CC BY
135
УДК 619:615.371:619:616.988.7(571.56).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ РИНОПНЕВМОНИИ В ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ УСЛОВИЯХ
М.П. НЕУСТРОЕВ, доктор ветеринарных наук, зам. директора
С.Г. ПЕТРОВА, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник
Ф.М. ТИХОНОВА, главный специалист А.А. БАИШЕВ, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник
Якутский НИИСХ Россельхозакадемии К.П. ЮРОВ, доктор ветеринарных наук, зав. отделом
ВИЭВ Россельхозакадемии Е-mail: [email protected]
Резюме. Цель исследований - определение эффективности новой инактивированной вакцины против ринопневмонии в производственных условиях. Испытания проведены в неблагополучных по заболеванию хозяйствах республики Саха (Якутия). Инактивированная вакцина с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 по эффективности не уступает живой вирусвакцине. Так, после ее введения (II группа) деловой выход жеребят составил 82,8...100 %, у кобыл, иммунизированных вирусвакциной (I группа) - 80,0.100 %, у невакцинированных (III группа) - 66,7 %. В крови кобыл иммунизированных инактивированной вакциной против риноп-невмонии в течение трех месяцев наблюдения значительно повышалось содержание в-глобулиновой фракции белка, лимфоцитов, а такжелизоцимная, бактерицидная и фагоцитарная активность сыворотки крови, по сравнению с животными, привитыми вирусвакциной, и контролем. Повышенная фагоцитарная активность у кобыл первой группы сохранялась и через 6 мес. после иммунизации. При этом повышались количество клеток, поглощенных учтенными нейтрофилами (фагоцитарный индекс; I группа - 10,7±2,29, II группа - 13,58±2,22, p < 0,5, III группа - 11,66±2,71), показатель поглощения клетокактивными нейтрофилами (фагоцитарное число; I группа - 15,56±1,37, II группа - 21,28±1,22, p < 0,5, III группа - 14,41±3,02) и поглотительная способность нейтрофилов (фагоцитарная емкость; I группа - 21,45±1,16, II группа - 25,12±1,26, p < 0,5, III группа - 21,65±2,55). Иммунизация инактивированной вакциной вызывает выработку антител в достаточно высоких титрах, которая сохраняется в течение 6 мес. (срок наблюдения). Таким образом, иммунопрофилактика ринопневмонии лошадей в неблагополучных хозяйствах инактивированной вакциной с иммуномодулятором индуцирует синтез специфических агглютинирующих антител, стимулирует иммунобиологическую реактивность организма, в результате чего развивается иммунитет относительно высокой напряженности и повышается деловой выход жеребят.
Ключевые слова: лошадь, ринопневмония, инактивированная вакцина, деловой выход, иммунобиологическая реактивность, антитела.
В Российской Федерации, в том числе в республике Саха (Якутия), не решенной проблемой ветеринарной медицины остается профилактика абортов кобыл инфекционной этиологии. Наиболее распространенная инфекционная болезнь лошадей табунного содержания - ринопневмония (вирусный аборт лошадей), которая регистрируется почти во всех регионах России [1, 2].
По данным ветеринарной службы республики Саха (Якутия), в 2002-2011 гг. циркуляция вируса ринопневмонии лошадей была отмечена в 90 пунктах 16 районов.
Наиболее высокая заболеваемость животных регистрируется в Таттинском, Хангаласском, Нюрбинском,
Амгинском, Оймяконском, Чурапчинском и Сунтар-ском районах, где сосредоточено наибольшее количество лошадей республики Саха (Якутия). Значительное распространение вирусного аборта в последние годы обусловлено недостаточным проведением плановых диагностических исследований, вакцинопрофилак-тики, бесконтрольным завозом верховых лошадей из других регионов России и обменом животными внутри республики, экстремальными условиями тебеневки, особенностями ведения отрасли (концентрация значительного поголовья лошадей в период отъема жеребят), снижением естественной резистентности в зимнее-весенний период, длительной выживаемостью возбудителя во внешней среде [3].
