CC BY
66
внутрисосудистого компонента микроциркуляции у белых крыс-самцов в состоянии острого оксидативного стресса.
Литература
1.Бокарев И.Н. // Тромбоз, гемостаз и реология.- 2000.-№1.- С.6-7.
2.Габбасов З.А. и др. // Лабор. дело.- 1989.- №10.- С. 15-18. ЗЖуравлева И.А. и др. // Клин. медицина.- 1997.- №4.-
С. 18-21.
4.Зефиров А.Л. и др. // Рос. физиол. ж. им. И.М. Сеченова.-2001.- №4.- С.499-506.
5.Киричук В.Ф. и др. // Кардиоваскул. тер. и профилактика.- 2005.- № 4(6).- Ч.2.- С. 53-60.
6.Киричук В.Ф. и др. // Биомед. технол. и радиоэлектроника
- 2004.- №12.- С. 10-15.
7.Киричук В.Ф. и др. // Цитол.- 2001.- №1.- С. 27-33.
8.Киричук В.Ф., Воскобой И.В. // Тер. архив.- 2000.- Т.72, №12.- С. 47-50.
9.Киричук В.Ф. и др. // Тромбоз, гемостаз и реология.-2001.- №1.- С.31-34.
10.Киричук В., Шварц ЮЛ Кардиол.- 1998.- Т.38(5).- С.14.
УДК 616.381-002.3-085
СЛИЗИСТАЯ ОБОЛОЧКА ТОНКОЙ КИШКИ КРЫС ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ПРОФИЛАКТИКИ ВОЗНИКНОВЕНИЯ ТОНКОКИШЕЧНЫХ НЕСФОРМИРОВАННЫХ СВИЩЕЙ
В.А.ГОЛОВНЕВ, К.В.АТАМАНОВ, Д.В.МОРОЗОВ, Н.В.ГОРЛОВ,
О.А.ЗАРУБЕНКОВ, Е.В. ЛЕВЧЕНКО, Н.М.КОЛОТОВА,
А.В.ВАНХАЛЬСКИЙ, С.А. ФУРСОВ, И.В.МАЙБОРОДИН*
Несформированные кишечные свищи сопровождаются гнойными процессами в брюшной полости, нагноением ран брюшной стенки с частой эвентерацией органов. При этом характерны интоксикация и быстрое развитие раневого и алиментарного истощения. Непрерывное поступление в рану агрессивного кишечного содержимого делает практически невозможной и без того сложную адекватную санацию гнойных очагов. Симптомы вторичного иммунодефицита обнаружены у 37 из 84 больных с кишечными свищами [7]. При подготовке к реконструктивным операциям необходимо проведение иммунокоррекции для восстановления иммунного потенциала и достижения хорошего результата хирургического вмешательства [8]. Кишечные свищи
- серьезная хирургическая проблема [11]. Нужны методы профилактики формирования кишечных фистул.
По данным [13], этиологически 85% свищей являются постхирургическими, 9% - посттравматическими, 3% сформировались в результате туберкулезного поражения и 3% были образованы при воспалительных заболеваниях различных отделов кишечника. 52% больных были пониженного питания, у 60% диагностирована анемия. Подобные результаты были получены и в США. В отделениях хирургии 2 учебных госпиталей университета Луисвилла, Кентукки, с 1997 по 2005 год находилось 106 пациентов со свищами желудочно-кишечного тракта (исключая аноректальную область). Из них 67 больных имели фистулы тонкой кишки, 26 - толстой, 8 - желудка и 5 - 12-перстной кишки. По происхождению эти свищи у 81 пациентов были послеоперационными, у 15 - посттравматическими, в 6 случаях - из-за эрозии грыжевого мешка, у 2 - результат дивертикулитов и у 2 -последствие радиационного облучения [11]. В Мексике большинство кишечных свищей также имеют послеоперационную этиологию [14]. Сепсис, нарушения питания и водно'-электролитный дефицит -важные осложнения кишечных свищей. За последние 10 лет из 174 пациентов 90 были с фистулами тонкой кишки (48 тощей и 42 подвздошной), 50 больных - со свищами толстой кишки. У 151 (86%) пациента фистула образовалась после хирургического вмешательства.
