Способ определения уровня содержания гормонов, указывающих на беременность, в кровяных пятнах на вещественных доказательствах Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ

© А. В. Коноваленко, О. Д. Ягмуров, В. Л. Сидоров, 2011 г. УДК 618.2/.3:612.621.31]-07

A. В. Коноваленко, О. Д. Ягмуров,

B. Л. Сидоров

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ СОДЕРЖАНИЯ ГОРМОНОВ, УКАЗЫВАЮЩИХ НА БЕРЕМЕННОСТЬ, В КРОВЯНЫХ ПЯТНАХ НА ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВАХ

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова; Бюро судебно-медицинской экспертизы, Санкт-Петербург

ВВЕДЕНИЕ

Одной из дополнительных возможностей судебно-медицинской экспертизы, которая может служить для дифференцирования пятен крови на вещественных доказательствах, является определение крови беременной женщины в отличие от крови других женщин (мужчин), не страдающих онкологическими заболеваниями [7]. Методами иммуноферментного анализа (ИФА) и радиоиммунологического анализа (РИА) можно достаточно успешно и достоверно определять уровень содержания таких гормонов, как эстрадиол, прогестерон, хорионический гонадотропин человека (ХГЧ), плацентарный лактоген, альфа-фетопротеин, в пятнах крови на вещественных доказательствах [5-8]. При высоком содержании в пятнах крови двух или трех из вышеперечисленных гомонов определяется принадлежность крови беременной женщине. Основным гормоном, по содержанию которого в сыворотке крови делают выводы о беременности в клинических диагностических лабораториях, является хориони-ческий гонадотропин (ХГ, хориогонадотропин) -белковый гормон приматов. Физиологическая роль ХГ состоит в поддержании нормального развития беременности. ХГ стимулирует продуцирование желтым телом, образующимся в яичниках при беременности, стероидных гормонов прогестерона и эстрагенов, что является необходимым условием для сохранения беременности. ХГ также участвует в регуляции других процессов, связанных с нормальным течением беременности, в том числе препятствует отторжению зародыша в материнском организме, влияя на иммунные процессы [1]. В первой половине XX столетия широко применялось биологическое распознавание беременности по Ашгейму и Цондеку [2]. Принцип метода заключается в том, что у женщин с первых дней беременности из передней доли мозгового придатка поступает в кровь и оттуда в мочу повышенное по сравнению с нормальным состоянием количество гормона, влияющего на яичник в двух направ-

лениях: изменяя его морфологически и усиливая его внутрисекреторную активность. Для обнаружения в моче повышенного количества гормона проводится проба на лабораторных мышах. Моча беременных женщин вызывает характерные изменения в их яичниках, которые исследуют морфологически и находят в них характерные для беременности изменения.

В отечественной экспертизе вещественных доказательств рекомендуется серологический метод, основанный на реакции задержки агглютиниции бараньих эритроцитов, сенсибилизированных хорион гонадотропным гормоном (ХГГ), антителами кролика, иммунизированного этим гормоном. Ингибитором агглютинации является ХГГ, содержащийся в крови и выделениях беременной женщины. ХГГ - специфический для беременности гормон: на всем ее протяжении синтезируется хориони-ческими тканями плаценты. Появляется он в крови и моче женщины почти одновременно, и достаточная для определения его концентрация возникает с 5-9 дня отсутствия менструации, обусловленного беременностью. ХГГ может быть выявлен в пятнах крови, а также в необескров-ленных органах и тканях, имеющих хорошую васкуляри-зацию, а также в молозиве и влагалищных выделениях и их пятнах, если они произошли от женщин со сроком беременности от 6 до 12-16 недель. Для этого создан специальный серологический набор «ГРАВИДОДИАГНОСТИ-КУМ», учет результатов которого основан на реакции гемагглютинации и носит субъективный характер [3].

