CC BY
74
© ПОЛЯКОВА Е.М., БОжКОВА С.А., 2015 УДК 616.71-018.46-002-022-085.33.015.8-078
Полякова Е.М., Божкова С.А.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ФЕНОТИПИЧЕСКОЙ И ГЕНОТИПИЧЕСКОЙ УСТОЙЧИВОСТИ К АМИНОГЛИКОЗИДАМ ШТАММОВ STAPHYLOCOCCUS AUREUS, ВЫДЕЛЕННЫХ В ТРАВМАТОЛОГО-ОРТОПЕДИЧЕСКОМ СТАЦИОНАРЕ
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им. Р.Р. Вредена» Минздрава России, 195427, г. Санкт-Петербург
Клинические изоляты Staphylococcus aureus (n = 102) изучены на чувствительность к гентамицину, тобрамицину, не-тилмицину и амикацину дискодиффузионным методом. Методом полимеразной цепной реакции проведен анализ всех штаммов на наличие в их геноме генов aac(6')-Ie/aph(2"), antl, aac, ant(6)-Ia, aph(3')-IIIa и ant(4')-Ia, кодирующих ами-ногликозидмодифицирующие ферменты. Штаммы, чувствительные к аминогликозидам, не содержали в геноме данных генов. В геноме всех штаммов, устойчивых к аминогликозидам, присутствовало не менее двух из перечисленных генов. Отмечена 100% корреляция между фенотипическойустойчивостью изученных штаммов к аминогликозидам и наличием у них гена aac(6')-Ie/aph(2").
Ключевые слова: Staphylococcus aureus; аминогликозиды; гены устойчивости к аминогликозидам; диско-диффузионный метод; полимеразная цепная реакция.
Для цитирования: Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60(11): 50-53.
Poliakova E.M., Bojkova S.A.
THE COMPARATIVE CHARACTERISTIC OF PHENOTYPIC AND GENOTYPIC RESISTANCE TO AMINOGLYCOSIDES OF STRAINS STAPHYLOCOCCUS AUREUS ISOLATED IN TRAUMATOLOGICAL ORTHOPEDIC HOSPITAL.
The R.R. Vreden Russian research institute of traumatology and orthopedics of Minzdrav of Russia, 195427 St. Petersburg, Russia
The clinical isolates of Staphylococcus aureus (n=102) were analyzed on .sensitivity and to gentamicin, tobramicin, netimicin and amikacin. The disc diffusing technique was applied. The technique of polymerase chain reaction was applied to analyze all strains establishing presence in their genomes genes aac(6')-Ie/aph(2"), ant1, aac, ant(6)-Ia, aph (3')-IIIa and ant(4')-Ia coding amino-glycoside-modifying enzymes. The strains sensitive to amino-glycosides had no the given genes in genome. The genome of all strains resistant to amino-glycosides included no less than two of enumerated genes. The 100% correlation was established between phenotypic resistance of analyzed strains to amino-glycosides and availability in them of gene aac(6')-Ie/aph(2").
Keywords: Staphylococcus aureus; amino-glycosides; genes of resistance to amino-glycosides; disc diffusing technique; polymerase chain reaction
Citation: Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2015; 60 (11): 50-53. (in Russ.)
Введение. Staphylococcus aureus является наиболее распространенным возбудителем инфекции области хирургического вмешательства и остеомиелита в стационарах травматолого-ортопедического профиля [1-3]. При этом более 70% клинических изолятов S. aureus составляют метициллинчувствительные штаммы, подавляющее большинство которых чувствительны к аминогликозидам [4, 5]. Распространенной практикой локальной профилактики и лечения подобных инфекционных осложнений является добавление антибиотиков группы аминогликозидов, в частности гентамицина и тобрамицина, в костный цемент, который широко применяют для фиксации компонентов эндопротезов у пациентов с остеопорозом или для замещения дефектов костной ткани при лечении инфекционных осложнений или остеомиелита [6-8]. Аминогликозиды не рекомендуется использовать для системной монотерапии стафилококковых инфекций [9], так как существуют другие эффективные, но менее токсичные антистафилококковые препараты. Однако в ряде случаев аминогликозиды применяют в составе комбинированной антибиотикотерапии для лечения инфекций, вызванных S. aureus, с целью усиления
Для корреспонденции: Полякова Екатерина Михайловна, [email protected]
For correspondence: Poliakova E.M., ekaterinapolyakova@ rambler.ru
бактерицидного действия, а также в случаях выделения штаммов, резистентных к другим антибактериальным препаратам, или непереносимости пациентом препаратов других групп [10].