Цель работы - изучение строения стенки тонкой кишки крыс при различных условиях наложения кишечного шва и разлитом гнойном перитоните.
Материалы и методы. Изучение структурной организации стенки тонкой кишки при различных способах профилактики формирования тонкокишечных свищей проводили на 36 крысах-
самках породы Вистар массой тела 250-300 г, полученных из вивария Новосибирского ГМУ. Животные были разделены на 3 равные группы. Одна группа животных служила интактным контролем, у остальных одновременно моделировали разлитой гнойный перитонит по методу Ф.Ф.Усикова и соавт. [6]: под эфирным наркозом выполняли нижнесрединную лапаротомию.
С целью предупреждения развития спаечного процесса и предупреждения перитонита резецировали большой сальник, жировые образования в области семенников. Червеобразный отросток перевязывали у основания двумя лигатурами на расстоянии 0,5 см друг от друга, между ними отросток отсекали. Ампутированный отросток погружали в свободную брюшную полость, после чего послойно ушивали переднюю брюшную стенку, при этом конец нити на культе аппендикса для простоты удаления его впоследствии оставляли в подкожной клетчатке.
Через 12 часов выполняли релапаротомию, погруженный червеобразный отросток (источник перитонита) удаляли, выпот эвакуировали. Пересекали тонкую кишку на расстоянии 5 см от слепой кишки, накладывали анастомоз бок в бок с трехслойными узловыми швами. В одной из этих групп участок кишки со швами оставляли в свободной брюшной полости. В другой - помещали между париетальной брюшиной и мышцами передней брюшной стенки (экстраперитонизация участка кишки со швами). Оперированным перед ушиванием брюшины в брюшную полость вводили 1 г канамицина, растворенного в 3 мл физраствора. Крыс декапитировали через 5 сут. после санирования брюшной полости. Все манипуляции проводили под эфирным наркозом.
Фрагменты тонкой кишки крыс, забранные на расстоянии 5-7 см от слепой кишки, фиксировали в 10% растворе нейтраль -ного формалина не менее суток, обезвоживали в градиенте этанола возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в парафин. Срезы толщиной 5-10 мкм окрашивали гематоксилином и эозином по Ван-Гизону и по Романовскому. Определение структурной организации слизистой оболочки кишки вели при увеличении светового микроскопа до 1200 раз. Применяли квадратную тестовую систему, совмещаемую на экране компьютера с изображением, полученным при помощи цифровой видеокамеры микроскопа. Для изучения показателей микроциркуляции (использование объектива,х4) конечная площадь тестового квадрата равна 14400 мкм2 (сторона квадрата 120 мкм), при подсчете цитограммы клеток (применение объектива с ув.х40) - 144 мкм2 (сторона квадрата 12 мкм) [3]. Статобработку данных вели на программе MS Excel (Microsoft, USA), определяли ср. арифметическое и стандартное отклонение. Различия между средними считали достоверными при p<0,05.
Результаты. Во всех группах после ушивания повреждения тонкой кишки в условиях перитонита на срезах данного органа увеличилась относительная площадь сосудистого компонента. Объемная плотность кровеносных сосудов в группе с простым ушиванием тонкой кишки и в группе с экстраперитонизацией была больше в 5,7 и 3,6 раза, соответственно, по сравнению с состоянием у интактных крыс. При этом в контроле (погружение участка кишки со швами в брюшную полость) величина значения данного показателя была достоверно больше, чем у животных с экстраперитонизацией, на 59,2% (рис. 1^) (табл. 1).
