Состояние врожденного иммунитета слизистой оболочки при хроническом бактериальном цистите у женщин Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 616.62-002.2-039.35

© Е.М. Волкова, Т.С. Перепанова, Л.В. Ганковская, О.А. Свитич, 2013

Е.М. Волкова1, Т.С. Перепанова1, Л.В. Ганковская2, О.А. Свитич2 СОСТОЯНИЕ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ БАКТЕРИАЛЬНОМ ЦИСТИТЕ У ЖЕНЩИН

'ФГБУ «НИИурологии»Минздрава России, г. Москва 2ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, г. Москва

Исследовано состояние врожденного иммунитета слизистой оболочки у женщин с хроническим рецидивирующим циститом. При наличии хронического воспалительного процесса в мочевыводящих путях у женщин отмечены повышенная экспрессия генов TLR2, TLR4 и снижение концентрации генов HbD1 по сравнению со здоровыми лицами. Эти данные являются проявлением несостоятельности врожденного иммунного ответа, в результате которой происходит переход острой инфекции мочевыводящих путей в хроническую форму.

Ключевые слова: хронический цистит, иммунитет, слизистая оболочка мочевого пузыря.

E.M. Volkova, T.S. Perepanova, L.V. Gankovskaya, O.A.Svitich MUCOUS MEMBRANE GENETIC IMMUNITY IN WOMEN WITH CHRONIC

BACTERIAL CYSTITIS

Congenital mucosal immunity in women with chronic recurrent cystitis has been studied. In case of urinary tract chronic inflammation an increased expression of TLR2 and TLR4 genes, and reduced concentration of HbD1 genes compared to healthy individuals have been noticed. These findings prove congenital immune response failure, which causes conversion of acute urinary tract infection into a chronic form.

Key words: chronic cystitis, immunity, bladder mucous membrane.

Инфекции мочевых путей могут протекать бессимптомно, спорадически или рецидивировать, в острой и хронической формах и в конечном итоге могут стать причиной развития заболеваний почек [1]. Слизистые оболочки являются своего рода механическим барьером, защищающим организм от внешнего мира. Несмотря на постоянное воздействие различных патогенов, ткани остаются стерильными, и инфекция развивается достаточно редко, что зависит от состояния врожденного иммунного ответа слизистых оболочек [2]. Антимикробные пептиды, к которым относятся дефензины, кателицидины и гистати-ны, являются медиаторами врожденного иммунного ответа, и именно от степени их экспрессии зависит напряженность врожденного иммунного ответа на внедрение бактериального агента. Бета-дефенсины делятся на бета-дефенсины 1 и 2 (или НЬё1 и НЬБ2 соответственно) и вырабатываются эпителиальными клетками урогенитального тракта. НЬс1 1 вырабатывается конститутивно в отличие от НЬВ 2, который вырабатывается в ответ на воспаление и/или инфекцию. Этот ответ регулируется взаимодействием между фимбриями кишечной палочки и рецепторного комплекса (ТЬЯ4) клеток хозяина. В связи с этим с целью определения состояния врожденного иммунитета слизистой оболочки у пациенток с хроническим рецидивирующим циститом было проведено настоящее исследование.

Материал и методы. В исследование вошли 38 пациенток: основная группа (жен-

щины с рецидивирующим бактериальным циститом) - 28 человек; контрольная группа (женщины без урогинекологических заболеваний - здоровые) - 10 человек. Средний возраст женщин основной группы - 21 год (18-50 лет), контрольной группы - 37 лет (24-53 лет). Материал из уретры для определения экспрессии генов TLR2, TLR4 и HBD-1 забирали посредством урогенитального зонда типа «А», помещали в эппендорф (Axygen, США) с наполнителем «Среда-РНК» и после транспорта в холодном контейнере (при +4 °С), хранили при -70°С. Выделение РНК из эпителиальных клеток проводили при помощи комплекта реагентов RNAesy kit (QIAGEN, Германия). Полученную очищенную РНК собирали в отдельную пробирку и замораживали в холодильнике при -70°С для последующих исследований. Реакцию обратной транскрипции проводили для синтеза кДНК на матрице мРНК генов TLR2, TLR4 и HBD-1 для последующего определения числа копий с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Полученную кДНК хранили при температуре -700С. В работе была использована модификация поли-меразной цепной реакции, позволяющая определить кинетику реакции и судить о наличии и исходном количестве ДНК-мишени в образце. Метод получил название полиме-разной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Последовательность праймеров и зондов TLR2, TLR4 и HBD-1 подбирали с помощью программы Vector NTI 8.0,

анализируя последовательность интересующих генов, полученную из электронной базы данных GenBank. Реакционную смесь готовили из реактивов «Набора для проведения ПЦР-РВ в присутствии интеркалирующего красителя SYBR Green I» (Синтол, РФ). После приготовления реакционных смесей пробирки помещали в амплификатор для ПЦР-РВ ДТ-96 (ДНК-технология, РФ), позволяющий анализировать образцы ДНК/РНК в динамическом диапазоне от 1 до 109 копий и одновременно детектировать 4 флуоресцентных красителя (FAM/SYBR Green, ROX, R6G, CY5). Программа реакции: -95°С - 5 мин, (-94°С - 20 с, -62°С - 40 с) - 40 циклов. Изучение экспрессии исследуемых генов проводилось относительно экспрессии гена ß-актина. Для определения экспрессии гена актина использовали «Набор реактивов для обнаружения и определения кДНК ß-актина человека» (Синтол, РФ). Количество копий исследуемого представлено в виде

гена

количества копий 105

относительно 10 копий гена актина [3].

