CC BY
268
ЛЕКЦИИ
Для цитирования: Дюльгер, Г.П. Современные методы искусственного осеменения собак / Г.П. Дюльгер, П.Г. Дюльгер, Е.С. Седлецкая, УДК 636.7.082.453
Н.И. Колядина // Российский ветеринарный журнал. — 2017. — № 8. — С. 34-38.
For citation: Dyulger G.P., Dyulger P.G., Sedletskaya E.S., Koladina N.I., Current Techniques of Artificial Insemination in Dogs, Rossijskij ve-terinarnyj zhurnal (Russian veterinary journal), 2017, No. 8, pp. 34-38.
Современные методы искусственного осеменения собак
Г.П. Дюльгер1, доктор ветеринарных наук, зав. кафедрой морфологии и ветеринарии ([email protected]), П.Г. Дюльгер1, кандидат ветеринарных наук, старший преподаватель кафедры морфологии и ветеринарии, Е.С. Седлецкая1, кандидат ветеринарных наук, старший преподаватель кафедры морфологии и ветеринарии, Н.И. Колядина2, ветеринарный врач-репродуктолог.
1 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Российский государственный аграрный университет — МСХА имени К.А. Тимирязева» (127550, Москва, ул. Тимирязевская, д. 49).
2 Ветеринарный центр «Ковчег», (107023, Москва, ул. Большая Семеновская, 10 стр. 11).
В статье подробно описаны история, современное состояние и технологические процессы искусственного осеменения собак: получение спермы, оценка качества эякулята, разбавление и хранение спермы, выбор времени осеменения и введения свежеполученной, разбавленной или криоконсервированной спермы в половые пути самок. Сперму вводят интравагинально или внутриматочно под контролем вагинального эндоскопа, лапароскопа или через разрез брюшной стенки. Эффективность осеменения напрямую зависит от места введения спермы. Влагалищное осеменение является более простым, дешевым и менее инвазивным, чем внутриматочное трансцервикальное или трансабдоминальное осеменение. Метод широко и с большим успехом используют для осеменения собак свежеполученной спермой. При использовании криоконсервированной спермы методом выбора, на сегодняшний день, является внутриматочный с эндоскопической катетеризацией шейки матки. К сожалению, метод трудоемкий, требуются опыт и дорогостоящее оборудование для эндоскопической визуализации и катетеризации шейки матки.
Ключевые слова: собаки, сперма, искусственное осеменение
Сокращение: ИЭ — индекс эозинофилии, ЛГ — люте-инизирующий гормон, RCF — relative centrifugal force (относительное центробежное ускорение)
Введение
Искусственное осеменение — репродуктивная технология, при которой сперму, полученную от самца-производителя, с помощью специальных инструментов вводят в половые пути самки для ее плодотворного осеменения [1].
Первый опыт по искусственному осеменению собак, приведший к рождению двух щенков породы спаниель, был выполнен в 1780 г. всемирно известным итальянским физиологом Лаззаро Спаланцани [24]. Первые щенята с применением разбавленной охлажденной спермы были получены в 1954 г. [11], с применением за-морожено-оттаянной — в 1969 г. [22].
В настоящее время искусственное осеменение собак достаточно широко практикуют во многих странах мира и, в частности, в США, Северной и Центральной Европе. Коммерческое применение искусственного осеменения в собаководстве (экспорт, импорт спермы, требования к родительским парам, правила регистрации потомства и т. д.) регламентируется Национальными кинологическими федерациями.
Работу по искусственному осеменению собак проводят в следующем порядке: получение спермы; оценка качества полученного эякулята; разбавление, хранение и транспортировка спермы; выбор времени осеменения самки; введение спермы в половые пути самки [2, 3].
Получение спермы
Сперму от самцов получают методом мастурбации. Технически данный способ несложен. Первые несколько раз сперму лучше брать в присутствии самки в охоте. Оператор (с активной правой рукой) располагается слева от самца, которому позволяют обнюхать самку, со-
вершить несколько садок, не допуская коитуса. Затем через препуциальный мешок рукой массируют половой член. При появлении признаков эрекции препуциаль-ный мешок отводят назад и выводят наружу краниальную часть полового члена. Половой член снизу и позади его луковицы обхватывают большим и указательным пальцами левой руки и ритмично сжимают. Этот прием приводит к полной эрекции пениса и эякуляции.