Относительная площадь лимфососудов в группе с ушиванием тонкой кишки и погружением ее в свободную брюшную полость и в группе с экстраперитонизацией шва тонкой кишки была больше в 2,6 и 3 раза, соответственно, относительно состояния у интактных крыс. Можно отметить меньшее значение площади лимфатических сосудов в контроле на 15,4%, по сравнению с группой после экстраперитонизации. Площадь межклеточных щелей в группе с ушиванием раны тонкой кишки без экстрапери-тонизации и в группе с экстраперитонизацией больше в 2,9 и 2,1 раза, соответственно, чем у интактных крыс.После погружения участка кишки со швами в брюшную полость объемная плотность интерстициальных пространств была больше, относительно животных с экстраперитонизацией, на 41,2% (табл. 1).
После хирургической операции и развития перитонита развивается воспалительная реакция на повреждение тканей. Из-за воспалительного процесса в тканях оказывается множество биологически активных (гистамин, брадикинин и др.), антигенных и токсических веществ из разрушенных собственных клеток и тканей (в т.ч. - из лизосом фагоцитов [2]) и лизированных микроорганизмов, которые резко повышают проницаемость
* Новосибирский ГМУ, 630091, Красный проспект, 52, [email protected]
эндотелия и выход из сосудов фибрина и форменных элементов. В результате воспаления и повреждения эндотелия возможно и тромбирование кровеносных сосудов на уровне капилляров и венозного отдела, где скорость кровотока невысокая. Здесь формируется тромб, и поврежденный сосуд выключается из кровообращения. Это является защитной реакцией организма, предохраняющим его от гематогенной диссеминации бактерий, токсинов и антигенов из места травмы или воспаления. В итоге нарушения венозного оттока при сохраненном притоке также возможно расширение кровеносных сосудов и увеличение их относительной площади на срезе тканей стенки органа [2].
Таблица 1
Сосудистый компонент собственной пластинки слизистой оболочки тонкой кишки крыс после различных способах профилактики не-сформированных кишечных свищей в условиях перитонита (M±m)
Структуры Группы животных
Интактные Ушитая кишка в свободной брюшной полости Экстра-перитонизация кишки со швами
Кровеносные сосуды (Ад) 4±1,552■ 3 22,б±1,381- 3 2
Лимфатические сосуды (Ад) З^С^2- 3 14,9±0,921, 3 17,2±0,б1, 2
Интерстициальные пространства (Ад) 3,33±0,9592■ 3 9,б7±1,121- 3 6,85±0,541’ 2
, А
Рис. 1. Тонкая кишка интактной крысы. Плотное расположение клеток, просвет сосудов практически не виден. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. х250
Примечание: 1 2 3 - величины, достоверно отличающиеся от соответствующих в данных колонках (р<0,05); Ад - относительная площадь структур на поперечном срезе (%)
Расширение лимфатических сосудов вызвано тем, что острый и хронический воспалительный процесс затрагивает в первую очередь лимфатическую систему, которая и осуществляет дренаж посторонних чужеродных и антигенных веществ из патологического очага [5, 10, 12]. Во-первых, тромбируются и эмболизируются детритом лимфатические сосуды и капилляры на протяжении [4, 9, 10]. Закрытие лимфососудов является важным фактором при возникновении воспалительного отека, ограничивающим попадание бактерий и токсических веществ с места воспаления в кровь. Это защитный механизм [4, 9, 10]. Во-вторых, блокируются лимфатические узлы [5]. Явления блокады лимфатического русла при воспалительной реакции оправданы и предохраняют организм от диссеминации инфекции и токсинов через кровеносную систему [4, 5, 9-10], т.к. в лимфоузлах происходит сброс части лимфы в кровеносные сосуды и вместе с лимфой возможно проникновение микроорганизмов в кровь [1]. Блокада кровеносных и лимфососудов ведет к их расширению и расширению интерстициальных пространств. Интерстициальные пространства являются начальными путями лимфосистемы и поэтому все изложенное выше о возможных причинах расширения лимфатических сосудов является актуальным для объяснения увеличения относительной площади интерстициальных пространств. Это воспалительный процесс и блокада регионарного лимфатического русла [4, 9, 10]. Т.к. интерстициальные пространства не имеют эндотелия и толстых многослойных стенок, это является дифференциальным критерием их отличия от лимфатических капилляров, поэтому степень расширения межклеточных щелей была выше, чем лимфососудов. Именно интерстициальные пространства служат местом депонирования тканевой жидкости при блокаде или недостаточности транспортной функции лимфатической системы в регионе.
