CC BY
18
УДК 602.3:579.6
DOI 10.18286/1816-4501-2018-4-216-221
РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОТЕОМНОГО АНАЛИЗА БАКТЕРИОФАГА BACILLUS CEREUS FBC - 28УГСХА
Феоктистова Наталья Александровна, кандидат биологических наук, доцент кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза»
Мерчина Светлана Васильевна, доцент кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза»
Мастиленко Андрей Владимирович, кандидат биологических наук, доцент кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза» ФГБОУ ВО Ульяновский ГАУ
432017, г. Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1; 8(8422)55-95-47 e-mail: [email protected]
Ключевые слова: Bacillus cereus, бактериофаг, протеом, молекулярная масса, белок, изоэлектриче-ская точка
В статье представлены результаты протеомного анализа бактериофага Bacillus cereus FBc-28 УГ-СХА (изучение количественного состава, изоэлектрической точки белков, молекулярного веса), выделенного из объектов внешней среды (проба почвы), представляющего интерес как компонент экспериментального фагового биопрепарата для обработки продуктов питания с целью снижения количественных показателей микробной контаминации. В экспериментах были использованы ресурсы систем SnapGeneViewerv.4.1.7 и ExPasy (https://web.expasy.org). В результате проведенных исследований были получены данные протеомного анализа на основании проведенного ранее сиквенса. Установлено, что качественный состав протеинов бактериофага FBc-28 УГСХА соответствует таковым у аннотированных аналогов, имеет четкие гомологии нуклеотидного и аминокислотного наборов. При анализе протеома бактериофага FBc-28 УГСХА и, соответственно, данных секвенирования его нуклеиновой кислоты было выявлено 60 белков с молекулярными массами от 5,7 до 132,3 кДа. Гистограмма распределения белкового состава Bacillus cereus phage FBc-28 УГСХА по изоэлектрической точке (pI) фиксирует значения в широком диапазоне, равном 4,2 -12,1. Полученные данные о протеоме бактериофага FBc-28 УГСХА, специфичного в отношении Bacillus cereus, приближает нас к созданию фаговых препаратов нового поколения, предназначенных для деконтаминации пищевого сырья, имеющих высокую специфичность и широкий спектр литического действия в пределах бактериального вида, и соответствующих стандартам биобезопасности
Исследования проводятся в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ, выполняемых по заданию МСХ РФ в 2018 году.
Введение
Разработка биопрепаратов на основе бактериофагов для деконтаминации пищевого сырья или готовых к употреблению продуктов питания подразумевает изучение их основных биологических свойств (литической активности, специфичности, устойчивости к физическим и химическим факторам, сохранении титра при хранении и т.п.), к которым также относятся и молекулярно-генетические характеристики, включая анализ протеома [1-5].
По литературным данным бактерии Bacillus cereus входят в состав основных конта-минатов животного и растительного пищевого сырья, так как являются почвенными спороо-бразующими сапрофитами и при несоблюдении санитарного-гигиенических параметров переработки, высокой температурной устойчивости и солетолерантности могут стать причиной пищевых отравлений и при употреблении готовых
кулинарных блюд [6-9].
Цель работы - изучение протеома бактериофага Bacillus cereus FBc - 28УГСХА (определение количества, молекулярного веса и изоэлектрической точки белков).
Объекты и методы исследований
Объект исследования - бактериофаг FBc -28УГСХА, выделенный в 2008 г. из пробы почвы (г. Сызрань, Самарская область), характеризующийся следующими свойствами:
- характеристика бляшкообразующих единиц - прозрачные негативные колонии округлой формы, 5,0±-3,0 мм с полным лизисом в центре, неполным лизисом в виде ореола по периферии, 8,5±0,5 мм в диаметре;
- показатель литической активности - титр по Грация- 9,0±1,0х1011 БОЕ/мл, титр по Аппель-ману - 10-10;
- специфичен для культур, идентифицированных как Bacillus cereus, и не лизирует куль-
туры, относящиеся к группе «Bacillus cereus»: Bacillus anthracis, Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus thuringiensis и Bacillus weihens tephanensis;
- отличается устойчивостью к таким факторам, как обработка трихлорметаном в течение 25 минут в соотношении 10:1, культивирование при температуре 780 С в 30 минут приводит к инактивации; установлено, что культивирование бактериофага при изменении показателя рН в диапазоне 3,4-8,2 не приводит к разрушению бактериофага.
