CC BY
17
Логинов Павел Вадимович, кандидат биологических наук, профессор РАЕ, доцент кафедры общей и биоорганической химии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцраз-вития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 52-41-43, е-mail: [email protected].
УДК 618.14-002:616-07-08 © Р.В. Павлов, А Р. Пыдра, 2012
Р.В. Павлов1, А.Р. Пыдра2
СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПЕРИТОНЕАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ БОЛЬНЫХ НАРУЖНЫМ ГЕНИТАЛЬНЫМ ЭНДОМЕТРИОЗОМ, ОСЛОЖНЕННЫМ СПАЕЧНЫМ ПРОЦЕССОМ МАЛОГО ТАЗА
1ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России 2ГБОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России
С целью изучения роли иммунной системы в процессе формирования спаечного процесса в брюшной полости при наружном эндометриозе проведено иммунологическое исследование перитонеальной жидкости у 63 больных эндометриозом со спаечным процессом малого таза. В качестве группы сравнения выступали 37 больных эндометриозом без спаечного процесса, в качестве контрольной группы - 30 практически здоровых женщин. Установлено, что в процессе спайкообразования при наружном эндометриозе в перитонеальной жидкости прогрессируют иммунные нарушения, характеризующиеся увеличением продукции макрофагами ФНОа, ИЛ6, ИЛ8 и снижением продукции лимфоцитами ИЛ2 и ИФНу.
Ключевые слова: спаечная болезнь, наружный генитальный эндометриоз, иммунитет.
R.V. Pavlov, A.R. Pidra
THE CONDITION OF IMMUNE SYSTEM OF PERITONEAL FLUID IN PATIENTS WITH EXTERNAL GENITAL ENDOMETRIOSIS COMPLICATED BY PELVIC ADHESIONS
To study the role of the immune system in the development of adhesions in the abdominal cavity due to external endometriosis we conducted immunological study of peritoneal fluid in 63 patients with endometriosis accompained by the pelvic adhesive process and in 37 patients with endometriosis without adhesions. It was found out that adhesive process caused by external endometriosis was characterized by immune disorders having the progressing increase in TNF-alpha, IL6 and IL8 production by macrophages and reduced production of IL2 and IFN-gamma by lymphocytes in peritoneal fluid.
Key words: adhesions, external genital endometriosis, immunity.
Введение. Наружный генитальный эндометриоз (НГЭ) является одной из основных причин женского бесплодия, занимая второе место после воспалительных заболеваний придатков матки. Одной из причин бесплодия при НГЭ является спаечно-рубцовый процесс в области малого таза, ведущий в 25,0 % случаев к трубно-перитонеальному бесплодию [1, 2, 6, 7]. Роль иммунной системы в патогенезе НГЭ и спаечной болезни в настоящее время не вызывает сомнения [3, 4, 5], однако данные в отношении динамики иммунологических показателей в процессе формирования спаечного процесса при НГЭ в доступной литературе нами обнаружено не было.
Цель: изучить клеточный состав и особенности цитокинового обмена в перитонеальной жидкости (ПЖ) больных НГЭ, осложненным спаечным процессом малого таза.
Материалы и методы. Иммунологическое исследование ПЖ выполнено у 100 больных НГЭ, диагноз которого был верифицирован на этапе клинико-инструментального обследования, включая лечебно-диагностическую лапароскопию, и окончательно подтвержден гистологически. Все больные НГЭ были сопоставимы по возрасту, жалобам, анамнезу, гинекологической и экстрагенитальной патологии, степени распространения заболевания (II-III степень по классификации Американского общества фертильности r-AFS). В зависимости от наличия сопутствующего спаечного процесса малого таза все больные были разделены на 2 группы:
I основная группа - 63 больных НГЭ со спаечным процессом малого таза;
II группа сравнения - 37 больных НГЭ без спаечного процесса малого таза II-III степени по классификации J. Hulka и Американского общества фертильности (r-AFS);
III контрольная группа - 30 женщин репродуктивного возраста без гинекологической патологии, с двухфазным менструальным циклом, госпитализированных для выполнения хирургической стерилизации.
Иммунологическое исследование ПЖ выполнялось до начала лечения и включало в себя: изучение относительного и абсолютного количества основных субпопуляций иммунокомпетентных клеток ПЖ (макрофаги, нейтрофилы, CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, CD25 - лимфоциты) путем иммуно-фенотипирования мембранных антигенов с использованием моноклональных антител фирмы Caltag Laborarories (США), на проточном цитометре «Bio Rad Brute-HS» (США). Изучение продукции ин-терлейкинов (ИЛ) (ИЛф, ИЛ2, ИЛ4, ИЛ6, ИЛ 8), фактора некроза опухоли-a (ФНОа) и интерферона-Y (ИФНу) изолированными мононуклеарными клетками (МНК) ПЖ в смешанной 24-часовой культуре клеток in vitro и уровня этих же цитокинов в нативной ПЖ методом иммуноферментного анализа (ИФА) на планшетном фотометре iEMS-Reader (Labsystems, Финляндия, Thermo Fisher Scientific Inc) с использованием наборов ИФА-БЕСТ (ВекторБест, Россия) и моноклональных антител «Протеиновый контур» (Россия), согласно прилагаемым инструкциям.
