CC BY
14
болезнь и Helicobacter pylori, проблемы диагностики и лечения. 2000, www.rambler.ru; 10. Исаков В.А, Домарадский Н.В. Хелико-бактериоз. - М.: Медпрактика, 2003, с.412; 11. Ломов С.Ю. Роль факторов патогенности в механизме хеликобактериозных поражений желудка. - ЖМЭИИ, 1997, N.6, с.108-111; 12. Рожавин М.А. Патогенные свойства Campylobakter pylori. - Клин. Микроб., 1989, N.3, с.20-24; 13. Пасечников В.Д., Чуков С.З. Значение геномной гетерогенности штаммов Helicobacter pylori в развитии ассоциированной патологии гастродуоденальной зоны. - Росс. Журн. гастро-энт., 2001, N.3, с.7-11; 14. Чуков С.З., Пасечников В.Д. Особенности иммунологического ответа у Helicobacter pylori - инфицированных больных хроническим гастритом. - www.rambler.ru; 15. Червинец В.М, Бондоренко В.М, Базлов С.Н. Микрофлора слизистой оболочки ульцерозной зоны больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки. - Журн. микроб., 2001, N.5, с.12-15; 16. Leunk R.D. Production of a cytotoxin by Helicobacter pylori. -Rev. Infect. Dis., 1991, v.13, p.686-689; 17. Jonson W.M., Lior H. American Society for Microbiology, 1986, p.63; 18. Leunk R.D., Jonson P.T. American Society for Microbiology, 1987, p.53; 19. Lowry O.H, Rosebrough N.J. - J. boil. Chem., 1951, v.193, p.265-275; 20. Mobley H, Fulkerson J. Expression of catalytically active urease by Helicobacter pylori. - Nasional University of Irland, 1997, p.58-66.
SUMMARY
About some factors of pathogenesity of Helicobacter pylori Kh.Aliyeva, A.Samedov, E.Agayeva
We studied some factors of pathogenicity of Helicobacter pylori (HP) and the mechanism of their action.
We studied cytotoxin s molecular uniformity. We have done the gel-chromatography of cytotoxin on Sefadex G 200 and established its heterogeneity and cytotoxicity of high-molecular fractions.
Presence of cytotoxicy genes allows to explain why HP infection in various cases is shown as a different clinical picture.
nocTynHJia 09.10.2006
Рецепторы эстрогенов у женщин, больных раком слизистой оболочки полости рта
А.Д.Алиев
Азербайджанский медицинский университет, г.Баку
В последние годы в большинстве стран мира наблюдается рост заболеваемости предопухо-левыми процессами и раком слизистой оболочки полости рта (СОПР). При этом наиболее частыми нозологическими формами предопухоле-вых процессов слизистой полости рта считаются лейкоплакия и красный плоский лишай.
Слизистая оболочка полости рта, вероятно, является мишенью для половых стероидов, в первую очередь для эстрогенов, при этом рецепторы эстрогенов (РЭ) обнаружены в клетках лейкоплакии и в клетках чешуйчатой карциномы, хотя содержание РЭ в большинстве клеток слизистой относительно невелико и данные разных авторов достаточно противоречивы.
Биосинтез эстрогенов из предшественников (4-андростендиона и тестостерона) происходит не только в стероидпродуцирующих железах внутренней секреции, но и во многих тканях организма - жировой ткани, мышцах, печени, поч-
ках, мозжечке (4). Внегонадное образование эстрогенов является основным у мужчин, а у женщин - в постменопаузе, а также у подвергшихся кастрации или при ожирении (2).
В крови ПСГ в основном находятся в виде комплексов с транспортными белками - специфическими и неспецифическими. Образование таких комплексов со специфическими белками является одним из факторов регуляции биологической активности и интенсивности обмена ПСГ (1).
В клетках-мишенях ПСГ действуют через ядерные рецепторы, причем в цитоплазме эст-радиол-17р (Э2) непосредственно связывается с РЭ.
Клинические, биохимические, цитоморфо-логические данные свидетельствуют о зависимости функционального состояния СОПР от воздействия ПСГ.
Важным подтверждением того, что СОПР и
ее малигнизированные формы могут быть тканью-мишенью эстрогенов, являются данные об ингибировании 2-метоксиэстрадиолом пролиферации клеток рака полости рта. 2-метокси-эстрадиол, эндогенный метаболит эстрадиола, ингибируя пролиферацию, стабилизирует экспрессию р53 и ингибирует транскрипционную активность важного онкогенного белка ^кВ (3).
Как известно, при возможном использовании гормональной компоненты терапии рака очень важно иметь данные о гормональной чувствительности опухоли.