Изучаемый бактериофаг концентрировали методом ультрафильтрации с применением одноразовых ультрафильтров с пределом исключения 10 кДа, Мегск (Millipore) [10-11].
Нуклеотидные последовательности исследуемых бактериофагов изучали методом полупроводникового секвенирования на платформе lonTorrent (Thermo Fisher Scientific, США) при помощи набора реагентов Ion PI Sequencing 200 Kit v3 на чипе Ion PI ChipKit v2 секвенатораIonProton (ThermoFisherScientific, США) согласно протоколу производителя.
Оценку распределения длин фрагментов библиотек и их концентрацию проводили с использованием прибора Bioanalyzer 2100 и набора реагентов Agilent High Sensitivity DNA Kit (Agilent Technologies, США) согласно протоколу производителя. Клональную амплификацию библиотек, которые были предварительно эк-вимолярно пулированы, проводили с использованием набора Ion PI Template OT2 200 Kit v3 (Thermo Fisher Scientific, США) согласно протоколу производителя. Для сборки фаговых геномов denovo использовали риды с качеством прочтения нуклеотидов не ниже Q20 и длиной не менее 50 оснований.
Сборку геномов осуществляли с использованием программного обеспечения Newbler (Roche/454 GS-FLX).Сравнение собранных геномов бактериофагов с геномами известных аннотированных бактериофагов проводили при помощи алгоритма BLAST (http://blast.ncbi.nlm. nih.gov/Blast.cgi) и баз данных нуклеотидных последовательностей NCBI (Национальный центр биотехнологической информации, США). Визуализацию выравнивания собранных нами геномов с известными мы проводили с использованием программного обеспечения BLAST Ring Image Generator (BRIG).Поиск открытых рамок считывания проводили при помощи программного обеспечения UGENE (Унипро, Россия). Для проведения анализа протеома бактериофа-
шиз
ffCIBHi ДС1И11
ШШЗЖЩм
дствть
ВС1&74. ДС1Д731
рис. 1 - карта линейной днк бактериофага Bacillus cereus phage FBc - 28 УГСХА а)c расшифровкой кодирующих областей генома, б) картирование генов, для которых не определены гомологии
га FBc - 28 УГСХА применяли ресурсы систем SnapGeneViewerv.4.1.7 и ExPasy (https://web. expasy.org).
результаты исследований Данные сиквенса бактериофага Bacillus cereus FBc - 28 УГСХА были внесены в систему SnapGeneViewerv.4.1.7 и получена карта протео-ма (рис. 1) [12-13]. Затем нуклеотидный сиквенс каждого из локусов был ретранслирован в про-теомный сиквенс и определен аминокислотный состав, который был перенесен в систему ExPasy и получены данные о молекулярной массе и точке изоэлектрического фокусирования. Этот алгоритм применяли для каждого генетического ло-куса. Полученные нами данные анализа протео-ма бактериофага FBc - 28УГСХА были сопоставлены на основании данных проведенного сиквенса.
