CC BY
51
УДК 577.121
И.А. Аллилуев1, Е.М. Вечканов1, И.А. Сорокина1, Ю.Н. Калюжная1, А.В. Темяков1, И.И. Кузнецов2, В.В. Внуков1
СОСТОЯНИЕ ГЛУТАТИОНОВОЙ СИСТЕМЫ В ТКАНЯХ КРЫС ПРИ ТРАВМЕ ОПОРНО-ДВИГАТЕЛЬНОГО АППАРАТА В УСЛОВИЯХ МЕТИОНИН ИНДУЦИРОВАННОЙ ГИПЕРГОМОЦИСТЕИНЕМИИ
Южный федеральный университет, Академия биологии и биотехнологии им. Д.И. Ивановского 344000, Россия, г. Ростов-на-Дону, проспект Стачки, 194/1ю Е-mail: [email protected] 2Ростовский государственный медицинский университет 344022, Россия, г.Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29
Цель: исследование состояния глутатионовой системы в тканях крыс при травме опорно-двигательного аппарата в условиях метионин индуцированной гипергомоцистеинемии.
Материалы и методы: определен уровень гомоцистеина в плазме крови животных, а также количество глутатиона и активность ферментов глутатионпероксидазы, глутатион^-трансферазы, глутатионредуктазы в гемолизате эритроцитов, гомогенате ткани печени и сердечной мышце.
Результаты: у животных в условиях экспериментальной гипергомоцистеинемии и травме опорно-двигательного аппарата реагируют эритроцитарные и печеночные компоненты системы глутатиона.
Выводы: показано увеличение содержания глутатиона и изменение активности глутатионпероксидазы, глутатион-S-трансферазы и глутатионредуктазы в различных тканях.
Ключевые слова: гипергомоцистеинемия (ГГЦ), тромбофилия, травма опорно-двигательного аппарата, глутатионо-вая система, окислительный стресс.
I.A. Alliluev1, E.M. Vechkanov1, I.A. Sorokina1, Ju.N. Kaljuzhnaja1, A.V. Temjakov1, I.I. Kuznecov2, V.V. Vnukov1
THE STATE OF GLUTATHIONE SYSTEM IN RAT TISSUES WITH TRAUMA MUSCULOSKELETAL SYSTEM IN THE METHIONINE INDUCED HYPERHOMOCYSTEINEMIA
Southern Federal University, Academy of Biology and Biotechnology n.a. D.I. Ivanovsky 194/1 Stachki st., Rostov-on-Don, Russia 344000. E-mail: [email protected] 2Rostov-on-Don State Medical University 29 Nakhichevanckiy st., Rostov-on-Don, Russia, 344022
Purpose: to research the glutathione system state in rat tissues after trauma of the musculoskeletal system in a methionine-induced hyperhomocysteinemia.
Materials and methods: the level of homocysteine in the plasma of animals, as well as the amount of glutathione and glutathione peroxidase enzyme activity, glutathione-S-transferase, glutathione reductase in the erythrocyte hemolysate, liver homogenates and cardiac muscle have been determined.
Results: it has been found that in the animals with experimental hyperhomocysteinemia and musculoskeletal injury the liver and erythrocyte glutathione system components react.
Conclusions: an increase of glutathione content and activity change of glutathione peroxidase, glutathione-S-transferase and glutathione reductase in different tissues have been shown.
Key words: hyperhomocysteinemia, thrombophilia, trauma, glutathione system, oxidative stress.
Введение
Патология сердечно-сосудистой системы является основной причиной смертности среди населения во всем мире. Лидирующее значение среди данных заболеваний приходится на венозные тромбозы и тромбоэмболию легочных артерий, приводящих к летальному исходу или инвалидизации пациентов [1]. Проведение оперативного вмешательства или получения травмы, сопряжённой с нарушением целостности костей, многократно повышает риск развития тромбоза [2]. Независимым фактором в возникновении внутрисосудистого тромбоза является гипергомоцистеи-немия, запускающая механизмы окислительного стресса и дисфункции эндотелия [3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10]. В антиок-сидантной защите важнейшая роль отводится системе глутатиона, обеспечивающей защиту клеток от активных кислородных метаболитов и повышающей их резистентность по отношению к повреждающим факторам [11]. Экспериментальные исследования, направленные на изучение состояния глутатионового звена при гипергомо-цистеинемии, недостаточно изучены. Не сформировано чёткое представление об особенностях функционирования ферментов глутатионового цикла в условиях травмы опорно-двигательного аппарата на фоне гипергомоцисте-инемии, что и определило цель настоящего исследования.
