CC BY
10
УДК: 616.35-006.6-089:612.015.348:612.1
СОДЕРЖАНИЕ ФЕРРИТИНА И ТРАНСФЕРРИНА В КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ПРЯМОЙ КИШКИ В ПЕРВУЮ НЕДЕЛЮ ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ
Кит О. И., Горошинская И. А., * Тарнопольская О. В., Геворкян Ю. А., Малейко М. Л., Снежко А. В., Немашкалова Л. А., Абакумова С. В. ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздрава России,
THE CONTENT OF TRANSFERRIN AND FERRITIN IN BLOOD OF PATIENTS WITH RECTAL CANCER IN THE FIRST WEEK AFTER SURGERY
Kit O. I., Goroshinskaya I. A., *Tarnopolskaya O.V., Gevorkayn U. A., Maleiko M. L., Snezhko A. V., Nemashkalova L. A., Abakumova S. V. Federal State Institution «Rostov Research Institute of Oncology». Health Ministry of Russian Federation
Кит О. И., Профессор, директор ФГБУ РНИОИ.
Горошинская И. А., Профессор, главный научный сотрудник лаб. изучения патогенеза злокачественных опухолей Тарнопольская О. В., в.н.с. лаб. изучения патогенеза злокачественных опухолей Геворкян Ю. А. Профессор, зав. отделением абдоминальной онкологии № 2 Малейко М. Л., с.н.с. отделения абдоминальной онкологии № 2 Снежко А. В., в.н.с. отделения абдоминальной онкологии № 1 Немашкалова Л. А., н.с. лаб. изучения патогенеза злокачественных опухолей Абакумова С. В., биолог клинико-диагностической лаборатории Kit O. I., Professor, Director of the Institute.
Goroshinskaya I. A., Professor, Chief Researcher of Laboratory studies of the pathogenesis of malignant tumors. Tarnopolskaya O. V., Leading Researcher of Laboratory studies of the pathogenesis of malignant tumors. Gevorkayn U. A., Head of the department of abdominal oncology. Maleiko M. L., Senior Researcher of the department of abdominal oncology. Snezhko A. V., Leading Researcher of the department of abdominal oncology. Nemashkalova L. A., Researcher of Laboratory studies of the pathogenesis of malignant tumors. Abakumova S. V., Biologist of diagnostic laboratory.
Резюме
Цель исследования. Изучить динамику содержания ферритина и других показателей обмена железа больных раком прямой кишки до операции и в послеоперационный период до 7 дня и сопоставить ее с другими известными неспецифическими критериями острой фазы воспаления.
Материалы и методы. В исследование включены лабораторные данные 31 больного раком прямой кишки (РПК) 2-3 стадии перед операцией и в послеоперационный период, а именно в 1, 3 и 7 день после операции. В качестве группы сравнения (контрольной) использовали те же показатели обмена железа 22 лиц без онкологических заболеваний такого же возрастного интервала. Определяли на биохимическом анализаторе Cobas Integra 400 содержание ферритина, трансферрина, железа сыворотки крови (СЖ) и ненасыщенную железосвязывающую способность (НЖСС) у больных раком прямой кишки до операции и в послеоперационный период на 1, 3 и 7 день, а также в группе лиц без онкопатологии (контрольная группа).
Результаты. До операции у больных изучаемые показатели находились в пределах нормы; относительно контрольной группы было отмечено лишь снижение СЖ на 31% у мужчин. В послеоперационный период статистически значимо (p<0,05) по отношению к показателям контрольной группы увеличен уровень ферритина у мужчин в среднем на 70%, у женщин — на 5 сутки вдвое и на 7 сутки на 51%%, а уровень трансферрина снижен. Резко снижено содержание СЖ: в среднем у мужчин в 3,3 раза, у женщин в 2,2 раза.
Заключение. Противоположные изменения ферритина и трансферрина, как известных белков острой фазы воспаления, свидетельствуют о преобладании в первую неделю после операции неспецифической реакции больных на операционный стресс, одними из маркеров которого являются эти металлопротеины.
Синхронность изменения изученных показателей системы железа с изменением мембранного потенциала эритроцитов и лимфоцитов может свидетельствовать об их возможной обусловленности.
Ключевые слова: рак прямой кишки; сывороточное железо; ферритин; трансферрин; ненасыщенная железосвязы-вающая способность; мембранный потенциал клеток крови.
Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология 2016; 132 (8): 40-45
Тарнопольская Ольга Владимировна
Tarnopolskaya Olga V. [email protected]
Summary
Purpose of the study. Examine the dynamics of the content of ferritin and other indicators of iron metabolism in the blood of patients with colorectal cancer before surgery and in the postoperative period to 7 days, and compare it with other known non-specific criteria of the acute phase of inflammation. Respond to the question whether changes in iron metabolism parameters in patients with colorectal cancer after surgery are specific.
Materials and methods. The content of ferritin, transferrin, iron and unsaturated iron binding capacity (TIBC) in the blood serum of patients with colorectal cancer before surgery and in the postoperative period of 1, 3 and 7 days was determined at the biochemical analyzer Cobas Integra 400. The values of parameters in the group of individuals without cancer pathology (control group) were used for comparison.
Results. Before surgery, patients studied parameters were within normal limits. In the postoperative period (7 days) ferritin level was significantly increased by 88%, and transferrin level was reduced by 73% in relation to that of the control group (p <0.05; U-Mann-Whitney). Total iron binding capacity was significantly reduced by 250%.
Conclusions. Opposite changes of ferritin and transferrin, known as the acute-phase proteins, show predominance in the first week after surgery nonspecific reaction of patients to surgical stress. These metalloproteins are considered as one of the markers of the stress.
We compared revealed changes in the studied parameters of iron system with the experimental data on the changes in the membrane potential of red blood cells and lymphocytes, and came to the conclusion that the identified synchronicity indicates their potential conditionality.
Keywords: rectal cancer; ferritin; transferrin; unsaturated iron binding capacity; the membrane potential of blood cells. Eksperimental'naya i Klinicheskaya Gastroenterologiya 2016; 132 (8): 40-45
Введение
Актуальной задачей современной абдоминальной хирургии в онкологии является поиск новых биохимических маркеров, позволяющих прогнозировать успешность дальнейшего послеоперационного лечения рака прямой кишки [1]. Исследования обмена железа при опухолевом процессе в настоящее время активно возобновились в силу убедительных результатов о его роли в формировании чувствительности к противоопухолевой терапии [2]. В работах [3-5] представлены современные сведения о роли метаболизма железа и металлопротеинов во многих физиологических функциях человека. В работах [6-8] показана роль ферритина и трансферрина в обмене железа. Ферритин является основным внутриклеточным белком, запасающим железо. Ферритин состоит из двух компонентов — апоферритина (белковой части) и небелковой, содержащей мицеллу гидрофосфата Fe+3. Апоферритин — глобулярный белок, состоящий из 24 субъединиц, образующих оболочку вокруг полости, которая может вместить до 4500 атомов железа. Помимо железа ферритин способен связывать ионы других металлов, некоторые из которых являются токсичными (алюминий, бериллий). В отношении таких ионов ферритин действует как детоксикант. Ферритин печени играет роль депо железа для всего организма. Ферритин в слизистой оболочке тонкой кишки служит для переноса железа из просвета кишечника к трансферрину сыворотки; ферритин ретикуло-эндотелиальной системы адсорбирует железо, освобожденное при деструкции
эритроцитов, с тем, чтобы реутилизировать железо для синтеза гемоглобина. В физиологических условиях биосинтез апоферритина стимулируется железом. Ферритин синтезируется клетками различных тканей: печени, селезенки, костного мозга, сердечной мышцы, легких, почек, щитовидной железы, плаценты, тонкого кишечника, поджелудочной железы, а также лейкоцитами. Эти же клетки и наиболее богаты ферритином [6]. В норме только одна треть мест связывания заняты железом. Дополнительное количество железа, которое может быть связано, именуют ненасыщенной (или латентной) железосвязывающей способностью (НЖСС).
Транспорт ионов Бе в плазме крови происходит через образование комплекса железа с белком плазмы апотрансферрином с образованием трансфер-рина. Для связывания с апотрансферрином железо должно быть окислено до Бе3+, что осуществляется церулоплазмином. Одна белковая молекула может перемещать максимально два иона Бе3+. Железо в сыворотке почти полностью связано с трансфер-рином. Снижение концентрации трансферрина отмечено при злокачественных новообразованиях [9,10], а также в условиях воспаления [11], Доказано, что дефицит железа является наиболее частой причиной анемии, которая характерна для больных колоректальным раком. Она существенно ухудшает их состояние и затрудняет проведение противоопухолевой терапии [9]. В то же время предполагается роль избытка железа в развитии злокачественного процесса [5;10].