Статистический анализ полученных результатов проводился на персональном компьютере с применением пакета статистических программ «Primer of Biostatistics» (Biostat). Для всех критериев определялось среднее значение и стандартная ошибка среднего, для сравнения показателей в различных группах использовался критерий Стьюдента (t). Достоверность получаемых результатов определяли в соответствии с общепринятым в медицине значением р < 0,05.
Результаты и их обсуждение. При анализе клеточного состава ПЖ у больных НГЭ было установлено, что вне зависимости от спаечного процесса малого таза у больных НГЭ отмечалось увеличение общей клеточности ПЖ за счет макрофагов и снижение в ней количества CD3, CD4, CD16 и CD25-лимфоцитов. У больных НГЭ с сопутствующим спаечным процессом малого таза по сравнению со здоровыми женщинами и больными группы сравнения в ПЖ наблюдается достоверное снижение количества CD25-лимфоцитов (табл. 1).
Таблица 1
Субпопуляционный состав МНК ПЖ больных НГЭ в зависимости от сопутствующего спаечного процесса, (М ± т)_
Показатель Здоровые женщины (n = 30) Больные НГЭ
Больные НГЭ без спаечного процесса (n = 37) Больные НГЭ со спаечным процессом (n = 63)
№ группы 1 2 3
Лейкоциты, х 109/л 1,60 ± 0,12 2,51 ± 0,15 2,29 ± 0,09
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,183
Нейтрофилы, % 14,60 ± 0,75 12,41 ± 1,28 12,74 ± 1,12
Достоверность отличий P1-2 = 0,169 P1-3 = 0,279 P2-3 = 0,852
Макрофаги, % 37,82 ± 2,25 55,20 ± 1,63 57,05 ± 1,10
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,333
CD3, % 72,50 ± 5,50 58,54 ± 1,27 58,24 ± 1,24
Достоверность отличий P1-2 = 0,008 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,874
CD4, % 53,00 ± 1,00 43,76 ± 1,04 41,48 ± 0,79
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,083
CD8, % 25,50 ± 1,50 27,40 ± 0,72 26,56 ± 0,76
Достоверность отличий P1-2 = 0,230 P1-3 = 0,472 P2-3 = 0,461
CD16, % 24,00 ± 2,00 15,60 ± 0,96 15,88 ± 0,69
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,810
CD19, % 23,00 ± 2,00 20,86 ± 0,88 21,33 ± 0,64
Достоверность отличий P1-2 = 0,300 P1-3 = 0,316 P2-3 = 0,662
CD25, % 32,10 ± 2,70 26,67 ± 1,09 20,96 ± 1,01
Достоверность отличий P1-2 = 0,050 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,001
При изучении продукции цитокинов МНК ПЖ in vitro было выявлено увеличение продукции ИЛ1Р, ФНОа, ИЛ6, ИЛ8 и снижение продукции ИЛ2 и ИФНу у всех больных НГЭ вне зависимости от сопутствующего спаечного процесса. У больных со спаечным процессом малого таза по сравнению с пациентками группы сравнения МНК ПЖ продуцировали достоверно большее количество ФНОа, ИЛ6, ИЛ8 и сниженное количество ИЛ2 и ИФНу (табл. 2).
Таблица 2
Продукция цитокинов МНК ПЖ in vitro у больных НГЭ в зависимости _от наличия спаечного процесса, (M ± m)_
Показатель Здоровые женщины (n = 30) Больные НГЭ
Больные НГЭ без спаечного процесса (n = 37) Больные НГЭ со спаечным процессом (n = 63)
№ группы 1 2 3
ИЛ 1Р, пкг/мл 64,12 ± 3,21 79,00 ± 3,30 79,54 ± 2,79
Достоверность отличий P1-2 = 0,002 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,903
ФНОа, пкг/мл 78,98 ± 2,46 181,40 ± 10,83 221,70 ± 11,36
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,020
ИФНу, пкг/мл 39,69 ± 1,04 25,41 ± 1,69 16,94 ± 1,17
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,001
ИЛ2, пкг/мл 49,54 ± 4,16 32,90 ± 1,79 30,85 ± 1,23
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,019
ИЛ4, пкг/мл 37,20 ± 2,30 32,74 ± 2,01 31,66 ± 1,68
Достоверность отличий P1-2 = 0,148 P1-3 = 0,060 P2-3 = 0,688
ИЛ6, пкг/мл 234,60 ± 33,8 2006,00 ± 42,69 2181,00 ± 29,76
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,001
ИЛ 8, пкг/мл 528,80 ± 28,40 1110,00 ± 53,71 1336,00 ± 39,04
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,001
Следствием изменения цитокинпродуцирующей активности МНК явилось изменение уровня выше обозначенных цитокинов в нативной ПЖ больных НГЭ. Так, согласно полученным данным, в ПЖ больных НГЭ вне зависимости от наличия спаечного процесса наблюдается увеличение уровня ИЛ1Р, ФНОа, ИЛ6, ИЛ8 и снижение уровня ИЛ2 и ИФНу. В отличие от пациенток группы сравнения, у больных со спаечным процессом малого таза степень повышения уровня ФНОа, ИЛ6, ИЛ8 и снижения ИЛ2 и ИФНу была статистически более значимой (табл. 3).
