CC BY
28
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ДИРОФИЛЯРИОЗА СЛУЖЕБНЫХ СОБАК В ПЕРМСКОМ КРАЕ
Согрина A.B., Написаноеа Л.А., Бережно В.К., Хайдарое К.А.
ФГБНУ «ВНИИ фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений им. К.И. Скрябина»
Введение. Современная ветеринарная служба располагает достаточным количеством иммунологических коммерческих тестов по различным заболеваниям, в том числе и по дирофиляриозу. Однако существует проблема, которая препятствует применению их на практике особенно при массовых обследованиях -это высокая стоимость.
Исходя из этого, мы при изучении распространения дирофиляриоза среди служебных собак в Пермском крае проводили исследования на основе иммуноферментной реакции (ИФР) с использованием приготовленного нами соматического антигена-экстракта из половозрелых Dirofilaria immitis. Предварительно, используя референс положительные и отрицательные контрольные сыворотки крови собак, отрабатывали все необходимые параметры ИФР: определение концентрации белка антигена-экстракта из дирофилярий для сенсибилизации полистироловых планшетов; время и температурный режим сенсибилизации; разведение сывороток и конъюгата (антитела диагностические против IgG сыворотки крови собак, меченные пероксидазой); время инкубации с коньюгатом. После конкретизации этих данных использовали ИФР в диагностических исследованиях.
Материалы и методы. Серологические исследования проводили на базе ФГБНУ «ВНИИП им. К.И. Скрябина» со 186 пробами сывороток крови собак различного пола, породы и возраста, предварительно обследованных на наличие микрофиляремии. Сыворотки хранили при
Наличие микрофиляремии в крови опытных собак определяли методом концентрации с последующей их идентификацией.
Постановку ИФР проводили в непрямом варианте с целью выявления антител
[2].
Твердой фазой в реакции служили планшеты из полистирола (ГОСНИИМедПолимер, г. Москва).
Реакцию оценивали на автоматическом Ридере Antos 2010 при длине волны 492 нм с применением программы Adap 1.6.
Результаты и обсуждение. Предварительными исследованиями 186 служебных собак на наличие микрофилярий в крови установили, что 4 из них заражены D.immitis; 9 - D.repens и 1 собака была поражена обоими видами. У остальных животных на момент забора крови микрофилярии не были обнаружены.
По результатам ПФР установили, что не все собаки, в крови которых были обнаружены микрофилярии, реагировали серопозитивно (табл.).
Так, из 4 проб сывороток собак с микрофиляриями D.immitis в крови одна показала в иммунореакции отрицательный результат; из 9 проб - с подтвержденным
диагнозом кожного дирофиляриоза у одной регистрировали сомнительную реакцию, а сыворотка крови собаки с микстинвазией прореагировала в ИФР отрицательно.
По нашему мнению, отрицательные результаты, как в первом, так и во втором случае связаны с очень большой интенсивностью инвазии, а именно более 4 тысяч личинок дирофилярий на 1 мл крови. Такая интенсивная микрофиляремия могла оказать иммуносупрессивное действие на звенья иммунной системы, связанные с выработкой специфических антител.
Из 172 собак, у которых гельминтологическими методами микрофилярий в крови не выявляли (табл.), в ИФР показали следующий результат: 129 (75%) реагировали отрицательно, 8 (4%)проб сывороток - положительно, а 35 (20%) проб показали сомнительный результат. Положительный результат в ИФР среди проб крови собак, свободных от микрофилярий, можно объяснить разными причинами, а именно, наличием гельминта в организме, на антигены которого вырабатываются антитела, но отсутствием личинок вследствие применения препаратов, угнетающих активность дирофилярий (антигельминтики, антибиотики), а также паразитированием однополых особей, либо забором крови на раннем этапе заражения, когда антитела уже вырабатываются, а дирофилярии еще не достигли половой зрелости.
Таблица
Результаты серологического мониторинга при дирофиляриозе служебных собак Пермского края
Кол-во обследованных животных Результат ИФР
Категории собак Положительный Отрицательный Сомнительный о4 Л н о в л н и ё [3 о Специфичность, %
п % п % п %
й Ё О. immitis 4 3 75 1 15 0 0
Й § о л ю § О. герет 9 8 89 0 0 1 11
§ к ю о о & г ) К О. immitis + О. герет 1 0 0 1 100 0 0 84,6 75,0
Собаки свободные от микрофилярий: 172 8 4 129 76 35 20
Достаточно высокую чувствительность соматического антигена-экстракта из половозрелых ВлштШз в ИФР с сыворотками крови собак с подтвержденным
диагнозом кожного дирофиляриоза (D.repens) можно объяснить значительным антигенным родством двух паразитов. Для дифференциальной диагностики этих паразитозов необходимо использовать очищенные антигены-экстракты. Сомнительный результат, полученный ИФР в 35 пробах сывороток собак, с одной стороны, может быть также следствием применения в ИФР неочищенного антигена D.immitis, а с другой, реагированием антигена-экстракта из D.immitis с антителами на другие виды гельминтов, в том числе - кишечных нематод, на наличие которых эти животные на момент взятия крови не были обследованы.
Результаты наших исследований не расходятся с данными других авторов, использовавших в ИФР как не очищенные, так и очищенные антигены-экстракты этих видов гельминтов [1, 3, 4, 5].
Заключение. Таким образом, наши исследования являются наглядным подтверждением целесообразности использования ИФР в серомониторинге дирофиляриоза, как важного информативного аспекта особенно при скрытых формах инвазии.
Литература: ¡.Бескровная Ю.Г., Нагорный С.А., Васерин Ю.И. //Сб. мат. докл. науч. конф «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями»,- М,-2009,-Вып. 10.-С. 61-63. 2.Хайдаров К.А., Написанова Л.А. Бережко В.К.//Российский паразитологический журнал.-2009.-№1.-С.68-74. 3.Matsumura К., Kazuta Y., Endo R. et al.//Vet. Parasitol.-1986.-Vol. 21.-N 3.-P. 165-171. 4.Vezzani D., Carbajo A.E., Fontanarrosa M.F. et al.//Vet. Parasitol.-2011.-Vol. 176.-N 2-3.-P. 240-249. 5.WangL.C.//Acta. trop.-1997.-V.68.-№l.-P. 115-120.
Serological monitoring of Dirofllaria spp. infection of service dogs in the Perm Region. Sogrina A.V., Napisanova L.A., Berezhko V.K., Khaydarov K.A. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants.
Summary. The results of serological monitoring of Dirofilaria spp. infection among service dogs of the Perm Region were represented. Immunoenzyme assay (IEA) was used to analyze 186 serum samples obtained from dogs previously tested for microfilariae in blood. Microfilariae (D. immitis) were detected in 4, (D. repens) - in 9, mixed infection (D. immitis + D. repens) - in 1 blood sample. At IEA the positive result was in 3 and 8 samples respectively, at mixed infection reaction was negative. In remaining 172 serum samples 8 positive, 129 negative and 35 doubtful outcomes were detected. The sensitivity and specificity oflEA were 84,6% and 75,0% respectively.