Результаты. В ходе исследования установлено, что в основной группе уровень ТЬЯ.2 в среднем составлял 6.69911(1.54675 -107.4205), ТЬЯ4 - 4.657780 (0.00672 -85.26745), ИВВ-1 - 142 (0.33022 - 2820.127). В контрольной группе уровень ТЬЯ.2 в среднем составлял 3.622 (1.726 - 7.51), ТЬЯ4 -0.211 (0.0264 - 0.125), ИВВ-1 - 1388,6 (680 -2401).

Выводы. По данным проведенного исследования у женщин, страдающих рецидивирующим циститом, выявлены повышенная экспрессия генов ТЬЯ.2, ТЬЯ4 и снижение концентрации генов ИЬВ1 при наличии хронического воспалительного процесса в моче-выводящих путях, что позволяет предположить несостоятельность врожденного иммунного ответа и как следствие переход острой инфекции мочевыводящих путей в хроническую форму.

Сведения об авторах статьи: Волкова Екатерина Михайловна - аспирант ФГБУ «НИИ урологии» Минздрава России. Адрес: 105425, Москва, ул. 3-я Парковая, 51. Тел.: (499) 367-64-64. E-mail: [email protected].

Перепанова Тамара Сергеевна - д.м.н., профессор, зав. отделом инфекционно-воспалительных урологических заболеваний с группами клинической фармакологии и эфферентных методов лечения ФГБУ «НИИ урологии» Минздрава России. Адрес: 105425, Москва, ул. 3-я Парковая, 51. E-mail: [email protected].

Ганковская Людмила Викторовна - д.м.н., профессор, руководитель НКЦ персонализированной медицины ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России. Адрес: г. Москва, ул. Островитянова, д. 1, стр.1. Тел.: (495) 434-90-00. E-mail: [email protected].

Свитич Оксана Анатольевна - д.м.н., сотрудник НКЦ персонализированной медицины ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России. Адрес: г. Москва, ул. Островитянова, 1. Тел.: (926) 148-83-22. E-mail: [email protected].

ЛИТЕРАТУРА

1. Colonization of Mucosal Surfaces [Editors: J.P. Nataro, P.S. Cohen, H.L.T. Mobley, J.N. Weiser). Washington, D.C.: ASM Press, 2005. 456 p.

2. Toll-like receptor 4 expression and cytokine responses in the human urinary tract mucosa / Samuelsson P., Hang L., Wullt B., Irjala H., Svanborg C. // Infect. Immun. 2004. Vol. 72, N 6. P. 3179-3186.

3. Карташов Д.Д. Комплексный анализ противомикробных пептидов в биологических средах организма: дис. ... канд. мед. наук. -М., 2010. - 77 с.

УДК 616.69-008.14:[616.147.14-005.7:611.839.35]-073.756.8-089.163 © В.Н. Журавлев, О.С. Коган, Д.В. Романенко, И.В. Кочмашев, В.Е. Шерстобитов, 2013

В.Н. Журавлев1, О.С. Коган2, Д.В. Романенко2, И.В. Кочмашев2, В.Е. Шерстобитов2 ПЛОСКОПАНЕЛЬНАЯ КОМПЬЮТЕРНАЯ ТОМОГРАФИЯ (CONE-BEAM CT) В ПРЕДОПЕРАЦИОННОЙ ДИАГНОСТИКЕ НАРУШЕНИЙ ВЕНО-ОККЛЮЗИВНОГО МЕХАНИЗМА ПРИ ЭРЕКТИЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ

'ГБОУВПО «Уральская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Екатеринбург 2ГБУЗ «Свердловская областная клиническая больница №1», г. Екатеринбург

В клинике урологии УГМА на базе СОКБ №1 с 2011 года применяя эндоваскулярные методы лечения васкулогенной эректильной дисфункции (ЭД), мы отметили недостаточную информативность существующих методов обследования пациентов с данным заболеванием.

Применение плоскопанельной компьютерной томографии у 23 пациентов позволило увеличить эффективность эндо-васкулярной эмболизации вен тазового сплетения у пациентов с нарушением венооклюзионного механизма.

Ключевые слова: рентгенологические методы обследования пациентов с ЭД, плоскопанельная, КТ-кавернозография, эмболизация вен тазового сплетения при ЭД.