В результате распространения ринопневмонии, сальмонеллезного аборта и недостаточного выполнения зоотехнических и ветеринарных мероприятий деловой выход жеребят остается низким и составляет 50...55 %.
На сегодняшний день в Европейской части России изучена эпизоотология заболевания, разработана и применяется вирусвакцина из штамма СВ/69 [1]. Однако ее испытания в условиях табунного содержания лошадей показали недостаточную эффективность из-за технологической трудоемкости схемы вакцинации, которая предусматривает двухкратное введение.
Исходя, из этого мы разработали новую инактивированную вакцину против ринопневмонии и установили ее безвредность и иммуногенность на лабораторных животных.
Цель наших исследований - испытание инактивированной вакцины против ринопневмонии в производственных условиях для обоснования ее широкого применения в табунном коневодстве.
Условия, материалы и методы. Вакцина против ринопневмонии лошадей изготовлена из штамма СВ/69 вируса ринопневмонии лошадей совместно с отделом вирусологии ВИЭВ им. Я.Р.Коваленко Россельхозакадемии. Культуру инактивировали формалином, в качестве адъюванта добавляли гидроокись алюминия.
В качестве иммуномодулятора использовали культуральную жидкость штамма бактерий Вас. виЫШвТНП-3, депонированного во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве.
Эффективность нового препарата сравнивали с вирусвакциной против ринопневмонии лошадей сухой культуральной из штамма СВ/69, которую применяли согласно [4].
Для испытания вакцин в 2008-2010 гг. в неблагополучном по ринопневмонии ОАО «Нам» были проведены
2 опыта: первый в 2008-2009 гг., второй - в 20092010 гг. Для обоих экспериментов формировали по три
3 группы жеребых кобыл. Животным I группы двухкратно вводили вирусвакцину из штамма СВ/69, II группы -однократно новую инактивированную вакцину, особей III группы не вакцинировали, (контроль).
В 2008-2009 гг. число животных по группам составляло соответственно 18, 17 и 18 гол., в 2009-2010 гг. -32, 32 и 30 гол.
Таблица 1. Результаты сравнительных производственных испытаний вакцин против ринопнев-монии в ОАО «Нам»
Группа Годы Поголовье Деловой выход %
I 2008-2009 18 100
II 1T 100
III 18 66,7
I 2009-2010 32 80,0
II 36 82,8
III 30 66,7
Первый раз вакцины вводили в первой декаде ноября внутримышечно в область верхней трети шеи в дозе
3 мл. Вторую группу кобыл ревакцинировали через 3 мес. (в феврале).
Кровь исследовали через 1, 3 и 6 мес. после иммунизации. За подопытными животными вели клиническое наблюдение.
Производственные испытания инактивированной вакцины проводили в неблагополучном по риноп-невмонии СХПК «Болугур» (2010-2011 гг.). Для этого сформировали 2 группы, первую из которых (106 гол.) иммунизировали инактивированной вакциной, вторая (42 гол.) была контрольной.
Иммунизацию кобыл проводили в первой декаде декабря. Клиническое состояние контролировали в течение 5 мес. Кровь брали до вакцинации и через 6 мес. При повторном взятии кровь брали и от жеребят.
В целях производственного испытания специфической профилактики абортов инфекционной этиологии был поставлен опыт на 120 гол. жеребых кобыл участка «КыИыл Толоон» ОПХ «Покровское», неблагополучного по ринопневмонии и сальмонеллезному аборту. Опытную группу из 60 гол. иммунизировали вакцинами против ринопневмонии (инактивированная - опытная серия) в дозе 4 мл и сальмонеллезного аборта лошадей в дозе 2 мл (согласно инструкции по применению). Вторая группа (60 гол.) была контрольной.
Гематологические исследования крови проводили по общепринятым методикам. Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли с суточной культурой Streptococcus equi Н-34, бактерицидные свойства сыворотки крови - суточной культурой E. coli, лизоцим-ную активность - культурой Micrococcus lizodeicticus, используя методики [5]. Содержание общего белка и его фракций в сыворотке крови определяли совместно с сотрудниками лаборатории биохимии и массового анализа Якутского НИИСХ Россельхозакадемии на инфракрасном анализаторе (NIR scanner model 4250).
