CC BY
7
232
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
сополимеров хитозана, изучение их физико-химических свойств и культивирование на/в них различных типов клеток в модели in vitro. Сополимеры Chit (ММ 60 кДа, СД 0.9) с олиго(1_,1_- и /LD-лактидами с ММ 5 кДа (Chit-L,L и Chit-L,D, соответственно) получали методом твердофазного синтеза. Показано, что структура матриксов представляла собой систему взаимосвязанных макропор со средним размером пор в диапазоне 50-250мкм (конфокальная лазерная микроскопия). Отсутствие цитотоксичности подтвердили путем культивирования клеток мышиных фи-бробластов L929 в экстрактах, полученных после инкубации гидрогелей в среде DMEM (10% FBS) — МТТ-тест. Культивирование клеток острого моноцитарного лейкоза человека (THP-1) в гидрогелях не приводило к их активации (ИФА на TNF-a и IL-6). Показано, что «химия и топография поверхности» гидрогелей обеспечивала адгезию клеток L929 и МСК (конфокальная микроскопия), рост и пролиферацию в течение 7-14 дней (МТТ-тест). Для изучения диф-ференцировки МСК использовали 2D пленки. Определяли активность щелочной фосфатазы, а также уровни экспрессии генов-маркёров Runx2, ALPL, SPP1 (пЦр в режиме реального времени). Окрашивание везикул, содержащих три-глицериды, и активность ADIPOQ, PPAR/(n^) применяли для доказательства адипогенеза. Показано, что все сопо-лимерные плёнки поддерживали пролиферацию и диффе-ренцировку МСК, при этом Chit-L,D усиливали их остеоген-ный, а Chit-L,L — адипогенный потенциал. Таким образом, полученные матриксы являются перспективными биоматериалами для регенеративной медицины. Это исследование частично финансировано Российским научным фондом (номер гранта 22-13-00261).
РЕКОНСТРУКЦИЯ СТРУКТУРЫ ФИБРОТИЧЕСКОГО ФОКУСА КАК МОДЕЛИ ДЛЯ ОЦЕНКИ ПРОГРЕССИРОВАНИЯ ФИБРОЗА IN VITRO
А.Е. Толстолужинская2, Н.А. Басалова1, E.C. Новоселецкая1, М.Н. Карагяур1 2, Р.Ю. Еремичев1, А.Ю. Ефименко1, 2
1 Институт регенеративной медицины, Медицинский научно-образовательный центр, МГУ
им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 Факультет фундаментальной медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: фиброз, фибротический фокус, сфероид, внеклеточный матрикс, децеллюляризация, миофибробласты.
Фибротический фокус является основной морфо-функциональной единицей при развитии фиброза различных тканей, в том числе фиброза лёгких. Такой фокус состоит из ядра неправильно уложенных специфических белков внеклеточного матрикса (ВКМ), синтезируемых миофибробластами и их предшественниками, расположенными на периферии ядра. Поскольку фибротический фокус является одним из ключевых объектов для изучения механизмов регуляции и прогрессирования фиброза, необходима разработка релевантной модели данной морфофункциональной структуры. Поэтому основная цель данной работы заключалась в реконструкции фи-бротического фокуса in vitro.
Для получения ядра фибротического фокуса собирали сфероиды, образованные миофибробластами, на различных культуральных средах. Полученные сфероиды подвергали децеллюляризации (Новоселецкая, 2020).
Структуру сфероидов и децеллюляризованных сфероидов (децелл-сфероид) оценивали с помощью конфокальной микроскопии и дот-блоттинга. Децелл-сфероиды рецеллюляризировали миофибробластами и на полученной модели «фибротического фокуса in vitro» оценивали их функциональную активность.
Было показано, что культуральная среда, содержащая эмбриональную бычью сыворотку, аскорбиновую кислоту и трансформирующий фактор роста бета (TGFb) способствует сборке сфероидов и отложению специфических компонентов фибротического ВКМ, включая коллаген I типа и EDA-фибронектин. Децелл-сфероиды нетоксичны и могут быть рецеллюляризованы с помощью фибробла-стов. Фибробласты в составе децелл-сфероидов могут дифференцироваться в миофибробласты под влиянием TGFb. Миофибробласты были способны дедифференциро-ваться в фибробласты и разрушать ВКМ децелл-сфероида после обработки внеклеточными везикулами мезенхимных стромальных клеток (МСК), обладающими установленными антифибротическими свойствами (Басалова, 2020).
Таким образом, нами разработана модель, воспроизводящая клеточный состав и микроокружение, характерные для фибротического фокуса. Мы показали, что миофибробласты в составе фибротического фокуса под воздействием внеклеточных везикул способны разрушать ядро фокуса, что может быть одним из возможных механизмов антифибротического действия МСК. Данная система может быть использована в качестве модельного 3D объекта для изучения in vitro динамики формирования и деградации фибротического фокуса (грант РФФИ № 20-315-90120 и 21-315-70002).
Литература:
1. Novoseletskaya E., Grigorieva O., Nimiritsky P et al. Front. Cell
Dev. Biol. 2020. V. 8. № 9. P. 1-25.
D-АСПАРАГИН УЛУЧШАЕТ ПРИЖИВЛЕНИЕ
БИОПОЛИМЕРНОГО СКАФФОЛДА КОЖИ
ПОСЛЕ РАННЕЙ НЕКРЭКТОМИИ
А.И. Трофименко, А.Х. Каде
Кубанский государственный медицинский
университет, Краснодар, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: желатин, альгинат натрия, скаффолд,
кожа.
Разработка биодеградируемых скаффолдов является перспективным подходом к решению проблемы дефицита донорского материала у пациентов с обширными ожогами кожи.
Цель — изучить влияние D-аспарагина на приживление биополимерного скаффолда для замещения дефектов кожи после некрэктомии ожоговых ран в эксперименте у крыс.
В исследовании на 20 крысах-самцах, после моделирования ожога кожи III ст. [1], проводили раннюю некрэктомию с одномоментной имплантацией скаффолда на основе альгината натрия, желатина тип А и винилтриэтоксисилана [2], в группе 1 без и в группе 2 с D-аспарагином.
Окраску микропрепаратов кожи (30-е сутки) выполняли по протоколу для гематоксилин-эозина, а также по Маллори. Для фрактального анализа фибриллярной структуры внеклеточного матрикса применяли плагин FracLac 2.5 (NIH, США) для «Image J 1.51j8». При
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
