CC BY
76
ЛИТЕРАТУРА
1. Балаболкин М.И. Сахарный диабет. — М., 1994 — 340 с.
2. Богданович В.П. Сахарный диабет (лечение и профилактика). — Нижний Новгород, 1997. — 270с.
3. Георгиева С.А., Головченко В.М, Пучиян Д.М. и др. Противотромботическая терапия в клинической практике: Новое в теории, диагностике, лечении — М., 1982. — 64с.
4. Дедов И.И., Шестакова М.В. Лечение диабетической нефропатии: прошлое, настоящее и будущее // IX Пленум правления научного общества нефрологов России и научной конференции, посвященной памяти члена-корреспондента РАМН проф. И.Е. Тареевой. — М., 2001. -С.19-20.
5. Мазуров В.И., Новик А.А., Нагибович О.А., Ромишевский Б.В. и др. Влияние сахароснижающей терапии на функции почек у больных сахарным диабетом II // Клин. мед. — 1998. — №6. — С. 38-41.
6. Мамедгасанов Р.М., Семавен И.Е., Смирнова Л.М. и др. // Клин. мед. — 1998. — №8. — С. 74-76.
7. Соколов Е.И. Сахарный диабет атеросклероз. — М., 1996. — 280 с.
8. Тарасова Н.С. значение ПОЛ у больных хроническим алкоголизмом с поражением почек // Тер. Арх. — 1998. — Т.70.
№6. — С. 23-25.
9. Тареева И.Е. Нефрология: Рук-во для врачей. — М.: Медицина, 1995. — 480 с.
10. Шестакова М.В., Шамхалова, Уханова Т.Ю. и др. Глюренорм при диабетической нефропатии: влияние на функциональное состояние почек и эндотелей сосудов // Пробл. Эндокринологии. — 1996. — Т.42, №2 — C. 8-11.
11. Юданова Л.С., Старосельцева Л.К., Альтшулер М.Ю. Изменение сосудистой стенки, инсулинового спектра крови и системы гемостаза у больных сахарным диабетом II типа и возможности их коррекции // Тер. арх. — 1998. — Т.70. №6. — С. 20-23.
12. Adler S., Nagt С., Artishevsky A. Diabetic nephropathy: pathogenesis and treatment // Ann. Rev.Med. — 1993. — Vol. 44. — P 303-315.
13. Gross J.L., Stein А.С., et al. Rick factors for development of proteinuria by type II (non— insulin-dependent) diabetic patients // Braz. J.med.biol.Res. — 1993. — Vol. 26. — P. 1269-1278.
14. Mur Marti T., Franch J., Griera N.M., et al. Nephropathy and microalbuminuria in type II diabetes // Atencion Primaria. — 1995. — Vol. 30, № 16(9). — P. 516-524.
Информация об авторах: 670047, Улан-Удэ, ул. Павлова, 12. Республиканская клиническая больница им. Н.А. Семашко тел. (3012) 233624 Шоболова Надежда Андреевна — врач-диабетолог,
Бальжиров Доржи Баирович — аспирант, Прокаева Татьяна Александровна — аспирант, Назарова-Рыгдылон Алима Николаевна — заведующая отделением,
Жигаев Геннадий Федорович — д.м.н., профессор.
© МАРТЫНОВ А.М. — 2011 УДК 615.322:582.681.26
СОСТАВ И СОДЕРЖАНИЕ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ФИАЛКИ ПЕСЧАНОЙ
Альберт Михайлович Мартынов (Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра фармации, зав. — д.ф.н., проф. Г.Н. Ковальская)
Резюме. Изучен состав фенольных соединений надземной части фиалки песчаной (Viola arenaria DC.), произрастающей в Восточной Сибири. С помощью качественных реакций и хроматографических исследований в растении обнаружены флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты. Методом ВЭЖХ идентифицированы 8 соединений: галловая, кофейная, цикоревая и неохлорогеновая кислоты, кемпферол-3-гликозид, витексин, кверцетин, а также о-метоксикумарин. Установлено, что преобладающими среди фенолокислот являются галловая, цикоревая кислоты, из флавоноидных соединений — витексин и кверцетин. Разработана методика спектрофотометрического определения фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту. Относительная ошибка не превышает ± 4,63%.