Сперма выделяется в виде трех четко разделенных фракций (рис. 1). Первая фракция эякулята представляет собой прозрачный, слегка опалесцирующий, жидкий
Рис. 1. Фракции спермы собаки (слева направо: первая, вторая и третья фракции). Пояснение в тексте Fig. 1. Fractions of the dog sperm (from the left to the right: the first, second and third fraction). Explanation in the text
секрет со слабокислой реакцией. Она очищает мочеполовой канал от остатков мочи и, как правило, не содержит спермиев. Вторая — серо-белого, белого или молочно белого цвета, состоит из спер-миев и незначительного количества жидкого секрета со слабокислой реакцией. По консистенции она напоминает обезжиренное или разбавленное водой молоко. При ее выделении самцы обычно совершают ритмичные тол-кательные движения тазом. Третья фракция — бесцветная и прозрачная — представляет собой секрет предстательной железы. Имеет слабощелочную реакцию и, как правило, не содержит спермиев. Выделение первой фракции длится в среднем 13,5 с, второй — 52,4 с, третьей — примерно 7 мин. Объем первой фракции составляет 0,33 (0,1.. .2) мл, второй — 1,17 (0,1.. .3) мл, третьей — может варьироваться в широких пределах от 1,2 до 20 мл [7].
При выделении третьей фракции спермы половой член самца поворачивают на 180° (отводят назад для имитации «полового замка»).
Для раздельного получения фракций эякулята используют набор градуированных пластиковых пробирок объемом 15 мл со съемными воронками разного цвета.
Сперму берут от здоровых, физиологически зрелых племенных самцов-производителей в манеже с соблюдением ветеринарно-санитарных правил и не более трех раз в неделю. Эякуляты хорошего качества получают, если интервал между взятиями спермы составляет 2.. .5 суток. При длительной сексуальной абстиненции или нерегулярном (с интервалом 10 суток и более) получении спермы в эякуляте существенно возрастает доля спермиев с морфологическими аномалиями и резко снижается активность спермиев [18]. Для криоконсервации сперму от сацов-производителей получают еженедельно — два эякулята с перерывом 1.2 ч.
Самую высокую фертильность самцы-производители имеют в возрасте от 18 мес до 4 лет. После 4-летнего возраста у самцов часто регистрируют патологию простаты (дисгормональной или воспалительной природы), приводящую к существенному снижению оплодотворяющей способности их спермы.
Сперма для осеменения
Для осеменения собак используют свежеполученную, охлажденную или замороженную сперму. В Европе примерно в 50.55 % случаях самок осеменяют свежепо-лученной спермой, в 10 % случаях — охлажденной (транспортной) спермой, в 35....40 % случаях — заморо-жено-оттаянной [14].
Свежеполученная сперма. Ее используют сразу же после оценки качества. Доля активных с нормальной морфологией спермиев в эякуляте должна быть не ниже 75 % [9]. Для осеменения используют весь эякулят или часть его (вторую фракцию). При использовании для осеменения целого эякулята (или его второй фракции) количество спермиев в дозе может колебаться от 200 до 1200 млн [9]. Исключение из этого правила составляют собаки миниатюрных пород, у которых часто суммарное количество спермиев в эякуляте не превышает 50.100 млн. При использовании для осеменения части эякулята количество активных спермиев в спермодозе должно быть не менее 150.200 млн [14]. Переживаемость спермиев в половых путях самок после их естественного или искусственного осеменения свежеполученной спермой практически одинаковая и составляет 4.6 суток.
Охлажденная сперма. Для разбавления и кратковременного хранения спермы используют готовые к использованию коммерческие искусственные среды (Canine EXTTM - Chilled semen, Cani-Plus Chill, CaniPRO™ Chill 5, CaniPRO™ Chill 10 и др.) либо трис-буферную среду, приготовленную из отдельных компонентов. В состав этой среды входят: трис(гидроксиметил)аминоме-тан — 6,056 г, лимонная кислота — 3,4 г, фруктоза — 2,5 г, вода бидистилированная — 200 мл. После растворения всех компонентов среду стерилизуют на водяной бане в течение 10 мин с момента закипания. Затем охлаждают до температуры 35.40 °С и добавляют кристаллический пенициллин (200 ЕД), дигидрострептоми-цин 0,2 г, а затем и желток куриного яйца в соотношении 1:4 (20 % от объема среды).