Устойчивость S. aureus к аминогликозидам обусловлена наличием генов, кодирующих аминогликозид-модифицирующие ферменты, которые нарушают связывание молекул антибиотиков с рибосомами бактериального возбудителя, что препятствует антибактериальному действию аминогликозидов. В настоящее время описано значительное число характерных для S. aureus генов устойчивости к аминогликозидам. Однако подавляющее большинство данных о распространенности этих генов относится к штаммам S. aureus, выделенным в других странах [11-14]. Кроме того, существует недостаток сведений относительно корреляции данных генов в геноме штаммов S. aureus с их фенотипической устойчивостью к аминогликозидам.
Целью данного исследования является сравнительная характеристика фенотипической и генотипической устойчивости клинических изолятов S. aureus к различным антибиотикам группы аминогликозидов.
Материалы и методы. В работе исследованы клинические изоляты S. aureus (n = 102), выделенные в 2012-2014 гг. у пациентов, проходивших лечение в РНИИТО им. Р.Р. Вре-дена по поводу инфекций области хирургического вмешательства после травм и ортопедических операций или остеомиелита. Исследованные изоляты включали 83 метициллин-
Таблица 1
Праймеры, использованные в работе
Ген Последовательность праймера (5'^3') Размер продукта, п. н. Температура отжига, °С
aac(6')-Ie/aph(2") TGCCACACTATCATAACCAC GCCACAAATGTTAAGGCAAT 102 55,5
ant(6)-Ia AACATAGCTGTCCGTTTGC TGCTGTGCCATAGAAGATGT 266 56,5
antl GGTGGTTTACGCATTAACAG TCACCAGTAGTCACTGTTTG 479 55,5
aph(3')-IIIa CACAAAGATGTTGCTGTCTC TTGCTCGGAAGAGTATGAAG 304 55,5
aac CATGGCAAGCTCTAGGATT GGCTGAGTTTATGGAAGAAG 323 55,0
ant(4')-Ia GTTTGGGCTTCTACCGATTT CTCAGGTGGAATCAGATTGG 121 55,5
Таблица 2
Распределение изученных штаммов S. aureus по их фенотипической устойчивости к амино-гликозидам
Штаммы Число Фенотип
штаммов Gen+, Ami+, Tob+, Net+ Gen+, Ami', Tob+, Net+ Gen+, Ami-, Tob+, Net+ Gen-, Ami-, Tob-, Net- Gen+ Ami+ Tob+ Net+
MRSA 83 61,45% 3,61% 2,41% 32,53% 67,47% 61,45% 67,47% 67,47%
MSSA 19 0 0 0 100% 0 0 0 0
Всего... 102 50% 2,94% 1,96% 45,1% 54,9% 50% 54,9% 54,9%
П р и м е ч а н и е. Здесь и на рис. 2: Gen - гентамицин, Ami - амикацин, Tob - тобрамицин. Net - нетилмицин; индексы + - устойчивость, — чувствительность, ' - промежуточная устойчивость.
метициллинчувствительных
резистентных (MRSA) и 19 штаммов S. aureus (MSSA).
Бактериальные культуры выращивали на плотных питательных средах: колумбийский агар с 5% бараньей крови («Биомедиа», Россия) и агар Мюллера-Хинтона (Oxoid, Великобритания) в течение 18-20 ч при 37°С. Бактериальный анализ чувствительности штаммов к аминогликозидам проводили при помощи дискодиффузионного метода (ДДМ) в соответствии с МУК 4.2.1890-04 и международными стандартами EUCAST [15, 16]. В ходе исследования были использованы диски для определения чувствительности к гентамицину (10 мкг), амикацину (30 мкг), тобрамицину (10 мкг) и нетилмицину (10 мкг) производства oxoid (Великобритания). В качестве контрольного штамма был использован штамм S. aureus ATCC 29213.
Анализ последовательностей бактериальных геномов, оценку разнообразия аллелей исследуемых генов и подбор праймеров проводили при помощи программ BLAST, Primer Blast и PerlPrimer v1.1.21.
ДНК исследуемых штаммов выделяли при помощи коммерческого набора для выделения ДНК из бактериальных клеток (БиоСилика, Россия). Гены устойчивости к амино-гликозидам выявляли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на амплификаторе CFX96 (Bio-Rad, США) с использованием праймеров, представленных в табл. 1. Условия реакции: 95°С - 3 мин; 33 цикла: 95°С - 10 с; отжиг праймеров - 15 с; 72°С - 15 с. Визуализацию результатов ПЦР осуществляли при помощи электрофореза в 1% агарозном геле и окраски бромистым этидием.