Следовательно, оценка гормональной чувствительности очагов поражения при опухолях слизистой оболочки полости рта позволит выделить чувствительные и нечувствительные к половым стероидным гормонам патогенетические варианты этих заболеваний на основании определения рецепторов эстрогенов и андрогенов в цитозольной фракции биоптатов из очагов поражения. Кроме того, это даст возможность обосновать применение терапии этих заболеваний с использованием препаратов, влияющих на процессы метаболизма стероидов в клетках-мишенях.
С целью изучения чувствительности злокачественных опухолей слизистой оболочки полости рта, в данном исследовании мы определяли уровень РЭ в цитозольной фракции в опухолях женщин, не получавших предварительного лечения.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. В исследование вошло 35 женщин. Возраст пациенток колебался от 46 до 67 лет. Подавляющее число больных находились в возрасте старше 50 лет и только 14 из них в возрастной группе 56-60 лет. У всех больных этой группы диагноз был подтвержден гистологически.
Репродуктивная функция была сохранена у 6 пациенток, постменопауза до 1 года имелась у 5 пациенток, постменопауза от 1 до 5 лет - у 12 больных, от 5 до 10 лет - у 9 пациенток, более 15 лет - у 3 больных.
В контрольную группу вошли 15 практически здоровых женщин, средний возраст которых составлял 58,2±3,7 года. У всех пациентов контрольной группы также были взяты биоптаты с различных участков здоровой СОПР.
Биоптаты злокачественных опухолей и предо-
Менструальная до 1 года функция сохранена
1-5 лет
5-10 лет более 10 лет
Рис. Уровень РЭ в цитозольной фракции рака СОПР больных с сохраненной менструальной функцией и с разным сроком длительности постменопаузы
пухолевых поражений СОПР, а также нормальной слизистой после хирургического забора тканей замораживали в жидком азоте и хранили до определения рецепторов стероидных гормонов в течение 16-24 час при температуре -70°С. Масса тканевых образцов, в которых проводили радиоли-гандное определение специфического связывания рецепторов с андрогенами и эстрогенами, колебалась от 35 до 250 мг.
Биоптаты/ тканей СОПР растирали в фарфоровой ступке при охлаждении жидким азотом, смешивали с буфером. Состав буфера: 10 ммоль/л Трис-HCI (фирма "E.Merck", ФРГ), 1,5 ммоль/л ЭДТА (фирма "Sigma", США), 1,0 ммоль/л дитиотреитола (фирма "Koch-Light Laboratories", Великобритания), 0,03% азид натрия (фирма "E.Merck", ФРГ), pH 7,4 при 20°С, 10% глицерин марки осч (по объему). После размораживания гомогенат центрифугировали 10 мин при 2500-3000 д. Из надосадочной жидкости получали цитозоль, центрифугируя пробы при 105000 д в течение 1 часа (ротор RP-640, центрифуга "Sorval", Великобритания). Для работыi использовали цитозоль с концентрацией общего белка около 1,0 мг/мл. Белок определяли по методу Лоури.
Для определения рецепторов эстрогенов (РЭ) в цитозольной фракции исследуемых биопта-тов в качестве лиганда использовали (2,4,6,7-3H)-эстрадиол-17ß (3Н)Э2 ("Amersham Int. PLC", Англия) при насыщающих концентрациях. Неспецифическое связывание определяли при 100-200-кратном молярном избытке диэтилстильбэстрола. Инкубацию проб цитозоля с (3Н)Э2 проводили аналогично
Таблица. Уровень РЭ (фмоль/мг белка) в цитозольной фракции злокачественных опухолей больных с учетом репродуктивной функции и длительности постменопаузы
Репродуктивная функция Уровень РЭ
Сохранена менструальная функция 34,3±2,6
Постменопауза до 1 года 26,7+2,6
Постменопауза от 1 до 5 лет 23,7+3,4
Постменопауза от 5 до 10 лет 18,4+3,5
Постменопауза более 10 лет 11,5+2,1
определению РА.
После инкубации к пробам добавляли равный объем 0,2% раствора протамина сульфата, интенсивно встряхивали, инкубировали во льду 5 мин и центрифугировали 10 мин при 2500-3000 д. Надо-садочную жидкость удаляли, осадок промывали 2 раза 1,0 мл охлажденного буфера, растворяли в 50 мкл ледяной уксусной кислоты и добавляли 75 мкл 50% водного раствора едкого натра. Пробы из пробирок смывали в сцинтилляционные флаконы 2 порциями по 3,5 мл сцинтиллятором СЖ-8.