а
таблица 1
локализация белков в геноме Bacillus cereus FBc - 28 УГСХА
SeQUCTioe: b.iul !ji Гмшгез: 151 ИМ FBC - 28 yrCXA.gfc [L Jitea у 44 730 bp)
Feature Location see u туре
У ВС1847 119 463 345 bp ■ -4— CDS
У ВС IS 48 898 1995 1098 bp в —*- Cl>5
У ВС1849 2267 244 0 174 bp ■ CDS
У ВС1850 2463 2801 339 bp ■ CDS
У ВС 18 51 2974 3291 318 bp ■ —fr CDS
У ВС 18 5 2: 3697 5253 1557 bp ■ —fr CDS
у ВС1853 5267 5569 303 bp н —» CDS
у ВС1854 55-69 5802 234 bp я —fr- CDS
/ BC18 5S 5S16 6451 636 bp я —* CDS
у ВС1856 6468 684 5 378 bp я CDS
у ВС1857 6 891 .. 7874 9S4 bp и —fr CD5
у ВС18 5В 7871 B173 303 bp в —fr- CDS
/ ВС18 S9 8148 8717 570 bp я — CDS
у ВС186О В727 9245 519 bp я —* CDS
у ВС1861 9227 .. lO 420 1194 bp и —fr- CDS
У ВС1862 11 248 .. 12Ü33 736 bp я —fr CDS
У ВС18 63 12 053 .. 15139 3037 bp я —» CDS
у ВС1864 15 181 .. 17 5B9 2409 bp я — CDS
У ВС1865 17 В 28 13 035 258 bp в —* CDS
у BC1S66 13 164 .. 13 475 312 bp ш CDS
у ВС18 6 7 13 492 .. 13 794 303 bp я —» CDS
у ВС18 6В 1В 791 .. 19 12Б 336 bp в —*- CDS
у ВС1869 19 346 .. 20 122 777 bp В —» CDS
у ВС18 70 20 336 .. 20 590 255 bp О —fr CDS
У ВС1871 20 933 .. 21 334 402 bp В CDS
у ВС1872 21 551 21 859 309 bp в —» CDS
/ ВС18 73 22 036 .. 22 331 246 bp в —» CDS
у ВС1874 22 377 .. 22 607 231 bp в —* CDS
У ВС1875 22 6Ю 23 197 538 bp в — CDS
у ВС18 76 23 23« .. 23 655 426 bp в —» CDS
у ВС1877 23 642 .. 24 236 645 bp в CDS
У ВС187В 24 301 .. 24 433 133 bp в —fr CDS
у ВС1879 24 430 .. 24 797 318 bp ■ —fr CDS
у ВС18 ВО 24 814 - 2$ 755 942 bp в CDS
у ВС18В1 25 75В .. 25 904 147 bp в —fr CDS
У ВС18В2 26 034? .. 26 227 198 bp в CDS
J• BC1SB3 26 252 26 632 331 bp ■ —fr CDS
у ВС18 В4 26 629 .. 26 91Ö 232 bp а — CDS
у ВС1885 26 912 .. 27 109 198 bp я —» CDS
у ВС18В6 27 136 .. 27 303 168 bp я —fr CDS
у ВС 1887 27 565 - 23 092 528 bp я — CDS
У ВС 1888 23 129 .. 23 45B 330 bp я —fr CDS
у BC1SB9 23 714 .. 29 094 331 bp я —fr CDS
у ВС189О 29 769 .. 30 236 468 bp я —fr CDS
У ВС1891 ЗО 253 . 31 968 3716 bp я —fr CDS
У ВС18 92 31 985 - 33 502 1518 bp в —fr CDS
У ВС1893 33 570 .. 34 343 774 bp я —fr CDS
У ВС1894 34 403 - 35 527 1125 bp в —fr CDS
У ВС1895 35 577 __ 35 SO I 225 bp в —fr CDS
У ВС1896 35 836 - 36171 336 bp ■ —fr CDS
У ВС1897 36 176 .. 36 932 BQ7 bp в CDS
У ВС1898 36 936 .. 37 360 375 bp в —fr CDS
У ВС18 99 37 360 37 719 360 bp в —fr CDS
У BC19QO 37 722 .. 38 129 408 bp ■ —fr CDS
У ВС1901 33 1.43 .. 33 649 507 bp в —^ CDS
У ВС19&2 33 673 .. 39 032 360 Dp ■ —* CDS
У ВС 19 0-3 39 019 .. 39 234 216 bp ■ —► CDS
У ВС19ОД 39 302 39 679 378 bp ■ —» CDS
У BC19D5 39 730 .. 40 023 294 bp в —¥ CDS
У ВС19 О5 40 309 .. 43 956 3648 bp ■ —fr CDS
У ВС190 7 44 7SO 44 730 1 bp в —» CDS
У ВС19 0 8 44 7SO .. 44 730 X bp ■ CDS
У ВС1909 44 7SO 44 7SD 1 ftp ■ —*- CDS
У ВС1910 44 730 44 730 1 bp в CDS
J ВС1911 44 7SO . 44 7SD 1 op ■ —» CD5
У ВС1912 44 7SO 44 730 1 bp □ ■9— CDS