Результаты и обсуждение. Оценка фенотипической чувствительности штаммов S. aureus к аминогликозидам (ДДМ). Все штаммы MSSA и 32,53% штаммов MRSA были чувствительны ко всем исследуемым аминогликозидам; 3,61% штаммов MRSA были резистентны к гентамицину, тобрамицину и не-тилмицину, но характеризовались промежуточной устойчивостью к амикацину; 2,41% штаммов MRSA были чувствительны к амикацину, несмотря на устойчивость к другим аминогликозидам (табл. 2); 61,45% штаммов MRSA были резистентны ко всем тестируемым антибиотикам.
Сходная распространенность гентамицин-резистентных штаммов MRSA описана для ряда других стран: 60,53% (Греция), 61,7% (Япония) и 90,2% (Турция) [11-13]. К сожалению, данных по устойчивости S. aureus к другим аминогликозидам недостаточно, и в основном они относятся к штаммам MRSA. Так, в Японии была показана большая устойчивость штаммов MRSA к тобрамицину (95,3%), чем к гентамицину (61,7%), в то время как в нашем исследовании доля устойчивых к гентамицину и тобрамицину штаммов MRSA была одинакова (67,47%) (см. табл. 2). Проводить сравнение с данными, полученными в других странах, достаточно сложно из-за существенных различий соотношения штаммов MRSA и MSSA в выборках, а также отсутствия сведений о том, какую часть изученных штаммов S. aureus составляли штаммы MSSA, крайне редко характеризующиеся устойчивостью к аминогликозидам [4, 5].
ПЦР-анализ наличия генов устойчивости к аминогликозидам у штаммов S. aureus. Результаты ПЦР-анализа 102 штаммов S. aureus, изученных на наличие генов устойчивости к аминогликозидам, приведены в табл. 3.
Наиболее распространенным был ген aac(6')-Ie/aph(2"), выявленный у 54,9% всех изученных штаммов (MRSA + MSSA). Гены aac и antl обнаружены у 50,98 и 11,76% штаммов соответственно; гены ant(6)-Ia и aph(3')-IIIa - только у 0,98%. Ген ant(4')-Ia не выявлен среди изучаемых штаммов,
Таблица
Результаты ПЦР-анализа штаммов S. aureus на наличие генов устойчивости к аминогликозидам
Ген Все штаммы S. MRSA MSSA
aureus (n = 102) (n = 83) (n = 19)
n % n % n %
aac(6')-Ie/aph(2") 56 54,9 56 67,47 0 0
antl 12 11,76 12 14,46 0 0
aac 52 50,98 52 62,65 0 0
ant(6)-Ia 1 0,98 1 1,21 0 0
aph(3')-IIIa 1 0,98 1 1,21 0 0
ant(4')-Ia 0 0 0 0 0 0
3
aac(6')-le/aph(2")+ant1+ant(6)-la+aph(3')-llla (3,57%)
aac(6')-le/aph(2")+ant1+aac (14,29%) ■ aac(6')-le/aph(2")+ant1 (3,57%)
aac(6')-le/aph(2")+aac (78,57%)
Рис.1. Распределение резистентных штаммов S. aureus в зависимости от комбинаций генов устойчивости к аминогликозидам, присутствующих в их геноме.
%
100 80 60 40 20
I
Gen*, Ami*, Gen*, Ami1, Gen*, Ami", Tob*, Net* Tob*, Net* Tob*, Net* (л = 51) (n = 3) (n = 2)
Фенотип
aac(6')-le/aph(2") aac
□ ant(6)-la И aph(3')-llla
Gen", Ami", Tob", Netr (n = 46)
HH antl Ш art(4')-la
Рис.2. Распределение штаммов по наличию генов устойчивости к аминогликозидам в зависимости от фенотипа.
хотя в ряде исследований он встречается у 26-84% штаммов в зависимости от региона их выделения [5, 13, 14].
Анализ комбинаций генов резистентности к аминогликозидам в геноме каждого штамма показал, что наиболее распространенным сочетанием генов была комбинация aac(6')-Ie/aph(2") + aac, присутствующая в геноме 78,57% штаммов (рис. 1). В геноме 14,29% штаммов одновременно присутствовали гены aac(6')-Ie/aph(2"), antl и aac. Комбинации генов aac(6')-Ie/aph(2") + antl и aac(6')-Ie/aph(2") + antl + ant(6)-Ia + aph(3')-IIIa были выявлены в геноме только 3,57% штаммов.
