CC BY
28
GENERLIZED BCG-INFECTION ON THE BACKGROUND OF A SECONDARY IMMUNITY DEFICIENCY
A.A. Shurygin
Department Phthisiopulmonology Acad. Y.A. Vagner Perm State Academy of Medicine Kuibysheva str., 39, Perm, Russia, 614990
To attract the attention of medical workers to the problem of postvaccinal complications clinical observation data of lethal outcome after generalized BCG-infection caused by inoculation of immuno-biologic preparation on the background of active intrauterine herpesrvirus infection are reported.
Triggering role of opportunistic herpesvirus infection during chronic recurring course in thanato-genesis is shown.
Key words: postvaccinal complications, Bacillus Calmette-Guerin (BCG), herpesvirus infection, newborn
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИЕЛОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ОКСИПИРИДИНА
ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ХИМИОТЕРАПИИ НА МОДЕЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ ОПУХОЛИ МЫШЕЙ
А.В. Сипров, О.А. Куликов, В.А. Кузнецова, А.В. Ельмеев
Кафедра фармакологии Медицинский институт МГУ им. Н.П. Огарева Большевистская, 68, Саранск, Россия, 430005
Показано, что в эксперименте на мышах линии BDF1 с меланомой В-16 3-оксипиридин-ацетилцистеинат (3-ОПЦ) и мексидол снижают миелотоксичность цисплатина, не уменьшая его противоопухолевой эффективности в отношении первичного опухолевого узла. 3-ОПЦ более эффективно, чем мексидол, восстанавливает клеточный состав эритроидного ростка костного мозга.
Ключевые слова: 3-оксипиридинацетилцистеинат (3-ОПЦ), мексидол, цисплатин, миело-токсичность.
Перспективной группой цитостатиков, обладающих широким спектром хи-миотерапевтической активности, считаются комплексные соединения платины [1, 2]. Борьба с гематологическими осложнениями противоопухолевой химиоте-
рапии является важнейшим вопросом современной онкологии и гематологии [3]. Ранее показано, что применение комплексных соединений платины в больших дозах вызывает у животных отчетливые признаки подавления костно-мозгового кроветворения с преимущественным угнетением эритропоэза. Учитывая, что побочные эффекты антибластомных средств могут быть обусловлены их способностью оказывать токсическое воздействие на мембраны клеток, нарушением регуляции ПОЛ с образованием свободных радикалов [4], привлекают внимание по своим фармакодинамическим свойствам антиоксиданты из группы 3-оксипи-ридинов, оказывающие мембранопротекторное действие [5].
Целью данной работы явилось сравнение миелопротекторной активности мексидола и 3-оксипиридинацетилцистеината (3-ОПЦ) при проведении химиотерапии цисплатином (ЦП) у мышей с меланомой В-16.
Материалы и методика. Эксперименты выполнены на 75 мышах-самках линии BDF1 массой 18—22 г. разводки питомника ГУ НЦБМТ РАМН «Столбовая». Суспензию клеток меланомы В-16 (106 клеток в растворе Хенкса) перевивали подкожно в подмышечную впадину. Все животные были разделены на 4 группы: мыши с опухолевым штаммом меланомы В-16 без лечения (контроль В-16); животные с меланомой, получавшие химиотерапию ЦП (ООО «Лэнс-Фарм», Россия), который вводили внутрибрюшинно 2 раза с интервалом 120 часов в дозе 4 мг/кг, начиная с 7 суток с момента имплантации опухолевых клеток (В-16 + + ЦП); в следующих группах животные с меланомой получали ЦП так же, как и в предыдущей группе, в сочетании с 3-ОПЦ и мексидолом, которые вводили внутримышечно в дозе 50 мг/кг в соответствующих группах (В-16 + ЦП + 3-ОПЦ; В-16 + ЦП + мексидол), начиная с 7 суток после имплантации опухолевых клеток в течении 14 дней. В каждой группе было по15 мышей. Отдельную группу составили интактные особи.