У ВС1913 44 7SO .. 44 7SO 1 op в 4— CD5
У ВС1914 44 7SO .. 44 730 1 bp в CDS
У ВС1915 44 7SO 44 730 1 bp в CDS
У ВС1916 44 7SO .. 44 73D 1 bp ■ CDS
У ВС1917 44 7SO .. 44 730 1 bp в — CDS
У ВС191В 4Д 7SO 44 7BO 1 bp ■ —» CDS
У ВС1919 44 7SO .. 44 7SO 1 bp в —* CDS
У ВС19 2.0 44 7SO 44 730 1 bp ■ —* CDS
У ВС 19 21 44 7SO .. 44 7SO 1 bp □ —k CDS
У ВС1847 119 463 345 bp ш 4— gene
У ВС184В S98 1995 1098 bp □ gene
У ВС1849 2267 244 D 174 bp Е-1 gene
У ВС185О 2463 2801 339 bp □ {jene
У ВС18 51 2974 3291 318 bp EZJ —► gene
У BC1S5 2 3697 5253 1557 bp □ —» gene
У ВС185 3 5267 5569 зоз bp □ —¥ gene
У ВС 18 54 5569 58Q2 234 bp о — gene
У ВС18 5 5 5816 6451 636 bp а —*- gene
У ВС1856 646B 684 5 378 bp □ —► gene
У ВС1857 6891 7874 934 bp п —» gene
У ВС18 58 7871 8173 ЗОЗ bp в —* gene
У ВС1859 a 148 8717 570 bp □ —fr gene
У ВС18бО H727 9245 519 bp в gene
У ВС18&1 9227 .. lo 42D 1194 bp □ —» gene
У ВС1862 11 248 .. 12 ОЗЗ 736 bp о —» gene
У BC186.3 12 053 .. 15 139 3087 bp □ —4 gene
У ВС1864 15 1S1 .. 17 539 2409 bp в —fr gene
У ВС18б5 17 828 .. 13 035 258 bp □ —» gene
У ВС186 0 13 164 .. 13 475 312 bp ■ —p gene
У ВС18 б 7 13 492 .. 13 794 303 bp о gene
У ВС 18 6В IS 791 19 126 336 bp □ — gene
У ВС18 6 9 19 346 20 122 777 bp □ —► gene
У ВС187О 2Q 336 .. 20 59D 255 bp о —fr gene
У ВС18 71 20 933 .. 21 334 4Q2 bp & —► gene
У ВС18 7 2 21 551 .. 21 859 309 bp о —fr gene
У ВС18 73 22 086 - 22 331 246 bp в —fr gene
У ВС18 74 22 377 .. 22 607 231 bp □ —» gene
У ВС1875 22 610 .. 23 197 538 bp Eil —fr gene
У ВС18 76 23 230 .. 23 655 426 bp □ —fr gene
У ВС 18 77 23 642 .. 24 236 645 bp □ —fr gene
У ВС18 7 В 24 301 .. 24 433 133 bp □ —fr gene
У ВС 18 79 24 4SO .. 24 797 318 bp в —» gene
У ВС1880 24 814 .. 25 755 942 bp о —fr gene
J ВС 1881 25 758 . 25 90Я 147 bp а —• gene
I hypothetical proteir
Exoriuctea.se SbcC
hypothetical proteir
hypothetical protein Exoriuciease sbcD hypothetical protein hypothetical piotein hypothetical protein
hypothetical protein MCH domain family pro... DMA polymerase I hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein Trans-gtycosytase hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein
hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein SeaItoId protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical protein hypothetical prote hypothetical prote hypothetical prote hypothetical prote hypothetical prote hypotheti hypothetical prote hypothetical prote hypothetical prote xpaFi protein holln
hypothetical prote hypothetical prote hypothetical prote
hypothetical prote hypothetical prote hypothetical prote hypothetical prote hypothetical prote
Установлено, что анализ протеома бактериофага Bacillus cereus FBc - 28 УГСХА соответственно данных секвенирования его нуклеиновой кислоты было выявлено 60 белков с молекулярными массами от 5,7 до 132,3 кДа (рис. 1).
