CC BY
36ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ ОТВЕТ ВЗРОСЛОГО КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПОСЛЕ ВАКЦИНАЦИИ ШТАММОМ 82 BRUCELLA ABORTUS И RB51
12 3
Мустафин М.К. , Мустафин Б.М. , Давкенова А.А.
1Мустафин Муафик Каметаевич - доктор ветеринарных наук, профессор;
2Мустафин Батыржан Муафикович - доктор ветеринарных наук, доцент;
3Давкенова Алия Абаевна - магистрант, кафедра ветеринарной медицины, факультет ветеринарии и технологии животноводства,
Костанайский государственный университет им. Ахмета Байтурсынова, г. Костанай, Республика Казахстан
Аннотация: бруцеллез - зоонозное заболевание, вызванное бактериями рода Brucella. У животных он характеризуется абортом и нарушением плодовитости. Brucella abortus является основным возбудителем бруцеллеза у крупного рогатого скота. Болезнь может быть предотвращена за счет использования аттенуированной вакцины штамма 82, которая вызывает резистентность к инфекции, продолжающуюся несколько лет у значительного числа вакцинированных животных. Ключевые слова: бруцеллез, антитело, бычий.
Вакцина может вызывать постоянные серологические реакции, особенно когда животных вакцинируют как взрослых. Эти стойкие серологические реакции в основном относятся к антигенной О-цепи липополисахарида, присутствующего в бруцеллах.[1].
Вакцина RB51 была утверждена в качестве официальной вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота в США (Federal Register (156): 41730-41733, 1996). RB51 представляет собой стабильный грубый мутант, полученный из вирулентного штамма 2308 серийными проходами этого штамма на средах, содержащих рифампицин . Вакцина индуцирует защиту от заражения вирулентным штаммом B. abortus у крупного рогатого скота и других животных. Уровни защиты, вызванные вакциной у крупного рогатого скота, по -видимому, аналогичны уровням, достигнутым с помощью штамма 82, но вакцина RB51 не вызывает серологические реакции, которые влияют на серодиагностику заболевания, особенно при использовании традиционных серологических тестов. [2].
В настоящее время рекомендуется, чтобы телята только в возрасте от 4 до 10 месяцев были вакцинированы 1-3,4 х 10 10 Рекомендуемая доза для взрослых в десять раз меньше, и вакцинация беременного крупного рогатого скота не рекомендуется. Хотя у мышей множественная вакцинация не приводит к получению антител, и вакцинация беременных мышей не приводит к абортам, последствия множественной вакцинации, а также эффект вакцинации на беременный крупный рогатый скот подробно не изучены. [3,4].
Целями настоящего исследования были: 1) определить, дает ли вакцинированный RB51 взрослый крупный рогатый скот, отрицательную анти-серологию по сравнению с взрослыми животными, вакцинированными вакциной S82; 2) определить влияние вакцинации и ревакцинации RB51 на беременность; 3) определить, выделяют ли животные вакцинный штамм после родов в молоке и влагалищных выделениях, ревакцинированные RB51 во время беременности.
Материалы и методы. Использовали три группы из 25 взрослых самок, 2-5 лет. Одна группа получала 2x10 9 жизнеспособных бактерий штамма RB51 в 2 мл подкожно (SC). Вторая группа получала 3 х109 жизнеспособных бактерий штамма S82 (SC), а третья группа служила контрольной группой, получавшей
физиологический раствор. Все животные в группе штамма RB51 ревакцинировали подкожно через 6 месяцев после первой инокуляции с той же дозой. Большинство животных были беременны до ревакцинации.
Сыворотки испытывали со следующими традиционными тестами: РБП, РА. Были проведены также два непрямых теста ELISA (I-ELISA). Вкратце, разбавление гладкого липополисахарида 1 J г / мл готовили в 0,05 M карбонатном буфере (pH 9,6) и 100 мкл добавляли в лунки 96 пластин из полистирола (NUNC 2-69620) и инкубировали в течение ночи при 4 ° С. После трех циклов промывки (Handiwasher-BDSL, UK) с 0,01 M забуференным фосфатом физиологическим раствором (рН 7,4), содержащим 0,05% Tween 20 (PBST), 100 мкл тестовой сыворотки (в двух экземплярах) и контрольной сывороткой (в четырехкратном) разбавленной 1: 200 в PBST добавляли в лунки в течение 1 часа при 37°C. Были включены четыре контроля: сильная положительная сыворотка, слабая положительная сыворотка, отрицательная сыворотка и буферный контроль. После еще трех циклов промывки в каждую лунку добавляли 100 мкл мышиного моноклонального против бычьего IgG 1, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRPO), должным образом разбавленной в PBST, и планшеты инкубировали, как описано выше. После трех заключительных циклов промывки 100 мкл 3% перекиси водорода (H2O2) и 1 мМ 2,2-азинобиса (3-этилбензтиазолинсульфоновая кислота) (ABTS), растворенного в 0,05 M цитрате натрия I лимонной кислоте (рН 4,5) был добавлен во все лунки. Планшеты инкубировали в течение 10 минут при 37°C с непрерывным встряхиванием для развития цвета. Для прекращения реакции к всем лункам добавляли 100 мкл додецилсульфата натрия (SDS). Показания оптической плотности были получены с использованием спектрофотометра (Titertek Multiskan Plus, Flow Lab. McLean, VA) при 405 нм. Результаты были выражены как процент положительности положительной контрольной сыворотки (ПП) [2, 3].