Наличие геммагглютинизирующих специфических антител к вирусу ринопневмонии определяли методом иммуноферментного анализа.
Цифровые данные обрабатывали методами вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение. В первый год испытания в ОАО «Нам» у кобыл, иммунизированных обоими вакцинами, деловой выход жеребят составил 100 %, против 66,7 % у неиммунизированных
На второй год испытаний деловой выход у кобыл иммунизированных инактивированной вакциной оказался выше, чем в контроле, на 16,1 %, у кобыл привитых вирусвакциной - на 13,3 %.
В крови кобыл иммунизированных инактивированной вакциной против ринопневмонии в течение трех месяцев наблюдения существенно повышалось содержание р-глобулиновой фракции белка, лимфоцитов, а также лизоцимная, бактерицидная и фагоцитарная активность сыворотки крови, по сравнению с животными привитыми вирусвакциной и контролем (табл. 2). Повышенная фагоцитарная активность у кобыл II группы сохранялась и через 6 мес. после иммунизации. При этом отмечалось достоверно (р < 0,5) более высокое количество поглощенных клеток учтенным нейтрофилами (фагоцитарный индекс; I группа - 10,7 ± 2,29; II группа - 13,58 ± 2,22; III группа - 11,66 ± 2,71), показатель поглощенных клеток активными нейтрофилами (фагоцитарное число; I группа - 15,56 ± 1,37; II группа - 21,28 ± 1,22; III группа - 14,41 ± 3,02) и поглотительная способность нейтрофилов (фагоцитарная емкость, I группа - 21,45 ± 1,16; II группа - 25,12 ± 1,26; III группа - 21,65 ± 2,55).
В первый месяц после вакцинации наиболее высокие титры специфических антител зарегистрированы у кобыл иммунизированных живой вакциной. Однако на 3 и 6 мес. наблюдения значительно повышалась величина этого показателя у кобыл привитых инактивированной вакциной. Таким образом, достаточно высокий уровень антител, вырабатываемый организмом в ответ на введение живых и инактивированных вирусов ринопневмонии, предотвращает развитие полевого штамма, что обспечивает достаточно высокое получение приплода (80...100 %).
При серологическом исследовании сывороток крови жеребых кобыл СХПК «Болугур» методом иммуноферментного анализа до иммунизации выявлено присутствие антител к вирусу ринопневмонии в достаточно высоком титре (опыт - 1143 ± 341,1; контроль - 1533 ± 193,8), что, на наш взгляд, следует рассматривать как иммунную реакцию на инфициро-
Таблица 2. Динамика иммунобиологических показателей крови после иммунизации в ОАО «Нам»
Груп- па Глобулины, г % Лизоцим- БАСК, % ФА, % Лимфоциты, 109/л
а R Y Титр антител ная активность
Через 1 месяц после вакцинации
I 1,41 І 0,01 1,38 ± 0,02 1,87 ± 0,07 1266,7±202,0 25,5 ± 4,1 75,5 ± 4,8 76,03 ± 3,50* 3,35 ± 0,15
II 1,42 І 0,01 1,39 ± 0,01 1,85 ± 0,05 342,8±122,2 21,8 ± 6,9 56,3 ± 6,4 81,04 ± 5,30* 4,14 ± 0,31***
III 1,42 І 0,02 1,39 ± 0,01 1,85 ± 0,05 300,0±115,7 18,9 ± 6,3 59,1 ±5,6 74,9 ± 4,1 2,56 ± 0,17
Через З месяца после вакцинации
I 1,45 І 0,01 1,42 ± 0,01 1,73 ± 0,05 700,0±1,23 17,0 ± 3,0 13,9 ± 3,5 69,87 ± 5,9 3,57 ± 0,16
II 1,46 І 0,01 1,44±0,01* 1,72 ± 0,05 2514,3±323,3 26,3 ± 8,8 29,6 ± 9,8* 85,25 ± 2,9* 4,02 ± 0,09***
III 1,45 І 0,01 1,42 ± 0,01 1,77 ± 0,05 266,7±137,7 14,4 ± 3,6 17,2 ±1,6 78,57 ± 3,6 2,06 ± 0,09
Через 6 месяцев после вакцинации
I 1,37 І 0,03 1,32 ± 0,04 2,05 ± 0,13 1142,9±161,6 - 45,5 ± 7,2 75,03 ± 0,6* 2,58 ± 0,19
II 1,39 І 0,03 1,35 ± 0,03 1,94 ± 0,11 3080±756,2 - 37,1 ± 5,1 82,7 ± 6,1* 4,19 ± 0,41
III 1,40 І 0,02 1,36 ± 0,02 1,95 ± 0,06 960,0±118,6 - 40,6 ± 6,5 79,3 ± 6,6 5,81 ± 0,32
Примечание: БАСК - бактерицидная активность сыворотки крови; ФА - фагоцитарная активность; * - р < 0,5; ** - р < 0,05; *** - р < 0,01.
