CC BY
14
УДК [616-005.1-08:331.1]:615.22
Ключевые слова: поросята, фаза молочно-растительного питания, гемостаз, сосудистая стенка, перекисное окисление липидов
Key words: piglets, milk and vegetable feeding stage, hemostasis, vessel wall, lipid peroxidation
Краснова Е. Г., Медведев И. Н.
СОСУДИСТЫЙ КОНТРОЛЬ НАД ГЕМОСТАЗОМ У ПОРОСЯТ МОЛОЧНО-РАСТИТЕЛЬНОГО ПИТАНИЯ
vascular hemostasis in piglets at the milk and vegetable
feeding stage
Курский институт социального образования (филиал) Российского государственного социального университета Адрес: 305029, Россия, г. Курск, ул. К. Маркса, 53
Kursk Institute of social Education (branch of the Russian state social university) Address: 305029, Russia, Kursk, Karl Marx street, 53
Краснова Евгения Геннадьевна, к. б. н., соискатель каф. адаптивной физической культуры и медико-биологических наук
Krasnova Eugenia G., Ph.D. in Biology science, Competitor for science Degree of the Dept. of Adapted Physical Education and Biomedical sciences Медведев Илья Николаевич, д. б. н., проф., зав. каф. адаптивной физической культуры и медико-биологических наук
Medvedev Il'ya N., Doctor of Biology science, Professor, Head of the Dept. of Adapted Physical Education and Biomedical sciences
Аннотация. При обследовании 35 здоровых поросят в течение фазы молочно-растительного питания выявлено постепенное понижение содержания в их крови количества продуктов перекисного окисления за счет усиления активности антиоксидантного потенциала их плазмы. Для здоровых поросят молочно-растительного питания характерен низкий уровень эндотелиоцитемии, сочетающийся с возрастным повышением синтеза в сосудистой стенке веществ с антиагрегационной активностью, антитромбина III и тканевых активаторов плазминогена. Summary. The examination of 35 healthy piglets at the milk and vegetable feeding stage revealed that the degree of lipid peroxidation products in blood gradually decreases due to the increase of the activity of their plasma antioxidant potential. At this stage healthy piglets are characterized by low level of endotheliocytemia associated with age-dependent rise of synthesis of substances with antiaggregatory activity, antithrombin III and tissue plasminogen activators in a vessel wall.
Введение
Начало поступления в организм поросенка растительных кормов является серьезным этапом созревания регуляторных систем его организма. В этих условиях существенным элементом поддержания гомеостаза растущего организма животного является сосудистый гемостаз, в значительной мере контролирующий уровень притока крови к тканям. Возрастная динамика гемостатической активности стенки сосудов у поросят при смене питания, слагающейся из антиагрега-ционной, противосвертывающей и фибрино-литической их способностей, в значительной мере определяет состояние микроциркуляции в тканях и тем самым уровень в них метаболических процессов [7].
Состояние контроля сосудистой стенки над гемостазом в фазу молочно-раститель-ного питания существенно определяет рост и развитие животного на протяжении всего последующего онтогенеза, закладывая основы продуктивных свойств поросенка [6]. Несмотря на высокую научную и практическую значимость гемостатической активности сосудистой стенки у поросят в течение фазы молочно-растительного питания, ее особенности оставались изучены весьма недостаточно, диктуя потребность спланировать и провести настоящее исследование.
Цель работы - выяснить возрастную динамику гемостатической активности сосудистой стенки у здоровых поросят в течение фазы молочно-растительного питания.
Материалы и методы исследования
Находившиеся под наблюдением 35 здоровых поросят молочно-растительного питания породы крупная белая осматривались и обследовались 5 раз: на 21-е, 25-е, 30-е, 35-е и 40-е сутки жизни.
У всех животных регистрировали интенсивность перекисного окисления липи-дов плазмы (ПОЛ), оценивая в ней уровень ацилгидроперекисей (АГП) [4] и тиобарби-туровой кислоты (ТБК) - активных продуктов набором «Агат-Мед» с выявлением выраженности антиокислительной активности (АОА) жидкой части крови [3].