Учитывая накопление жидкости в воспаленной ткани и блокаду путей оттока (лимфососуды и узлы), можно объяснить расширение кровеносных сосудов, лимфатических капилляров и межклеточных щелей в пластинке слизистой оболочки тонкой кишки при перитоните. В лимфе имеется большая концентрация белков, продуктов жизнедеятельности клеток, клеточного и тканевого детрита, что является питательной средой для бактерий [15] и может поддерживать воспалительную реакцию.
Меньшая степень возрастания относительной площади кровеносных сосудов и интерстициальных пространств на срезе тонкой кишки у особей с экстраперитонизацией участка кишки со швами, по сравнению с крысами, у которых кишка со швами погружена в свободную брюшную полость, говорит о меньшей выраженности воспалительного процесса в стенке тонкой кишки.
Рис. 2. Ворсинка слизистой оболочки тонкой кишки крысы после погружения кишки со швами в свободную брюшную полость. Лейкоцитарная инфильтрация, значительное расширение кровеносных и лимфатических сосудов. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. х130
Рис. 3. Фрагмент рис. 2. Нейтрофильная инфильтрация, гнойные эмболы в просвете кровеносного и лимфатического капилляров. Ув. х500
Рис. 4. Расширенные кровеносный и лимфатический капилляры в собственной пластинке слизистой оболочки тонкой кишки животного с экстраперитонизацией швов. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. x500
В норме, у интактных животных до операции, в собственной пластинке слизистой оболочки было обнаружено относительно небольшое число лейкоцитов (рис. 1). Эпителий постоянно травмируется при контакте с твердыми частицами химуса и агрессивными пищеварительными ферментами. Слизистая оболочка кишки граничит с ее полостью, где высокая бактериальная контаминация. В собственно пластинку через микротравмы постоянно поступают различные антигены. Для элиминации этих антигенных веществ в слизистой оболочке присутствуют разные типы лейкоцитов, чаще - лимфоцитов (рис. 1), как резидентных, так и постоянно мигрирующих к антигенам. Число лимфоцитов на единицу площади среза собственной пластинки слизистой оболочки в группе с ушиванием тонкой кишки и погружением ее в свободную брюшную полость и в группе с экстраперитониза-цией шва было больше в 2,3 и 2,З раза, соответственно, относительно состояния у интактных особей (рис. 1-4) (табл. 2).
Абсолютное количество моноцитов и макрофагов в слизистой оболочке тонкой кишки в группе с ушиванием без экстрапе-ритонизации и в группе с экстраперитонизацией было больше в
24,1 и 17,7 раза, соответственно, чем у интактных крыс. У животных после погружения участка кишки со швами в брюшную
полость количество клеток макрофагального ряда было больше, относительно особей с экстраперитонизацией, на 3б,4%. Численная плотность нейтрофилов в группе с простым ушиванием тонкой кишки и в группе с экстраперитонизацией была больше в
74,1 и 43,1 раза, соответственно, по сравнению с состоянием у интактных крыс. При этом в группе с погружением участка кишки со швами в брюшную полость величина значения этого показателя была достоверно больше, чем у животных с экстрапе-ритонизацией на 71,9% (табл. 2).