Цель исследования - изучения особенностей функционирования глутатионовой системы в тканях крыс при травме опорно-двигательного аппарата в условиях метио-нин индуцированной гомоцистеинемии.
Материалы и методы
Лабораторные животные. Эксперименты проводили на 32 белых крысах-самцах Rattus norvegicus массой 250300 г в возрасте 6 месяцев с учетом этических принципов экспериментирования на животных моделях, изложенных в «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях, Страсбург, 1987». Животные содержались в стандартных клетках в условиях 12-часового режима освещения и свободного доступа к корму и воде. Содержание животных соответствовало санитарным правилам, утвержденным МЗ СССР 06.07.73 г., по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) и приказу МЗ высшего и среднего специального образования СССР от 13.11.84 г. № 742 «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных». Кормили животных натуральными и брикетированными кормами в соответствии с нормами, утвержденными приказом МЗ СССР от 12.08.77 г. № 755. Перед экспериментами животные проходили карантин и акклиматизацию в условиях вивария в течение 14 дней. В ходе эксперимента осуществляли еженедельный контроль массы лабораторных животных в группах.
Химические реактивы. L-Methionine (AppliChem), L-Glutathione oxidized (Sigma), L-Glutathione reduced (Sigma-Aldrich), 1-Chloro-2,4-dinitrobenzene (Aldrich), 5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) (Sigma), NADPH
(Sigma), EDTA (Sigma), Trizma hydrochloride (Sigma), tert-Butyl hydroperoxide solution (Luperox), Trichloroacetic Acid (BioChemica). Остальные реактивы квалификации хч, Россия: K2HPO4, KH2PO4, Na2HPO4, NaH2PO4,Ka, NaHCO3, HCl, NaOH.
Приборная база и условия проведения эксперимента. Спектрофотометрические исследования проводили на спектрофотометре DU 800 «Beckman Coulter» (США), хемилюминесцентный анализатор Immulite 2000 Xpi (Siemens). Все эксперименты проводились при комнатной температуре.
Моделирование гипергомоцистеинемии. Индукцию гипергомоцестеинемии у крыс осуществляли путем ежедневного внутрижелудочного введения 1% раствора ме-тионина в дистиллированной воде из расчета 0,12 г мети-онина в сутки на крысу [12].
Моделирование травмы. С целью формирования однотипных закрытых переломов костей голени производилась травматизация задней конечности крысы с помощью специально разработанного механического устройства [13]. Нанесение травмы осуществлялось под наркозом с использованием золетила в концентрации 5 мг/100 г.
Дизайн эксперимента. Животные были рандомизи-рованы в одну из четырех групп по 8 особей в каждой: I группа - контрольная группа интактных животных; II группа - опытная, животным формировали закрытый перелом костей голени и выводили из эксперимента через 1 неделю; III группа - опытная, животным в течение семи недель ежедневно вводили метионин после чего выводили из эксперимента; IV группа - опытная, животным в течение шести недель ежедневно вводили метионин, затем формировали закрытый перелом костей голени, продолжая вводить метионин, и выводили из эксперимента через 1 неделю.
Извлечение биологического материала. В качестве биологического материала использовали плазму крови, суспензию эритроцитов, гомогенаты сердечной мышцы и печени. По окончании срока эксперимента животных де-капитировали под наркозом с использованием золетила в концентрации 5 мг/100 г. Кровь декапитированных экспериментальных животных собирали самотёком в полипропиленовые центрифужные пробирки с добавлением раствора гепарина 5000 МЕ/мл из расчета 0,1 мл гепарина на 10 мл крови. Для получения плазмы кровь центрифугировали в течение 15 мин при 3000 об/мин, затем плазму отделяли от плотного осадка форменных элементов и хранили при температуре + 40 С. Осадок эритроцитов трижды промывали двумя частями охлажденного 0,9% раствора NaCl, содержащего 0,01М трис-HCl, рН 7,4. Полученный плотный осадок эритроцитов использовали для получения 1% гемолизата. Эритроциты лизировали дистиллированной водой в соотношении 1:10 при + 40 С в течение 30 минут. Ткани органов гомогенизировали на холоду в буфере, содержащем 50 мМоль Трис-HCl, рН 7,4, с добавлением Triton X100 до конечной концентрации 0,1%.