Материал и методы исследования
В исследование включены лабораторные данные 31 и
больного раком прямой кишки (РПК) 2-3 стадии ч
перед операцией и в послеоперационный период, у
а именно в 1, 3 и 7 день после операции. В качестве I
группы сравнения (контрольной) использовали (
те же показатели обмена железа 22 лиц без онко- р
логических заболеваний такого же возрастного и
интервала из числа сотрудников института. Ис- I
следование проводили в период сентября — ноя- ч
бря 2014 года. Дизайн исследования был одобрен I
этическим комитетом ФГБУ «РНИОИ». Обязатель- I
ным условием включения в исследование было до- ч
бровольное информированное согласие больных, р
а также доноров из числа сотрудников. В группе и
больных раком прямой кишки было 17 мужчин С
и 14 женщин, в контрольной группе было 9 мужчин и 13 женщин. В сыворотке крови определяли уровень ферритина, трансферрина, железа и ненасыщенную железосвязывающую способность (НЖСС) с помощью биохимического анализатора Cobas Integra 400. Концентрацию ферритина измеряли в мкг/л, трансферрина — в г/л, а железа в сыворотке (СЖ) и НЖСС измеряли в мкМ/л. Численные данные анализировали с помощью приложения Statistika 6.0. и представляли в виде Mean±SD (среднее±станд.отклонение). Статистическую значимость различий оценивали U-крите-рием Манна-Уитни (непараметрический критерий) и с помощью параметрического критерия Т-теста Стьюдента.
Результаты исследования и их обсуждение
В обследованных нами группах наблюдались некоторые различия в изучаемых показателях у мужчин и женщин. Основное различие состояло в содержании ферритина, средний уровень которого у женщин во всех группах существенно ниже, чем у мужчин, что согласуется с различиями
в нормативных значениях этого показателя. Поэтому динамика изменения содержания ферритина, трансферрина и железа анализировалась отдельно для мужчин и женщин, что нашло отражение в таблице 1, в которой представлены средние значения изучаемых показателей по группам.
Таблица 1.
Показатели обмена железа у больных раком прямой кишки МУЖЧИН и ЖЕНЩИН до операции и после нее, а также в контрольной группе здоровых доноров. В скобках в ячейках указано во сколько раз изменился показатель относительно контроля — Т^ возрос или снизился. Средне-е±8Б-станд. отклонение. Ы=норма.
Примечание:
*- статистически значимое различие в сравнении с контрольной группой доноров, и-тест Манна-Уитни.
Показатели обмена железа Контрольная Больные раком прямой кишки
Норма (N) группа (n=22; м9, ж13) до операции (n=31; м17, ж14) 1 сутки (n=13; м8, ж5) 3 сутки (n=16; м9, ж7) 7 сутки (n=8; м4, ж4)
м:2,3-4,0 2,9±0,4 (N) 2,5±0,6 (¿1,16) 1,9±0,7*(¿1,53) 2,0±1,0* (¿1,45) 1,7±0,4*(¿1,71)
Трансфер-рин, ж:3,0-3,8 3,0±0,5 (N) 2,96±0,6 (¿1,01) 2,6±0,46(¿1,15) 1,7±0,3* (¿1,76) 1,7±0,2* (¿1,76)
Общее 2,9±0,5 2,7±0,6 (¿1,07) 2,2±0,7*(¿1,32) 1,8±0,8*(¿1,61) 1,7±0,3*(¿1,71)
м:20-300 149,9±43,4 (N) 170±53(t1,14) 274±60* (t!,82) 241±97* (t1,61) 252±121* (t1,68)
Ферритин, ж:10-120 92,0±22,9 (N) 79,3±17,2(¿1,16) 63,3±17,2*(¿1,45) 190±24* (t2,05) 139±36*(t1,51)
Общее 116±106 129±172 (t1,11) 193±169 (t1,66) 218±217(t1,88) 196±176(\ 1,69)
м:10,6-28,3 21,0±3,9 (N) 14,5±12,1(¿1,45) 9,2±6,6*(¿2,28) 4,4±1,9*(¿4,77) 7,4±3,3*(¿2,84)
Железо, ж:6,6-26,0 14,8±4,0 (N) 14,9±5,8 (t1,01) 6,9±4,9*(¿2,15) 6,6±3,0*(¿2,24) 6,8±1,3*(¿2,18)
Общее 17,4±5,0 14,7±9,6 (¿1,18) 8,4±6,2*(¿2,07) 5,4±2,7*(¿3,22) 7,1±2,3*(¿2,45)
НЖСС, мкМ/л 20-62 48±13(N) 49±18 (t!,02) 40±15 (¿1,20) 37±12* (¿1,30) 35±8*(¿1,37)
Показатели системы обмена железа корреляционно связаны друг с другом, и мы проанализировали эту связь по общим показателям, без разделения по полу, для здоровых доноров того же возраста и больных до лечения. На рис. 1 представлены таблицы с коэффициентами корреляции Пирсона, полученные в приложение 81аИ8Ика 6.0. Корреляционная матрица свидетельствует о степени корреляционных связей, жирным курсивом выделены статистически значимые (р<0,05) коэффициенты.