Корреляция результатов ДДМ и ПЦР-анализа. В результате проведенного исследования было показано, что все штаммы S. aureus, фенотипически устойчивые к гентамицину, тобра-мицину и нетилмицину, содержали в своем геноме не менее двух генов устойчивости к аминогликозидам (рис. 2).
Штаммы, устойчивые к гентамицину, нетилмицину и тобрамицину, но чувствительные или обладающие промежуточной устойчивостью к амикацину, также характеризовались присутствием в геноме генов устойчивости к аминогли-козидам. В геноме всех штаммов S. aureus, согласно результатам ДДМ чувствительных к аминогликозидам (n = 46), не выявлен ни один из исследуемых генов устойчивости.
Учитывая 100% распространенность гена aac(6')-Ie/ aph(2") среди изученных нами штаммов S. aureus, устойчивых к аминогликозидам (см. рис. 2), и его высокую распространенность согласно публикациям ряда авторов [11, 12], данный ген может быть использован в качестве генетического маркера, в частности в составе мультиплексной ПЦР в
сочетании с еще одним-двумя наиболее распространенными генами резистентности к аминогликозидам.
Заключение. Фенотипическая устойчивость штаммов S. aureus к аминогликозидам ассоциирована с присутствием в их геноме хотя бы одного из генов устойчивости к данным антибиотикам. В случае изученных нами штаммов отмечена 100% корреляция фенотипической устойчивости штаммов с наличием в их геноме гена aac(6')-Ie/aph(2"). Данный ген может быть рекомендован для дальнейшего изучения в качестве возможного генетического маркера устойчивости S. aureus к аминогликозидам.
ЛИТЕРАТУРА
1. Божкова С.А., Разоренов В.Л., Петрова Т.М. Микробиологический мониторинг - основа рациональной стратегии и тактики антибактериальной терапии инфекции костей и протезированных суставов. Тольяттинский медицинский консилиум. 2011; (3-4): 33-42.
2. Розова Л.В., Годовых Н.В. Сравнительная характеристика видового состава микроорганизмов при хроническом посттравматическом и гематогенном остеомиелите. Гений Ортопедии. 2014; (2): 56-9.
3. Шаповал С.Д., Савон И.Л., Якунич А.Н., Максимова О.О. Резистентные и полирезистентные возбудители гнойно-некротических осложнений синдрома диабетической стопы. Новости хирургии. 2015; 23 (1): 70-6.
4. Божкова С.А., Тихилов Р.М., Краснова М.В., Рукина А.Н., Тишина В.В., Полякова Е.М. и др. Профиль резистентности возбудителей как основа выбора эффективного антибиотика при стафилококковых инфекциях протезированных суставов. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2013; 15 (2): 115-23.
5. Schmitz F.J., Fluit А.С., Gondolf M., Beyrau R, Lindenlauf E., Verhoef J. et.al. The prevalence of aminoglycoside resistance and corresponding resistance genes in clinical isolates of staphylococci from 19 European hospitals. J. Antimicrob. Chemother. 1999; 43(2): 253-9.
6. Привольнев В.В., Родин А.В., Каракулина Е.В. Местное применение антибиотиков в лечении инфекций костной ткани. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2012; 14 (2): 118-31.
7. Duffy R.K., Shafritz А.В. Bone cement. J. Hand. Surg. Am. 2011; 36(6): 1086-8.
8. Jiranek W.A., Hanssen A.D., Greenwald A.S. Antibiotic-loaded bone cement for infection prophylaxis in total joint replacement. J. Bone Joint. Surg. Am. 2006; 88(11): 2487-500.
9. Страчунский Л.С., Белоусов Ю.Б., Козлов С.Н. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. М.: Боргес; 2002.
10. Фомина И.П. Современные аминогликозиды. Значение в инфекционной патологии, особенности действия. Российский медицинский журнал. 1997; 5 (21): 1382-91.
11. Yildiz О., Çoban A., Çener A., Coçkuner S., Bayramoglu G., Guducuoglu H. et.al. Antimicrobial susceptibility and resistance mechanisms of methicillin resistant Staphylococcus aureus isolated from 12 Hospitals in Turkey. Ann. Clin. Microbiol. Antimicrob. 2014; 13 (1): 44.