Определение биохимических показателей. Уровень гомоцистеина определяли иммуноферментным методом с помощью набора Siemens. Активность глутатионпе-роксидазы (GPx) определяли спектрофотометрически
по скорости окисления восстановленного глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила [14]. Определение конъюгирующей активности глутатион-S-трансферазы (GST) осуществляли по Habig [15]. Активность глутатионредуктазы (GR) измеряли по степени окисления НАДФН [16]. Определение содержания восстановленного глутатиона (GSH) проводили с 5,5-дити-обис (2-нитробензойной) кислотой по Эллману [17]. Количество гемоглобина определяли колориметрически с помощью стандартного клинического набора реактивов производства «La Chema». Определение общего белка осуществляли методом Lowry в модификации Shacterle-Pollack.
Статистическая обработка и программное обеспечение. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета прикладных программ STATISTICA 6.0. Рассчитывали среднюю арифметическую M и стандартную ошибку средней m. Для оценки статистически значи-
мых различий между сравниваемыми группами использовали параметрический критерий Стьюдента. Оценку соответствия типа распределения выборки нормальному проводили с использованием метода трех сигм. Разницу средних величин считали достоверной при р < 0,05 и стремящейся к достоверности при 0,05 < р < 0,1
Результаты и их обсуждение
Настоящее исследование основано на создании экспериментальной модели ГГЦ, создаваемой у крыс за счет внесения в питьевую воду метионина (Met) и индуцирования травмы опорно-двигательного аппарата [12, 18]. У животных с сформированным переломом костей голени (II группа) содержание гомоцистеина в плазме крови статистически достоверно не изменялась по отношению к значениям физиологической нормы (см. табл. 1).
Таблица 1
Содержание гомоцистеина (мкмоль/л) в плазме крови экспериментальных групп животных
Исследуемый показатель Статистические данные I (n=8) II (n=8) III (n=8) IV (n=8)
Гомоцистеин M 7,45 8,88 47,4 46,03
m 0,33 1,24 1,60 1,33
Р1 - >0,05 <0,05 <0,05
Д%1 - 119* 536* 517*
Р2 - - <0,05 <0,05
Д%2 - - 434** 418**
М - средняя арифметическая; т - стандартная ошибка средней; А%1 - процент изменений по отношению к контролю (I группа); А%2 - процент изменений по отношению к группе травма 7 день (II группа); * - статистически достоверные изменения по отношению к контролю (р1 < 0,05); ** - статистически достоверные изменения по отношению ко II группе (р2<0,05);
Показано развитие умеренной ГГЦ, что выражалось в приросте концентрации гомоцистеина в плазма крови крыс III-ей группы в 6,4 раза, что соответствует 47,4 (±) 1,6 мкмоль/л (p<0,05). У животных IV-ой группы уровень ГГЦ составил в среднем 46,0 (±) 1,33 мкмоль/л (p<0,05).
Глутатион (GSH) является естественным метаболитом гомоцистеина и важнейшим компонентом антиокислительных реакций [4, 19]. Глутатионпероксидаза ^Рх), глутатионтрансфераза (GST), глутатионредуктаза (GR) и НАДФН образуют глутатионовую антиоксидантную систему, в которой GR и НАДФН необходимы для восстановления, окисленного GSH и, следовательно, его рециклирования. Результаты исследования уровня GSH, GPx, GST и GR в различных тканях представлены в табл. 2 и на рис. 1, 2, 3.
