CC BY
75
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
ных патогенов, выделенных из различных продуктов в США, были выявлены плазмиды, практически идентичные плазмиде pIP1202. О возрастающем распространении антибиотикоустойчивых бактериальных штаммов свидетельствует также большая вспышка острой кишечной инфекции в Германии, вызванная энтерогеморрагической кишечной палочкой E. coli 0104:H4, с завозом инфекции в другие страны Европейского региона и США. Используемые в настоящее для определения антибиотикоустойчи-вости микробиологические методы занимают достаточно продолжительное время, что затрудняет своевременный выбор препарата для лечения больного человека. Большей эффективностью и быстротой получения результатов отличается метод ПЦР, предназначенный для детекции различных генов пато-генности.
Нами разработан комплекс ПЦР для выявления у штаммов Y. pestis и E. coli генов резистентности к различным антибиотикам. На основе нуклеотид-ных последовательностей плазмид антибиотикоре-зистентности Y. pestis, представленных в базе данных NCBI GenBank, а также данных литературы по анти-биотикоустойчивым патогенным штаммам E. coli нами сконструированы олигонуклеотидные прай-меры для детекции генов резистентности к стрептомицину, тетрациклину, хлорамфениколу, кана-мицину, полимиксину, ванкомицину, гентамицину. Подобраны оптимальные условия проведения ПЦР. Разрешающая способность сконструированных ПЦР исследована на коллекции антибиотикостойчивых штаммов Y. pestis и E. coli и показана их эффективность для выявления резистентных к лекарственным препаратам штаммов бактерий. Разработанный способ позволяет быстро и эффективно проводить детекцию генов антибиотикоустойчивости у штаммов Y. pestis и E. coli.
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ЛЕКТИНСВЯЗЫВАЮЩЕГО КОМПОНЕНТА LACTOBACILLUS FERMENTUM 90 TS-4 (21) В МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ЦЕНОЗАХ С ДРОЖЖЕПОДОБНЫМИ ГРИБАМИ И.В. Анохина, Э.Г. Кравцов, Я.А. Рыбас Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов», медицинский факультет, Москва
Было протестирванно 20 клинических изолятов дрожжеподобных грибов Candida albicans на предмет зависимости их адгезивной активности от динамики менструального цикла и возможности влиять на эту адгезию лектинсвязывающим компонентом, выделенным из культуральной жидкости молочнокислых бактерий [Lactobacillus fermentum 90 TS-4(21)].
Установленно, что для 75% изолятов дрожжеподобных грибов Candida albicans изменение гормонального фона организма женщины является существенным фактором в процессе адгезии к клеткам-мишеням (влагалищные эпителиоциты). Прослеживается значимое увеличение адгезии в период овуляции и резкое снижение последней в начале и в конце менструального цикла.
Если выделенные на 9 день менструального цикла клетки-мишени проинкубировать с лектинсвя-зывающим компонентом, то из 20 клинических изо-
лятов торможение адгезии проявится у 35% культур. При инкубации влагалищных эпителиоцитов с лек-тинсвязывающим компонентом в период овуляции торможение адгезии демонстрирует 90% дрожжеподобных грибов Candida albicans. Среди этих изолятов 12 культур претерпевают сдвиг адгезивной активности в сторону увеличения в контроле и уменьшения в опыте. Обработка клеток-мишеней лектинсвязыва-ющим компонентом в конце менструального цикла сокращает количество отвечающих на это действие культур до 45%.
Таким образом, среди 20 клинических изолятов дрожжеподобных грибов Candida albicans 75% культур представлены гормонзависимыми, 25% — гор-моннезависимыми микроорганизмами. Попытки модулировать адгезивную активность с помощью лектинсвязывающего компонента молочнокислых бактерий выявили, что наибольший ингибирую-щий эффект проявляется в отношении гормонза-висимых культур дрожжеподобных грибов Candida albicans и только в овуляционную фазу менструального цикла.