вание полевым вирусом и подтверждение неблагополучия хозяйства по ринопневмонии. Через 6 мес. после введения вакцины у кобыл опытной группы антитела к вирусу ринопневмонии присутствовали в более высоких титрах (1778±291,4), чем в контроле, где зарегистрировано некоторое снижение величины этого показателя (914±107,3), хотя она оставалась довольно высокой, то есть животные были носителями возбудителя заболевания. В этом случае более высокий титр антител в крови животных опытной группы, на наш взгляд, свидетельствует о развитии гуморального иммунного ответа, обеспечивающего эффективность вакцинопрофилактики. Снижение величины этого показателя у неумминизированных кобыл перед вы-жеребкой, может быть обусловлено иммунодепрес-сивным действием вируса на иммунную систему, а также связыванием гуморальных антител, вследствии виремии, и образованием значительного количества цитоксических иммунных комплексов, которые повышают проницаемость кровеносных сосудов, в том числе и плацентарных, что облегчает проникновение вируса в плод. При этом следует учесть, что, по мнению других исследователей в естественных условиях гуморальные антитела не создают защиты против инфекции и по изменению их титра невозможно предсказать время наступления абортов [6].
У жеребят опытной группы антитела к вирусу ринопневмонии также присутствовали в более высоком титре, чем в контроле (опыт - 800±26,7; контроль -267±17,6), что, на наш взгляд, подтверждает их передачу от матери к жеребенку через молозиво. Кроме того, в крови вакцинированных кобыл отмечено повышенное содержания у-глобулиновой фракции белка (опыт - 2,10±0,02, контроль - 2,02±0,07 г %).
Следовательно, введение инактивированной вакцины индуцирует выработку специфических антител и стимулирует иммунобиологическую реактивность. При этом деловой выход повышается с 71,0 до 81,9 %.
В хозяйстве неблагополучном по ринопневмонии и сальмонеллезному аборту одновременное введение инактивированных вакцин против обоих заболеваний повысило деловой выход жеребят на 16,7 % - с 53,3 до 70 %.
Высокую эффективность инактивированной вакцины не уступающей живой, на наш взгляд, можно объяснить иммуномодулирующим компонентом - культуральной жидкостью (фугатом) штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3, который согласно результатам наших предыдущих исследований может индуцировать синтез интерферона и стимулировать иммунобиологическую реактивность организма, усиливать иммуногенность инактивированных бактериальных и вирусных вакцин [7, 8].
Выводы. Иммунизация жеребых кобыл в ноябре (период отъема жеребят) инактивированной вакциной вызывает выработку специфических гемагллю-тинирующих антител в высоких титрах, стимулирует иммунобиологическую реактивность (повышение фагоцитарной, бактерицидной и лизоцимной активности, содержания р-глобулиновой фракции белка и лимфоцитов). В результате развивается иммунитет относительно высокой напряженности и повышается деловой выход жеребят.
Инактивированная вакцина против ринопневмонии с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 при однократном введении не уступает по эффективности живой вирусвакцине.
Иммунизация жеребых кобыл в неблагополучных по ринопневмонии пунктах повышает деловой выход жеребят на 10,9...33,3 %.