Эякулят разбавляют как минимум 1:2. После разбавления сперму медленно охлаждают и хранят в холодильнике при температуре 4.5 оС не более 48 ч. В некоторых коммерческих средах, например CaniPRO™ Chill 10, сперму собак можно хранить в холодильнике при температуре 4.5 оС без существенно снижения ее качества до 10 суток. Транспортируют сперму в термосах-охладителях различной конструкции. Непосредственно перед осеменением оценивают активность охлажденной спермы. Для осеменения ее используют как в охлажденном виде, так и подогретой на водяной бане до 37 °С [20].
Охлаждение оказывает неблагоприятное действие на переживаемость спермиев в половых путях самок. При использовании охлажденной спермы в первые 24.48 ч показатель переживаемости спермиев составляет 24.72 ч.
Криоконсервированная, или замороженная, сперма. Для разбавления используют только вторую фракцию эякулята. После всесторонней макро- и микроскопической оценки эякулята его разбавляют криопротектор-ными средами, содержащими глицерин.
При высокой концентрации спермиев эякулят разбавляют в соотношении 1:2.1:6. При низкой концентрации спермиев эякулят центрифугируют при RCF 700.1000 g в течение 5 мин [9]. Надосадочную жидкость удаляют, а концентрат спермиев разбавляют до требуемой концентрации — 100.200 млн спермиев/мл.
По шведской технологии, или методу Уппсальского университета, свежеполученный эякулят вначале разбавляют трис-лимонной кислотой-фруктозо-желточной средой, содержащей 3 % глицерина, и медленно (в течение 1.2 ч) охлаждают до температуры 4.5 °С. После охлаждения сперму разбавляют второй раз той же трис-лимонной кис-лотой-фруктозо-желточной средой, но содержащей уже 7 % глицерина и 0,5 % пасты Equex. Паста содержит до-децилсульфат натрия — поверхностно-активное вещество, улучшающее сохранность целостности плазмолем-мы спермиев в процессе охлаждения и замораживания.
В клинической практике для разбавления спермы собак применяют также и готовые к использованию коммерческие криопротекторные среды (Triladyl®-Canine Freeze, CaniPRO™ Freeze A&B и др.).
Разбавленную сперму охлаждают и замораживают на блоках сухого льда в виде гранул объемом 100 мкл, либо расфасовывают и укупоривают в промаркированные пропиленовые соломинки объемом 0,5 мл и замораживают в парах жидкого азота.
Технология замораживания спермы в пропиленовых соломинках является основной и наиболее совершенной. Для программного замораживания спермы в соломинках применяют дорогие управляемые компьютером аппараты-замораживатели Ice Cube 15M и др. В малобюджетных лабораториях соломинки со спермой замораживают вручную: на специальном устройстве, в котором лоток с заправленными и укупоренными соломинками выдерживают в нескольких сантиметрах над уровнем жидкого азота.
После заморозки гранулы спермы собирают в промаркированные криопробирки объемом 1.2 мл, которые также, как и соломинки с криоконсервированной спермой, помещают в канистры и переносят в сосуд Дьюара, где хранят в жидком азоте при температуре -196 °С.
Сперму, замороженную в виде гранул, оттаивают в подогретом до 37 °С изотоническом растворе цитрата
(3,0 %) или хлорида (0,9 %) натрия либо в коммерческом растворе-размораживателе, например CaniPRO™ AI.
Соломинки с криоконсервированной спермой собак оттаивают в течение 45.60 с на водяной бане при температуре 37 °С. После оттаивания соломинки просушивают, кончики обрезают, их содержимое выливают в пробирку-контейнер и набирают в шприц для проведения искусственного осеменения. В зависимости от способа введения и качества используемой спермы для осеменения самок используют 2.4 и более соломинки.
Активность спермиев после размораживания должна составлять минимум 50 %.
Криоконсервация негативно влияет на активность спермиев и их переживаемость в гениталиях самки. После процедуры замораживания и оттаивания активность спермиев снижается на 20.50 %, а их переживаемость в половых путях самок сокращается до 12.24 ч. По этой причине при использовании для искусственного осеменения собак заморожено-оттаянной спермы весьма важно правильно выбрать время проведения осеменения.