САЛЬМОНЕЛЛЕЗ, ВЫЗВАННЫЙ SALMONELLA ENTERICA СЕРОВАРА ORANIENBURG, СВЯЗАННЫЙ С УПОТРЕБЛЕНИЕМ СУХОЙ МОЛОЧНОЙ СМЕСИ ДЛЯ ДЕТЕЙ
М.В. Афанасьев1, М.В. Чеснокова1, Р.И. Пещерова1, Л.П. Нурсаянова2, Н.С. Казановская3, М.Ю. Шестопалов1, С.В. Балахонов1
ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Иркутск; 2Управление Роспотребнадзора по Иркутской области, г. Иркутск; 3ФБУЗ Центр гигиены и эпидемиологии по Иркутской области, г. Иркутск
В этиологической структуре пищевых зоонозов сальмонеллез занимает лидирующие позиции, как в мире, так и в Российской Федерации. Среди сальмонелл, вызывающих заболевания людей, преобладают возбудители S. enterica сероваров Enteritidis и Typhimurium. В связи с этим, зарегистрированные случаи сальмонеллеза в г. Усолье-Сибирское Иркутской области с 2 ноября 2011 г. по 16 января 2012 г. среди детей, обусловленные редко встречающимся сероваром Oranienburg, и связанные с употреблением сухой адаптированной молочной смеси, представляются достаточно интересными. В процессе эпидемиологического расследования было изучено 13 штаммов S. enterica, выделенных от больных детей (n = 7; 53,8%; от 2 до 7 мес.), взрослых (n = 2; 15,4%; 24—27 лет) и образцов молочной смеси (n = 4; 30,8%). Изоляция штаммов, их микробиологическая и серологическая характеристика проводилась стандартными методами. В качестве дополнительного теста выполнялась ускоренная масс-спектрометрическая идентификация с применением MALDI-ToF масс-спектрометра Microflex® и программного комплекса «Biotyper» (Bruker Daltonics, Германия). Расширенная генетическая характеристика штаммов включала ПЦР-детекцию гена инвазивности inv А, изучение плазмидного спектра и сравнительный анализ рестрикционных профилей, полученных с помощью эндонуклеаз рестрикции XbaI и SpeI методом электрофореза в переменном поле (PFGE-анализ). Все исследованные штаммы имели типичные для вида биохимические
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
свойства, относились к серотипу Oranienburg. У всех штаммов отмечен одинаковый плазмидный спектр и положительный амплификационный ответ на ген inv А. Рестрикционные профили 12 изолятов были абсолютно идентичны; один штамм имел минимальные отличия (коэффициент подобия = 0,98), что позволило отнести все штаммы к одной клональной группе. Комплексный подход с использованием современных технологий идентификации и типи-рования дал возможность установить клональный характер заболеваний и подтвердить эпидемиологическую связь штаммов, выделенных от больных и фактора передачи.
ИЗУЧЕНИЕАНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ, ИЗОЛИРОВАННЫХ ОТ ПТИЦ
Е.В. Афанасьевская, С.В. Поспелова, А.В. Перова
ГБОУ ВПО ПГМА им. акад. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития РФ, г. Пермь
Современное птицеводство не может быть успешным без проведения превентивных профилактических мероприятий с использованием различного рода антибактериальных средств. Одно из основных негативных последствий их применения — развитие устойчивости возбудителей, в результате чего снижается их эффективность и возникает необходимость повторных курсов.
Целью работы явилось изучение видового состава и динамическая оценка антибиотикочувствительно-сти культур, выделенных в условиях птицефабрики в период с 2009 по 2012 годы. Исследовано 825 проб патологического материала, взятого при вынужденном забое птицы. Бактериологическое исследование проводили по стандартной методике. Чувствительность изолированных штаммов к антибактериальным препаратам определяли диско-диффузионным методом в отношении ципрофлоксацина, энрофлоксацина, ванкомицина, оксациллина, ампициллина, фураз-ролидона, триметоприма, гентамицина.
