CC BY
39
БИОХИМИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯ
УДК 543.4:544.2
Л. М. Юсупова, Р. Ш. Мархабуллина, С. Ю. Гармонов
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
5,7-БИС-(МЕТАНИТРОФЕНИЛАМИНО)-4,6-ДИНИТРОБЕШОФУРОКСАНА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ
Ключевые слова: 5,7-бис-(метаттрофетламто)-4,6-дшитробензофуроксан, спектрофотометрический метод.
Исследованы электронные спектры растворов 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофуроксана в ацетонитриле, диметилформамиде, диметилсульфоксиде и ацетоне. Разработана методика определения 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофуроксана спектрофотометрическим методом в диметилсульфоксиде. Анализ экспериментальных данных доказал возможность использования этой методики для контроля качества субстанции 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофуроксана и лекарственной формы на ее основе.
Keywords: 5,7-bis-metanitrophenylamino-4,6-dinitrobenzofuroxan, spectrophotometric method.
The electronic spectra of 5,7-bis-metanitrophenylamino-4,6-dinitrobenzofuroxan solutions in acetonitrile, dimethylformamide, dimethylsulfoxid and in acetone has been investigated. The technique of quantitative definition of 5,7-bis-metanitrophenylamino-4,6-dinitrobenzofuroxan in dimethylsulfoxide using by spectrophotometric method is developed. The analysis of experimental data has proved the possibility of this method using for quality control of 5,7-bis-metanitrophenylamino-4,6-dinitrobenzofuroxan and medical form based on it.
Введение
Бензофуроксаны представляют собой биологически-активные вещества широкого спектра действия [1,2].
5.7-Бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензо-фуроксан представляет собой биологически-активное вещество с ярко выраженной антигельминтной активностью. Композиция, включающая три компонента: н-гекса-
децилтрифенилфосфоний бромид, 5,7-бис-(м-нитро-анилино)-4,6-динитробензофуроксан в определенном массовом соотношении и глюкозу, обладает высокой эффективностью при низких лечебных дозах [3].
Весьма актуальной задачей является контроль качества субстанции 5,7-бис-
(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на и композиций на его основе. Обеспечение качества фармацевтических продуктов является комплексной задачей, решение которой требует реализации всех мер, направленных на достижение установленных требований к качеству
лекарственных средств [4]. Для разработки показателей качества 5,7-бис-(метанитро-фениламино)-4,6-динитробензофуроксана необходимо изучение его подлинности и количественного содержания.
Спектрофотометрия широко используется на всех этапах фармацевтического анализа (испытание на доброкачественность, подлинность, количественное определение) и, таким образом, является одним из основных общих методов анализа лекарственных веществ и их препаратов [5,6].
Целью данной работы является разработка методики спектрофотометрического определения
5.7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензо-
фуроксана в субстанции и лекарственной композиции на его основе.
Экспериментальная часть
Для анализа спектров поглощения 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на в различных растворителях были проведены следующие исследования. Точную навеску 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на растворяли в ацетонитриле, диметилформамиде, ацетоне и диметилсульфоксиде. Далее снимали спектры поглощения полученных растворов в режиме сканирования, используя в качестве раствора сравнения соответствующий растворитель. Для удобства сравнения спектры регистрировали в одном и том же масштабе.
В состав гранул с 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-ном входили вспомогательные вещества: крахмал, глюкоза и гексадецилтрифенилфосфоний бромид. Для изготовления гранул предварительно измельчали в ступке 0,05 г
гексадецилтрифенилфосфоний бромида и смешивали с 0,5 г 5,7-бис(метанитрофениламино)-
4,6-динитробензофуроксаном для образования комплекса. Продолжая измельчение, постепенно по частям добавляли 9,31 г глюкозы и затем 2 г 7% крахмального клейстера. Полученную массу тщательно перемешивали и просеивали через сито с размером ячеек 2 мм. Гранулы сушили на открытом воздухе при температуре 20-22 0С в течение суток.
Количественное определение 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на в гранулах проводили спектрофотометрическим методом. Навеску предварительно растертых в порошок гранул (0,01 г точная навеска) растворяли в диметилсульфоксиде в течение пяти минут,
количественно переносили в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводили объем этим растворителем до метки. Раствор тщательно перемешивали и фильтровали, измерение величины оптической плотности растворов 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на проводили на спектрофотометре СФ-56 в кварцевых кюветах с толщиной поглощающегося слоя 1 см при длинноволновом максимуме поглощения (439±2 нм). Содержание5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на в гранулах определяли по градуировочной зависимости.
Результаты и их обсуждение
Из представленных на рисунке 1 данных видно, что спектр поглощения 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на в диметилсульфоксиде имеет явно отличительные особенности. Использование диметилсульфоксида делает ярко выраженной контрастность полосы поглощения 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана по отношению к другим растворителям за счет значительного спектрального сдвига. Поэтому в качестве растворителя для количественного определения 5,7-бис-
(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на целесообразно использовать
диметилсульфоксид.
Рис. 1 - Электронные спектры поглощения 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензо-фуроксана в растворителях (8 мкг/мл): 1-
ацетонитрил, 2-диметилформамид, 3-
диметилсульфоксид, 4-ацетон
Концентрацию 5,7-бис-(метанитро-
фениламино)-4,6-динитробензофуроксана в композиции на его основе можно определить по величине оптической плотности раствора при 439 нм с использованием предварительно построенного градуировочного графика.
