CC BY
826
ОБЗОРЫ
УДК 615.779.9-07
СОВРЕМЕННЫЕ, НАИБОЛЕЕ УПОТРЕБЛЯЕМЫЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
АНТИБИОТИКОВ
Н.Ф. Фаращук, Ю.П. Цюман
Смоленская государственная медицинская академия, Россия, 214019, Смоленск, ул. Крупской, 28
В статье приводится обзор современных лабораторных методов качественного и количественного анализа антибактериальных препаратов, их эффективности и эквивалентности. Рассматриваются преимущества, недостатки и технологические особенности применяемых методов.
Ключевые слова: антибиотики, лабораторный анализ, качество, эффективность
THE MOST COMMON LABORATORY ANTIBIOTICS RESEARCH METHODS N.F. Farashchuk, Yu.P. Tsyuman
Smolensk State Medical Academy, Russia, 214019, Smolensk, Krupskaya St., 28
The article is a review on modern laboratory methods of the qualitative and quantitative analysis of antibacterials, their efficiency and equivalence. Advantages and disadvantages as well as technological features of the applied methods are considered.
Key words: antibiotics, laboratory analysis, quality, efficiency
Врачу, не искушенному в тонкостях фармацевтического бизнеса, борьба компаний, производящих лекарства, видна исключительно в виде обилия рекламы в периодических изданиях, разнообразных листовок-вкладышей. На самом деле конкуренция фармфирм за рынок лекарственных препаратов часто приобретает острый и жесткий характер. И одним из основных критериев в этой борьбе является качество препаратов, их клиническая эффективность [8]. Согласно данным отечественных и зарубежных периодических изданий, применение некачественных антибиотиков приводит к хронизации заболеваний, росту инвалидизации и смертности [1], а также к формированию резистентности бактерий [16].
Для исследования антибиотиков применяют хроматографические, спектроскопические, биологические, химические (идентификация с помощью химических реакций, количественное определение титриметрическими методами и т.д.) методы. Существует также целый ряд физико-химических методов анализа антимикробных препаратов: хемилюминометрия и биохемилюминометрия, колориметрические и спектрофотометрические методы, электрофорез, полибуферное распределение, экстракция, эксорбция - сочетание экстракции и сорбции.
Для количественного определения антибиотиков применяют различные спектральные методы - в первую очередь, фотоколориметрический и спектрофотометрические методы. Например, для определения концентрации раствора эритромицина можно применить фотоколориметрический метод, основанный на изменении абсорбции раствора антибиотика после взаимодействия его с серной кислотой. Антибиотики тетрациклинового ряда могут быть определены спектрофотометрическим методом по полосе поглощения, исчезающей после щелочного гидролиза действующего вещества. Наряду с вышеперечисленными методами количественного анализа антибиотиков используются и хроматографические, спектр которых также довольно разнообразен: бумажная хроматография, тонкослойная хроматография (ТСХ), эксклюзионная хроматография (гель-фильтрация, молекулярно-ситовая фильтрация, гельпроникающая хроматография). Для идентификации антибиотиков используются ТСХ и спектроскопические методы (ИК- и УФ-спектроскопия), а для количественного определения - УФ-спектроскопия.
