CC BY
10
к контрольным пробам, обработанным аналогично. Кюветы 10 мм, сине-зеленый светофильтр. Для шкалы 3 к 0,5—10 мкг фенола в 3 мл 0,4% раствора Ыа2С03 приливали по 0,2 мл раствора п-нитродиазобензола, коло-риметрировали к контрольным пробам, изготовленным аналогично. Кюветы
5 мм.
Протягивали равное количество воздуха через 2 пары поглотителей. Одна пара содержала по 3 мл 0,4% раствора №2С03, другая — по 3 мл водного спирта и помещалась в ледяную воду. Раствор соды из поглотителей переводили в пробирки, смывали 1-й поглотитель 2—3 каплями воды, прибавляли по 0,2 мл раствора п-нитродиазобензола и колориметрирова-ли к контрольным пробам. По графику 3 находили количество фенола в 1-м и 2-м поглотителях и суммируя их в пробе (Ьх). Спиртовой раствор из поглотителей переводили в пробирки с холодильниками, 1-й поглотитель смывали 5—6 каплями водного спирта и обрабатывали вместе с контрольными пробами (3 мл) как шкалу на гипериз. Из графика 2 определяли фенол в 1-м и 2-м поглотителе, а суммируя их — в пробе (6сУм). Рассчитывали —Ьх и определяли количество гипериза в пробе ах графически или по формуле (19), принимая /(=4,5.
ЛИТЕРАТУРА
Алексеева М. В., Кочмар Е. Г., ХрусталеваЕ. А. Учен, записки Московск. научно-исслед. ин-та санитарии и гигиены им. Эрисмана. М., 1960, № 5, с. 42.—А л ь ш и ц И. М., Аникина Т. А., Бабенкова Е. А. и др. Гиг. и сан., 1963, № 9, с. 58. — Б ы х о в с к а я М. С., Г и н з б у р г С. Л., X а л и з о в а О. Д. В кн.: Методы определения вредных веществ в воздухе. М., 1966, с. 548. — Г р о н с -
6 е р г Е. Ш. Химическая промышленность, 1961, № 7, с. 64. — Перегуд Е. А. Санитарная химия полимеров. Л., 1967, с. 129; с. 149. — Салямон Г. С. Гиг. и сан., 1962, № 10, с. 51.
Поступила 2/1 1967 г.
УДК 614.72+616.154.951:615.778.38-074:543.
.42.062
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНАЗОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И ВОЗДУХЕ1
А. П. Линеберга Рижский медицинский институт
Феназон (1-фенил-4-амино-5-хлорпиридазон-6) является перспективным гербицидом для борьбы с сорняками посевов сахарной свеклы. Растворимость его в воде составляет 0,03%.
Разработанные химические методы не позволяют обнаружить малое количество этого вещества в биологических объектах. Описаны методы определения аналогичного гербицида пирамина в сахарной свекле и почве (Drescher) хроматографическим и колориметрическим методом, а в моче (Zeller с соавторами) хроматографическим методом. Мы разработали спектрофотометр ический метод для изучения феназона в биологических объектах.
Феназон поглощает в ультрафиолетовой области спектра. Оптическая плотность (D) и молярный коэффициент поглощения (Е) феназона в дистиллированной воде для концентрации 8,47 мг!л в зависимости от длины волны (кривая 1) показаны на рис. 1. Как видно из рис. 1, феназон в
1 Образцы крови кроликов и пробы воздуха камер были сняты аспиранткой кафедры гигиены Рижского медицинского института М. Зеберг.
<Г /¡/*/0/7 С/И
ультрафиолетовой области спектра имеет 2 максимума поглощения — при 225 и 285 нм. В аналитических целях использовался второй максимум.
Все спектры поглощения были сняты на спектрофотометре СФ-4; применяли кварцевые кюветы длиной 1 см. Раствором для сравнения во всех случаях служила дистиллированная вода.
Для исследования крови кроликов снимали спектры поглощения сыворотки крови в интервале от 250 до 315 нм. Сыворотка была получена 20-
минутным центрифугированием крови с частотой 2500 обIмин.