Всего было выделено и идентифицировано 1672 культуры различных видов микроорганизмов, среди которых преобладали бактерии семейства Enterobacteriaceae (58,1%), которые чаще всего (46,3%) изолировали из ассоциаций со стафило- и энтерококками. Особый интерес представляло изучение чувствительности микроорганизмов к фторхино-лонам, которые входят в состав многих кормовых антибиотиков и широко применяются в птицеводстве. Изучение антибиотикограмм позволило выявить формирование и распространение устойчивых к фторхинолонам клонов эшерихий и золотистых стафилококков. Динамическое наблюдение показало, что с 2009 по 2011 гг. количество резистентных штаммов E. coli возросло с 5,3 до 29,1%. S. aureus в 2009 г. встречался в единичных случаях и был чувствителен ко всему выбранному спектру антибиотиков. К 2011 г. доля культур S. aureus, рост которых фторхинолоны не подавляли, составила 33,5%. Важно подчеркнуть, что ванкомицин проявлял активность в отношении всех грамположительных кокков. MRSA среди «птичьих» штаммов обнаружены не были.
Таким образом, сформировавшаяся и распространившаяся среди бактерий, циркулирующих на птицефабрике, устойчивость к ципрофлоксацину является одним из факторов риска развития генерализованных инфекций у птиц. Для предотвращения
формирования резистентности необходима правильная и своевременная ротация препаратов с разным механизмом действия.
ОЦЕНКА АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТОВ ИЗ ДРОЖЖЕЙ CANDIDA И MALASSEZIA МЕТОДОМ ДОТ-БЛОТ АНАЛИЗА
О.А. Баева, В.Г. Арзуманян, О.А. Сердюк
ФГБУ НИИ вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова РАМН, Москва
Многие виды дрожжевых грибов являются возбудителями фунгемийиаллергомикозов. Качественная диагностика этих заболеваний предполагает наличие панели высокоспецифичных и стандартизованных дрожжевых антигенов. Антигенные препараты из дрожжей производятся за рубежом, причем первой стадией их выделения является дезинтеграция дрожжевых клеток. В то же время известно, что наиболее важными в антигенном отношении являются поверхностные компоненты клеток дрожжей, поскольку именно поверхность микробной клетки является той материей, которая непосредственно взаимодействует с клетками и антителами иммунной системы хозяина (Mochon A.B. et al, 2010). Нами разрабатывается и постоянно совершенствуется способ выделения антигенных компонентов поверхностных слоев дрожжей. Целью настоящего исследования явилось сравнение иммунологических свойств двух препаратов — из дрожжей родов Candida и Malassezia.
В экспериментах использованы штаммы дрожжей из институтской коллекции — Candida albicans № 927, Malassezia furfur № 1451. Выращивание культур дрожжей Сandida проводили в чашках Петри на плотной синтетической питательной среде, содержащей соли, витамины и глюкозу в качестве единственного источника углерода и энергии (Yarrow, 1998). Дрожжи Malassezia культивировали в чашках Петри на синтетической среде, содержащей соли, Tween 40 и желчные соли (Арзуманян В.Г., 2000). Инкубацию чашек проводили в термостате при температуре 32°С.
Выделение антигенного комплекса поверхностных компонентов клеток проводили путем экстракции раствором додецилсульфата натрия. Концентрация детергента подбиралась таким образом, чтобы клетки оставались целыми. Бесклеточный экстракт использовали в качестве антигенного препарата.
Два кролика породы шиншилла были иммунизированы по следующей схеме: препараты из дрожжей вводили внутривенно в краевую вену уха в дозе 0,25 мл, причем по 6 иммунизаций без адьюванта с интервалом 3 суток, после чего еще по 5 иммуни-заций в нарастающей дозе от 0,25 мл до 1 мл с адью-вантом Фрейнда с интервалом 2 недели. Сыворотки кроликов были использованы в опытах по изучению перекрестной реактивности препаратов из упомянутых дрожжей. Кролик А — иммунизирован препаратом из C. albicans, кролик Б — из M. furfur.
Дот-блот анализ полученных препаратов с кроличьими сыворотками проводили методом, описанным ранее (Towbin H. et al., 1979). На мембрану наносили по 1 мкл дрожжевых препаратов, концентрация белка примерно 2,3 мг/мл; в качестве отрицательного контроля использовали раствор бычьего сывороточного альбумина 2 мг/мл в фосфатном бу-