Ключевые слова: фенольные соединения, фиалка песчаная, ВЭЖХ, спектрофотометрия.
COMPOSITION AND CONTENT OF PHENOL COMPOUNDS IN OVERGROUND PART OF SAND VIOLET
A.M. Martynov (Irkutsk State Institute for Postgraduate Medical Education)
Summary. The composition of phenol compounds of overground part of sand violet Viola arenaria DC., being widespread in East Siberia, has been studied. Flavonoids and phenol carbonic acids were detected in the plant with the help of qualitative reactions and chromatography investigations. Using the high-performance liquid chromatography (HPLC) method, eight compounds were identified, such as: gallic, coffee, chicory and neochlorogenic acids, as well as kempherol-3-glikozid, vitexin, quercetin and O-methoxycoumarin. It was found, that gallic, chicori acids, vitexin and quercetin are predominant among phenol acids and flavonoids, respectively. The technique of spectrophotometric determination of phenol compounds using gallic acid equivalent has been developed. The relative error does not exceed 4.63 %.
Key words: phenol compounds, sand violet, HPLC, spectrophotometry.
Виды рода фиалка издавна использовались в качестве лечебных средств при различных заболеваниях. Известно, что многие представители этого семейства применяются в качестве отхаркивающего, обволакивающего, ранозаживляющего, противоаллергического, мочегонного средства и при ряде других патологий [4]. Эти свойства обусловлены наличием различных групп биологически активных соединений: флавоноидов, фе-нолкарбоновых кислот, антоцианов, полисахаридов и других веществ. Химический состав фенольных соединений фиалки песчаной мало изучен [3, 4].
Цель работы: исследование состава полифеноль-ного комплекса и количественная оценка этой группы природных соединений надземной части фиалки песчаной.
Материалы и методы
Объектом исследования служила высушенная надземная часть фиалки песчаной — Viola arenaria DC. семейства фиалковых (Violaceae), заготовленная во время цветения в 2008-2009 гг. в Иркутском сельском районе.
Рис. 1. УФ-спектры поглощения: 1 — 0,001 % спиртового раствора галловой кислоты, 2 — спиртового извлечения из надземной части фиалки песчаной.
Проведенными качественными реакциями в растительном сырье обнаружены флавоноиды, фенол-карбоновые кислоты и кумарины. Состав этой группы соединений изучался с использованием химических и физико-химических методов (ТСХ, БХ, ВЭЖХ, УФ-спектроскопия) [1, 2, 5].
Детальное исследование состава фенольных соединений проводили методом ВЭЖХ на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «GILSON» (Франция) с последующей компьютерной обработкой результатов с помощью программы «Multichrom for Windows». В качестве неподвижной фазы использовалась металлическая колонка размером 4,6x250 мм PLATINUM EPS C 18 100 A, с величиной частиц 5 микрон, подвижная фаза — система растворителей: метанол-вода-фосфорная кислота, концентрированная в соотношении 400:600:5. Анализ проводили при комнатной температуре со скоростью подачи элюента 0,5 мл/мин. Продолжительность анализа составляла 66 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора «GILSON» UV/VIS модель 151 при длине волны 254 нм.
Для изучения состава фенольных соединений траву фиалки песчаной измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. 5,0 г сырья помещали в колбу объемом 250 мл, прибавляли 50 мл 70 % спирта этилового, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 2 часов с момента закипания спирто-водной смеси в колбе. Полученное извлечение охлаждали, фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу объемом 100 мл и доводили спиртом этиловым 70 % до метки, перемешивали и фильтровали (исследуемый раствор). Одновременно готовили серию 0,05 % растворов сравнения в 70 % спирте этиловом: кемпферол-3-гликозида, витексина, байкалина, кверцетина, рутина, лютеолина, гиперозида, апигенина, галловой, кофейной, цикоревой, хлорогеновой, неохлорогеновой кислот, 4-оксикумарина и о-метоксикумарина. Объем вводимой исследуемой пробы и растворов сравнения составлял 20 мкл. Идентификацию разделяемых веществ проводили путем сопоставления времени удерживания компонентов исследуемой смеси со временем удерживания стандартных образцов. Количественное определение идентифицированных веществ в исследуемом образце проводили по площади пика, используя метод внутренней нормализации.