Содержание восстановленного глутатиона GSH в ге-молизате эритроцитов крыс II-ой опытной группы в условиях травмирования превышало контрольные величины на 43% и соответствовало 6,7 (±) 0,6 мкмоль/г белка (p<0,05). Использование метиониновой нагрузки способствовало увеличению уровня, восстановленного GSH в гемолизате эритроцитов животных III-ей и IV-ой групп в среднем на 64% и составило 7,8 (±) 0,2 мкмоль/г белка (p<0,05) и 7,6 (±) 0,5 мкмоль/г белка (p<0,05) соответственно. Очевидно, содержание восстановленного GSH в гемолизате эритроцитов экспериментальных животных согласуется с предположительно максимальным уровнем генерации плазменного гомоцистеина при соответствующих концентрациях метионина, что не противоречит данным К.М. Кураян и соавт [14].
Таблица 2
Содержание глутатиона (GSH) и активность глутатионпероксидазы (GPx), глутатион^-трансферазы (GST) и
глутатионредуктазы (GR) в различных тканях животных
Ткань Гемолизат эритроцитов Гомогенат сердца Гомогенат печени
=s S Группы животных
1 « ¡и н fy rt H m к о ^ ^ 3 S « н д I II III IV I II III IV I II III IV
« « о о ° С S У rt а H U (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8) (n=8)
M 4,6 6,7 7,8 7,6 н/и н/и н/и н/и 1,97 18,2 20,3 14,5
m 0,5 0,6 0,2 0,5 н/и н/и н/и н/и 0,46 2,3 4,52 3,8
GSH 1ЛЬ / м Pi - <0,05 <0,05 <0,05 - - - - - <0,05 <0,05 <0,05
A%1 - 43 66 63 - н/и н/и н/и - 821 923 633
р2 - - >0,05 >0,05 - - - - - - >0,05 >0,05
A%2 - - 16 13 - - н/и н/и - - 11 -20
н M 1805 2595 2538 2995 1397 1633 1554 1764 5585 4805 7456 6927
s s m 111,1 175,2 285,4 499,0 64 175 79 135 558 365 520 628
GPx Мкмоль / Pi - <0,05 <0,05 <0,05 - >0,05 >0,05 <0,05 - >0,05 <0,05 >0,05
A%1 - 43,7 40,6 65,8 - 17 11 26 - -14 33 24
р2 - - >0,05 >0,05 - - >0,05 >0,05 - - <0,05 <0,05
A%2 - - 11,5 15,4 - - 5 8 - - 55 44
M 3,37 3,64 2,94 4,21 19,3 20,4 20,2 20,9 281 376 398 386
-Q m 0,22 0,59 0,27 0,48 1,01 1,6 1,5 0,75 31 30 28 32
Pi - >0,05 >0,05 <0,05 - >0,05 >0,05 >0,05 - <0,05 <0,05 <0,05
A%1 - 8,0 -12,0 24,9 - 5,6 4,6 8,2 - 34 41 37
P2 - - >0,05 >0,05 - - >0,05 >0,05 - - >0,05 >0,05
A%2 - - 20 15 - - 1 3 - - 6 3
M 2,63 2,18 1,14 2,48 9,5 8,5 8,8 10,5 60,8 77,3 83,6 68,5
-O H Pi 1- m 0,42 0,96 0,36 0,23 0,7 0,9 0,3 0,5 10,8 6,5 5,4 1,1
Pi - >0,05 <0,05 >0,05 - >0,05 >0,05 >0,05 - >0,05 <0,05 >0,05
о -w A%1 - -17,0 -56,5 -6,0 - -10 -7 10 - 27 37,5 12
P2 - - <0,05 >0,05 - - >0,05 >0,05 - - >0,05 >0,05
A%2 - - -47 14 - - 4 24 - - 8 -17
См. сноску табл. 1, н/и - исследование не проводилось
Рисунок 1. Динамика изменений биохимических показателей в гемолизате эритроцитов
Формирование закрытого перелома костей голени у крыс П-ой группы способствовало увеличению концентрации восстановленного С8И в гомогенате печени в течение недели (время выведения животных из эксперимента) в 9,2 раза, и составило 18,2 (±) 2,3мкмоль/г белка (р<0,05). Содержание восстановленного С8И у животных, находившихся на метиониновой диете превысило значения физиологической нормы в 10,3 раза, что в 1,4 раза выше значений С8И гомогената печени крыс, подвергшихся травме нижних конечностей. Более низкие значения С8И в гомогенате печени крыс !У-ой группы в условиях умеренной ГГЦ свидетельствует об интенси-
фикации процессов антирадикального ингибирования и напряжении глутатионовой антиоксидантной системы организма.