Важнейшим методом анализа, который используется как для идентификации, так и контроля чистоты и количественного определения антибиотиков в странах с развитой фармацевтической промышленностью (США, Англия, Япония, страны ЕС), является высокоэффективная жидкостная хроматография [9, 11, 15]. Бурно развиваясь в последнее десятилетие, этот метод открыл возможность разделения смесей, содержащих десятки и сотни компонентов [9]. Принципы
хроматографии весьма универсальны, благодаря чему она оказалась пригодной для изучения объектов самой разной природы, в частности антимикробных препаратов [11]. Жидкостная хроматография (ЖХ) - способ (метод) хроматографического разделения смесей веществ или частиц, основанный на различии в скоростях их перемещения в системе несмешивающихся и движущихся относительно друг друга фаз [11]. Подвижная фаза в жидкостной хроматографии выполняет двоякую функцию: 1) обеспечивает перенос десорбированных молекул по колонке; 2) регулирует удерживание в результате взаимодействия с неподвижной фазой (сорбции) и с молекулами разделяемых веществ [19]. ВЭЖХ - метод разделения веществ на мелкозернистых сорбентах (с частицами размером менее 15 мкм) при повышенном давлении [2]. Можно выделить основные «плюсы» жидкостной хроматорафии: 1) разделение носит динамический характер, что обусловливает большую эффективность хроматографического разделения по сравнению со статическими методами сорбции и экстракции; 2) хроматография позволяет решать как аналитические задачи (разделение, идентификация, определение), так и препаративные (очистка, выделение, концентрирование) [19, 41]; 3) большой диапазон молекулярных масс веществ, с которыми можно работать: от нескольких единиц до десятков миллионов, что существенно шире, чем в газовой хроматографии (современные методы ВЭЖХ позволяют анализировать как смеси ионов или молекул, так и смеси ферментов, белков и даже вирусов); 4) мягкость условий (почти все разделения можно проводить при температурах, близких к комнатной, при отсутствии контакта с воздухом) делает ее особенно пригодным, а зачастую единственным методом исследования лабильных соединений, в частности биологически активных веществ и биополимеров; 5) эффективность разделения, которую уже сейчас дает ВЭЖХ (до 150000 теоретических тарелок на 1 м), существенно превосходит достигнутую в газовой хроматографии (ГХ); 6) метод ВЭЖХ дает возможность препаративно выделить из сложной смеси в мягких условиях чистые вещества, которые можно далее исследовать другими физико-химическими методами; 7) чувствительность, достигаемая в ВЭЖХ, в ряде случаев превосходит чувствительность в тонкослойной хроматографии, а высокоселективные детекторы позволяют определять микроколичества веществ в сложных смесях [3, 11, 15].
Метод ВЭЖХ применяется для анализа широкой совокупности различных антибиотиков, позволяя провести не только количественный анализ, но и оценить эквивалентность [4, 12, 50]. Данные об исследовании ЛС методом ВЭЖХ есть как в русских источниках, так и в зарубежной прессе, но с преобладанием последних. Найден только один источник на русском языке, в котором приводится анализ цефтриаксона в лекарственной форме порошок для инъекций методом ВЭЖХ [10].
Большинство изученных зарубежных источников, описывающих определение различных антибиотиков с помощью жидкостной хроматографии, останавливается на обращено-фазовом варианте ВЭЖХ. Есть данные об определении ванкомицина [20], меропенема [25, 31, 32] и других карбапенемов [24, 37] цефалоспоринов [40], гемифлоксацина мезилата [43], амоксициллина [42] в плазме, сыворотке крови и моче человека. Приводятся также данные об изучении стабильности различных лекарственных препаратов в растворе: анализ меропенема и продукта его деградации, окситетрациклина, колистина и спирамицина [29], тобрамицина и цефтазидима [41], цефалоспоринов [46]. Исследовано количественное содержание канамицина в тканях свиньи [23], колистина в образцах гомогенизированной мозговой ткани мышей [33], а также азитромицина [22], тетрациклина, хлортетрациклина в жидком коровьем навозе [49], остаточных тетрациклинов в меду [30], хинолонов, фторхинолонов, макролидов в образцах воды из окружающей среды [44], пенициллиновых антибиотиков, триметоприма в образцах молока [21, 35]. Особого внимания заслуживает анализ количественного содержания меропенема в порошке для инъекций [38]. В этом исследовании определяли концентрацию и стабильность активного вещества после 24 часов хранения при 4°С с помощью обращено-фазовой ВЭЖХ.
В большинстве приведенных исследований применялся именно метод обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, причем подвижная фаза обычно содержала ацетонитрил или метанол и фосфатный буфер в различных объемных соотношениях при разном рН. Анализ проводился на колонке С18 с фотодиодной детекцией [20, 29, 31, 34, 45-49], с УФ-спектрометрией [23, 32, 38, 42, 43], с флуоресцентной детекцией результатов анализа [30, 44]. Редко встречались случаи анализа методом ВЭЖХ с амперометрической детекцией с использованием алмазного электрода [21], электрохимической детекцией [26]. Для проведения большинства анализов применялся изократический режим элюирования, в редких случаях -градиентный [40]. Есть данные о применении ВЭЖХ в совокупности с масс-спектрометрией [44]. Из наиболее последних приводятся сведения об определении 11 антибиотиков (сульфодиазин, ^4)-ацетилсульфодиазин, сульфометазин, ^4)-ацетилсульфометазин, сульфомеразин, N(4)-ацетилсульфомеразин, сульфометоксазол, триметоприм, амоксициллин, амоксициллиновая кислота, ампициллин, ампициллиновая кислота, хлорамфеникол, тиамфеникол, окситетрациклин и хлортетрациклин) и их метаболитов в тканях рыбы и мышцах с помощью метода предварительной ферментативно-микроволновой экстракции и ВЭЖХ с масс-спектрометрией [27], а также методом
ЯМР и ВЭЖХ количественное определение фторхинолонов [39], определение биоэквивалентности норфлоксацина в ветеринарных растворах [28] и в образцах плазмы человека [36].