Полученная сыворотка имела весьма высокую оптическую плотность, поэтому перед снятием спектра она была разбавлена водой в 100 раз. Как показано на рис. 2, сыворотка крови имеет максимум поглощения при 280 нм. Этот максимум дают белки, находящиеся в сыворотке. Для измерения концентрации присутствующего феназона в сыворотке необходимо было освободиться от белков. Это достигалось ее термической обработкой в присутствии уксусной кислоты с последующим центрифугированием.
Обработку осуществляли следующим образом. К 1 мл сыворотки добавили 1 мл 1/2Б н. уксусной кислоты. Подкисленную смесь кипятили на водяной бане 3 мин. После тщательного перемешивания следовало 30-минутное центрифугирование. Затем 1 мл отцентрифугированной жидкости подвергали вторично такой же обработке. Полученный безбелковый центрифугат после 2-кратного разбавления исследовали спектрофотометрически. В спектре обработанной таким образом сыворотки максимум отсутствует (рис. 3, кривая 1). Чтобы убедиться в том, что подобная обработка не вызывает изменений поглощения феназона, раствор его в воде обработали аналогично. Как видно
гзо
ЗОО^Н/И
Рис. 1. Поглощение водного раствора феназона (1), после термической обработки в уксуснокислой среде (2).
?50
ЗООЛН/и
гзо
.700Лн/и
Рис. 2. Поглощение сыворотки крови кролика.
Рис. 3. Поглощение сыворотки с осажденным белком (/) через 5 часов после введения технического феназона в концентрации 2 г/кг (2) и поглощение раствора феназона, поступившего в кровь (3).
из рис. 1 (кривая 2), в области 240—315*нле при этом никаких изменений не наблюдается.
Поглощение сыворотки крови кролика с осажденным белком, получившего технический феназон в концентрации 2 г/кг, показано на рис. 3 (кри-
вая 2). Максимум поглощения находится при 275 нм. Смещение максимума от 285 до 275 нм связано с тем, что оптические плотности феназона и обработанной указанным выше способом сыворотки суммируются.
Для составления калибровочного графика ^определенную навеску (42,3 мг) феназона растворяли в 500 мл воды. Из полученного раствора приготовили растворы разных концентраций 4,23; 6,76; 8,47 и 12,70 мг!л. Снимали спектры поглощения этих растворов, по которым была определена максимальная оптическая плотность DMaKC при 285 нм. Для поправки на неспецифическое поглощение целесообразно пользоваться величиной AD, которую определяют по формуле:
AD = Р285 - °™ + °315 ■ d)
Пользуясь DMaKC , получают несколько завышенные результаты.
Зависимость AD растворов феназона в воде от концентрации выражается прямой.
На рис. 3 кривая 3 вычерчена как разность кривых 2 и /; она является кривой поглощения феназона, поступившего в кровь. Величина AD, используемая для нахождения концентрации феназона, должна быть вычислена согласно уравнению:
AD = AD" — AD', (2)
где AD" вычислено для кривой 2, a AD'—для кривой 1 согласно формуле (1).
Ниже приводится пример расчета концентрации феназона в сыворотке крови.
Кролик получил орально 2 г технического феназона на 1 кг веса. Взятая через 5 часов проба крови подготовлена к анализу описанным выше образом. Спектрофотометрически получены следующие значения оптической плотности при длинах волн 255, 285 и 315 нм: 0^=0,632, D"2B3— =0,705 и 0з,5=0,272 (см. рис. 3, кривая 2), откуда:
A D" = D"2s5 — °255 +2 °315 = 0,705 - 0,452 = 0,253.
Сыворотка крови, полученная перед ^введением феназона, имела AD'— =—0,013 (см. рис. 3, кривая /). Тогда AD=0,253 +0,013= 0,266.