Техника осеменения
Выбор времени и кратность осеменения. Самок, как правило, осеменяют на 10-е и 12-е сутки после начала течки (проэструса), на 4-е и 6-е сутки половой охоты или же на 2-е и 4-е сутки после овуляции.
Наиболее правильно оптимальное время осеменения собак можно выбрать по дате овуляции, используя непрямые методы ее определения (картина влагалищных мазков, многократные измерения концентрации прогестерона или же ЛГ в крови).
Выбор времени осеменения по картине влагалищных мазков. Пробы для анализа берут с верхнего свода слизистой оболочки влагалища каждый день или через день, начиная с 8-го дня от начала течки. Полученные мазки высушивают, фиксируют, окрашивают полихромными красителями, осматривают под микроскопом и высчитывают ИЭ, который представляет собой процентное отношение поверхностных клеток, окрашенных полихром-ным методом эозинофильно, к клеткам, окрашенным ба-зофильно. ИЭ напрямую зависит от степени эстрогенной стимуляции и положительно коррелирует с кариопикно-зом (эстрогены вызывают сначала кариопикноз, а затем эозинофилию). При наступлении овуляции ИЭ в окрашенных мазках достигает 80 % и более.
Выбор времени осеменения по концентрации прогестерона в плазме крови. Кровь для анализа берут многократно (через день, начиная с 8-го дня течки) или однократно (при наступлении половой охоты) и отправляют в ветеринарную лабораторию для гормонального анализа. Концентрацию прогестерона в плазме периферической крови определяют радиоиммуннологичес-ким или ферментоиммунологическим методом в день доставки крови в лабораторию. Время осеменения устанавливают на основании ретроспективного анализа результатов измерения концентрации прогестерона в плазме крови. У большинства самок овуляция наступает при концентрации прогестерона в плазме крови 2.4 нг/мл, у некоторых — 6.8 нг/мл. Оптимальное время для осеменения собак — 2.5-е сутки после овуляции, когда концентрация прогестерона достигает 10.20 нг/мл или 30.60 нмол/л [14]. Осеменяют собак свежеполученной спермой однократно или двукратно с перерывом 48 ч,
заморожено-оттаянной — однократно, двукратно или трехкратно с перерывом 24 ч.
W.K. Farstad [9] рекомендует осеменять собак при концентрации гормона в плазме крови 15.24 нмол/л двукратно через 48 и 64 ч после анализа; при концентрации 25.34 нмол/л — на следующие сутки после определения содержания гормона и повторно через 24 ч; при концентрации гормона 35.60 нмол/л — в день проведения анализа и повторно через 24 ч; при концентрации свыше 60 нмол/л — однократно в день исследования. На основании ретроспективного анализа результатов осеменения W.K. Farstad [9] пришел к заключению, что в идеале в день первого осеменения концентрация прогестерона крови собак должна составлять 35.54 нмол/л (12.18 нг/мл), второго осеменения — 55.75 нмол/л (19.25 нг/мл).
Разработаны приборы (eProcCheck, Minitube) для автоматического определения содержания прогестерона в крови, а также ферментоиммунологические наборы по экспресс определению концентрации прогестерона и ЛГ (Canine Ovulation Timing test kit; Cambridge Veterinary Sciences и др.) в периферической крови собак непосредственно в условиях ветеринарной клиники. К сожалению, ферментоиммунологические наборы по экспресс определению концентрации гормонов в крови оказались малопригодными для практического применения из-за недостаточно высокой точности метода при измерении концентрации прогестерона и кратковременности преовуляторного выброса ЛГ.
Способы искусственного осеменения. По месту введения спермы в половые пути самки способы искусственного осеменения собак подразделяют на влагалищные и внутриматочные.
Влагалищный способ. На сегодняшний день данный способ остается основным. Для внутривлагалищного введения спермы обычно используют одноразовые шприцы и полистироловые катетеры для искусственного осеменения собак (диаметром 4 мм, длиной 20 и 30 мм).