Величину эндотелиоцитемии у поросят устанавливали по Зайнулиной М. С. (1999) [5]. Антиагрегационную способность сосудистой стенки оценивали по Балуда В. П. и соавт. (1987) [1] на основе визуального микрометода регистрации агрегации тромбоцитов (АТ) [8] с применением в качестве индукторов АДФ (0,5*10"4 М), коллагена (разведение 1 : 2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед./мл), ристомицина (0,8 мг/мл) и адреналина (5,0х10_6 М), а также с сочетаниями агонистов: АДФ и адреналин, АДФ и коллаген, коллаген и адреналин в аналогичных концентрациях со стандартизированным количеством тромбоцитов в исследуемой плазме 200*109 тр. до и после временной венозной окклюзии. Во всех случаях рассчитывался индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) путем деления времени АТ на фоне венозной окклюзии на время АТ без нее.
У включенных в группу наблюдения поросят рассчитывался индекс антикоагуляци-онной активности стенки сосуда (ИАКАСС) путем деления активности антитромбина III (АТ III) [2] после венозной окклюзии на его активность до нее [1].
Фибринолитическая способность сосудистой стенки определялась путем регистрации времени лизиса фибринового сгустка [2] до и после временной венозной окклюзии, вызывающей выброс из стенки сосуда в кровь тканевого активатора плаз-миногена [1] с вычислением индекса фи-бринолитической активности сосудистой стенки (ИФАСС) путем деления времени
лизиса до окклюзии на время лизиса после нее.
Полученные в ходе исследований результаты обработаны с применением критерия Стьюдента.
Результаты исследований
У поросят в течение фазы молочно-рас-тительного питания выявлено достоверное уменьшение содержания в плазме крови АГП и ТБК-активных соединений с 1,38±0,07 Д233 / 1 мл до 1,26±0,03 Д233 / 1 мл и с 3,16±0,11 мкмоль/л до 3,02±0,08 мкмоль/л, соответственно. Это обуславливалось постепенным усилением антиоксидантной защищенности плазмы с 36,8±0,10 % в начале третьей фазы раннего онтогенеза до 38,7±0,04 % в ее конце.
Для здоровых поросят молочно-расти-тельного питания оказалась характерна высокая целостность эндотелиальной выстилки, о чем можно было судить по стабильно низкой эндотелиоцитемии (в среднем 1,2±0,05 клеток/мкл), что во многом обеспечивало высокий синтез гемостатически активных веществ в стенке сосудов.
У наблюдаемых здоровых животных в течение третьей фазы раннего онтогенеза отмечено постепенное повышение величин ИААСС со всеми примененными индукторами и их сочетаниями (табл. 1).
Минимальные значения среднего уровня ИААСС отмечены для тромбина в виду наибольшей активности данного индуктора и наименьшей выраженности торможения АТ с ним при венозной окклюзии. С остальными индукторами и их сочетаниями зарегистрирован более высокий уровень ИААСС, величины которых испытывали нарастание в течение всей фазы молочно-растительного питания.
У наблюдаемых поросят выявлено постепенное нарастание антикоагулянтной активности сосудистой стенки с 21-х по 40-е сутки жизни, на что указывало найденное повышение активности АТ III в их крови до пробы с временной венозной окклюзией и после нее (табл. 1). В крови поросят молочно-рас-тительного питания выявлено нарастание активности АТ III до 99,5±0,08 %, сочетающееся с повышением его продукции эндоте-
лиоцитами на 5,1 %, что обеспечивало рост ИАКАСС у животных до 1,35±0,08.
При оценке фибринолитической активности сосудистой стенки у поросят мо-лочно-растительного питания отмечено сокращение времени спонтанного лизиса фибринового сгустка на 2,6 %, при этом секреция тканевых активаторов плазминогена, провоцируемая созданием временной ишемии венозной стенки в течение фазы молоч-но-растительного питания, судя по динамике ИФАСС, возрастала на 7,4 % (табл. 1).
Обсуждение результатов
Начало потребления кормов растительного происхождения считается одним из ключевых этапов раннего онтогенеза поросенка, способным заложить основу его будущих продуктивных свойств и адекватной адаптации к внешней среде всех органов и систем животного [6]. При этом одним из важнейших интегративных элементов в организме животного являются сосуды, которые играют ведущую роль в поддержании жидкостных свойств крови. Данная способность стенок сосудов у молодняка свиней обеспечивается определенной возрастной динамикой секреции из них гемостатически активных факторов [7].