Другой ELISA использовал ацетон, убивший целые клетки RB51 штамма в качестве антигена по Колби . В кратце, лиофилизированные клетки RB51 восстанавливали в стерильной дистиллированной воде до 5% пропускания при 525 нм с образованием исходного раствора антигена, который хранили при 4°C. Перед использованием этот исходный раствор центрифугировали, супернатант отбрасывали, а исходный объем разбавляли в соотношении 1:20. В бикарбонатном буфере (рН 9,6). Соответствующие лунки 96-луночных полистирольных пластин покрывали 200 мкл антигена и инкубировали в течение ночи при 4°C. После четырех циклов в PBST 200 мл каждого образца сыворотки, разбавленного 1:50 в PBST, распределяли, и планшеты инкубировали при 37°С в течение 30 минут. После четырех циклов промывки каждой лунке оставляли стоять при 37°С с 200 мкл мышиного моноклонального анти-бычьего IgG 1, конъюгированного с HRPO, и надлежащим образом разбавляли. После четырех заключительных циклов промывки выдавали 200 мкл развивающегося раствора и реакцию останавливали, как описано ранее. В дубликаты включали четыре контроля: сильную положительную сыворотку, отрицательную сыворотку, лунки без антигена и лунки без сыворотки, последние два для предотвращения неспецифического связывания. Оптические плотности и результаты были получены и выражены как описано ранее. [3,4].
Вагинальные тампоны и молоко собирали один раз и сразу после родов из 15 коров штамма RB51 вакцинированной группы, и образцы были бактериологически проанализированы на наличие штамма вакцины с использованием селективных сред.
Результаты и обсуждение. Контрольные животные оставались серологически отрицательными на протяжении всего исследования. Животные, вакцинированные S82, показали классическую кривую антител, причем большинство животных были серологически отрицательными на 270 дней после вакцинации. Экстрактивные вакцинированные животные RB51 оставались отрицательными на протяжении всего
эксперимента в традиционных тестах RB, SAT и ME даже после ревакцинации. I-ELISA с SLPS показал положительные результаты с небольшим процентом сывороток из группы RB51 после первой вакцинации, с большим количеством положительных результатов через 30 дней после ревакцинации. Эта реакционная способность, вероятно, обусловлена специфическими антителами, направленными против поверхностных антигенов, общих для обоих штаммов Brucella .
Пик ответа на антитела наблюдался через 30 дней после вакцинации и снова через 30 дней после ревакцинации. Несмотря на то, что результаты вакцинированных животных были положительными в I-ELISA через 30 дней после вакцинации, только небольшой процент (4-8%) штаммов вакцинированных штаммом RB51 был положительным после первой вакцинации. Этот процент увеличился до 24%, через 30 дней после вакцинации и снизился до 0% через 6 месяцев после вакцинации. Отсутствие серологических реакций с сыворотками вакцинированных животных RB51 в обычных тестах указывает на то, что у этих животных не развивались антитела против O-антигена, как ожидается, при вакцинации штаммом RB51 . Никаких абортов не наблюдалось в вакцинированной группе штамма RB51, также штамм не культивировался из молочных или вагинальных секретов. Культуры в вакцинированной группе S82 не проводились, поскольку животные были вакцинированы один раз, и ни один из них не был беременным во время вакцинации.
Ни один из беременных животных не прервал или не продемонстрировал послеродовой отток вакцинного штамма в молочных или вагинальных выделениях, что указывает на то, что доза 2x10 9 бактерий RB51, вводимых в беременный крупный рогатый скот, может иметь очень низкий риск развития абортов.
Выводы. Это исследование подтверждает предыдущие наблюдения, что взрослый крупный рогатый скот, беременный или нет, не сероконвертирует в традиционных тестах на бруцеллез после вакцинации штаммом RB51. Важно отметить, что ревакцинация не изменяет традиционный серологический статус, указывающий на то, что можно проводить множественные прививки с штаммом RB51 взрослого нормального или беременного крупного рогатого скота, не влияя на серологические результаты. Эта характеристика имеет практическое значение, поскольку она позволяет ревакцинации животных повышать иммунитет без серологических последствий.
Список литературы
1. Alton J. Gones L. Поведение и эффекты грубой деформации Brucella abortus RB51 у мышей и крупного рогатого скота // Blacksburg, 1989.
2. Colby L. Гуморальный иммунный ответ Elk (Cervis elaphus nelsoni) и мышей на вакцинацию штаммом Brucella abortus RB51 // Blacksburg, 1997.
3. Cheville N. Бактериальная выживаемость, изменения лимфатических узлов и иммунологическая реакция крупного рогатого скота, вакцинированного стандартным и мутантным штаммом Brucella abortus // Американский журнал ветеринарных исследований. V. 53. № 10. P. 1881-8, 1992.
4. Stevens А.Е. Влияние возраста при вакцинации на эффективность штамма RB51 Brucella abortus для защиты крупного рогатого скота от бруцеллеза // Американский журнал ветеринарных исследований. V. 57. № 8. P. 1153-6, 1996.