Для оценки миелотоксичности у части животных на 14-е и 22-е сутки опыта под эфирным наркозом производился забор крови, с последующим определением содержания эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов и лейкоцитов. Из бедренной кости животных выделяли костный мозг и на предметном стекле готовили мазок. На 22-е сутки после трансплантации опухолевых клеток животные подвергались эвтаназии под эфирным наркозом. Эффективность лечения оценивали по массе первичного опухолевого узла.
Результаты обрабатывали с применением стандартных методов вариационной статистики. Достоверность различий оценивали с использованием параметрического ¿-критерия Стьюдента.
Как показали исследования, на 14-е сутки эксперимента в периферической крови животных с меланомой отмечалось снижение уровня гемоглобина на 44,35% и числа эритроцитов на 20,7% по отношению к интактным животным (р < 0,05, табл. 1). При этом число тромбоцитов и лейкоцитов не изменялось.
При химиотерапии ЦП отмечалось снижение уровня гемоглобина и эритроцитов по отношению к контрольной группе на 18,9% и 17,2% соответственно (р < 0,05). Количество тромбоцитов не изменялось, а число лейкоцитов достовер-
но снижалось на 32,7% и 39,5% по отношению к интактному и контрольному показателям соответственно. При этом число лимфоцитов не отличалось от показателя в контроле, однако становилось меньше, чем у интактнных животных на 42% (р < 0,05, табл. 1). Уровень нейтрофилов при монотерапии ЦП не изменялся.
Таблица 1
Влияние 3-ОПЦ и мексидола на клеточный состав периферической крови мышей с меланомой В-16 при терапии цисплатином (14-е сутки эксперимента)
Показатели Экспериментальные группы
интактные животные контроль (В-16) В-16 + ЦП В-16 + ЦП + + 3-ОПЦ В-16 + ЦП + + мексидол
Гемоглобин, г/л 118,6 ± 4,6 66 ± 3,8 р1 < 0,05 53,5 ± 4,1 р12 < 0,05 55,83 ± 2,36 Р12 < 0,05 54,5 ± 3,25 Р12 < 0,05
Эритроциты, X 1012/л 5,26 ± 0,18 4,17 ± 0,24 р1 < 0,05 3,45 ± 0,2 р12 <0,05 3,22 ± 0,25 Р12 < 0,05 3,68 ± 0,23 р1 < 0,05
Тромбоциты 9 X 10/л 440 ± 42 458 ± 30 403 ± 49,7 520,7 ± 42 386,6 ± 40,6 Р4 < 0,05
Лейкоциты х 109/л 4,56 ± 0,29 5,07 ± 0,74 3,07 ± 0,34 р12 < 0,05 3,77 ± 0,57 4,48 ± 0,26 р3 < 0,05
Нейтрофилы х 109/л 1,32 ± 0,23 2,49 ± 0,7 1,215 ± 0,25 1,3 ± 0,19 1,9 ± 0,14 Р34 < 0,05
Лимфоциты х 109/л 2,97 ± 0,23 2,35 ± 0,32 1,72 ± 0,19 р1 < 0,05 2,32 ± 0,5 2,29 ± 0,15 р13 < 0,05
Примечание: достоверность отличий р1 рассчитана по отношению к интактной группе; р2 — по отношению к контролю; р3 — по отношению к группе В-16 + ЦП; р4 — по отношению к группе В-16 + ЦП + 3-ОПЦ.
В группе с 3-ОПЦ количество лейкоцитов и лимфоцитов не отличалось от соответствующих показателей у интактных животных, не отличаясь в то же время от таковых и в группе с одним ЦП. Мексидол приводил к увеличению общего числа лейкоцитов на 46,2% (р < 0,05) по сравнению с группой с монотерапией ЦП. Данное изменение обусловлено увеличением числа лимфоцитов и нейтрофилов на 33% и 59,6% соответственно (р < 0,05, табл. 1). В группе с мекси-долом число нейтрофилов было на 48,5% больше, чем при введении 3-ОПЦ (р < 0,05).