Радиоактивность проб определяли на спектрометре модели 8100 (фирма "ЛКБ", Швеция). Эффективность счета по тритию равнялась около 40%.
В каждом случае определяли разницу между общим связыванием 3Н ДГТ или 3Н Э2 в трех параллельных пробах (после определения радиоактивности для каждой пробы) и неспецифическим связыванием также в трех параллельных пробах (все 6 проб соответствовали одному цитозолю). Специфическое связываниелигандов с циплазматичес-кими белками-рецепторами рассчитывали с учетом удельной радиоактивности лиганда и коэффициента эффективности счета. Конечный результат выражали в фемтомолях связанного с рецептором стероида на 1,0 мг общего цитозольно-го белка в пробе.
Коэффициент вариации в одном опыте составлял 10-11%, между опытами 11-13%. Статистическую оценку результатов проводили по Т-кри-терию.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. В цитозольной фракции первичных злокачественных опухолей СОПР у 24 женщин выявлены РЭ, что составляет 60,9% от всего количества опухолей. Уровень РЭ в цитозольной фракции опухолей СОПР в общей группе больных раком СОПР составлял 25,8±2,8 фмоль/мг общего белка цитозольной фракции с колебаниями значений в широких пределах от 9,2±2,1 до 48,9±4,5 фмоль/мг белка.
РЭ были обнаружены в цитозольной фракции злокачественных опухолей больных в возрасте до 55 лет в 13 случаях (54,1% от числа больных этого возраста), а у больных в возрасте старше 55 - в 11 случаях (45,9% от числа больных этого возраста).
Уровни РЭ в цитозольной фракции опухолей женщин в возрасте до 55 лет колебались от 13,1 до 40,3 фмоль/мг белка со средним уровнем 23,4±2,1 фмоль/мг белка.
У больных в возрасте старше 55 лет значения РЭ в цитозольной фракции опухолей колебались от 12,5 до 48,9 фмоль/мг белка, а средний уровень РЭ составил 19,1 ±3,4 фмоль/мг. Уровни РЭ в цитозольной фракции опухолей достоверно не отличались у больных выше указанных возрастных групп. Таким образом, уровень РЭ в цито-зольных фракциях злокачественных опухолей СОПР у женщин не зависел от возраста больных.
В таблице представлены данные по опреде-
лению уровня РЭ в цитозольных фракциях опухолей больных с разным сроком длительности постменопаузы. В этой таблице для сравнения представлены также данные уровня РЭ в цито-зольных фракциях опухолей больных с сохраненной репродуктивной функцией. Как видно из данных таблицы, уровень РЭ в цитозольных фракциях опухолей больных снижался с увеличением длительности постменопаузы, но только у больных с длительностью постменопаузы более 10 лет уровень РЭ в цитозольных фракциях опухолей был достоверно ниже, чем у больных с сохраненной репродуктивной функцией (р<0,5).
Более наглядно тенденция изменения уровней РЭ в цитозольных фракциях опухолей представлена на рисунке.
В цитозольной фракции первичных злокачественных опухолей СОПР РЭ выявлены в 60,9% от всего количества опухолей. Уровень РЭ в цитозольной фракции опухолей СОПР в общей группе больных раком СОПР составил 25,8±2,8 фмоль/мг общего белка цитозольной фракции с колебаниями значений в широких пределах от 9,2±2,1 до 48,9±4,5 фмоль/мг белка.
РЭ были обнаружены в цитозольной фракции злокачественных опухолей СОПР у 54,1% больных в возрасте до 55 лет и у 45,9% больных в возрасте старше 55. Уровни РЭ в цитозольной фракции опухолей достоверно не отличались у больных указанных возрастных групп. Таким образом, уровень РЭ в цитозольных фракциях злокачественных опухолей СОПР у женщин не зависел от возраста больных. В то же время уровень РЭ в цитозольных фракциях опухолей больных снижался с увеличением длительности постменопаузы, но только у больных с длительностью постменопаузы более 10 лет уровень РЭ в цито-зольных фракциях опухолей был достоверно ниже, чем у больных с сохраненной репродуктивной функцией. Следовательно, можно предположить, что чувствительность опухолей СОПР к эстрогенам у больных тем ниже, чем дольше больные находятся в состоянии постменопаузы.
Таким образом, в цитозольных фракциях би-оптатов рака СОПР у женщин уровень РЭ не был связан с возрастом больных раком СОПР и формой роста опухоли, однако при экзофитной форме роста было больше РЭ+опухолей. При наступлении постменопаузы уровень РЭ, по-видимому, снижался по мере увеличения продолжительности постменопаузы, но только у больных раком СОПР с продолжительностью постменопаузы более 10 лет уровень РЭ в цитозольной фракции би-оптатов опухолей был достоверно ниже, чем у больных с сохраненной репродуктивной функцией.