Моделирование ГГЦ у крыс способствовало не только накоплению С8И в цитозоле гепатоцитов животных Ш-й экспериментальной группы, но и приросту глута-тионредуктазной активности на 38% по отношению к контрольным величинам 83,6 (±) 5,4 МЕ/г белка, р <0,05 (рис. 2). Возможно активация СВ. способствует накоплению активной формы внутриклеточного С8И и оказывает протекторное действие на гепатоциты в условиях ГГЦ.
Рисунок 2. Динамика изменений биохимических показателей в гомогенате печени
Статистически достоверных изменений СВ. в гомогенате печени животных, находившихся в состоянии умеренной ГГЦ и перенесших травмирование (ГУ-ая группа) не выявлено (см. рисунок 2). Сходная картина прослежи-
вается и в отношении гомогената сердечной мышцы всех групп экспериментальных животных, активность СВ. оставалась на уровне аналогичного показателя контроля (р>0,05) (рис. 3).
65Н бРх 65Т 61*
30
26
-10 -10
В 2 гр. 0 3 гр, 0 4 гр
Рис. 3. Динамика изменений биохимических показателей в гомогенате сердечной мышцы
Функционирование GR всегда сопряжено с ферментами, окисляющими GSH в GSSG в результате восстановления перекисей (GPO и GST). Активность GPO в гемо-лизате эритроцитов крыс, подвергшихся травмированию опорно-двигательного аппарата (II-я группа), и животных, находящихся в условиях модельной ГГЦ (III-я группа), была повышена по сравнению с контролем в среднем на 43% и 40% соответственно, что свидетельствует об адекватном ответе системы на неблагоприятное воздействие свободных кислородных радикалов в условиях ГГЦ. Одновременно наблюдались изменения в активности GST в гемолизате эритроцитов крыс IV-ой группы на 25% (p<0,05), что соответствовало 4,2 (±) 0,48 МЕ/г Hb.
Таким образом, GPO и GST функционируют комплексно против отрицательного воздействия АФК, а полученные изменения их ферментативной активности могут свидетельствовать о приоритетной роли GPx в эритроцитах в условиях ГГЦ и развитии посттравматического стресса.
За исключением глутатионпероксиазной активности кардиомиоцитов крыс IV-ой группы, уровень которой превысил физиологические значения нормы на 26%, статистически достоверных различий в активностях GPO и GST гомогената сердца установить не удалось (рис. 3). Полученные данные согласуются с результатами исследований in vitro, в которых показано, что ГГЦ ведет к снижению продукции GPO воздействуя на мРНК внутриклеточной изоформы фермента. В эксперименте показано, что ГГЦ снижает экспрессию генов СОД и GPO, и, как следствие, их каталитическую активность, причем GPO в большей степени, чем СОД [11]. Ингибировать синтез GPO способен только ГЦ, в этом его уникальность по сравнению с другими тиолами, например, цистеином, содержание которого в плазме выше, чем гомоцистеина, и который также способен к самоокислению с образованием супероксида (О2*) и цистина [11]. В этой связи, можно предположить, что гомоцистеин является токсичным
тиолом особенно для сердечной мышцы крыс, за исключением условий развития посттравматической генерации АФК.
Следует отметить, что GST является многофункциональным ферментом, и ее ферментативная активность в гомогенате печени превышает контрольные величины во всех обследуемых группах крыс (II-IV группы) в среднем на 37% (p<0,05) (табл. 3, рис. 3), тогда как статистически значимые изменения глутатионпероксидазной активности выявлены только в гомогенатах печени животных в условиях ГГЦ. Уровень ферментативной активности GPO превосходил контрольные значения на 33%(p<0,05), что соответствует 7456 (±) 520МЕ/г белка.