Невысокая активность ПОЛ плазмы у поросят в фазу молочно-растительного питания во многом обеспечивает низкую альтерацию эндотелиоцитов, являющуюся морфологической основой возрастного усиления анти-агрегационной способности стенки сосудов в результате нарастания генерации в ней простациклина и N0, контролирующих состояние микроциркуляции в тканях.
У здоровых поросят молочно-раститель-ного питания найдено повышение контроля сосудистой стенки над адгезивной способностью кровяных пластинок, реализуемое, как минимум, через два механизма. Первый -повышение контроля сосудистой стенкой над количеством коллагеновых рецепторов (гликопротеиды !а-Па и VI) на поверхности тромбоцитов, что было косвенно определено по нарастанию торможения АТ с коллагеном в пробе с временной венозной окклюзией. Второй механизм заключался в понижении
выработки фактора Виллебранда структурами сосудов с одновременным снижением экспрессии рецепторов к нему ^Р!в) на поверхности кровяных пластинок в ответ на поступление в кровоток физиологических сосудистых антиагрегантов.
Усиление выработки в стенках сосуда веществ с антиагрегантной активностью обеспечивало также ослабление фиксации сильных агонистов - коллагена и тромбина - к их рецепторам на мембране тромбоцитов при одновременном понижении активности фосфолипазы С и торможении фосфоинозитольного пути активации тромбоцитов. Это сопровождалось также уменьшением влияния слабых индукторов агрегации - АДФ и адреналина - на рецепторы тромбоцитов за счет уменьшения выраженности экспрессии фибриногеновых рецепторов (ОРИв-Ша), ослабления активности фосфолипазы А2, уменьшения выхода ара-хидоновой кислоты из тромбоцитарных фосфолипидов и подавления тромбоксано-генерации [2].
Усиление антиагрегационной способности сосудистой стенки на протяжении фазы молочно-растительного питания в отношении сочетаний индукторов агрегации подтверждало выраженное нарастание выработки дезагрегантов в сосудах, моделируя реальные условия кровотока.
Важным компонентом обеспечения атром-богенной активности сосудистой стенки у поросят молочно-растительного питания является отмеченное постепенное нарастание ее антикоагулянтных и фибринолитических возможностей. Первые связаны с усилением выработки в структурах стенки сосудов одного из мощнейших физиологических антикоагулянтов - АТ-Ш. Вторые определялись постепенным повышением в них синтеза активаторов плазминогена.
Таким образом, выявленное у поросят молочно-растительного питания ослабление ПОЛ жидкой части крови во многом способствует повышению антиагрегационной, антикоагуляционной и фибринолитической возможностей стенки сосудов, поддерживая адекватность контроля сосудов над процессом гемостаза в целом.
Таблица 1.
Гемостатическая активность сосудов у поросят молочно-растительного питания
Параметры Фаза молочно-растительного питания, n=35, M±m Ср. знач.,
n=35, M±m
21 сут. 25 сут. 30 сут. 35 сут. 40 сут.
жизни жизни жизни жизни жизни
ИААСС с АДФ 1,75±0,04 1,78±0,08 1,83±0,02 р < 0,05 1,88±0,04 р < 0,05 1,94±0,08 р < 0,05 1,84±0,05
ИААСС 1,72±0,03 1,76±0,05 1,83±0,08 1,88±0,06 1,95±0,07 1,83±0,06
с коллагеном р < 0,05 р < 0,05 р < 0,05 р < 0,05
ИААСС 1,53±0,06 1,55±0,04 1,58±0,03 1,61±0,08 1,67±0,03 1,59±0,05
с тромбином р < 0,05 р < 0,05 р < 0,05
ИААСС 1,76±0,06 1,80±0,02 1,83±0,03 1,88±0,07 1,94±0,07 1,84±0,05
с р < 0,05 р < 0,05 р < 0,05
ИААСС 1,70±0,02 1,72±0,03 1,77±0,09 1,81±0,05 1,87±0,08 1,77±0,05
с ристомицином р < 0,05 р < 0,05 р < 0,05