На 14-е сутки эксперимента клеточный состав костного мозга мышей контрольной группы не отличался от такового у интактных животных. Под действием ЦП на 70,7% (р < 0,05) снижалось число миелоцитов по сравнению с интактными животными. При этом, более чем в 2,5 раза, возрастало число сегментоядерных нейтрофилов по сравнению с интактной и контрольной группами (р < 0,05, табл. 2). Введение ЦП приводило к угнетению эритроидного ростка кроветворения, что проявлялось исчезновением в мазках костного мозга базофильных и ок-сифильных нормоцитов, а также снижением на 95,5% (р < 0,05) числа полихро-матофильных нормоцитов по отношению к здоровым животным.
3-ОПЦ восстанавливал пул миелоцитов до интактного показателя, что на 244% больше, чем в группе В-16 + ЦП. При введении мексидола число миело-цитов возрастало по отношению к группе В-16 + ЦП на 160% (табл. 2).
Таблица 2
Влияние 3-ОПЦ и мексидола на клеточный состав костного мозга мышей с меланомой В-16 при терапии цисплатином (14-е сутки эксперимента)
Показатели, % Экспериментальные группы
интактные животные контроль (В-16) В-16 + ЦП В-16 + ЦП + + 3-ОПЦ В-16 + ЦП + + мексидол
Бласты 0,8 ± 0,35 0,5 ± 0,3 0 0,3 ± 0,3 0,24 ± 0,24
Миелоциты 6,34 ± 1,66 3,3 ± 0,5 1,86 ± 0,37 р1 < 0,05 6,4 ± 1,8 р3 < 0,05 4,84 ± 0,77 р3 < 0,05
Мета-миелоциты 4,74 ± 0,7 3,6 ± 1,1 4,18 ± 1,24 3,7 ± 0,7 5,14 ± 1,13
Палочко-ядерные нейтрофилы 29,24 ± 4,9 30,1 ± 7,4 24,4 ± 3,12 26,1 ± 3,97 36,7 ± 6,05
Сегменто- ядерные нейтрофилы 23,3 ± 1,56 24,32 ± 3,9 60,9 ± 3,84 р12 < 0,05 43,4 ± 5,7 р123 < 0,05 42,48 ± 6,7 р13 < 0,05
Базофильные нормоциты 0,72 ± 0,29 0,57 ± 0,2 0 р12 < 0,05 0,4 ± 0,24 0,1 ± 0,1 р1 < 0,05
Полихромато- фильные нормоциты 15,98 ± 1,4 14,1 ± 8,05 0,72 ± 0,54 р1 < 0,05 3,3 ± 0,8 р13 < 0,05 1,16 ± 0,35 рм < 0,05
Оксифильные нормоциты 0,48 ± 0,19 1,5 ± 0,8 0 р1 < 0,05 0,3 ± 0,3 0
Примечание: достоверность отличий р1 рассчитана по отношению к интактной группе; р2 — по отношению к контролю; р3 — по отношению к группе В-16 + ЦП; р4 — по отношению к группе В-16 + ЦП + 3-ОПЦ.
В группах с 3-ОПЦ и мексидолом достоверно снижалось число сегменто-ядерных нейтрофилов по отношению к группе с одним ЦП на 28,7% и 30,25% соответственно (табл. 2). Количество полихроматофильных нормоцитов при использовании 3-ОПЦ и мексидола оставалось достоверно ниже, чем у здоровых мышей, однако 3-ОПЦ увеличивал число полихроматофильных нормоцитов на 358,3% (р < 0,05) по сравнению с таковым в группе с одним ЦП. При этом данный показатель был на 184,5% (р < 0,05) больше, чем при применении мексидола (табл. 2).
К 22-м суткам у животных с меланомой без лечения уровень гемоглобина снижался со 118,6 ± 4,6 г/л (у интактных) до 52,8 ± 3,7 г/л (р < 0,05), а число эритроцитов с 5,26 ± 0,18 х 1012/л до 2,95 ± 0,31 х 1012/л (р < 0,05). При этом развивалась и тромбоцитопения: количество тромбоцитов достоверно снижалось с 440 ± 42,0 х 109/л до 296,7 ± 36,0 х 109/л по отношению к интактной группе. У животных-опухоленосителей имела место лимфопения: число лимфоцитов снижалось с 2,97 ± 0,23 х 109/л до 1,98 ± 0,15 х 109/л (на 33,4% относительно интактной группы, р < 0,05).
