитопрепаратов связан с их диуретическим действием. Тремулоидин, почек осины настой, коры осины отвар, стимулируя экскреторную функцию почек, оказывают нефропро-текторное действие. С ослаблением диуретической и салуретической реакций уменьшается и возможность препаратов нормализовать функцию почек. Препарат с антидиуретическим эффектом оказывает на почки дополнительное повреждающее действие. Эти результаты подтверждают ранее полученные данные о защитном характере диуреза и салуреза в момент действия на почки повреждающих агентов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Берхин Е.Б., Иванов Ю.И. Методы экспериментального исследования почек и водно-солевого обмена.
- Барнаул.: Омская правда, 1972. - 200с.
2. Кортиков, В.Н. Секреты целебных трав. Популярная энциклопедия. - Минск: Белмаркет, 1995. - Т. 1.
- С. 329-330.
3. Махлаюк В.П. Лекарственные растения в народной медицине. - М.: Нива России, 1992. - 477с.
4. Правдивцева О.Е. Фармакогностическое исследование по созданию антимикробных и противовоспалительных средств на основе некоторых видов рода Рори1ш Ь.: Дис. ...канд. фармацевтических наук. -Самара, 2001.- 156с.
5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Раеотасеае - ТИуте1аеасеае - Л.: Наука, 1985. -336 с.
УДК 615.03; 615.1; 615.017; 616.61 © В.П. Панин, А.В. Дубищев, М.И. Панина, 2009
В.П. Панин, А.В. Дубищев, М.И. Панина НИТРОКСИДЭРГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ФУНКЦИИ ПОЧЕК ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ
Самарский государственный медицинский университет, г. Самара
Изучено влияние различных препаратов (фуросемида, гипотиазида, фитопрепаратов на основе сырья семейства Ивовых - осины, тополя, ивы) на экскреторную функцию почек интактных крыс. Исследовались изменения показателей диуреза, экскреции электролитов, креатинина, оксида азота под действием настоев, отваров, экстрактов фитопрепаратов. Выявлена роль оксида азота в механизмах диуретического и салуретического эффектов изучаемых препаратов. В работе также исследуется нефропротекторная активность фитопрепаратов салицина, тремулоидина, экстракта ивы при моделированной токсической острой почечной недостаточности (ОПН). Выявлены выраженное защитное действие при ОПН препарата тре-мулоидина, связанное с NO-экскреторной активностью, и менее значительный отсроченный нефропротекторный эффект экстракта ивы. Фитопрепарат салицин, уменьшающий экскрецию оксида азота с мочой, при ОПН не проявлял защитного действия.
Ключевые слова: острая почечная недостаточность, оксид азота, нефропротекторные препараты.
V.P. Panin, A.V. Dubischev, M.I. Panina NITROXYDERGIC MECHANISMS OF PHARMACOLOGICAL CORRECTION OF THE KIDNEY FUNCTION IN EXPERIMENTAL RENAL INSUFFICIENCY
The influence of various preparations (furosemide in increasing doses, hydrochlorothiazide, phytopreparations on the basis of raw materials of the willow family - aspen, poplar, willow) on excretory functions of the kidneys of healthy rats has been studied. We have studied the changes in indicators of diuresis, excretion electrolits, creatinine, nitric oxide under the influence of infusions, broths, extracts of phytopreparations. The role of nitric oxide in the mechanisms of diuretic and saluretic effects of the preparations has been determined. Nephroprotective activity of salicine, tremuloidine, willow extract in modeling toxic renal insufficiency has been studied. The expressed protective action of tremuloidine connected with NO-excretion activity, and less considerable delayed nephroprotective effect of the willow extract are revealed in renal insufficiency. Salicine reducing NO excretion with urine in renal insufficiency failed to show protective effect.
Key words: acute renal insufficiency, nitric oxide, nephroprotective preparations.
Острая почечная недостаточность (ОПН) развивается у 5% госпитализированных больных и у 30% больных отделений реанимации. Это поли-этиологическое патологическое состояние, возникающее после больших травматических повреждений, обширных и глубоких ожогов, кровотечения, массивной бактериальной инвазии, внутрисосуди-стого гемолиза, тромбоза и эмболии почечных сосудов, воздействия ряда нефротоксических веществ и т.д. Несмотря на совершенствование методов лечения, летальность при ОПН остается высокой, достигая 20% при акушерско-гинекологической патологии, 50% - при токсических и лекарственных поражениях, 70% - после травм и хирургических вмешательств и 80-100% -при полиорганной недостаточности [3]. Широкому использованию средств для фармакологической коррекции функции почек при ОПН препятствует недостаточность сведений о механизмах нефро-протекторного действия препаратов, особенно лекарственных средств растительного происхождения.
Достижением последних лет прошлого столетия стало открытие биорегуляторных свойств нитрооксида - эндогенного оксида азота (N0) [1]. Наиболее изученным на сегодняшний день является механизм нитроксидэргической регуляции тонуса сосудов и периферического кровотока. В настоящее время установлено, что N0 активно участвует в модуляции почечной гемодинамики, транспорта жидкости и электролитов, коррекции функции почек в ответ на повреждение [4]. Исследование связи нефропротекторного эффекта препаратов с возможностью изменять уровень оксида азота в почках позволит раскрыть механизм защитного действия и откроет пути поиска лечебных и профилактических препаратов.
Целью нашего исследования явилось изучение нитроксидэргических механизмов реализации нефропротекторного действия фитопрепаратов и синтетических средств при экспериментальной токсической нефропатии.
Материал и методы
Для достижения поставленной цели в опытах на интактных крысах было изучено влияние