Роль хроматографии в XX в. нарастала с заметным ускорением. Пока нет признаков изменения этой тенденции и в нынешнем столетии. Конечно, разработка селективных сенсоров, совершенствование метода прямого инжекционного анализа, а также компьютерная поддержка таких точных методов измерения, как ЯМР и масс-спектрометрия, могут привести к автоматизации массовых рутинных анализов, однако приоритет в прямом разделении сложных смесей и получении высокочистых компонентов надолго останется за хроматографией [5].
Количественное определение некоторых антибиотиков, для которых ВЭЖХ-определение затруднено, проводят микробиологическим методом. Примером таких антибиотиков являются аминогликозиды (канамицин, гентамицин и т.д.). Данные вещества не поглощают электромагнитное излучение ближнего УФ-диапазона и поэтому не могут быть непосредственно (т.е. без дополнительного превращения в другие соединения) определены методом ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием [6].
Микробиологический метод количественного определения антибиотиков основан на способности антибиотиков угнетать рост микроорганизмов. Активность исследуемого антибиотика оценивают путем сравнения угнетения роста чувствительных микроорганизмов, вызванного известными концентрациями исследуемого антибиотика, и государственного стандартного образца данного антибиотика.
Существует две разновидности микробиологического определения активности антибиотиков: метод диффузии в агар [7] и турбидиметрический метод.
Метод диффузии проводят на твердых средах. Среды засевают определенным количеством указанных в НД тест-микроорганизмов. Далее на поверхность среды наносится раствор исследуемого антибиотика и стандартного образца. После инкубирования в течение определённого времени измеряют диаметр зон угнетения роста тест-микроорганизмов, вызванного исследуемым антибиотиком и ГСО. Диаметр зоны подавления роста при прочих равных условиях будет зависеть от концентрации антибиотика, чувствительности испытуемого микроорганизма и от способности антибиотика диффундировать в агар. Метод особенно полезен при изучении фармакокинетики антибиотиков, при определении концентрации антибиотиков в органах животных, плазме крови и т.д. В настоящее время этот метод широко используется в клинических лабораториях вследствие простоты, скорости и легкости проведения опыта. В лабораторной практике применяют диски, изготовленные из фильтровальной бумаги, пропитанные антибиотиками и высушенные.
Определение активности антибиотиков турбидиметрическим методом проводится аналогично, но в жидкой среде, находящейся в пробирке. О степени угнетении роста микроорганизма судят по величине мутности среды в присутствии сульфосалициловой или других кислот. Турбодиметрия и нефелометрия - оптические методы; анализ основан на поглощении и рассеянии лучистой энергии взвешенными частицами определяемого вещества. В настоящее время в российских лабораториях наиболее часто применяются три модификации метода: метод Брандберга-Робертса-Стольникова (азотная кислота) - полуколичественный; метод сульфосалициловой кислоты -количественный; метод трихлоруксусной кислоты - количественный.
На основании достаточно большого исследуемого материала в подавляющем большинстве случаев отмечалось соответствие результатов, полученных этими методами. Однако метод серийных разведений имеет преимущество перед диско-диффузионным анализом, так как позволяет получить информацию не только о факте резистентности микроорганизма к антибиотику, но и оценить величину этой устойчивости [13, 14, 17].
Многие антибиотики являются смесями веществ, поэтому для характеристики количественного содержания действующего вещества в образце антибиотика, кроме обычных параметров (масса, массовая доля), используют единицы действия (ЕД). Такой подход был особенно актуален в период до начала широкого использования ВЭЖХ для количественного определения антибиотиков. Единицей действия называется минимальная масса антибиотика, которая подавляет развитие тест-микроорганизма в определённом объеме питательной среды. Обычно 1 ЕД соответствует 1 мкг чистого антибиотика (стрептомицин, тетрациклин), хотя бывают и исключения, например, 1 ЕД натриевой соли бензилпенициллина соответствует 0,5958 мкг данного вещества [18].