Пользуясь градуировочным графиком, находят, что концентрация феназона равна 10,20 мг!л. С учетом того что при приготовлении фотометрируе-мого раствора сыворотка разбавлена 8-кратно, концентрация феназона в сыворотке составляет 81,6 мг!л. j i
С помощью описанного выше метода установлено, что через 5 часов после введения орально технического феназона в дозе 0,1 г! кг у 5 кроликов оптическая плотность обработанной сыворотки повышается, но статистически незначимо отличается от контроля (см. таблицу); через 5 часов после введения гербицида в концентрации 0,25 г!кг и больше оптическая плотность статистически значимо отличается от контроля. Через 24 часа после введения вещества в дозе 0,25—0,50 г!кг оптическая плотность опять-таки не имеет статистически значимых отличий от контроля. При введении феназона в концентрации 2 г/кг через 24 и 30 часов можно установить наличие его в крови; через 8 дней AD сыворотки возвращается к норме.
Средние характеристики поглощения образцов сыворотки крови, взятых через 5 часов после введения феназона
АО' ДО" ДО Количество феназона (в г/кг) Число животных
—0,013 0,005 0,018 0,10 5
—0,052 0,110 0,162 0,25 6
—0,024 0,210 0,234 0,50 5
—0,030 0,358 0,388 2,00 3
Данные таблицы хорошо согласуются с результатами, полученными Zeller с соавторами при исследовании мочи кроликов, получивших аналогичный феназону гербицид пиразон.
Специальными исследованиями установлено, что колебания оптической плотности вместе с неточностью приготовления проб находятся в пределах от 0,006 до 0,012 ед. D, что при наименьшем статистически значимом отличии от контроля составляет 4—8%. Чувствительность метода 4 мкг/мл.
Спектрофотометрическим методом исследовано также количество фена-зона в воздухе опытных камер для животных. Для этого определенный объем воздуха просасывали через специальный негигроскопичный тканевый фильтр. Фильтр погружали в дистиллированную воду на несколько часов, после чего снимали спектр поглощения промывного раствора. Зная оптические плотности d255» d2s5 и d31b этого раствора, определяли в нем концентрацию феназона. Если известен объем промывной воды, то можно установить количество феназона в определенном объеме воздуха. Концентрация гербицида в промывных растворах не превышала 0,003%, что в 10 раз ниже растворимости феназона. Предварительно проверяли поглощение промывной воды чистого фильтра; оказалось, она не имеет максимума поглощения в области 250—315 нм.
Для проверки полноты извлечения на фильтр наносили известное количество феназона, которое было извлечено описанным выше образом. Результаты фотометрического определения вещества в промывном растворе совпадали с количеством нанесенного гербицида в пределах точности метода.
Установлено, что при определении феназона в опытных камерах для животных погрешность не превышает 5% при самых меньших концентрациях, с которыми мы практически сталкивались.
ЛИТЕРАТУРА
Drescher N., Chem. Abstr., 1966, v. 64, р. 1287.—Zell er H., Fron-bergH., Hof man K. et al. Ibid., 1966, v. 64, p. 5687.
Поступила 20/XI 1967 r.
УДК 613.633:[вв9.27-Ив9.25+в69.295
К МЕТОДИКЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЛЬФРАМА, КОБАЛЬТА И ТИТАНА В ИХ СМЕСЯХ
Т. М. Урусова
Северо-осетинский медицинский институт, Орджоникидзе
В литературе описан ряд методов качественного и количественного определения вольфрама (М^), кобальта (Со) и титана (ТО в породах, рудах, сплавах и воздухе.
Для исследования малых количеств XV и вольфрамового ангидрида в воздухе X. Я- Венгерской 1 рекомендован метод, основанный на реакции образования роданид-вольфрамового комплекса в результате взаимодействия шестивалентного W с ионом родана в присутствии восстановителя — двухвалентного хлористого олова. Однако последний нельзя считать вполне подходящим восстановителем из-за малой разности нормальных окислительных потенциалов.
Восстановление шестивалентного вольфрама протекает медленно, этим обусловлено длительное нарастание окрашивания даже при очень высокой
1 Автореферат диссертации. М., 1964.