Таблица 2
Численная плотность тканевых лейкоцитов (на 1Ö5 мкм2 площади среза) собственной пластинки слизистой оболочки тонкой кишки крыс после различных способах профилактики несформированных кишечных свищей в условиях перитонита (M±m)
Клетки Группы животных
Интактные Ушитая кишка в свободной Брюшной полости Экстраперитонизация кишки со швами
Лимфоциты 14,7±1,222- 3 34,1±1,241 34^0^81
Моноциты и макрофаги ö,995±ö,1752’ 3 24±0,941j 3 17,б±0,921, 2
Нейтрофилы 0,61±0,1З32- 3 4З,2± 1,92’ 3 2б,3±0,891, 2
Примечание: 1 2 3 - величины, достоверно отличающиеся от соответствующих в данных колонках (р<0,05)
В нормальных тканях функции иммунитета выполняют, в основном, лимфоциты, которые способны к самостоятельному передвижению между клеток и даже к движению против тока крови в сосудах [1]. При воспалительной реакции, в связи с появлением большого количества антигенных веществ, в тканях появляются другие лейкоциты. По численной плотности и соотношению различных типов лейкоцитов можно судить о степени выраженности воспалительной реакции, ее остроте [2]. Поэтому до операции лимфоцитов в цитограмме относительно много. При воспалении идет рост числа всех лейкоцитов, в т.ч. и лимфоцитов. Но численность лимфоцитов нарастает несколько медленнее, чем других клеток. Нейтрофилы являются первыми лейкоцитами, мигрирующими к месту появления (образования) антигенов.
Присутствие большого числа нейтрофилов на все сроки исследования указывает на выраженную остроту воспалительного процесса [2]. При экстраперитонизации участка кишки со швами степень возрастания численности нейтрофилов меньше, чем при погружении ушитой кишки в свободную брюшную полость и меньше активность воспалительного процесса. Моноциты являются предшественниками макрофагов. Моноциты, как и лимфоциты и нейтрофилы, мигрируют из кровеносного русла в места присутствия антигена в тканях. В тканях в норме этих клеток очень мало, при миграции в ткани из кровеносного русла они очень быстро дифференцируются в макрофаги. Моноциты появляются в тканях для элиминации разрушенных и антигенных веществ практически вместе с нейтрофилами [2], поэтому их численность возрастает уже в ранние сроки после операции и остается повышенной на все сроки наблюдения, видимо, в связи с присутствием (постоянным образованием) разрушенных клеток, то есть увеличение численности моноцитов и макрофагов после операции в слизистой оболочке кишки также указывает на острый воспалительный процесс. После экстраперитонизации тонкой кишки со швами выраженность роста количества клеточных элементов макрофагального ряда меньше, чем при погружении участка кишки со швами в брюшную полость, и при экстрапери-тонизации меньше выраженность воспалительной реакции.
Рост численной плотности лимфоцитов, нейтрофилов, моноцитов и макрофагов после ушивания стенки тонкой кишки различными способами свидетельствует о продолжающемся воспалительном процессе. Меньшее содержание нейтрофильных лейкоцитов и клеток макрофагальнго ряда у крыс после экстра-перитонизации кишки со швами указывает на меньшую интенсивность воспалительной реакции или на стихании ее. В любом случае - это хороший прогностический признак.
Заключение. В слизистой оболочке тонкой кишки после ушивания ее повреждения при перитоните растет объемная плотность сосудистого компонента и численная плотность лимфоцитов, нейтрофилов и клеток макрофагального ряда. Нарушения микроциркуляции и лимфотока, лейкоцитарная инфильтрация указывают на воспалительный процесс в тканях стенки кишки. Меньшее увеличение площади сосудистого компонента
на срезе и меньшая степень лейкоцитарной инфильтрации слизистой оболочки тонкой кишки у крыс с экстраперитонизацией участка кишки со швами говорит о меньшей активности воспаления по сравнению с крысами, у которых кишка со швами погружена в свободную брюшную полость.
Литература
1.Бородин Ю.И., Григорьев В.Н. Лимфатический узел при циркуляторных нарушениях.- Новосибирск: Наука, 1986.