Как видно из рис. 1, имеет место высокая прямая корреляционная связь между трансферрином и НЖСС для здоровых и больных: к=0,90 и к=0,72, соответственно. Имеет место обратная корреляционная связь между железом и НЖСС в обеих группах к= -0,6. Различия между больными до операции и здоровыми были найдены в коэффициентах корреляции между ферритином и трансферрином — только у больных до операции имела
место значимая обратная корреляционная зависимость с к= -0,52;
Нам представилось важным проследить изменения показателей обмена железа в послеоперационный период, поскольку именно изменения являются биохимическими сигналами, запускающими взаимозависимые процессы в организме больного. На рис. 2 показано, во сколько раз изменялись изучаемые показатели обмена железа у больных до операции и в послеоперационный период по отношению к показателям в контрольной группе у мужчин и женщин.
Как видно из таблицы 1 и рисунка 2, у больных РПК до операции все показатели оставались в пределах нормы и были близки к средним значениям в группе сравнения. Лишь у мужчин было несколько снижено содержание железа на 31% (в 1,45 раз). С первого дня после операции у мужчин значительно выросло содержание ферритина (в 1,6-1,8 раз),
22ДСНССКИ s 3Bteic St¡ в ^Сйгтб Cf
л
IS
о hÉ
ара<ГЬК-ф а <а Basic SU ? ЭСате
ma
0 ï
Ï Э
m я
If
1 *
О g Ш с
Correlations (контрольная группа) Marked correlations are significan! at p < .05000 N=22 (Casewise deletion of missing data)
Van able Трансферрин Ферритин Железо НЖСС ■
Трансферрин 1.00 -0,22 -0,27 0,90 I
Ферритин -0,22 1,00 0,30 -0,23
Железо -0,27 0,30 1,00 -0,62 1
НЖСС 0,90 -0,23 -0,62 1,00 1
Variable
Трансферрин
Ферритин
Железо
НЖСС
Correlations (ракПрК-до операции) Marked correlations are significant at p < .05000 N=28 (Casewse deletion of missing data)
Трансферрин Ферритин
1,00
Железо
НЖСС
-0,52
0.05
0,72
•0,52 0.051 0,721
1.001 0,161 -0,451
0.16 1,00 -0,5dl
-0,45 -0,58 1 ,oo|
Рисунок 1.
Коэффициенты корреляции Пирсона изучаемых показателей обмена железа в группах сравнения — здоровых и больных раком прямой кишки до операции. Курсивом обозначены статистически значимые коэффициенты корреляции.
Рисунок 2.
Послеоперационные изменения показателей системы железа у больных раком прямой кишки по отношению к показателям лиц группы контроля.
одновременно значительно снизились показатели трансферрина и СЖ: на 3 сутки максимально в 4,8 раза для СЖ, и почти в 1,5 раза для трансферрина. У женщин с 1-х и до 7-х суток оставалось значимо сниженным содержание СЖ более чем в 2 раза. Трансферрин снизился с 3 по 7 сутки в 1,76 раз. Ферритин вырос максимально в два раза на 3-и сутки, а на 7-е сутки только на 51% превышал доо-перационный уровень.