Самку удерживают в стоячем положении. Половые органы ее обмывают теплой водой и орошают 1%-м раствором бикарбоната натрия. По верхнему своду преддверия влагалища и влагалища вводят полистероловый катетер для осеменения собак. Продвижение катетера к цервикальному каналу контролируют рукой через брюшную стенку. С помощью адаптера к катетеру присоединяют стерильный одноразовый шприц со спермой. Осеменатор, сидящий на стуле, поднимает на свое левое бедро заднюю часть тела собаки. Собаку удерживают в наклонном положении: спереди за ошейник—владелец, сзади — осеменатор. Левой рукой осеменатор удерживает самку за левое бедро, правой медленно вводит сперму из шприца во влагалище. Катетер извлекают, в преддверие и каудальную часть влагалища вводят на 10 мин большой палец для имитации «полового замка» и стимуляции антиперистальтических сокращений в матке. Наклонное положение самки при введенном в ее влагалище пальце способствует быстрому проникновению спермы в матку. По материалам японских исследователей [27], уже через 2,5 мин после введения спермы в краниальную часть влагалища спермии оказываются в полости верхушки рогов матки. После осеменения собаку выгуливают 30 мин, не позволяя ей бегать, прыгать и садиться.
Для внутривлагалищного осеменения собак используют также гибк^ резиновые катетеры Osiris или MAVIC с баллоном на конце (рис. 2), который наполняют стериль-
Рис. 2. Интравагинальный способ осеменения собаки с использованием гибкого резинового катетера с баллоном на конце Fig. 2. Vaginal insemination of dog: the using of a flexible rubber catheter with the balloon at its end
ным изотоническим раствором натрия хлорида и удерживают катетер в нужном положении внутри влагалища, имитируют «половой замок», тем самым предотвращая рефлюкс спермы из половых органов наружу. Объем вводимой дозы может варьироваться от 1...2 до 5...8 мл, что зависит от размеров самки.
Хорошие результаты получают при осеменении собак свежеполученной спермой. По частоте наступления беременности и/или по результатам щенения эффективность внутривлагалищного осеменения собак свеже-полученной спермой достигает 47,8...89 % [13, 17, 22, 26].
Эффективность интравагинального осеменения собак охлажденной спермой зависит от срока ее хранения. По материалам С. Linde-Forsberg [13], при кратковременном хранении разбавленной спермы ее эффективность существенно не отличается от свежеполученной (45,1 против 47,8 %).
Результативность осеменения собак заморожено-отта-янной спермой не постоянна: по разным оценкам она варьируется от 10.34,6 % [13, 15] до 46,0.57,9 % [10, 13, 22].
Внутриматочный способ. В литературе описаны два нехирургических и два хирургических способа внутри-маточного осеменения собак.
Нехирургический внутриматочный способ осеменения при помощи эндоскопа разработан в Новой Зеландии [28, 29]. Для трансцервикального внутриматочного осеменения собак применяют тубусный цистоэндоскоп (№ 23 по шкале Шаррьера) с оптической трубкой (длиной 30 см, диаметром 4 мм с углом зрения 25.30 °), источником света и инструментальным каналом для осе-менительного инструмента, гибкий полистероловый трансцервикальный катетер с изогнутым кончиком.
Современные эндоскопы снабжены видеосистемой. Видеоэндоскопы более удобны в работе, чем эндоскопы. Они не только обеспечивают показ изображения на мониторе и его прямую запись на персональный компьютер, но и дают возможность владельцу животного в режиме реального времени наблюдать за ходом искусственного осеменения его собаки.
Самку фиксируют в положении стоя на столе. Прибор вводят по верхнему своду влагалища до ее самой узкой, парацер-викальной части. Непосредственно через окуляр оптической трубки или при помощи видеосистемы визуализируют вход в шейку матки (рис. 3), который расположен между медиальной парацервикальной складкой влагалища и цервикаль-ным бугорком. Под визуальным контролем через инструментальный канал прибора в цервикальный канал направляют гибкий полистероловый трансцервикальный катетер с изогнутым кончиком (рис. 4). Изогнутый кончик катетера облегчает его введение в цервикальный канал. После внутриматоч-ного введения спермы заднюю часть туловища поднима-
Рис. 3. Визуализация входа в цервикальный канал и введение
(проведение) трансцервикального катетера в полость матки
Fig. 3 Visualization and endoscopic catheterization of the canine cervix
ШВР M_
Рис. 4. Положение рук и инструментов при внутриматочном осеменении собаки под контролем видеоэндоскопа
Fig. 4. Position of hands and tools during the intrauterine insemination of dog under the control of the videoendoscope
ют, эндоскоп и катетер для осеменения извлекают из половых органов. Чтобы минимизировать вероятность рефлюкса введенной в матку спермы наружу, самку удерживают в наклонном положении в течение 5.10 мин.