2.Кузин М.И., Костюченок Б М. Раны и раневая инфекция.-2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1990.
ЗМайбородин И. и др. // Стоматол.-2005.- Т.84, №6.- С. 15.
4.Поликар А. Физиология и патология лимфоидной системы.- М: Медицина, 1965.
5. Бородин Ю.И. и др. Сорбционно-аппликационные и лим-фотропные методы в комплексном лечении ожогов.- Новосибирск: Изд-во СибВО, 1995.
6.Усиков Ф.Ф. и др. // Хир.- 1984.- № 8.- С. 127-133.
I.Федоров В.Д. и др. // Хир.- 1994.- № 10.- С. 36-39.
8.Ханевич М.Д. и др. // Вестн. хир. им И.И. Грекова.- 2005.-
Т. 164, № 3.- С. 27-29.
9.ЧернухА.М. Воспаление.- М: Медицина, 1979.
10.Casley-Smith J.R. // The inflammatory process.- 2nd Ed.-Vol. 2, 1973.- P. 161-204.
II.Draus J. et al // Surgery.- 2006.- Vol.140, №4.-P.570-576. 12Foldi M. Diseases of lymphatics and lymph circulation. -
Thomas: Springfield, Ile, 1969.
13.Jamil M. et al. // J. Coll. Physic Surg. Pak.- 2004.- Vol. 14, № 4.- P. 237-240.
14Martinez J.L. et al. // World J Surg.- 2007.- Epub ahead of
print.
15.Partsch H.// Acta Chir Scand Suppl.- 1988.-Vol.544.- P. 25
УДК 616.61-091.8:617-001.32]-08-092.9
ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ КОРРЕКЦИИ НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПОЧЕК ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ СИНДРОМЕ ДЛИТЕЛЬНОГО СДАВЛЕНИЯ
Е.С.ЛУКЬЯНОВА, Д.Б.КУЗЬМЕНКО, Е.А.ВАСЬКИНА*
Особенностью травматизма является рост множественных и сочетанных повреждений, или политравм, достигая 25-80%.
Под влиянием нервно-рефлекторных и нейрогуморальных механизмов при синдроме длительного сдавления (СДС) возникает прекапиллярный стаз в коже, скелетной мускулатуре, органах живота, забрюшинном пространстве. При нарушенной перфузии органы и ткани испытывают гипоксию. В межклеточных пространствах накапливаются недоокисленные продукты обмена, вазоактивные вещества [3]. Калий, плазма с альбумином и фибриногеном покидают сосудистое русло. Нарастает гемоконцентрация и повышается свертывающая активность крови. Постепенное снижение артериального давления в процессе компрессии ведет к уменьшению объема циркулирующей плазмы. Это состояние усугубляется развитием острой почечной недостаточности. Поскольку почки - главная буферная система организма, они регулируют кислотно-основное состояние путем экскреции кислых и реабсорбции щелочных продуктов. Патологические изменения в почках развиваются после устранения компрессии на фоне воздействия на организм пострадавшего токсемии и плазмопотери. Под влиянием активных протеолитических ферментов идет повреждение структуры почек спустя 10-30 минут после снятия компрессии и восстановления кровотока [5].
Цель работы — выявление закономерностей морфофункциональных изменений в почках в различные периоды экспериментального СДС на фоне применения ксенобиотиков.
Материал и методы. Опытные животные - крысы-самцы породы Вистар массой 180-200 г., в возрасте 5-6 месяцев. Моделировали СДС средней степени тяжести [6]. Забор материала проводился под эфирным наркозом, в соответствии с международными требованиями гуманного отношения к животным. Первая группа - крысы с СДС средней степени тяжести, леченные интраперитонеальными инфузиями 10% раствора реополиг-люкина с молекулярной массой 30-40 тыс. дальтон с добавлением
* Новосибирский ГМУ, б30091 г. Новосибирск, Красный пр., З2
