CC BY
11
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
ПР, ранняя летальность и резистентность) в группах с различными цитогенетическими нарушениями не продемонстрировал статистически значимых различий. При анализе связи цитогенетических нарушений и их сочетаний с долгосрочными результатами лечения (БРВ (НЯ176,9; р<0,0001) и ВРР (НЯ6,4; р=0,02)) отмечено статистически значимое неблагоприятное влияние перестроек генов MLL/t(11q23) и c-MYC/t(8q24).
Выводы. Неблагоприятными прогностическими факторами в рамках терапевтического воздействия, предусмотренного протоколом 0ЛЛ-2009, являются перестройки генов МЬЬД(1^23) и с-MYC/t(8q24). Делеции генов СЭКЫ2Л/9р21 и ТР53/17р13, численные и комплексные нарушения кариотипа не являются факторами прогноза у взрослых больных РЬ-негативным ОЛЛ при использовании протокола 0ЛЛ-2009.
Л. Б. Полушкина, В. А. Шуваев, М. С. Фоминых, Е. В. Ефремова, Е. В. Мотыко, Ю. С. Руженкова, А. П. Самородова, Н. Б. Павленко, М. П. Бакай, Л. С. Мартыненко, Е. В. Клеина, С. В. Волошин, С. С. Бессмельцев, А. В. Чечеткин, И. С. Мартынкевич
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург
СЕКВЕНИРОВАНИЕ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ: МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ДЕФЕКТЫ У ПАЦИЕНТОВ С РАЗЛИЧНЫМ ТЕЧЕНИЕМ МИЕЛОИДНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
Введение. Стандартные молекулярно-гене-тические методы не могут дать полного представления об особенностях миелопролифера-тивных новообразований (МПН), а в отдельных случаях даже подтвердить клональный характер заболевания. При несомненной диагностической и прогностической значимости молекулярных маркеров МПН все более актуальным является использование технологий высокопроизводительного секвенирования следующего поколения (NGS) для анализа большого массива генетических локусов.
Цель. Оценить молекулярно-генетический профиль МПН у пациентов с различным течением заболевания.
Материалы и методы. Нами были исследованы образцы ДНК цельной крови 7 пациентов с МПН. Шести больным установлен диагноз первичный миелофиброз (ПМФ), одному — эссенциальная тромбоцитемия (ЭТ). Всем пациентам проводили исследование на наличие отдельных маркеров клональности традиционными методами: драй-верных мутаций (ДМ) в генахJAK2 (аллель-специфичная ПЦР), MPL (ПЦР-ПДРФ), CALR (секвени-рование по Сэнгеру), а также прогностически значимых аберраций генов ASXL1, EZH2, SRSF2 (секвенирование по Сэнгеру). Также была использована NGS панель из 55 генов, ассоциированных с МПН с применением реагентов AmpliSeq на приборах MiSeq/HiSeq 2500 (Illumina Inc.).
Результаты. При исследовании традиционными методами мутация JAK2 обнаруже-
на у 3 пациентов, CALR — у 3, не обнаружено ДМ — у 1. У 4 больных выявлены аберрации гена ASXL1, в одном случае в сочетании с EZH2. Все выявленные мутации были подтверждены результатами NGS.