Количественную оценку группы фенольных соединений осуществляли методом прямой спектрофотометрии на приборе “Lambda 35 UV/ VIS” Perkin Elmer instruments (США). В ходе разработки данной методики
были изучены условия извлечения фенольных соединений из сырья: измельченность сырья, экстрагент и время экстракции. Таким образом, определены оптимальные условия: нагревание на водяной бане в течение 1 ч, степень измельченности 2 мм, с использованием в качестве растворителя спирта этилового 70 %.
Проведенными исследованиями УФ-спектра поглощения спиртового извлечения надземной части фиалки песчаной установлено, что максимум поглощения отмечается при длине волны 270 ± 2 нм, такой же максимум имеет приготовленный 0,05 % спиртовой раствор галловой кислоты ^1ика, каталожный №3378). Поэтому за аналитическую длину волны нами принято 270 нм, в соответствии с которой проводилось количественное определение в пересчете на галловую кислоту.
Аналитическую пробу травы фиалки песчаной измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями 2 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу вместимостью 200 мл, прибавляли 100 мл спирта этилового 70 %, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на водяной бане в течение часа. Извлечение охлаждали, фильтровали через бумажный складчатый фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили этим же растворителем до метки (раствор А).
4 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл и объем раствора доводили спиртом этиловым 70 % до метки (раствор Б).
Оптическую плотность раствора Б измеряли на спектрофотометре при длине волны 270 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали спирт этиловый 70 % (рисунок 1).
Параллельно измеряли оптическую плотность СО галловой кислоты.
Приготовление раствора СО галловой кислоты. Около 0,05 г (точная навеска) галловой кислоты помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл и растворяли в спирте этиловом 70 %, затем объем раствора доводили до метки тем же растворителем. 2 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл и объем раствора доводили тем же растворителем до метки.
Содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на галловую кислоту и абсолютно сухое сырье в % (Х) вычисляли по формуле:
£> • • 2 • 100 • 100 • 100 • 100 Р т(, 100100
" £>о• 100• 100• /и• 4• (100-^) " £)о-/и-2 (100-^)
где D — оптическая плотность испытуемого раствора, Do — оптическая плотность раствора СО галловой кислоты, т — масса навески сырья в граммах, то — масса навески СО галловой кислоты в граммах, W — потеря в массе при высушивании сырья в процентах.
Таблица 1
Результаты исследования фенольных соединений надземной части фиалки песчаной методом ВЭЖХ
№ Время удерживания, сек Площадь пика, mV*ceK Количественное содержание в смеси, % Вещество
1 372.4 10659.04 12.00 Галловая кислота
2 396.2 9635.73 10.85 Кофейная кислота
2 551.2 13026.44 14.67 Цикоревая кислота
4 887.2 6395.93 7.20 Неохлорогеновая кислота
5 1369 1520.01 1.71 Кемпферол-3-гликозид
6 1812 10467.62 11.79 Витексин
7 2476 6747.14 7.60 О-метоксикумарин
8 3210 8758.74 9.86 Кверцетин
Таблищ 2
Проведенными хроматографическими исследованиями в надземной части фиалки песчаной определено 4 вещества, относящиеся к фенолкарбоновым кислотам, 3 — флавоноидной структуры и 1 соединение кумари-новой природы.
Методом ВЭЖХ обнаружено 13 веществ фенольной структуры, в основном представленных фенолкарбоновыми кислотами и флавоноидами. Идентификацию фенольных соединений проводили по времени удерживания растворов стандартных образцов. Всего идентифицировано 8 соединений: флавоноиды — кемпферол-3-гликозид, витексин, кверцетин; фенольные кислоты — галловая, кофейная, ци-коревая, неохлорогеновая, а также соединение, относящееся к группе кумаринов: о-метоксикумарин. Полученные данные ВЭЖХ анализа фенольных соединений приведены в таблице 1.
Методом внутренней нормализации установлено, что преобладающими среди флавоноидных соединений является витексин, кверцетин, из идентифицированных фенольных кислот доминируют галловая и цикоревая.
Количественная оценка суммы фенольных соединений в исследуемом объекте проводилась методом прямой спектрофотометрии в пересчете на галловую кислоту. Общее содержание полифенолов в над-
земной части фиалки песчаной составляет 2,59 %.