12. Polyzou A., Slavakis A., Pournaras S., Maniatis A.N., Sofianou D., Tsakris A. Predominance of methicillin-resistant staphylococcus aureus clone susceptible to erythromycin and several other non-P-lactam antibiotics in a Greek hospital. J. Antimicrob. Chemother. 2001; 48 (2): 231-4.
13. Ida T., Okamoto R., Shimauchi C., Okubo T., Kuga A., Inoue M. Identification of Aminoglycoside-Modifying Enzymes by Susceptibility Testing: Epidemiology of Methicillin-Resistant Staphylococ-cus aureus in Japan. J. Clin. Microbiol. 2001; 39 (9): 3115-21.
14. Hauschild T., Sacha P., Wieczorek P., Zalewska M., Kaczynska K., Tryniszewska E. Aminoglycosides resistance in clinical isolates of Staphylococcus aureus from a University Hospital in Bialystok, Poland. Folia Histochem Cytobiol. 2008; 46 (2): 225-8.
15. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, МУК 4.2.1980-04 Минздрава России, 2004.
16. EUCAST Clinical Breakpoint Table v. 5.0 (2015). Available at: http://www.eucast.org/fileadmin/src/media/PDFs/EUCAST_files/ Breakpoint_tables/v_5.0_Breakpoint_Table_01.pdf
Поступила 20.04.15
REFERENCES
1. Bozhkova S.A., Razorenov V.L., Petrova T.M. Mikrobiologicheskiy monitoring - osnova ratsional'noy strategii i taktiki antibakterial'noy terapii infektsii kostey i protezirovannykh sustavov. Tol'yattinskiy meditsinskiy konsilium. 2011; (3-4): 33-42. (in Russian)
2. Rozova L.V., Godovykh N.V. Sravnitel'naya kharakteristika vi-dovogo sostava mikroorganizmov pri khronicheskom posttravmat-icheskom i gematogennom osteomielite. Geniy Ortopedii. 2014; (2): 56-9. (in Russian)
3. Shapoval S.D., Savon I.L., Yakunich A.N., Maksimova O.O. Rezis-tentnye i polirezistentnye vozbuditeli gnoyno-nekroticheskikh oslo-zhneniy sindroma diabeticheskoy stopy. Novosti khirurgii. 2015; 23 (1): 70-6. (in Russian)
4. Bozhkova S.A., Tikhilov R.M., Krasnova M.V., Rukina A.N., Tishi-na V.V., Polyakova E.M. i dr. Profil' rezistentnosti vozbuditeley kak osnova vybora effektivnogo antibiotika pri stafilokokkovykh infek-tsiyakh protezirovannykh sustavov. Klinicheskaya mikrobiologiya i antimikrobnayakhimioterapiya. 2013; 15 (2): 115-23. (in Russian)
5. Schmitz F.J., Fluit A.C., Gondolf M., Beyrau R, Lindenlauf E., Ver-hoef J. et.al. The prevalence of aminoglycoside resistance and corresponding resistance genes in clinical isolates of staphylococci from 19 European hospitals. J. Antimicrob. Chemother. 1999; 43(2): 253-9.
6. Privol'nev V.V., Rodin A.V., Karakulina E.V. Mestnoe primenenie antibiotikov v lechenii infektsiy kostnoy tkani. Klinicheskaya mikrobiologiya i antimikrobnaya khimioterapiya. 2012; 14 (2): 118-31. (in Russian)
7. Duffy R.K., Shafritz A.B. Bone cement. J. Hand. Surg. Am. 2011; 36(6): 1086-8.
8. Jiranek W.A., Hanssen A.D., Greenwald A.S. Antibiotic-loaded bone cement for infection prophylaxis in total joint replacement. J. Bone Joint. Surg. Am. 2006; 88(11): 2487-500.
9. Strachunskiy L.S., Belousov Yu.B., Kozlov S.N. Prakticheskoe ruk-ovodstvopo antiinfektsionnoy khimioterapii. Moscow: Borges; 2002. (in Russian)
10. Fomina I.P. Sovremennye aminoglikozidy. Znachenie v infektsion-noy patologii, osobennosti deystviya. Rossiiskyi Meditsinskyi Zhur-nal. 1997; 5 (21): 1382-91. (in Russian)
11. Yildiz O., Qoban A., §ener A., Cojkuner S., Bayramoglu G., Guducuoglu H. et.al. Antimicrobial susceptibility and resistance mechanisms of methicillin resistant Staphylococcus aureus isolated from 12 Hospitals in Turkey. Ann. Clin. Microbiol. Antimicrob. 2014; 13 (1): 44.