У пациента № 1 с предварительным диагнозом ЭТ на первом этапе молекулярно-генетиче-ского исследования маркеры клональности не выявлены. По результатам NGS обнаружены мутации в гене IDH1 (Tyr183Cys, COSM6494783) и KIT (Ile924Thr, rs1000138811), что позволило подтвердить клональную природу заболевания. Благоприятное течение ПМФ с префи-бротической стадией отмечено у пациента № 2 с мутацией в гене JAK2 и единственной дополнительной аберрацией, выявленной NGS, в гене TET2 (Gly355Asp, COSM6494926). Трансформация ПМФ в хронический миеломо-ноцитарный лейкоз (ХММЛ) констатирована у пациента № 3 с мутацией 1 типа в гене CALR. Методом NGS обнаружена мутация в гене KRAS (Gly12Ala, COSM522), встречающаяся у пациентов с ХММЛ. У остальных 4 пациентов при проведении первичной молекулярно-гене-тической диагностики выявлено сочетание драйверной мутации с прогностически неблагоприятными аберрациями в генах ASXL1 и EZH2. Прогрессия заболевания отмечена у всех больных даже на фоне проведения таргетной терапии руксолитинибом, 2 пациента (№ 5 и № 7) умерли. По результатам NGS в образце ДНК пациента №4 с нарастанием лейкоцитоза
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
и спленомегалии, быстрым усилением фиброза костного мозга до остеосклероза выявлены мутации в генах CBL (Glu366Lys, COSM6840675 и Arg246Ter, COSM4387952) и TET2 (Pro29Arg, COSM5020249) в дополнение к обнаруженным ранее JAK2 и ASXL1 (Tyr591Ter, COSM1681609). Прогрессия ПМФ с развитием нейтропении IV степени, тромбоцитопении тяжелой степени отмечена у пациента № 5 с мутациями JAK2 и ASXL1 (Arg1068Ter, COSM41715) и аберрацией неясного значения Pro278Leu в гене GNAS. Постепенное нарастание бластемии в периферической крови, остеосклероз костного мозга наблюдаются у пациента № 6 с мутацией 2 типа в гене CALR, а также дополнительными дефектами в генах ASXL1 (Gly646fsTer12, COSM914346), GNAS (Arg844His, COSM94388), PDGFRA (Ile989Val, rs145019788). Трансфор-
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
мация ПМФ в ОМЛ констатирована у пациента № 7 с мутацией типа 1 в гене CALR и мутацией ASXL1 ^еи6915БТег25) и выявленными при помощи N05 неблагоприятными аномалиями генов ЮШ (Л^1325ег, С05М28748) и DNMT3A (РЬе734Ьеи, С05М1169640).
Выводы. Таким образом, результаты, полученные с помощью N05, позволяют расширить представления об особенностях молекуляр-но-генетического профиля новообразования у конкретного пациента. Сопоставление перечня обнаруженных мутаций с различным характером течения МПН говорит о важной прогностической роли дополнительных генетических аберраций. Целесообразным видится внедрение расширенных миелоидных панелей N05 уже на этапе первичной диагностики МПН.
А. С. Поляков, Я. А. Носков, Ю. В. Никитин, С. Н. Колюбаева, Д. К. Жоголев, А. Д. Золотарёв, Д. В. Гуров
Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова», Министерства обороны Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ПЕРСПЕКТИВЫ РЕАЛИЗАЦИИ ИНДИВИДУАЛИЗИРОВАННЫХ ПОДХОДОВ В ВЫБОРЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ НА ОСНОВЕ ИЗУЧЕНИЯ ХИМИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БЛАСТНЫХ КЛЕТОК
Введение: Концепция пациент-специфичного подхода к терапии не является новым подходом в современной медицине. В рутинной практике этими принципами руководствуются прежде всего при выборе антибактериальных, противовирусных, антимикотических препаратов. Тогда как попытки индивидуализированного выбора противоопухолевой терапии, основанные на определении хими-очувствительности злокачественных клеток, пока рассматриваются только в качестве перспективного метода. Сложности в практическом применении наработок клеточной онкологии основаны на трудностях в получении достаточного количества однородных опухолевых клеток из солидных новообразований, гетерогенностью опухолей как в рамках одной нозологической формы у различных пациентов, так и в пределах одного новообразования, невозможностью получения дополнительного биопсийного материала в терапевтических целях. С этих позиций наиболее перспективным направлением в плане скорейшего внедрения в практическую медицину является
онкогематология. При таких заболеваниях как миелодиспластический синдром (МДС) или острые миелоидные лейкозы (ОМЛ), когда достаточное для экспериментального изучения количество однородных опухолевых (бластных) клеток может быть получено из костномозговых пунктатов или даже периферической крови, экспериментальные исследования хи-миочувствительности in vitro могут способствовать обоснованному индивидуальному выбору и улучшению исходов терапии.
Цель. Оценить возможность обоснования выбора терапии на основе изучения геноток-сичности лекарственных препаратов при резистентном ОМЛ.
Материалы и методы. Бластные клетки периферической крови пациента с полирезистентным ОМЛ отсортировывали на сортере MoFlo Astrios EQ (Beckman Coulter) в 2 пробирки со сложной средой для культивирования, в одну из которых сразу добавляли противоопухолевый препарат (опробован только децитабин). После культивирования (24 часа) сравнивали количество жизнеспособных клеток в пробе