Микробиологические и физико-химические методы, используемые для анализа антибиотиков, имеют ряд недостатков, в частности для них характерны недостаточные чувствительность, специфичность и надежность (микробиологические методы), а также трудоемкая и длительная пробоподготовка (физико-химические методы). Поэтому, наряду с вышеуказанными методами, в последнее время получили широкое распространение методы иммунохимического анализа -
гомогенный поляризационный флуоресцентный иммуноанализ (ПФИA) и твердофазный иммуноферментный анализ (ИФA), которые применяются для осуществления лекарственного мониторинга и антибиотикотерапии. Метод ПФИA обеспечивает высокую точность определения и экспрессность анализа, а твердофазный ИФA является более чувствительным методом анализа. Другим перспективным направлением биоаналитической химии является метод иммуноаффинной экстракции, который позволяет повысить чувствительность и селективность различных методов определения, а также эффективно устранить влияние компонентов образца на результаты анализа.
Заключение
Учитывая все вышесказанное, можно заключить, что в настоящее время существует большое количество методов лабораторного анализа антибиотиков. Но наиболее часто применяемыми остаются микробиологические методы и метод BЭЖX, дающие достаточно точные результаты и реально выполнимые.
Список литературы
1. Белоусов Ю.Б. Дженерики - мифы и реалии // Remedium. - 2003. - M7-8. - C. 4-9.
2. Битуева A.B. Методические указания к выполнению CPC по курсу «Cовременные исследования в биохимии». - Улан-Удэ: Изд-во BCF^, 2006. - 72 с.
3. Буланова A.B., Полякова Ю.Л. Xроматография в медицине и биологии. - Cамара: Самарский университет», 2006. - 116 с.
4. Гладкий A. Качество и надежность препарата Tаксотер®: опыт компании sanofi-aventis // Здоровье Украины. - 2009. - T.l, Ml. - C. 3.
5. Даванков B.A., Яшин Я.И. Cto лет хроматографии // Bестн. Рос. Aкад. наук. - 2003. -T.73, M7. - C. 637-646.
6. Eгорова T.A., Клунова C.M., Живухина E.A. Основы биотехнологии. - М.: Aкадемия, 2003. - 208 с.
7. E^mœ C.E., Жиркова Л.Л., Bоронкова B.B. Новый математический подход при определении концентрации антибиотиков методом диффузии в агар // Aнтиб.xимиотер. - 1998. - M2. - C. 14-19.
8. Кеда Б.И. Bсесоюзная конференция по применению хроматографии в биологии и медицине // Лабораторн. дело. - 1984. - M7 - C. 444-447.
9. Карпов О.И. Оригинальные препараты и копии макролидов: тенденции противостояния // Фарматека. -2004. - M3-4. - C. 83-7.
10. Ламберт ПА., Конвей Б.Р. Cравнение фармацевтического качества генерических препаратов цефтриаксона и Роцефина // Клин.микробиол. антимикроб. химиотер. - 2004. - T.6, M3. - C. 260-272.
11. Орлов B^., Aратская A.A. Жидкостная хроматография: теоретические основы. - Дзержинск, 1997. - 42 с.
12. Писарев B.B., Cмирнова Л.Б., Cавченко A^. и др. Оценка сравнительной фармакокинетики воспроизведенных лекарственных средств, содержащих рибавирин // Am^.химиотер. - 2008. - M3-4. -C. 23-25.
13. Решедько Г.К., Cтецюк О.У. Особенности определения чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом // Методические рекомендации. Методы бактериологического исследования условно-патогенных микроорганизмов в клинической микробиологии. - М. - 1991. - C. 18.
14. ^доренко C.B., Колупаев B.E. Aнтибиотикограмма: диско-диффузионный метод. Интерпретация результатов. - М., Sanofi Pasteur, 1999. - 32 с.
15. ^ысин E^., Ициксон Л.Б., Брауде E.B. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. - М., 1986. - 213 с.