На основании данных системы ExPasy были построены гистограммы распределения фрагментов протеома бактериофага Bacillus cereus FBc - 28 УГСХА в зависимости от молекулярной массы (рис. 2) и точке изоэлектриче-ского фокусирования (рис. 3).
Установлено, что 57% выявленных белков имеет молекулярную массу 10-20 кДа, 15% - 20-40 кДа, 10% - 40-60 кДа, 5% - более 80 кДа, 13% - менее 10 кДа.
Анализ белков бактериофага Bacillus cereus FBc - 28УГСХА по изоэлектрической точке (pl) - величине pH, при которой белки переходят в изоэлектрическое состояние, показал, что она располагается в диапазоне от 4,2 до 12,1.
Продолжение таблицы 1
jus kill
Рис. 2 - Гистограмма распределения белкового состава Bacillus cereus phage FBc - 28 УГСХА по молекулярной массе в зависимости от pi
Рис. 3 - Гистограмма распределения белкового состава Bacillus cereus phage FBc - 28 УГСХА
по изоэлектрической точке (рО
Выводы
Сиквенсовые данные генома бактериофага ГБе - 28УГСХА, выделенного из объектов внешней среды (пробы почвы), представлены в виде линейной карты ДНК с расшифровкой кодирующих областей генома.
Результаты полученных данных о нукле-отидных последовательностях бактериофага
Bacillus cereus FBc - 28 УГСХА, полученных при его секвенировании, позволили нам провести сравнительный анализ их геномов. Установлено, что качественный состав протеинов бактериофага FBc - 28 УГСХА соответствует таковым у аннотированных аналогов, имеет четкие гомологии нуклеотидного и аминокислотного наборов. В структуре протеинов выявлена закономерность, которая присуща фагам, - наличие структурных
и неструктурных компонентов. Определены продукты генов, не имеющие четко определенных функциональных характеристик, - гипотетические белки, которые имеют аналогии в аннотированных геномах бактериофагов, активных в отношении Bacillus cereus.
Однако, исследование биологических свойств бактериофагов, которые будут входить в состав биопрепарата для деконтаминации продуктов питания, невозможно без изучения их белков. При анализе протеома бактериофага FBc - 28 УГСХА - данных секвенирования его нуклеиновой кислоты было выявлено 60 белков, у которых определен размер. Молекулярная масса установленных белков колеблется в диапазоне от 5,7 до 132,3 кДа, причем 57% из них имеет молекулярную массу 10-20 кДа, 15% - 20-40 кДа, 10% - 40-60 кДа, 5% - более 80 кДа, 13% - менее 10 кДа. Гистограмма распределения белкового состава Bacillus cereus phage FBc - 28 УГСХА по изоэлектрической точке (pI) дает информацию о кислотности среды (pH), при которой белок не несёт электрического заряда, и фиксирует значения в широком диапазоне, равном 4,2 - 12,1. Полученные данные количественного анализа белков бактериофага Bacillus cereus FBc - 28 УГСХА позволят в перспективе получить информацию о качественном его составе. Полученные данные о протеоме бактериофага FBc-28 УГСХА, специфичного в отношении Bacillus cereus, приближает нас к созданию фаговых препаратов нового поколения, предназначенных для декон-таминации пищевого сырья, имеющих высокую специфичность и широкий спектр литического действия в пределах бактериального вида, и соответствующих стандартам биобезопасности.
Библиографический список
1. Алешкин, А.В. Биодеконтаминация и продление сроков годности мясных и рыбных полуфабрикатов с помощью бактериофагов / А.В. Алешкин, Э.Р. Зулькарнеев, Ю.В. Ларина // Астраханский медицинский журнал. - 2015. - Том 10, № 4. - С. 40-48.
2. Суярова, Е.А. Диагностические возможности протеомного профилирования в гастроэнтерологии [Электронный ресурс] / Е.А. Суярова, Г.Н. Тарасова // Фундаментальные исследования. - 2015. - № 1-9. - С. 1921-1925. - URL: http:// fundamental-research.ru/ru/article/view?id=38454 (дата обращения: 15.10.2018).