Литература.
1. Гулюкин М.И., Юров К.П. Профилактика массовых инфекционных болезней лошадей табунном коневодстве // Ветеринария и кормление. - 2004. - №4. - с. 22-24.
2. Неустроев М.П., Юров К.П. Новые средства и методы профилактики инфекционных болезней лошадей табунного содержания //Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2006. - № - с.54-56.
3. Неустроев М.П. Вирусные болезни лошадей в Якутии //АПК Сибири, Монголии и Республики Казахстан в XXI веке: мат. IVМеждунар. науч.-практ. конф. (Улан-Батор, 9-10 июля 2001 г.). - Новосибирск, 2001. - с.331-332.
4. Наставление по применению вирусвакцины против ринопневмонии лошадей сухой культуральной из штамма CB/69. Утвержден департаментом ветеринарии МСХ РФ от 5 апреля 1996 г. - № 13-4-2/569. Неустроев М.П., Малышева В.И. Оценка естественной резистентности лошадей: Методические рекомендации / РАСХН. Сиб. Отделение. Якутский НИИСХ. - Новосибирск, 1995. - с.3-9.
5. Allen G.R., Btyans J.T. Molecular epizoobio- Cogg, pathogenesis and profylaxis of equine herpesvirus- J. infections Drag.Veb. Microbiol. Immunol, 1986. № 2. p. 78-144.
6. Осмаев И.А., Юров К.П., Неустроев М.П. Иммуномодулирующие свойства эндогенного интерферона у телят//Ветеринария. - 2007. - № 1. - с.11-12.
7. Неустроев М.П., Тарабукина Н.П., Федорова М.П. Использование пробиотика из штамма Bacillus subtilis в сельском хозяйстве // Аграрная наука сельскохозяйственному производству Монголии, Сибири и Казахстана: Сборник науч. докладов XIIМеждунар. науч.-практ. конф. (Улан-Батор, 6-7июля 2010 г.). - Улаанбаатор, 2010. - ч.2. - с. 503-507.
FINDINGS OF TESTING OF INACTIVATED VACCINE AGAINST RHINOPNEUMONIA
IN WORKING CONDITIONS M.P. Neustroev, S.G. Petrova, F.M. Tikhonova, A.A. Baishev, K.P. Yurov
Summary. The testing had been conducted in order to examine the effectiveness of a new inactivated rhinopneumonia in working conditions. The testing had been conducted in rhinopneumonia neglected households of Republic of Sakha (Yakutia). In the result of comparative clinical testing there was established that an inactivated vaccine with a culture liquid of the strain of Bacillus subtilis TNP-3 was as effective as a live vaccinia virus. So after the administration of inactivated vaccine foal crop percent was 82,8-100% and after the administration of vaccinia virus to mares - 80,0-100%. The offspring produce of non-vaccinated mares was 66.7%. There were marked increasing of content of p - globulin fraction of total protein, lymphocytes, lysozyme, bactericidal and phagocytic activity of blood serum of immunized with inactivated vaccine mares within three months of observations as compared to animals immunized with control vaccinia virus. In mares increased phagocytic activity of first group persisted 6 months after immunization. There were increases of absorbed by cells active neutrophils’ amount (phagocytic number, group 2 - 13,58 ± 2,22, group 3 - 11,66 ± 2,71), the accounted neutrophils absorption cells (phagocytic index, group 2 - 21.28 ± 1,22, group 3 - 14,41 ± 3,02) and the absorption capacity of neutrophils (phagocytic capacity, group 2 - 25,12 ± 1,26, group 3 - 21,65 ± 2,55). Immunization with an inactivated vaccine elicited antibodies in high enough titres, which lasts for 6 months (observation period). Thus, immunoprophylaxis in rhinopneumonia neglected households vaccine with inactivated equine rhinopneumonia immunomodulator induced the synthesis of specific agglutinating antibodies. That stimulated immunological reactivity, resulting in the development of relatively high intensity of immunity and increased foal crop percent. Keywords: horse, equine rhinopneumonia, inactivated vaccine, crop percent, immunobiological reactivity, antibodies.