16. Ушакова E.A. Проблемы фальсификации лекарственных средств: фокус на антимикробные препараты // Клин.микробиол. антимикроб. химиотер. - 2005. - M2. - C. 167-173.
17. Царенко C.B., ^доренко C.B., Tаирова К.Р. и др. Новая стратегия использования антибиотиков в нейрореаниматологии: эффективность in vivo при «неэффективности» in vitro // Клин.анестезиол. реаниматол. - 2006. - T.3, M2. - C. 36-45.
18. Чарушин B.fr Xn^ra в борьбе с инфекционными заболеваниями // ^росовский образовательный журнал. - 2000. - T.6, M3. - C. 64-72.
19. Шаповалова E.fr, Пирогов A.B. Xроматографические методы анализа: Метод.пособие для спец. курса. -М., 2007. - 109 с.
20. Abu-Shandi K.H. Determination of vancomycin in human plasma using high-performance liquid chromatography with fluorescence detection // Anal. Bioanal. Chem. - 2009. - V.395, N2. - P. 527-532.
21. Andrade L.S., de Moraes M.C., Rocha-Filho R.C. et al. A multidimensional high performance liquid chromatography method coupled with amperometric detection using a boron-doped diamond electrode for the
simultaneous determination of sulfamethoxazole and trimethoprim in bovine milk // Anal. Chim. Acta. - 2009. -V.654, N2. - P. 127-132.
22. Boonleang J., Panrat K., Tantana C. et al. Bioavailability and pharmacokinetic comparison between generic and branded azithromycin capsule: a randomized, double-blind, 2-way crossover in healthy male Thai volunteers // Clin. Ther. - 2007. - V.29, N4. - P. 703-710.
23. Chen Y., Chen Q., Tang S. et al. LC method for the analysis of kanamycin residue in swine tissues using derivatization with 9-fluorenylmethyl chloroformate // J. Sep. Sci. - 2009. - V.32, N21. - P. 3620-3626.
24. Dreetz M., Hamacher J., Eller J. et al. Serum bactericidal activities and comparative pharmacokinetics of meropenem and imipenem-cilastatin // Antimicrob. Agents Chemother. - 1996. - V.40, N1. - P. 105-109.
25. Elragehy N.A., Abdel-Moety E.M., Hassan N.Y. et al. Stability-indicating determination of meropenem in presence of its degradation product // Talanta. - 2008. - V.77, N1. - P. 28-36.
26. Fedorowski J., LaCourse W.R. A review of post-column photochemical reaction systems coupled to electrochemical detection in HPLC // Anal. Chim. Acta. - 2010. - V.657, N1. - P. 1-8.
27. Fernandez-Torres R., Lopez M.A., Consentino M.O. et al. Enzymatic-microwave assisted extraction and highperformance liquid chromatography-mass spectrometry for the determination of selected veterinary antibiotics in fish and mussel samples // J. Pharm. Biomed. Anal. - 2011. - V.54, N5. - P. 1146-1156.
28. Frackowiak A., Kokot Z.J. Quantitative analysis of norfloxacin by 1 H NMR and HPLC // Acta Pol. Pharm. -2012. - V.69, N4. - P. 597-601.
29. German R., Bukowska B., Pajchel G. et al. Extremely long time stability study of selected antibiotic standards // J. Pharm. Biomed. Anal. - 2010. - V.51, N3. - P. 758-763.
30. Hakuta T., Shinzawa H., Ozaki Y. Practical method for the detection of tetracyclines in honey by HPLC and derivative UV-Vis spectra // Anal. Sci. - 2009. - V. 25, N9. - P. 1149-1153.
31. Ikeda K., Ikawa K., Morikawa N. et al. High-performance liquid chromatography with ultraviolet detection for real-time therapeutic drug monitoring of meropenem in plasma // J. Chromatogr. B. Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. - 2007. - V.856, N1-2. - P. 371-375.
32. Ip M., Au C., Cheung S.W. et al. A rapid high-performance liquid chromatographic assay for cefepime, cefpirome and meropenem // J. Antimicrob. Chemother. - 1998. - V.42, N1. - P. 121-123.
33. Jin L., Li J., Nation R.L. et al. Brain penetration of colistin in mice assessed by a novel high-performance liquid chromatographic technique // Antimicrob. Agents Chemother. - 2009. - V.53, N10. - P. 4247-4251.