Выводы
Применение метиониновой диеты характеризовалось развитием умеренной гипергомоцистеинемии, что выражалось в приросте концентрации гомоцистеина в плазма крови крыс III-ей и IV-ой группы. Формирование закрытого перелома костей голени у животных IV-ой группы с последующим пролонгированием метиониновой диеты в течение недели не способствует дальнейшему развитию гипергомоцистеинемии, что очевидно свидетельствует о наличии максимального уровня генерации гомоцистеина при соответствующих концентрациях потребляемого животным метионина.
У животных в условиях экспериментальной умеренной ГГЦ и травме опорно-двигательного аппарата реагировали только эритроцитарные и печеночные компоненты системы глутатиона (повышение содержания GSH и изменение активности GR, GPO и GST). Разная степень выраженности активации глутатионзависимых ферментов в условиях индуцированного травмирования раскрывает особенности тканевых метаболических закономерностей патогенеза при механической травме.
ЛИТЕРАТУРА
1. Варданян А.В., Мумладзе Р.Б., Белоусов Д.Ю., Ройтман Е.В. Клинико-экономический анализ профилактики послеоперационных венозных тромбоэмболических осложнений // Качественная клиническая практика. - 2006, № 1. - С. 51-63.
2. Копенкин С.С., Скороглядов А.В. Проблемы профилактики тромбоэмболических осложнений при эндопротезировании крупных суставов // Вестн. травматол. ортопед. - 2009. -№ 3. -С. 69-73.
3. Белая О.Л., Федорова Н.В., Фомина И.Г. Гипергомоцисте-инемия и процессы перекисного окисления липидов при стаб ильных формах ишемической болезни сердца // Кар-диоваскулярная терапия и профилактика. - 2007, № 6 (1). -С. 41-46.
4. Болдырев А.А. Молекулярные механизмы токсичности го-моцистеина // Биохимия. - 2009. - Т. 74., Вып. 6. - С. 725-736.
5. Aksoy M., Basar Y., Salmayenli N., Ayalp K., Ata Genc F., Dilege S., Kayabali M., Baktiroglu S., Kurtoglu M. Hyperhomocysteinemia in patients with arterial occlusive disease // Surg. Today. - 2006. -Vol. 36. - P. 327-331.
6. Jacobsen D.W. Hyperhomocysteinemia and Oxidative Stress // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. - 2000. -№ 20. P. 1182.
7. Kanani P.M., Sinkey C.A., Browning R.L. Role of oxidant stress in endothelial dysfunction produced by experimental hyperhomocysteinemia in humans // Circulation. - 1999.
8. Kolling J., Scherer E., da Cunha A. Homocysteine induces oxidative-nitrative stress in heart of rats: prevention by folic acid // Cardiovasc. Toxicol. 2011. Vol. 11, № 1. P. 67-73.
9. Makris M. Hyperhomocysteinemia and thrombosis // Clin. Lab. Haem. - 2000. - Vol. 22. - P. 133-143.
10. Tousoulis D., Bouras G., Antoniades C. The activation of endotelhelin-1 pathway during methionine-induced homo-cysteinemia mediates endothelial dysfunction in hypertensive individuals // J. Hypertens. - 2010. - Vol. 28. - № 5. - P. 925-930.
11. Шмелева В.М., Рыбакова Л.П. Состояние окислительной и антиокислительной систем у больных с атеросклерозом при наличии и отсутствии гипергомоцистеинемии. // Казанский медицинский журнал. - 2008. - Т. 89, № 3. - С. 281-285.
12. Sanjana Dayal and Steven R. Lentz. Murine Models of Hyperhomocysteinemia and their Vascular Phenotypes // Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2008 September; 28(9): 15961605.
13. Березовский Д.П., Мажугин В.Ю., Кураян К.М., Кураян М.Б., Крайнова Н.Н., Хабарова О.В., Варавва Т.А., Корниенко И.В. Экспериментальная модель умеренной гипергомоцистеинемии для изучения патогенеза тромботических осложнений при травме опорно-двигательного аппарата // Кубанский научный медицинский вестник. - 2011, №5. - С. 21-24.
14. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах. // Лабораторное дело. - 1986. - №12. - с. 724-727.
15. Habig W.H., Pabst M.I., Iacoby W.B. Glutathione-S-Transferase. Ehe first step in mercapturic acid formation. // J. Biol. Chem. -1974. - V.249. - P.7130-7139.