При лечении одним ЦП содержание гемоглобина и эритроцитов снижалось с 118,6 ± 4,6 г/л и 5,26 ± 0,18 х 1012/л до 55,6 ± 4,8 г/л и 3,5 ± 0,15 х 1012/л соответственно по отношению к интактной группе. Количество тромбоцитов оставалось сниженным и составило 345,7 ± 31,1 х 109/л. Также сохранялась лейкопения:
общее число лейкоцитов составило 2,53 ± 0,22 х 109/л, что достоверно меньше, чем в интактной группе (4,56 ± 0,29 х 109/л) и контроле (3,68 ± 0,33 х 109/л). При этом число лимфоцитов в группе В-16 + ЦП уменьшалось с 2,97 ± 0,23 х 109/л (у интактных) и 1,98 ± 0,15 х 109/л (в контроле) до 1,093 ± 0,12 х 109/л.
Мексидол и 3-ОПЦ достоверно повышали число тромбоцитов по отношению к группе с одним цитостатиком до значений 493,3 ± 26 х 109/л и 443,3 ± 25 х 109/л соответственно (р < 0,05). Введение 3-ОПЦ не вызывало достоверных изменений общего числа лейкоцитов по отношению к группе В-16 + ЦП, однако при этом возрастало число лимфоцитов на 49,3% и составило 1,63 ± 0,2 х 109/л (р < 0,05). По сравнению с ЦП в монорежиме применение комбинации ЦП и мексидола приводило к возрастанию общего числа лейкоцитов до 4,03 ± 0,64 х 109/л (р < 0,05) и количества лимфоцитов до 1,75 ± 0,29 х 109/л (p < 0,05).
В костном мозге на 22-е сутки опыта у опухоленосителей, не получавших лечение, число сегментоядерных нейтрофилов снизилось с 23,28 ± 1,57% до 11,34 ± 3,1% (на 51,3%, p < 0,05). При воздействии ЦП отмечалось достоверное возрастание числа миелоцитов до 16,44 ± 2,9% по сравнению с интактной (6,34 ± 1,66%) и контрольной (4,74 ± 1,5%) группами. При этом число палоч-коядерных нейтрофилов увеличилось с 29,24 ± 4,9% до 43,28 ± 3,2% по отношению к интактным животным. Количество сегментоядерных нейтрофилов при монотерапии ЦП составило 12,06 ± 3,8%, что на 48,2% ниже, чем у интактных мышей (р < 0,05). В эритроидном ростке под влиянием ЦП достоверно по отношению к интактному показателю снижалось число базофильных (с 0,76 ± 0,27% до 0,04 ± 0,04%), полихроматофильных (с 15,98% ± 1,4% до 8,2 ± 1,7%) нормо-цитов и исчезали оксифильные. Применение мексидола и 3-ОПЦ не приводило к достоверным изменениям числа созревающих гранулоцитов (миелоцитов и метамиелоцитов) по отношению к группе с одним ЦП, однако при применении 3-ОПЦ число миелоцитов (10,9 ± 2,3%) и метамиелоцитов (3,64 ± 1,46%) достоверно не отличалось от такового в интактной (6,34 ± 1,66% и 4,74 ± 0,7% соответственно) и контрольной (4,74 ± 1,5% и 3,5 ± 1,11%) группах, чего нельзя сказать о группе с мексидолом, где уровни миелоцитов (16,2 ± 2,9%) и метамиелоцитов (9,46 ± 1,42%) были достоверно выше, чем в контроле и у интактных мышей. При этом количество метамиелоцитов в группе с 3-ОПЦ было на 61,5% (р < 0,05) меньше, чем в группе с мексидолом.