Представленные результаты свидетельствуют о существенных изменениях в системе железа в ответ на операционный стресс. До операции в обследованной нами группе больных не было достоверных отличий по сравнению с группой без онкопатологии того же пола и возраста, все показатели были в пределах нормы. Наибольшие изменения выявлены на 1 или 3 сутки, а на 7 сутки наблюдали небольшое снижение выраженности изменений относительно максимального. Известно, что сывороточный ферритин (СФ) и сывороточный трансферрин (СТ) являются белками острой фазы воспаления [11]. Резкое снижение содержания СЖ можно объяснить усилением синтеза ферритина,
или высвобождением внутриклеточного ферритина в кровь, что способствует связыванию большего количества СЖ. Изменения уровня СФ и СТ у больных РПК в послеоперационный период имеют противоположную направленность, что согласуется с данными других авторов [11]. Сходные изменения показателей обмена железа установлены нами ранее у больных раком желудка [12].
Поскольку в практике важны послеоперационные изменения не в сравнении с группой здоровых, а в сравнении с показателями до операции, на рис. 3 мы представили результаты в виде гистограмм изменений уровня белков СТ и СФ в послеоперационный период по отношению к показателям до операции у больных РПК, у мужчин и женщин.
Из рис. 3 видно, насколько противоположно изменяются показатели ферритина и трансферрина, кроме 1 суток у женщин. Но на 3 сутки у них разброс СФ и СТ был максимальным, затем несколько снизился на 7 сутки.
Ранее показано, что острофазный ответ сопровождается изменением содержания определенных белков крови (т.н. белки острой фазы — БОФ),
Рисунок 3. Послеоперационные изменения сывороточного ферритина и трансферрина у больных раком прямой кишки по отношению к показателям до операции.
Примечание:
* - статистически значимое отклонение от показателей до операции.
концентрация которых изменяется в ответ на воспаление, травму и другие патологические воздействия [13]. Известно, что острофазный ответ организма благоприятствует метастазированию, а наличие отдаленных метастазов является противопоказанием для оперативного лечения на поздних стадиях заболевания [14,15]. Поскольку в нашем институте разрабатываются новые способы и хирургические тактики в лечении колорек-тального рака [16], нам представляется интересным выяснить механизмы острофазного изменения ферритина и трансферрина, а также пути воздействия на железодефицитное состояние больного, чтобы избежать неблагоприятных последствий воспаления в процессе лечения. Результаты данной работы можно учитывать при дальнейшей оценке проводимого противоопухолевого лечения.
С целью понимания механизма реакции ме-таллопротеинов на острое воспаление, мы
сопоставили полученные данные с результатами экспериментального исследования Г. Н. За-цепиной и др. [17]. В этой работе было доказано значимое изменение мембранных потенциалов клеток крови (гиперполяризация мембран лимфоцитов и эритроцитов) именно на 5-7 сутки после операционного повреждения у млекопитающих на 70-150% от дооперационного значения. Сравнение этих данных с полученными нами результатами позволяет предположить связь между изменениями мембранного потенциала лейкоцитов и эритроцитов и выбросом в кровь ферритина. Можно думать, что выход ферритина в кровь из клеток сопровождается гиперполяризацией мембран лимфоидных клеток. А гиперполяризация мембран эритроцитов может ингибировать выход железа из этих клеток. В итоге мы наблюдаем резкое снижение уровня железа и возрастание уровня СФ.
Заключение
В послеоперационный период статистически значимо (р<0,05; и-критерий Манна-Уитни) по отношению к показателям контрольной группы увеличены уровень ферритина, а уровень СТ и НЖСС снижены во все сроки наблюдения, максимально на 3 сутки. Значительное снижение (в 4,8 раз у мужчин и в 2,2 раза у женщин) содержания СЖ можно объяснить захватом железа белком ферритином, уровень которого резко возрастает к 3 суткам после операции. Высказано предположение, что один из
возможных механизмов, запускающих острофазный ответ организма на повреждение, а именно изменения в системе железа, обусловлен гиперполяризацией мембран клеток крови на 3-7 сутки после операции. При изучении метаболизма железа у онкологических больных следует учитывать, что имеют место значительные различия в содержании металлопротеинов и железа в сыворотке больных в периоды «до операции и трансфузий» и «после операции».