3. Молекулярно-биологические и генетические принципы селекции терапевтических бактериофагов бактерий родов Pseudomonas и
Staphylococcus / К.А. Мирошников, Е.Е. Куликов, О.С. Дарбеева, К.А. Лыско, Г.М. Игнатьев // Прикладная биохимия и микробиология. - 2014. - Том 50, № 3. - С. 338.
4. Киселева, Ирина Анатольевна. Специализированный продукт диетического профилактического питания на основе коктейля бактериофагов: конструирование, технология производства, оценка безопасности и эффективности применения: дис. ... канд. биологических наук: 03.01.06, 03.02.03 / И.А. Киселева. - М.: 2015. - 202 с.
5. Conrotto, P. Proteomic approaches in biological and medical sciences: principles and applications / Р. Conrotto, S. Souchelnytskyi // Exp. Oncol. - 2008. - V. 30, № 3. - P. 171-180.
6. Global food losses and food waste: extent, causes and prevention / J. Gustavsson [et al.]. - Rome : FAO, 2011. - 38 p.
7. Выделение и идентификация бактерий Bacillus cereus / Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев, К.В. Маслюкова, Е.А. Ляшенко, А.И. Калдыркаев, С.Н. Золотухин, Н.И. Молофеева, Е.В. Сульдина // Естественные и технические науки. - 2018. - № 7 (121). - С. 28-33.
8. Леонтьев, В.Н. Порча пищевых продуктов: виды, причины и способы предотвращения / В.Н. Леонтьев, Х.М. Элькаиб, А.Э. Эльхедми // Труды БГУ. - 2013. - Том 8, часть 1. - С. 125-130.
9. Современная пищевая микробиология / под ред. Дж. М. Джеймс; пер. с англ. Е. Баранова.
- М.: Бином, 2012. - 888 с.
10. Каттер, Э. Бактериофаги: биология и практическое применение / Э. Каттер, А. Сулак-велидзе; науч. ред. А.В. Летаров; пер. с англ. Е.Е. Куликов [и др.]. - М.: Научный мир, 2012. - 636 с.
11. Effects of sunlight on bacteriophage viability and structure / K.E. Wommack, R.T. Hill, N.F. Miller, R.R. Colwell // Appl Environ Microbiol. - 1996.
- V. 62. - P. 1336-1341.
12. Молекулярно-генетическая характеристика бактериофага ВасШив cereus FBc-28 УГСХА / Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев, А.В. Мастилен-ко, Е.В. Сульдина // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2018.
- № 2 (42). - С. 216-222.
13. Molecular-genetic Characteristics of Bacteriophage Bacillus cereus ГВс - 28 UGSHA / N.A. Feoktistova, D.A. Vasilyev, A.V. Mastilenko, E.V. Suldina, S.N. Zolotukhin // Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences. - 2018. - V. 9. - № 4. - Р. 345-354.
RESULTS OF PROTEOMIC ANALYSIS OF BACILLUS CEREUS FBC - 28 UGSKHA BACTERIOPHAGE
Feoktistova N. A., Merchina S. V., Mastilenko A. V. FSBEI HE Ulyanovsk SAU 432017, Ulyanovsk, Novyi Venets Boulevard, 1; 8 (8422) 55-95-47 e-mail: [email protected]
Key words: Bacillus cereus, bacteriophage, proteome, molecular weight, protein, isoelectric point
The article presents results of the proteomic analysis of Bacillus cereus FBc - 28 UGSKhA bacteriophage (study of the quantitative composition, isoelectric point of proteins, molecular weight) isolated from environmental objects (soil test), which is of interest as a component of an experimental phage biological compound for food treatment to reduce quantitative parametres of microbial contamination. The resources of SnapGeneViewerv.4.1.7 and ExPasy (https:// web.expasy.org). were used in the experiments. As a result of the research, data of proteomic analysis were obtained on the basis of a previously performed sequence. It was established that the qualitative composition of the proteins of FBc - 28 UGSKhA bacteriophage corresponds to those of the annotated analogs, has a clear homology of the nucleotide and amino acid sets. When analyzing the proteome of FBc - 28 UGSKhA bacteriophage and, accordingly, the sequencing of its nucleic acid, 60 proteins with molecular masses from 5.7 to 132.3 kDa were detected. The histogram of the distribution of the protein composition of Bacillus cereus of FBc - 28 UGSKhA at the isoelectric point (pi) captures the values in a wide range of 4.2 -12.1. The obtained data on the proteome of FBc - 28 UGSKhA bacteriophage specific for Bacillus cereus brings us closer to the development of phage preparations of a new generation intended to decontaminate food raw materials, which have high specificity and a wide range of lytic action within the bacterial species, and complying with biosafety standards.