Для построения градуировочного графика готовили стандартные растворы, содержащие от 2,4 мкг/мл - до 24 мкг/мл 5,7-бис-(метанитро-фениламино)-4,6-динитробензофуроксана в
диметилсульфоксиде (рис.2). Для этого в мерную колбу вместимостью 50 см3 внесли рассчитанное
количество стандартного раствора 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на (0,024 мг/мл) и довели диметилсульфоксидом до метки. Далее растворы фотометрировали при длинах волн в области 439 нм.
А
200 300 400 Л0 500 А, НМ
Рис. 2 - Электронные спектры поглощения 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензо-фуроксана в диметилсульфоксиде (мкг/мл): 1-2,4; 2-6; 3-12; 4-18; 5-24
Зависимость оптической плотности от концентрации 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофуроксана линейна, хорошо воспроизводима и может быть использована как градуировочная. Значение предела обнаружения 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензо-фуроксана, определенное в соответствии с 3S-критерием составляет 0,0075 мкг/мл [7].
Градуировочная зависимость описывается следующим уравнением регрессии:
А=0.038^±0.003, где C - концентрация раствора, мкг/мл, А - значение оптической плотности.
Таблица 1 - Результаты определения 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофу-роксана методом “введено-найдено” (п=5, Р=0,95)
Введено 5,7-бис-(мета-нитрофениламино)-4,6-динитробензофуроксана, мкг/мл Найдено, мкг/мл
0,5 0,497±0,014 0,022
1,0 1,000±0,030 0,027
3,0 2,970±0,090 0,024
5,0 5,010±0,140 0,020
10 10,020±0,260 0,021
Анализ субстанции 5,7-бис-
(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на и лекарственной формы на ее основе спектрофотометрическим методом показал, что количество 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофуроксана составило более 99 %. Методика характеризуется хорошей сходимостью результатов и чувствительностью определений.
Таким образом, анализ экспериментальных данных показывает возможность примененения методики спектрофотометрического определения
5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензо-фуроксана для контроля качества фармацевтической субстанции и лекарственной формы на ее основе.
1 и 2), результаты определения при этом характеризуются удовлетворительными
метрологическими характеристиками.
Таблица 2 - Результаты определения 5,7-бис-(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурок-сана в лекарственной композиции (п=5, P=0,95)
Гранулы 5,7-бис- (мета- нитро- фенил- амино)-4,6- динитро- бензо- фуроксана, г Введено 5,7-бис-(мета-нитрофенил-амино)-4,6-динитро-бензо-фурокса-на, мкг/мл Найдено 5,7-бис- (метанитро- фениламино)- 4,6-динитро- бензо- фуроксана, мкг/мл
0,01 5 5,002±0,024 0,0039
0,02 10 10,008±0,025 0,0020
0,03 15 14,990±0,032 0,0017
0,04 20 10,001±0,014 0,0011
0,05 25 25,040±0,072 0,0023
Правильность определения 5,7-бис-
(метанитрофениламино)-4,6-динитробензофурокса-на была оценена методом “введено-найдено” (табл.
Литература
1. Р.Э. Тимашева, Е.А. Чугунова, Э.М. Гибадуллина, А.Р.
Бурилов, С.В. Бухаров. Производные бис(4-аминофенилового) эфира, содержащие
бензофуроксановые фрагменты. Вестн. Казан. технол. унта. №7, с. 29-30, 2012.
2. Л.М. Юсупова, С.Ю. Гармонов, И.М. Захаров, А.Р. Быков, Т.В. Гарипов, И.Ф. Фаляхов. Средства биологической защиты многоцелевого назначения на основе хлорпроизводных нитробензофуроксана. Вестн. Казан. технол. ун-та. №1, с. 103-111, 2004.
3. И. В. Галкина. Автореф. дисс. докт. хим. наук, Казан. гос. ун-т, Казань, 2010. 48 с.
4. В.Ф. Сопин, Е. В. Приймак, В. А. Севодин, Р. Р. Шакирова. Формирование интегративной системы менеджмента на предприятиях фармацевтической отрасли // Вестн. Казан. технол. ун-та. 2004. №1, с. 416-421,
5. А.П. Арзамасцев, П.Л. Сенов. Стандартные образцы лекарственных веществ. Медицина, Москва, 1978. 247 с.
6. Л.В.Спатлова, Л.М. Юсупова. Кинетика взаимодействия 5,7-дихлоро-4,6-динитробензофуроксана с 3,5-дихлороанилином // Вестн. Казан. технол. ун-та. 2011. №19, с. 29-34.
7. Пат. 2032678 Российская Федерация / С.Ю. Гармонов, Л.М. Юсупова, А.С. Якупова, И. Ф.Фаляхов, В.Ф. Сопин; заявл. 03.05.2001; опубл. 20.12.2002, Бюл. № 19.
© Л. М. Юсупова - д-р хим. наук, проф. каф. ХТОСА КНИТУ; Р. Ш. Мархабуллина - асп. той же кафедры; С. Ю. Гармонов - д-р хим. наук, проф. каф. аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КНИТУ, [email protected].