Для трансцервикального внутиматочного осеменения можно также использовать гибкий эндоскоп, который вводят во влагалище собак при помощи интуба-ционной трубки с надувной манжетой. Процедура достаточно трудоемкая: на отыскание шейки матки при помощи гибкого видиоэндоскопа и введение катетера в полость тела матки требуется в среднем 7,5 мин [12].
По частоте наступления беременности и/или по результатам щенения эффективность трансцервикального осеменения собак заморожено-оттаянной спермой под эндоскопическим контролем достаточно высокая и достигает при использовании свежеполученной спермы 100 % [15], замо-рожено-оттаянной — 64.100 % [12, 16, 19, 21, 28].
Недостатки способа: он неприемлем для нервных самок и самок с длинным влагалищем; процедура внутри-маточного осеменения очень сложна и трудоемка, связана с использованием дорогих инструментов и необходимостью специальной предварительной подготовки.
Нехирургический внутриматочный способ осеменения собак с помощью норвежского катетера, применяемого для осеменения лисиц, разработан в Швеции [4]. Катетер состоит из защитной нейлоновой оболочки толщиной 10 мм, тонкой металлической трубки диаметром 1.2 мм, рабочий конец которой (более узкий, толщиной 0,75.1 мм), тупой с боковым выходным отверстием, другой (входной) — открытый с разъемом для присоединения шприца. Выпускают три модели норвежского катетера: длиной 20, 30 и 40 см. Катетеры длиной 20 см предназначены для осеменения мелких собак, 30 и 40 см — средних и крупных по размеру самок, соответственно.
Металлический катетер в нейлоновой протекторной оболочке вводят по верхнему своду влагалища в его краниальную часть. С помощью большого и указательного пальцев захватывают шейку матки и контролируют прод-
вижение катетера до входа в цервикальный канал. Металлический катетер выдвигают из защитной оболочки. Осторожно манипулируя катетером и шейкой матки, отыскивают вход в канал шейки матки. Цервикальный канал проходят, вращая катетер и оттягивая шейку матки вперед и вниз. Длина канала шейки матки составляет всего 0,5...1 см. Сперму вводят, удостоверившись, что кончик катетера находится в теле матки. Катетер извлекают. Самке придают наклонное положение и удерживают в нем в течение 10 мин, введя во влагалище большой палец.
Опытный ветеринарный врач на отыскание шейки матки и введение катетера в полость тела матки затрачивает около 1 мин. Эффективность катетеризации цервикального канала и введения спермы в полость тела матки достигает 95,5.98,0 % [5].
Метод прошел широкую клиническую апробацию и доказал свою высокую эффективность при использовании как свежеполученной, так и заморожено-оттаян-ной спермы. Так, при использовании для осеменения свежеполученной спермы эффективность достигает 65,2.84 % [8,13], охлажденной — 65,2 % [l3], замо-рожено-оттаянной — 52.90,9 % [4, 8, 10, 13, 25].
Недостатки способа: неприемлем для нервных и тучных собак; связан с риском травмирования и инфицирования половых органов самки; технически трудновыполним — необходимы специальная подготовка и постоянная практика.
Хирургический внутриматочный способ осеменения через разрез брюшной стенки заключается в следующем. Самок выдерживают на голодной диете 18...24 ч. Под общим наркозом фиксируют на столе в спинном положении. Крышку операционного стола переводят в наклонное положение, чтобы вызвать смещение внутренних органов вперед и облегчить процедуру обнаружения рогов матки в брюшной полости. С соблюдением правил асептики и антисептики подготавливают операционное поле и делают разрез по белой линии живота. После топографической ориентации в брюшной полости из операционной раны извлекают и при помощи пластикового катетера, надетого на иглу, пунктируют один или оба рога матки. После прокола катетер продвигают вперед по просвету рога матки, иглу извлекают и через разъем катетера в его полость при помощи шприца вводят сперму в небольшом объеме (примерно 0,5..3 мл). После извлечения катетера место пункции прижимают стерильным тампоном. Брюшную стенку зашивают обычным способом.