Кроме того, принадлежность крови в пятнах на вещественных доказательствах беременной женщины устанавливается также с помощью типирования плацентарной рибонуклеиновой кислоты (РНК) с помощью полимераз-ной цепной реакции (ПЦР) [4]. При создавшейся трудной ситуации в российской судебно-медицинской экспертизе вещественных доказательств (отсутствие и плохое качество сывороток систем От, М№8) определение принадлежности крови в пятнах на вещественных доказательствах беременной женщины может, по нашему мнению, служить весьма существенным дополнительным идентификационным признаком и использоваться для дифференцирования вышеуказанных пятен.

Цель нашего исследования заключалась в следующем: на основе диагностических наборов фирмы «АлкорБио» разработать и апробировать методику установления принадлежности крови в пятнах на вещественных доказательствах беременной женщины.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для исследования были использованы образцы крови беременных женщин, мужчин, женщин, имеющих отрицательный тест на беременность, высушенные на стерильной марле, из которых готовили навески по 30 мг. Исследуемый материал помещали в пробирки и заливали по 0,3 мл дистиллированной воды с рН 7,6 для экстрагирования в течение 20 часов при 4 оС. Затем вытяжки из объектов, как неразведенные, так и в разведениях 1: 10-1:100000, помещали по 20-50 мкл в лунки 96-луночного полистирольного

УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ СПбГМУ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА • ТОМ XVIII • N0-! • 2011

Концентрация гормонов, измеренная на ридере "SUNRISE" в лунках планшетов, в исследуемых вытяжках из высушенных на марле образцов крови беременных и небеременных женщин, а также мужчины

Исследуемый образец Концентрация гормонов

ХГЧ (ME/л) тестестерон (нмоль/л) пролактин ^ME/л) лактоген ^ME/л) АФП (ME/мл)

Мужчина 21.601Í0.126 25.288i3.l56 2l6.86i11.5l 12.665i0.43 1.98i0.903

Женщина № 1 с отриц. тестом на 212.980i32.9l0 4.282i0.536 3ll.685i11.5l0 18.261i0.156 3.338i0.513

беременность

Женщина № 2 с отриц. тестом на 135.815i33.825 5.521i1.4l3 394.000i9.915 19.318i1.3l0 4.3lli0.521

беременность

Беременная женщина № 1 136l.000i86.900 4.l94i0.l46 955.000i3.695 45.318i0.354 28.638i0.532

Беременная женщина № 2 138l.000i2l8.214 6.568i0.083 905.445i24.905 35.995i2.094 24.092i2.l15

Беременная женщина № 3 435.655i19.4l5 6.592i0.10l 918.000i58.56 42.l91i0.909 16.608i0.501

Беременная женщина № 4 1549.268i144.065 4.582i0.146 l01.555i5.445 20.1l9i0.430 14.llli0.523

Беременная женщина № 5 1643.03li43.8l0 6.859i0.644 480.165i6.615 21.l84i0.391 14.5l6i0.653

Беременная женщина № б 1321.541i222.626 5.l41i0.l21 I11.090i36.ll0 33.l18i2.3l0 25.238i3.138

Беременная женщина № l 483.24i33.050 4.92li0.018 989.880il1.220 55.9l1i2.666 14.515i0.261

Беременная женщина № 8 324.580i66.980 5.162i0.086 1088.350i29.950 54.281i0.861 22.l84i1.20l

Беременная женщина № 9 2l9.000i35.850 5.849i0.659 l58.l55i40.855 44.450i1.778 22.392i0.923

Беременная женщина № 10 649.693i14.4l3 3.655i0.165 803.695i9.535 33.l03i1.112 15.238i0.523