12. Polyzou A., Slavakis A., Pournaras S., Maniatis A.N., Sofianou D., Tsakris A. Predominance of methicillin-resistant staphylococcus aureus clone susceptible to erythromycin and several other non-P-lactam antibiotics in a Greek hospital. J. Antimicrob. Chemother. 2001; 48 (2): 231-4.
13. Ida T., Okamoto R., Shimauchi C., Okubo T., Kuga A., Inoue M. Identification of Aminoglycoside-Modifying Enzymes by Susceptibility Testing: Epidemiology of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus in Japan. J. Clin. Microbiol. 2001; 39 (9): 3115-21.
14. Hauschild T., Sacha P., Wieczorek P., Zalewska M., Kaczynska K., Tryniszewska E. Aminoglycosides resistance in clinical isolates of Staphylococcus aureus from a University Hospital in Bialystok, Poland. FoliaHistochem. Cytobiol. 2008; 46 (2): 225-8.
15. Metodicheskie ukazaniya po opredeleniyu chuvstvitel'nosti mikroorganizmov k antibakterial'nym preparatam, MUK 4.2.198004 Minzdrava Rossii, 2004. (in Russian)
16. EUCAST Clinical Breakpoint Table v. 5.0 (2015). Available at: http://www.eucast.org/fileadmin/src/media/PDFs/EUCAST_files/ Breakpoint_tables/v_5.0_Breakpoint_Table_01.pdf
©КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015 УДК 616.155.392:579.842.11.083
Коробова А.Г., Фролова И.Н., Клясова Г.А.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СЕЛЕКТИВНОЙ ХРОМОГЕННОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ С ПРОДУКЦИЕЙ БЕТА-ЛАКТАМАЗ
ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава Российской Федерации, 125167, г. Москва
Изучали детекцию энтеробактерий с продукцией бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС) на селективной хромо-генной среде и сравнивали результаты детекции БЛРС с методом «двойных дисков». Мазки со слизистой ротоглотки и прямой кишки от больных исследовали параллельно на плотных питательных средах (Эндо или Мак-Конки) и на селективной среде CHROMagar^MESBL (CHROMagar, Франция). Продукцию БЛРС среди энтеробактерий подтверждали методом «двойных дисков». Для исключения гиперпродукции ampC бета-лактамаз использовали E-тест, содержащий це-фотетан и цефотетан с клоксациллином. При исследовании 1552 образцов от больных было выделено 1243 штамма энтеробактерий на агаре Эндо или Мак-Конки и 409 штаммов энтеробактерий на селективной среде CHROMagar™ESBL (Escherichia coli n=226, Klebsiella pneumoniae n = 105, Enterobacter spp. n = 35, Citrobacter spp. n=21, другие n= 22). Методом «двойных дисков» была подтверждена продукция БЛРС у 386 (94%) из 409 штаммов, выделенных на среде CHROMagar^IMESBL. У 23 (6%) штаммов подтверждения не было, из них у 15 была выявлена гиперпродукция ampC бета-лактамаз, а 8 были чувствительны к цефалоспоринам III поколения. Все энтеробактерии, выделенные на агаре Эндо или Мак-Конки, также тестировали методом «двойных дисков». Всего было получено 394 штамма энтеробактерий с продукцией БЛРС, из них на обеих средах (агар Эндо/Мак-Конки и CHROMagar^ESBL) - 263 (67%%) штамма, только на среде CHROMaga^ESBL - 123 (31%), только на среде Эндо/Мак-Конки - 8 (2%); p < 0,0001. Чувствительность селективной среды CHROMaga^ESBL составила 98%, специфичность - 97%%. Заключение об обнаружении энтеробактерий, продуцирующих БЛРС, представляли в клинику через 18-24 ч после поступления образцов от больных в лабораторию. CHROMagar^^SBL имеет высокую чувствительность и специфичность для выявления энтеробактерий с продукцией БЛРС и может быть использован в рутинной лабораторной практике.
Ключевые слова: хромогенные селективные среды; бета-лактамазы расширенного спектра; БЛРС; энтеробак-терии; антибиотикорезистентность.
Для цитирования: Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60(11): 53-57.
Д л я к о р р е с п о н д е н ц и и: Коробова Анна Геннадьевна, [email protected] For correspondence: KorobovaA.G., [email protected]