Процедура осеменения очень проста, но трудоемка, связана с использованием общего наркоза и возможна только в условиях клиники. На основании ретроспективного анализа результатов хирургического внутриматочного осеменения 235 собак свежеполученной, охлажденной замо-рожено-оттаянной спермой D.M. Burgess et al. [6] установили, что эффективность метода при содержании в спермо-дозе не менее 200 млн активных спермиев составляет в среднем 73,1 %. По материалам S.J. Mason, N.R. Rous [16], при использовании заморожено-оттаянной спермой в дозе 100 млн активных спермиев, эффективность достигает 45 %.
В настоящее время этот метод осеменения имеет ограниченное число сторонников. В некоторых странах Европы его практическое применение по этическим соображениям запрещено (Великобритания).
Хирургический внутриматочный способ осеменения с помощью лапароскопа и специальной пипетки
38 • рвж •
с игольчатым наконечником разработан в Японии [27] и подробно описан в работе L. D. М. Silva et al. [23].
Самку выдерживают на голодной диете. Под общим наркозом фиксируют на операционном столе в наклонно-спинном положении. Вентральную поверхность живота выбривают, обрабатывают антисептиками. При помощи иглы в брюшную полость накачивают диоксид углерода. Отступив от пупка 1 см назад по белой линии, при помощи троакара сначала в брюшную полость вводят световод диаметром 8 мм, соединенный с камерой лапароскопа, и отыскивают рога матки, затем на правой стороне живота, отступив 2 см в сторону от заднебрюшной молочной железы, вводят второй троакар диаметром 5 мм. Эндоскопическими щипцами, введенными в брюшную полость через канюлю троакара, захватывают тело матки и подтягивают к вентральной поверхности брюшной стенки. Брюшную стенку и рог матки прокалывают иглой, через просвет которой вводят внутриматочный катетер. Иглу извлекают и через катетер осеменяют самку.
По материалам T. Tsutsui et al. [27], при использовании свежеполученной спермы, эффективность однократного внутриматочного осеменения под контролем лапарото-мии достигает: при содержании в спермодозе 20..40 млн активных спермиев — 100 %, 10 млн — 90 %, 3.5 млн — 28 %. В работе L.D.M. Silva et al. [23] эффективность двукратного с перерывом 48 ч внутриматочного осеменения собак 1 мл свежеполученной спермы (250.. ..460 млн спер-миев) под контролем лапароскопа составила 60 %.
Недостатки способа: очень сложен, трудоемок, связан с использованием дорогостоящей аппаратуры, малопригоден для производственного применения. При проколе брюшной стенки существует риск повреждения крупных сосудов и внутренних органов.
Краткая характеристика существующих методов искусственного осеменения собак свидетельствует о том, что при использовании свежеполученной спермы наиболее доступным и приемлемым для практического применения является влагалищный, при использовании криокон-сервированной спермы — нехирургический внутриматочный способ осеменения под эндоскопическим или видеоэндоскопическим контролем.
Библиографию см. на сайте издательства http://logospress.ru/mdg
ABSTRACT
G.P. Dyulger1, E.S. Sedletskaya1, P.G. Dyulger1, N.I. Ko-ladina2
1 Russian State Agrarian University — Moscow Timiryazev Agricultural Academy
(49, Timiryazevskaya str., Moscow,127550). 3 Veterinary Centre «Kovcheg», (10, build. 11, Bolshhaya Semenovskaya str., Moscow, 107023).
Current Techniques of Artificial Insemination in Dogs. The current status of the canine artificial insemination - from collection, evaluation, storage of sperm and timing insemination to vaginal or intrauterine deposition of fresh, chilled and frozen sperm are reviewed in this article. In dogs, there are several basic possibilities for where the semen is placed: vaginal, intrauterine through of the cervix (by the use rigid endoscope) or through the abdomen (after laparascopy or laparatomy). The site of placement of semen has influence on pregnancy rates. Vaginal artificial insemination is a less expensive and invasive method in comparison to the transcervical and intrauterine methods, and has been widely used for the artificial insemination of dogs and gives acceptable pregnancy rates with fresh sperm. Intrauterine artificial insemination by vaginal endoscopy is the current method of choice for frozen-thawed semen. However, it is costly, time-consuming; and requires technical proficiency and the use of special equipment for endoscopic or videoendoscopic transcervical catheterization. Keywords: dogs, sperm, artificial insemination.
№ 8/2017 •