Таблица 3
Уровень цитокинов в нативной ПЖ больных НГЭ в зависимости от наличия спаечного процесса, (М ± т)_
Показатель Здоровые женщины Больные НГЭ
(n = 30) Больные НГЭ без спаечного процесса (n = 37) Больные НГЭ со спаечным процессом (n = 63)
№ группы 1 2 3
1 2 3 4
ИЛ1р, пкг/мл 131,6 ± 7,18 470,50 ± 23,24 465,20 ± 16,70
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,851
ФНОа, пкг/мл 8,09 ± 1,32 45,47 ± 3,29 56,02 ± 3,03
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,021
ИФНу, пкг/мл 121,30 ± 10,80 73,13 ± 4,79 60,78 ± 3,15
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,027
1 2 3 4
ИЛ2, пкг/мл 29,97 ± 1,60 20,14 ± 1,30 16,63 ± 0,79
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,016
ИЛ4, пкг/мл 60,10 ± 5,10 60,61 ± 3,51 59,66 ± 2,96
Достоверность отличий P1-2 = 0,933 P1-3 = 0,937 P2-3 = 0,841
ИЛ6, пкг/мл 44,52 ± 2,75 66,58 ± 4,88 84,55 ± 4,09
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,007
ИЛ8, пкг/мл 23,30 ± 2,70 173,60 ± 10,43 206,60 ± 10,73
Достоверность отличий P1-2 = 0,001 P1-3 = 0,001 P2-3 = 0,043
Заключение. В ПЖ больных НГЭ развивается иммунная дисфункция, характеризующаяся увеличением количества и активности макрофагов, продуцирующих большое количество цитоки-нов, обладающих цитотоксическим и проангиогенным действием (ИЛ1Р, ФНОа, ИЛ6, ИЛ8) и снижением количества и активности Т-лимфоцитов и ЕК, продуцирующих низкое количество ИЛ2 и ИФНу. Подобные особенности местной иммунной реакции способствуют возникновению и прогрессированию НГЭ за счет нарушения процесса элиминации клеток эутопического эндометрия и активации процессов ангиогенеза. Возникновение спаечного процесса в брюшной полости при НГЭ сопровождается усугублением вышеобозначенных иммунных нарушений, что, с одной стороны, указывает на универсальный характер иммунной дисфункции при НГЭ и спаечной болезни, объясняя высокую частоты спайкообразования при эндометриозе, а с другой, позволяет патогенетически обосновать целесообразность селективной иммунотерапии в профилактике спаечного процесса в послеоперационном периоде.
Список литературы
1. Адамян, Л. В. Генитальный эндометриоз. Современный взгляд на проблему / Л. В. Адамян, С. А. Гаспарян. - Ставрополь : Изд-во СГМА, 2004. - 228 с.
2. Савицкий, Г. А. Перитонеальный эндометриоз и бесплодие (клинико-морфологические исследования) / Г. А. Савицкий, С. М. Горбушин. - СПб. : Элби, 2002. - 170 с.
3. Минаев, C. B. Значение цитокинов в патогенезе острой хирургической патологии брюшной полости / C. B. Минаев // Цитокины и воспаление. - 2004. - Т. 3, № 2. - С. 41-45.
4. Сельков, С. А. Особенности локальной продукции интерлейкинов и ростовых факторов при наружном генитальном эндометриозе / С. А. Сельков, Н. Г. Солодовникова, О. В. Павлов, Д. А. Ниа-ури // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2005. - Т. 139, № 4. - С. 439-442.
5. Снимщикова, И. А. Профилактика образования спаек в оперативной гинекологии / И. А. Снимщикова, А. И. Медведев, И. А. Ререкин и др. // Аллергология и иммунология. - 2005. -Т. 6, № 2. - С. 189.
6. Elsheikh, A. Endometriosis and reproductive disorders / A. Elsheikh, S. Milingos, D. Loutradis et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci. - 2003. - Vol. 997. - P. 247-254.
7. Trinder, J. Endometriosis and infertility : the debate continues / J. Trinder, D. J. Cahill // Hum. Fertil. (Camb). - 2002. - Vol. 5, № 1. - P. 21-27.
Павлов Роман Владимирович, доктор медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии с курсом последипломного образования ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: 8-988-590-03-11, е-mail: [email protected].
Пыдра Анц Рейнович, ассистент кафедры акушерства и гинекологии ГБОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития России, Россия, 355000, г. Ставрополь, ул. Мира, д. 310, тел.: 8-962-411-50-60, е-mail: [email protected].