Число сегментоядерных нейтрофилов на фоне 3-ОПЦ составило 11,14 ± 2,7%, что достоверно меньше, чем у интактных мышей (23,28 ± 1,57%), а в группе с мексидолом данный показатель составил 16,16 ± 3,5% и не отличался от ин-тактного. В группе с 3-ОПЦ число полихроматофильных (14,2 ± 5,51%) и окси-фильных (0,66 ± 0,54%) нормоцитов не отличалось от такового в интактной группе, а на фоне мексидола количество полихроматофильных (6,8 ± 2,35%) и оксифиль-ных (0%) нормоцитов было достоверно меньше, чем у здоровых мышей.
Химиотерапия ЦП приводила к достоверному снижению массы первичного опухолевого узла с 11,16 ± 0,47 г до 8,36 ± 0,99 г. Масса опухоли в группе с 3-ОПЦ
и мексидолом составила 7,375 ± 0,4 г и 7,58 ± 0,63 г соответственно и не отличалась от таковой в группе с ЦП в монорежиме.
Таким образом, изучаемые антиоксиданты корригируют некоторые проявления миелотоксичности цисплатина, что на 14-е сутки проявляется в увеличении числа лейкоцитов, нейтрофилов, лимфоцитов в периферической крови, и повышении количества миелоцитов при снижении числа сегментоядерных нейтрофилов в костном мозге, а 3-ОПЦ повышает и число полихроматофильных нормоцитов. На 22-е сутки 3-ОПЦ и мексидол увеличивают число тромбоцитов и лимфоцитов в периферической крови, а общий уровень лейкоцитов — только мексидол. В костном мозге мексидол корригирует изменения гранулоцитарного ростка, не влияя на эритроидный, а 3-ОПЦ более эффективен в отношении восстановления клеточного состава эритроидного ростка кроветворения. Оба антиоксиданта не снижают противоопухолевого эффекта ЦП.
ЛИТЕРАТУРА
[1] Гарин А.М., Хлебнов А.В. Справочник практической химиотерапии опухолей. — М., 1995.
[2] Дыгай А.М., Жданов В.В., Зюзьков Г.Н. и др. Механизмы регуляции кроветворения при моделировании цитостатической миелосупрессии карбоплатином // Бюл. экспер. биол. — 2007. — Т. 143. — № 5.— С. 515—518.
[3] Дыгай А.М., Скурихин Е.Г., Першина О.В. и др. Роль центральных адренергических структур в регуляции гранулоцитопоэза при цитостатических воздействиях // Бюл. экспер. биол. — 2008.— Т. 145. — № 4. — С. 383—388.
[4] Сипров А.В., Кинзирская Ю.А. Применение эмоксипина для коррекции гематотоксично-сти циклофосфана в эксперименте // Бюл. экспер. биол. — 2008. — Т. 146. — № 7. — С. 72—75.
[5] Шишкина М.В., Хохлова Т.Ю., Шмырев В.И. и др. Влияние лекарственных средств на сво-боднорадикальное окисление // Экспер. и клин. фармакол. — 2000. — Т. 63. — № 1 — С. 72—78.
THE COMPARATIVE FEATURE OF MYELOPROTECTIVE ACTIVITY
OF SOME 3-OXIPIRIDINE DERIVATIES AT CHEMOTHERAPY BY THE MODEL OF THE INTERWEAVED TUMOR OF MICE
A.V. Siprov, V.A. Kuznetsova, A.V. Elmeev, O.A. Kulikov
Pharmacology department Medical institute N.P. Ogarev Mordovsky State University Bolshevistskaia, 68, Saransk, Russia, 430005
It is shown that in experiment in mice of the line BDF1 with melanoma B-16 the 3-oxipiri-dinacetylcysteinate (3-OPC) and mexidol reduce myelosupression of the cisplatin, not reducing its antitumor efficiency with respect to primary tumorous knot. The 3-OPC more effectively than mexidol restores erythroid cells of the marrow.
Key words: 3-oxipiridinacetylcysteinate, mexidol, cisplatin, myelosupression.