16. Юсупова Л.Б. О повышении точности определения активности глутатионредуктазы эритроцитов // Лабораторное дело, 1989. - №4. - с. 19-21.
17. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups //Arch. B^hem. - 1959.-Vol. 82.- Р. 70-77.
18. Кулинский В. И., Колесниченко Л. С. Система глутатиона II. Другие ферменты, тиол-дисульфидный обмен, воспаление
и иммунитет, функции.// Биомедицинская химия. - 2009. -Т. 55., №4. - С.365-379.
19. Sauls D.L., Arnold E.K., Bell C.W. Pro-thrombotic and pro-oxidant effects of diet-induced hyperhomocysteinemia // Thromb. Res. - 2007. - Vol. 120. - № 1. - P. 117-126.
20. Кураян К.М., Березовский Д.П., Микашинович З. И. и [др.] Особенности окислительного стресса и морфометрические показатели сосудов микроциркуляторного русла при экспериментальной умеренной гомоцистеинемии // Валеология: науч.-практ. журнал. - 2012. - № 3. - С. 7-12.
ПОСТУПИЛА 05.06.2015
УДК 6181-076 -011 367: 612. 017. 1.
А.А. Афонин, А.Ю. Левкович, М.А. Левкович, Л.В. Кравченко
РОЛЬ ЭКСПРЕССИИ TLR2, TLR6 И ПОЛИМОРФИЗМА ИХ ГЕНОВ В РАЗВИТИИ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОЙ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ И ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ
Ростовский НИИ акушерства и педиатрии 344012, Ростов-на-Дону, ул. Мечникова 43. E-mail: [email protected].
Цель: выявление новых механизмов развития генерализованной герпесвирусной инфекции (ЦМВИ и инфекции, вызванной ВПГ 1,2 типа) у новорожденных детей.
Материалы и методы: изучены данные 69 новорожденных с генерализованной герпесвирусной инфекцией в раннем неонатальном периоде. I группу (n=47) составили дети с генерализованной цитомегаловирусной инфекцией. Во II группу (n=22) вошли дети с генерализованной формой инфекции, вызванной вирусом герпеса 1,2 типа. Контрольную группу составили 26 здоровых новорожденных. Определение экспрессии TLR-2(CD14+CD282+) и TLR-6(CD14+CD286) на моноцитах проводили методом лазерной проточной цитофлюорометрии (Beckman Coulter, США). Полиморфизм аллельных вариантов генов TLR изучали методом ПЦР с последующим рестрикционным анализом тест-системами для молекулярно-генетического анализа, разработанными ГосНИИгенетика (Москва).
Результаты: снижение экспрессии TLR-2 и TLR-6 имеет место при генерализованной ЦМВИ только у детей с полной клинической симптоматикой. У новорожденных с тяжелой герпетической инфекцией отмечается снижение экспрессии TLR-2. Дефекты в генах TLR выявляются у 68,4 % детей при генерализованной ЦМВИ с полной клинической симптоматикой в виде полиморфизма Ser249Pro гена TLR-6 и у 26,3% детей с тяжелой герпетической инфекцией - в виде полиморфизма Arg753Gln гена TLR-2.
Заключение: приведены новые данные, подтверждают роль нарушений иммунной системы в патогенезе генерализованной герпесвирусной инфекции. Установлено, что у детей с врожденной генерализованной герпесвирусной инфекцией ведущим в формировании иммунного ответа является нарушение в системе факторов врожденного иммунитета.
Ключевые слова: внутриутробная инфекция, герпес вирусы, врожденный иммунитет.
A.A. Afonin, A.Y. Levkovich, M.A. Levkovich, L.V. Kravchenko
THE ROLE OF EXPRESSION OF TLR2, TLR6 AND POLYMORPHISM OF THEIR GENES IN THE DEVELOPMENT OF GENERALIZED CYTOMEGALOVIRUS AND HERPETIC INFECTIONS IN NEWBORNS
Rostov research Institute of obstetrics and Pediatrics 43 Mechnikov st., Rostov-on-don, 344012, Russia. E-mail: [email protected].