Bibliography
1. Aleshkin, A.V. Biodecontamination and prolonging ofshelf life of meat and fish semi-finished products using bacteriophages / A.V. Aleshkin, E.R. Zulkarneev, Yu.V. Larina //Astrakhan Medical Journal. - 2015. - Volume 10, No. 4. - P. 40-48.
2. Suyarova, E.A. Diagnostic capabilities of proteomic profiling in gastroenterology [Electronic resource] / E.A. Suyarova, G.N. Tarasova // Fundamental research. - 2015. - № 1-9. - P. 1921-1925. - URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=38454 (appeal date: 10/15/2018).
3. Molecular biological and genetic principles for selection of therapeutic bacteriophages of Pseudomonas and Staphylococcus bacteria genera / K.A. Miroshnikov, E.E. Kulikov, O.S. Darbeeva, K.A. Lysko, G.M. Ignatiev//Applied Biochemistry and Microbiology. - 2014. - Volume 50, No. 3. - P. 338.
4. Kiseleva, Irina Anatolyevna. Specialized product of dietary preventive nutrition based on a bacteriophage cocktail: design, production technology, assessment of safety and efficacy of use: dissertation of Candidate of Biological Sciences: 03.01.06 - biotechnology (including bionanotechnology) 03.02.03 -microbiology /I.A. Kiselyov. - Moscow, 2015. - 202 p.
5. Conrotto, P. Proteomic approaches in biological and medical sciences: principles and applications /P. Conrotto, S. Souchelnytskyi// Exp. Oncol. - 2008. - 30, № 3. - P. 171-180.
6. Global food losses and food waste: extent, causes and prevention/J. Gustavsson [et al.]. - Rome: FAO, 2011. - 38 p.
7. Isolation and identification of Bacillus cereus bacteria / N.A. Feoktistova, D.A. Vasiliev, K.V. Maslyukova, E.A. Lyashenko, A.I. Kaldyrkaev, S.N. Zolotukhin, N.I. Molofeeva, E.V. Suldina//Natural and technical sciences. - 2018. - № 7 (121). - P. 28-33.
8. Leontiev, V.N. Food spoilage: types, causes and methods of prevention / V.N. Leontiev, Kh.M. Elkaib, A.E. Elkhedmi // Scientific works of BSU. - 2013. -Volume 8, part 1. - P. 125-130.
9. Modern food microbiology / ed. by J. M. James; transl. from English by E. Baranova. - M.: Binom, 2012. - 888 p.
10. Kutter, E. Bacteriophages: Biology and practical application / E. Kutter, A. Sulakvelidze; scientific editor A.V. Letarov; transl. from English by E.E.Kulikov [et al.]. - Moscow: The Scientific World, 2012. - 636 p.
11. Effects of sunlight on bacteriophage viability and structure / K.E. Wommack, R.T. Hill, N.F. Miller, R.R. Colwell // Appl Environ Microbiol. -1996. - V. 62. - P. 1336-1341.
12. Molecular genetic characteristics of Bacillus cereus FBc-28 UGSKhA bacteriophage / N.A. Feoktistova, D.A. Vasiliev, A.V. Mastilenko, E.V. Suldina // Vestnik of Ulyanovsk State Agricultural Academy. - 2018. - № 2 (42). - P. 216-222.
13. Molecular-genetic Characteristics of Bacteriophage Bacillus cereus FBc - 28 UGSHA / N.A. Feoktistova, D.A. Vasilyev, A.V. Mastilenko, E.V. Suldina, S.N. Zolotukhin // Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences. - 2018. - V. 9. - № 4. - P. 345-354.