34. Kukusamude C., Santalad A., Boonchiangma S. et al. Mixed micelle-cloud point extraction for the analysis of penicillin residues in bovine milk by high performance liquid chromatography // Talanta. - 2010. - V.81, N1-2.
- P. 486-492.
35. Kuti J.L., Nightingale C.H., Knauft R.F. et al. Pharmacokinetic properties and stability of continuous-infusion meropenem in adults with cystic fibrosis // Clin. Ther. - 2004. - V. 26, N4. - P. 493-501.
36. Maia M.B., Martins I.L., do Nascimento D.F. et al. Validation of a reversed-phase high-performance liquid chromatography method with fluorescence detection for the bioequivalence study of norfloxacin in plasma samples // Ther. Drug Monit. - 2008. - V.30, N3. - P. 341-346.
37. Mattoes H.M., Kuti J.L., Drusano G.L. et al. Optimizing antimicrobial pharmacodynamics: dosage strategies for meropenem // Clin. Ther. - 2004. - V.26, N8. - P. 1187-1198.
38. Mendez A.S., Steppe M., Schapoval E.E. Validation of HPLC and UV spectrophotometric methods for the determination of meropenem in pharmaceutical dosage form // J. Pharm. Biomed. Anal. - 2003. - V.33, N5. - P. 947-954.
39. Michaleas S, Antoniadou-Vyza E. A new approach to quantitative NMR: fluoroquinolones analysis by evaluating the chemical shift displacements // J. Pharm. Biomed. Anal. - 2006. - V.42, N4. - P. 405-410.
40. Nemutlu E., Kir S., Katlan D. et al. Simultaneous multiresponse optimization of an HPLC method to separate seven cephalosporins in plasma and amniotic fluid: application to validation and quantification of cefepime, cefixime and cefoperazone // Talanta. - 2009. - V.80, N1. - P. 117-126.
41. Pallotta K.E., Elwell R.J., Nornoo A.O. et al. Stability of tobramycin and ceftazidime in icodextrin peritoneal dialysis solution // Perit. Dial. Int. - 2009. - V.29, N1. - P. 52-57.
42. Pires de Abreu L.R., Ortiz R.M., de Castro S.C. et al. HPLC determination of amoxicillin comparative bioavailability in healthy volunteers after a single dose administration // J. Pharm. Pharm. Sci. - 2003. - V.6, N2.
- P. 223-230.
43. Rote A.R., Pingle S.P. Reverse phase-HPLC and HPTLC methods for determination of gemifloxacin mesylate in human plasma // J. Chromatogr. B. Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. - 2009. - V.877, N29. - P. 3719-3723.
44. Seifrtovä M., Noväkovä L., Lino C. et al. An overview of analytical methodologies for the determination of antibiotics in environmental waters // Anal. Chim. Acta. - 2009. - V.649, N2. - P. 158-179.
45. Shahab F.M., Kobarfard F., Dadashzadeh S. Simultaneous determination of a new antituberculosis agent KBF-611 and its de-acetylated metabolite in mouse and rabbit plasma by HPLC // Arch. Pharm. Res. - 2009. - V.32, N10. - P. 1453-1460.
46. Signs S.A., File T.M., Tan J.S. High-pressure liquid chromatographic method for analysis of cephalosporins // Antimicrob. Agents Chemother. - 1984. - V.26, N5. - P. 652-655.
47. Sturini M., Speltini A., Pretali L. el al. Solid-phase extraction and HPLC determination of fluoroquinolones in surface waters // J. Sep. Sci. - 2009. - V.32, N17. - P. 3020-3028.
48. Sun X., Wu D., Shao B. et al. High-performance liquid-chromatographic separation of ofloxacin using a chiral stationary phase // Anal. Sci. - 2009. - V.25, N7. - P. 931-933.
49. Tylova T., Olsovska J., Novak P. et al. High-throughput analysis of tetracycline antibiotics and their epimers in liquid hog manure using Ultra Performance Liquid Chromatography with UV detection // Chemosphere. - 2010. - V.78, N4. - P. 353-359.
50. Vial J., Cohen M., Sassiat P. et al. Pharmaceutical quality of docetaxel generics versus originator drug product: a comparative analysis // Cur. Med. Res. Opin. - 2008. - V.7, N24. - P. 2019-2033.