Метрологические характеристики разработанной нами методики количественного определения, представленные в таблице 2 свидетельствуют об удовлетворительной ее воспроизводимости.
Результаты опытов с добавками в пересчете на галловую кислоту свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки (табл. 3).
Таким образом, исследование состава полифеноль-ных соединений фиалки песчаной методом ВЭЖХ позволило идентифицировать флавоноиды: кемпферол-3-гликозид, витексин, кверцетин; — фенольные кислоты: галловую, кофейную, цикоревую, неохлорогеновую, а также соединение, относящееся к группе кумаринов:
о-метоксикумарин. Методом внутренней нормализации установлено количественное содержание идентифицированных соединений.
Разработана методика количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту.
Полученные результаты исследования могут быть использованы при разработке проекта нормативной документации на новый вид лекарственного растительного сырья — фиалку песчаную.
Метрологические характеристики количественного определения суммы фенольных соединений в надземной части фиалки песчаной в пересчете на галловую кислоту
n f X S2 S P,% t(f,P) Дх E,%
5 4 2,59 0,02 0,1414 95 2,79 0,12 ± 4,б3
Результаты и обсуждение
Таблица 3
Результаты опытов с добавками галловой кислоты в навеску исследуемого сырья фиалки песчаной
Найдено суммы фенольных соединений в сырье, г Добавлено PCO галловой кислоты,г Должно быть фенольных соединений, г Найдено фенольных соединений, г Ошибка
Абсолютная (г) Относительная (%)
0,02б 0,0020 0,0280 0,0271 - 0,0009 - 3,21
0,02б 0,0042 0,0302 0,03027 + 0,0007 + 2,32
0,02б 0,00б1 0,0321 0,0327 + 0,000б + 1,87
ЛИТЕРАТУРА
1. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Под ред. Е.Е. Сироткиной. — Томск: ТГУ, 1987. — 185 с.
2. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд., доп. Вып.
2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. — М.: Медицина, 1989. — 400 с.
3. Мартынов А.М., Чупарина Е.В. Фиалка песчаная (Viola arenaria DC.) — новый источник макро- и микроэлементов. //
Сибирский медицинский журнал. — Иркутск, 2008. — Т. 78. № 3. — С. 98-99.
4. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав и использование / Под ред. А.А. Федорова. Л.: Наука, 1986. — С. 20-29.
5. Хроматография на бумаге / Под ред. И.М. Хайса, К. Мацека. М., 1962. — 851 с.
Информация об авторе: 664079, г. Иркутск, м-он Юбилейный, 100, ИГИУВ, кафедра фармации. Тел. (3952) 46-53-26; e-mail: [email protected] Мартынов Альберт Михайлович — к.ф.н., доцент
© КРИВОШЕЕВ И.М., МИРОВИЧ В.М., ФЕДОСЕЕВА Г.М. — 2011 УДК 615.322:582.998.1
СОДЕРЖАНИЕ И СОСТАВ ПОЛИСАХАРИДОВ СПИРЕИ ИВОЛИСТНОЙ (SPIRAEA SALICIFOLIA L.)
Игорь Михайлович Кривошеев, Вера Михайловна Мирович, Галина Михайловна Федосеева (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И. В. Малов, кафедра фармакогнозии и ботаники, зав. — д.ф.н., проф. Г.М. Федосеева)
Резюме. В статье приведены сведения о выделении и химическом исследовании полисахаридов спиреи иво-листной (Spiraea salicifolia L.). Установлено, что данный углеводный комплекс представлен водорастворимыми полисахаридами, пектиновыми веществами, гемицеллюлозами; исследован их качественный моносахаридный состав. Преобладающими в полисахаридном комплексе спиреи иволистной являются пектиновые вещества и гемицеллюлоза А и Б.
Ключевые слова: полисахариды, спирея иволистная, качественный моносахаридный состав.
CONTENT AND COMPOSITION OF POLYSACCHARIDES OF SPIREA IVOLISTNAYA (SPIRAEA SALICIFOLIA L.)
I.M. Krivosheev, V.M. Mirovich, G.M. Fedoseeva (Irkutsk State Medical University)