Литература
1. Кит О. И. Проблема колоректального рака в начале 21века: достижения и перспективы. //Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопрок-тологии. — 2013. — Том 23. — № 3. — С: 65-71.
2. Чехун В. Ф., Шпилевая С. И. Роль эндогенного железа в формировании чувствительности опухоли к противоопухолевой терапии. // Вопросы онкологии. — 2010. — Том56. — № 3. — с. 251-261.
3. Crichton R. R., Boelaert J. R. Inorganic Biochemistry of Iron Metabolism: From Molecular Mechanisms to Clinical Consequences. — Wiley. — 2001. — p.327.
Dunn L. L., RahmantoY.S., Richardson D. R. Iron uptake and metabolism in the new millennium // TRENDS Cell Biol. — 2006. — Vol. 17. — р.93-100. Yves Beguina, Matti Aaprob, Heinz Ludwigc, Lee Mizzend, Anders Osterborg Epidemiological and nonclinical studies investigating effects of iron in carcinogenesis. // Critical review in Oncology /Hematology. — 2014. — Vol. 89. — N1. — P. 1-15. http://dx.doi.org/10.1016/j.critrevonc.2013.10.008 Смирнова Л. А., Марцев С. П. Ферритин и его клиническое значение. //Медицинские. новости. — 1996. — N7. — С. 11-15. www.mednovosti.by.
7. Петухов В. И., Быкова Е. Я., Бондаре Д. К. и др. Сывороточный ферритин в диагностике железодефицитных состояний. //Гематология и трансфузиология. Научно-практический журнал. — 2003. — N2. — С. 36-41.
8. Свирновский А. И. Марцев С. П., Кравчук З. И., Коно-пелько Н. Ф., Смирнова Л. А. Цитотоксическая активность ферритина in vitro. //Медицинские новости. — 2004. — N3. — С. 94-95.
9. Луговской С. П., Лубянова И. П., Клименко П. П. Особенности метаболизма железа и его роль в процессах канцерогенеза. //Украинский журнал проблем медицины труда. — 2013. — т. 35, — № 2. — с. 55-63.
10. Снеговой А. В. Проблема железодефицитной анемии у пациентов с онкологическими заболеваниями: практика применения железосодержащих препаратов. //Современная онкология. — 2013. — т. 15. — № 2. — с. 65-71.
11. Якубовский С. В., Конопелько Н. Ф., Кривонос Д. П. Металлопротеины как маркеры острой фазы воспаления у больных острым холециститом. //Медицинский журнал. — 2007. — № 1. — С. 91-99.
12. Горошинская И. А., Касаткин В. Ф., Тарнополь-ская О. В., Малейко М. Л., Геворкян Ю. А., Немашка-лова Л. А. Изменения показателей обмена железа
в крови больных раком желудка. //Хирургия. Журнал им. Пирогова. — 2015. — № 5. — с. 29-34.
13. Biesma, D.H., Vandewiel A. Post-operative erythropoi-esis is limited by the inflammatory effect of surgery on iron metabolism. //Eur. J. Clin. Invest. — 1995. — Vol. 25. — N6. — P. 383-389.
14. Allin, K.H. Elevated C-reactive protein in the diagnosis, prognosis, and cause of cancer. / K.H. Allin, B.G. Nor-destgaard // Crit Rev Clin Lab Sci. — 2011. — Vol.48. — N4. — P. 155-70. doi: 10.3109/10408363.2011.599831.
15. Zhou, L. Prognostic role of C-reactive protein in urolog-ical cancers: a meta-analysis. / L. Zhou, X. Cai, Q. Liu, Z.Y. Jian, H. Li, and K.J. Wanga // Sci Rep. — 2015. — Vol.5. — 12733. Published online 2015 Aug 3. doi: 10.1038/ srep12733
16. Кит О. И. Геворкян Ю. А., Солдаткина Н. В., Колесников В. Е., Малейко М. Л. Способ лапароскопического лечения рака толстой кишки. Патент на изобретение. Номер патента:2463001 Страна: Россия Год: 2012.
17. 3ацепина Г.Н., Венгрус Т. В., Горюнов Н. Н. Мембранные потенциалы и адаптационные способности лимфоцитов и эритроцитов в различных состояниях жизнедеятельности млекопитающих. //Биофизика. — 1993. — T.38. —№ 6. — с. 1098-1103.