ЛИТЕРАТУРА
1. Agnusdei D., Selective estrogen receptor modulations and post-
SUMMARY
Estrogen receptors at women with oral cavity
mucous membrane cancer
A.Aliyev
The aim of the investigation was study of malignant tumor of oral cavity mucous membrane sensitivity. Determined estrogen receptors level in tumor cytosol fraction at women, which didn't receive prior treatment.
Поступила 11.10.2006
Влияние аномальных вариантов альфа-1 антитрипсина на репродуктивность индивидов
М.З.Дадашов, Т.М.Гусейнов
Институт Физики НАН Азербайджана, г.Баку
пользовали методику изоэлектрофокусирования в тонком слое полиакриламидного геля при рН 3,5-6,0 [9].
Уровень А1АТ определяли экспресс-методом определения ингибиторов трипсина в сыворотке крови человека [1].
Результаты обработаны общепринятыми статистическими методами.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. Для оценки влияния аномальных аллелей А1АТ на жизнеспособность носителей этой патологии, мы сравнивали частоты этих аллелей в различных возрастных группах: фенотипов МZ и МS в возрастных группах от 1 до 16, от 16 до 35 и от 35 до 70 лет. Общая частота аномальных фенотипов в первой группе составило 0,0147, во второй группе 0,0129, а в третьей группе 0,0108 соответственно. Результаты позволяют предположить, что естественный отбор элиминирует носителей аномальных аллелей. По нашим расчетам, коэффициент отбора по аномальным аллелям составляет 0,1. Другими словами, дифференцированная смертность должна приводить к возрастной стратификации популяции, если относительная частота "защитного" гена увеличивается с возрастом (2). Несмотря на это, частота Z и S аллелей проявляется на полиморфном уровне. В этом отношении имеются в основном две гипотезы. Согласно первой, увеличение протеиназной активности приводит к усилению миграционной способности сперматозоидов, возможно за счет уменьшения вязкости цервикального слизистого содержимого (7). Некоторые авторы считают, что низкий уровень белка может сочетаться с повышенной плодовитостью (фертиль-
menopausal women's health: the promise for the next millennium. -Aging, 1998, v.10, N.4, p.269-272; 2. Le Bail J.C., Alien K., Nicolas J.C. C19 steroids estrogenic activity in human breast cancer cell lines: importance of dehydroepiandrosterone sulfate at physiological plasma concentration. - Steroids, 1998, v.63, N.12, p.678-683; 3. Takata H., Tomizawa K., Matsushita M., Matsui H. 2-Metoxyestradiol enhances p53 protein transduction therapy associated inhibition of proliferation of oral cancer cells through the suppression of Nfkappa B activity. -Acta Med. Okayama, 2004, v.58, N.4, p.181-187; 4. Ukena K., Tsutsui K. Progesterone biosynthesis in the rat cerebellum. - Zool. Sci., 1997, v.14, p.11-12.
Альфа-1 антитрипсин (А1АТ) относится к классу серпинов и обладает широким спектром антипротеазной активности в сыворотке крови человека. Повышенный интерес к системе А1АТ стимулировался обнаружением его наследственной недостаточности и установлением ассоциации часто встречающихся вариантов S и Z с эмфиземой легких и ювенильным циррозом печени, сопровождающий летальным исходом. В меньшей степени недостаточность А1АТ ассоциируется с рядом других заболеваний: ревматоидным артритом, болезнью Вебера-Христиа-на, панкреатитом, псориазом, хроническом простатитом и др. [4, 6, 10, 11]. Кроме того, дефицит А1АТ играет определенную роль в патогенезе простудных заболеваний в целом [12, 13]. Несмотря на это, частота Z и S аллелей достаточно высока и проявляется на полиморфном уровне в большинстве популяций мира, что указывает на возможное их преимущество [4, 5, 7, 15]. В чем именно заключается жизненное преимущество индивидуумов с дефицитом А1АТ, остается неясным.
Целью настоящей работы явилось выяснение возможного механизма, поддерживающей частоты редких аллелей на полиморфном уровне.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Материалы, представленные в данной работе, собран во время экспедиции в Кубинский район Республики в 1995-97 гг, организованно лабораторией "Наследственные нарушения обмена" отдела Генетики Человека, Института Молекулярной Биологии и Биотехнологии НАН Азербайджана.
Аля фенотипирования вариантов А1АТ ис-