планшета, добавляли по 200 мкл конъюгата и инкубировали в термошейкере «ST-3» в течение 1 часа при 500 об/мин и 37 °С. Отмывание от несвязанных антител проводили пятикратно с помощью автоматического вошера «Columbus Pro». Оптическую плотность растворов измеряли фотометрически при длине волны405 нм на ридере «SUNRISE». Производителем ридера и вошера является фирма TECAN. В качестве положительного контроля использовали высушенную на марле кровь беременных женщин, которую предварительно исследовали с помощью системы «ARHITECT», используя технологию хемилюминесцент-ных иммунных исследований на микрочастицах. Отрицательными контролями служили сухие образцы крови мужчин и женщин, которые имели отрицательные результаты теста на беременность. Расчеты проводили по трем измерениям с помощью раздела «Описательная статистика» в приложении Excel для Microsoft Office. В исследуемом материале определяли уровень содержания следующих гормонов: гонадотропин лактоген (ЛГ); пролактин-01; хо-рионический гонадотропин человека (ХГЧ)-1 ; альфафетоп-ротеин (АФП)-1 ; стероид-тестестерон-01.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты исследования представлены в таблице. В результате проделанных исследований было установлено, что наиболее значительно в вытяжках из высушенной на марле крови беременных женщин и женщин с отрицательным тестом на беременность отличается концентрация гормонов ХГЧ, АФП и пролактина. Разница в содержании ЛГ выражена значительно слабее. Содержание тестестерона у женщин с отрицательным тестом на беременность и беременных женщин практически не отличается, его в несколько раз больше в вытяжке из крови мужчины, высушенной на марле.

ВЫВОДЫ

Следовательно, на основе выполненной работы можно заключить, что при исследовании пятен крови на ве-

щественных доказательствах на предмет принадлежности их беременной женщине целесообразнее определять содержание гормонов ХГЧ, АФП и пролактина. Это исследование имеет смысл проводить тогда, когда по уголовному делу проходят женщины с большими сроками беременности, а пятна крови имеют достаточно большую величину, небольшую давность образования (2-3 месяца), а также не подверглись гнилостным или деструктивным изменениям. Следует отметить, что в пятнах крови малой величины на объектах исследования, а также при гнилостных изменениях в них дифференцирования крови по системам MNSs и Gm также практически не дает реальных результатов.

Вышеизложенное позволяет рекомендовать данный метод для внедрения и использования в экспертной практике с целью определения дополнительного идентификационного признака при дифференцировании пятен крови на вещественных доказательствах, ввиду того, что данный метод относительно объективен и в комплексе с другими судебно-биологическими методиками дает более полную информацию о характеристике пятен крови на вещественных доказательствах и принадлежности их беременной либо небеременной женщине.

ЛИТЕРАТУРА

1. Дмитров, Д. Я. Физиология эндокринной системы / Д. Я. Дмитров. - Л., 1979. - С. 399.

2. Методы лабораторных исследований. - М. ; Л. : МЕДГИЗ, 1938. - С. 369-371.

3. Потапов, М. И. Об установлении происхождения крови, выделений и органов от беременной женщины : метод. реком. / М. И. Потапов, Л. И. Баринова, П. Е. Шиков // Сб. метод. док-тов по судебно-биолог. исслед. вещественных доказательств. - М., 1998. -С. 79-85.

4. Gauvin, J. Forensic pregnancy diagnostics with placental mRNA markers / J. Gauvin [et al] // Int. J. Legal. Med. - 2009. - Jan. 16. -[Epub ahead of print].

5. Schumann, K. Differentiation of dried blood stains of pregnant females, from fetal blood and amniotic fluid by determination of alfa fetoprotein / K. Schumann // Z. Rechtsmed. - 1988. - Vol. 101. - № 1. -P. 9-13.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ

6. Vallego, G. Human chorionic gonadotropin detection by means of enzyme immunoassay : a uswful method in forensic pregnancy diagnosis in bloodstains / G. Vallego // J. Forensic Sci. - 1990. -Vol. 35. - № 2. - P. 293-300.

7. Vergote, G. Forensic determination of pregnancy hormones in human bloodstains / G. Vergote [et al] // J. Forensic Sci. Soc. - 1991. -Vol. 31. - № 4. - P. 409-419.

8. Voss, P. Reference values for progesterone, beta-HCG, estriol and human placental lactogen in 10th-16th weeks of pregnancy / P. Voss [et al] // Zentralbl. Gynakol. - 1989. - Vol. 111. - № 13. -P. 897-903.