ИААСС 1,76±0,06 1,79±0,07 1,82±0,08 1,86±0,05 1,91±0,06 1,82±0,06
с адреналином р < 0,05 р < 0,05 р < 0,05
ИААСС 1,56±0,05 1,62±0,08 1,71±0,04 1,79±0,02 1,88±0,09 1,71±0,06
с АДФ+адреналином р < 0,01 р < 0,01 р < 0,01 р < 0,01
ИААСС 1,64±0,07 1,76±0,10 1,89±0,12 1,95±0,08 2,00±0,03 1,85±0,08
с АДФ+коллагеном р < 0,01 р < 0,01 р < 0,01 р < 0,05
ИААСС 1,64±0,08 1,71±0,04 1,78±0,08 1,89±0,07 1,96±0,04 1,80±0,06
с адреналином+коллагеном р < 0,01 р < 0,01 р < 0,01 р < 0,01
Активность АТ-Ш 98,1±0,06 98,3±0,07 98,6±0,11 98,9±0,04 99,5±0,08 98,7±0,07
в плазме до компрессионной пробы, % р < 0,05 р < 0,05
Активность АТ-Ш 128,3±0,14 129,5±0,07 130,6±0,08 132,3±0,05 134,8±0,20 131,1±0,17
в плазме после компресси- р < 0,05 р < 0,05
онной пробы, %
Индекс антикоагулянтной 1,30±0,05 1,31±0,08 1,32±0,04 1,34±0,02 1,35±0,08 1,32±0,08
активности сосудистой р < 0,05 р < 0,05
стенки
Время лизиса 8,0±0,05 8,0±0,04 7,9±0,01 7,8±0,03 7,8±0,09 7,9±0,09
фибринового сгустка р < 0,05 р < 0,05
до компрессии, мин.
Время лизиса 5,4±0,05 5,3±0,02 5,1±0,06 5,0±0,12 4,9±0,07 5,1±0,08
фибринового сгустка после р < 0,05 р < 0,05
компрессии, мин.
Индекс фибринолитиче- 1,48±0,04 1,50±0,03 1,54±0,04 1,56±0,02 1,59±0,06 1,53±0,07
ской активности сосуди- р < 0,05 р < 0,05 р < 0,05 р < 0,05
стой стенки
Примечание: р - достоверность возрастной динамики учитываемых показателей.
Выводы
1. У здоровых поросят молочно-растительного питания отмечается повышение антиоксидантной защиты плазмы, ослабляющее в ней процессы перекисного окисления липидов.
2. Для здоровых поросят в течение фазы молочно-растительного питания характерно
постепенное усиление антиагрегационной способности сосудистой стенки.
3. В течение фазы молочно-растительно-го питания у поросят регистрируется постепенное усиление коагуляционно значимых влияний со стороны сосудистой стенки (про-тивосвертывающая и фибринолитическая активность) на процессы гемостаза.
Список литературы
1. Балуда, В. П. Манжеточная проба в диагностике функционального состояния сосудистого звена системы гемостаза / В. П. Балуда, Е. И. Соколов, М. В. Балуда // Гематология и трансфузиология. -1987. - № 9. - С. 51-53.
2. Баркаган, З. С. Основы диагностики нарушений гемостаза / З. С. Баркаган, А. П. Момот. - М. : Ньюди-амед, 1999. - 217 с.
3. Волчегорский, И. А. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма / И. А. Волчегорский, И. И. Долгушин, О. Л. Колесников [и др.]. - Челябинск, 2000. - 167 с.
4. Гаврилов, В. Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / В. Б. Гаврилов, М. И. Мишкорудная // Лабораторное дело. - 1983. - № 3. - С. 33-36.
5. Зайнулина, М. С. Определение эндотелиоцитов в крови. В кн.: Гемостаз. Физиологические меха-
низмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний / М. С. Зайнулина ; под ред. Н. Н. Петрищева, Л. П. Папаян. - СПб., 1999. -С. 72-73.
6. Краснова, Е. Г. Тромбоцитарная активность у поросят в фазу молозивного и молочного питания / Е. Г. Краснова, И. Н. Медведев, С. Ю. Завалишина // Ветеринарная практика. - 2011. - № 4 (55). - С. 30-33.
7. Медведев, И. Н. Механизмы функционирования гемостаза у биологических объектов / И. Н. Медведев, С. Ю. Завалишина, Е. Г. Краснова [и др.] // Международный вестник ветеринарии. - 2010. - № 1. -С. 52-55.
8. Шитикова, А. С. Визуальный микрометод исследования агрегации тромбоцитов в кн. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний / А. С. Шитикова ; под ред. Н. Н. Петрищева, Л. П. Папаян. - СПб., 1999. - С. 49-52.