РЕЗЮМЕ

Д. В. Коноваленко, О. Д. Ягмуров, В. Л. Сидоров

Способ определения уровня содержания гормонов, указывающих на беременность, в кровяных пятнах на вещественных доказательствах

Представлен обзор литературы по применению методик, указывающих на беременность, при исследовании пятен крови на вещественных доказательств. Метод иммуноферментного ана-

лиза сравнивается с другими современными методиками, применяемыми в России. Широко раскрываются объективность, актуальность, а также другие возможности и преимущества данного метода при использовании его в судебно-медицинской практике.

Ключевые слова: иммуноферментный анализ, вещественные доказательства, пятна крови, беременность.

SUMMARY

Д. V. Konooalenko, О. D. Yagmuroo, V. L. Sidoroo

Definition of the level of hormones specifying pregnancy in the bloodstains on the material evidences

The paper presents a review of domestic and foreign literature on application of various techniques specifying pregnancy in examination of blood stains on material evidences. The ELISA method is compared with other modern techniques in use in Russia. Objectivity, relevance and advantages of the method are shown to be of use in forensic practice.

Key words: ELISA, material evidences, bloodstains, pregnancy.

© Коллектив авторов, 2011 г. УДК 616.72-007+616.711-002]:616.24

В. И. Трофимов, Н. А. Филиппова, Т. Г. Шемеровская, Е. А. Бручкус, М. В. Максимов, И. И. Нестерович, О. А. Смульская, В. В. Иванова, Г. К. Мациевская, Н. А. Браженко, О. Н. Браженко, В. И. Шевцов

ПУЛЬМОНОЛОГИЧЕСКИЕ СИМПТОМЫ У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ И СЕРОНЕГАТИВНЫМИ СПОНДИЛОАРТРИТАМИ

Кафедра госпитальной терапии, кафедра фтизиопульмонологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова; Санкт-Петербургская городская клиническая ревматологическая больница № 25

Поражение дыхательной системы является одним из наиболее часто выявляемых системных проявлений ревматоидного артрита (РА). В то же время их своевременная диагностика и дифференциальная диагностика является достаточно сложной задачей. Типичные клинические симптомы, как и используемые рутинные методики, в большей части позволяют диагностировать лишь далеко зашедшие изменения. Наибольшей разрешающей способностью обладает дорогостоящая методика КТ высокого разрешения (50-80 %) и биопсия легких [2, 12, 17]. В то же время информативность рутинной рентгенограммы составляет

не более 6 % [12, 17]. Специфические клинические симптомы, характерные для какого-либо варианта поражения легких, выявляются лишь у 6,5-10 % пациентов [12, 19]. Основные варианты поражения легких и соответствующие им клинические синдромы показаны на рис. 1.

Согласно литературным данным, наиболее часто выявляются поражения плевры, большая часть которых является бессимптомными (40-75 % аутопсий и 20 % - рентгенологические изменения) или проявляются умеренным болевым синдромом (около 25 %) [17]. Вторыми по частоте являются заболевания паренхимы легких, прежде всего, ассоциированная с ревматоидным артритом ин-терстициальная болезнь легких (ЯЛ-1ЬВ) [1-3, 9, 12, 17]. Самый частый вариант последней - обыкновенная ин-терстициальная пневмония - ШР, один из самых неблагоприятных вариантов ЯЛ-1ЬВ [9, 10, 19]. Реже встречается неспецифическая интерстициальная пневмония, в большей степени типичная для системных заболеваний соединительной ткани [9, 10]. Встречаются также смешанные варианты с элементами лимфоцитарной интерсти-циальной пневмонии [10, 19]. Указанные состояния проявляются рестриктивными изменениями. Ранняя клиническая симптоматика ЯЛ-1ЬВ в этих случаях может включать сухой кашель и одышку инспираторного типа. При некоторых вариантах ЯЛ-1ЬВ (криптогенная организующая пневмония - СОР [14] - и крайне редко ассоциирующийся с ревматоидным артритом респираторный бронхиолит-интерстициальная болезнь легких - ЯБ-1ЬВ) одышка может быть смешанной или экспираторной, а при физикальном обследовании могут выявляться признаки обструкции (жесткое дыхание, коробочный перкуторный тон). Обструктивный и бронхитический синдромы при ЯЛ-ТЬВ могут являться следствием развития