РАЗРАБОТКА РЕПОРТЕРНОЙ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ИНСУЛИНОВОЙ СИГНАЛИЗАЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

240

МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

динамического светорассеяния и ЯМР-спектрометрии. Оценку взаимодействия конъюгатов с микобактериями и опухолевыми клетками в условиях in vitro выполняли с помощью методов конфокальной и электронной микроскопии.

Гидродинамический размер полученных мишенных конъюгатов составлял от 114 ± 1,7 до 130 ± 3 нм, концентрация железа — 2,63-3,01 ± 0,09 мг/мл. Наличие отрицательного заряда способствовало сохранению коллоидной стабильности растворов. Было показано специфическое взаимодействие коньюгатов с соответствующими антигенами на поверхности микобактерий и опухолевых клеток. Таким образом, полученная панель мишенных коньюгатов может быть рекомендована для использования в прижизненной диагностике Тб и опухолей головного мозга. Исследование выполнено при поддержке гранта РНФ № 22-15-00240.

Литература:

1. Neuberger, T. J. Magn. Magn. Mater. 2005. V 293. P. 483.

РАЗРАБОТКА РЕПОРТЕРНОЙ КЛЕТОЧНОЙ

ЛИНИИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ИНСУЛИНОВОЙ

СИГНАЛИЗАЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

А.П. Федоровский1, М.Н. Карагяур2,

К.Ю. Кулебякин1 2

1 Кафедра биохимии и молекулярной медицины, Факультет фундаментальной медицины ФГБОУ МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

2 Институт Регенеративной Медицины, Медицинский научно-образовательный центр МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

e-mail: [email protected]

Ключевые слова: инсулиновая сигнализация, мезенхим-

ные стромальные клетки.

Согласно данным ВОЗ за последние 40 лет заболеваемость сахарным диабетом (СД) возросла в 4 раза. В 2019 году СД стал девятой причиной смерти в мире, в этом году из-за данного заболевания умерло приблизительно 1 ,5 миллиона человек. СД является одной из самых распространённых причин почечной недостаточности, инсульта, атеросклероза, артериальной гипертонии, ишемической болезни сердца, слепоты. Инсулинорезистентность (ИР), являющаяся риск-фактором развития СД 2 типа, также способствует канцерогенезу, ожирению, различным сердечно-сосудистым патологиям. На данный момент механизмы возникновения ИР полностью не выяснены. Учитывая фундаментальное значение ИР в этиологии многих заболеваний, задача раскрытия механизмов возникновения ИР имеет важное значение для медицины.

Целью исследования является создание модели для изучения инсулиновой чувствительности клеток в реальном времени.

Тирозинкиназа Брутона (BTK) — нерецепторная тирозинкиназа, принимающая участие в созревании и функционировании B-лимфоцитов. В состав BTK входит домен плекстриновой гомологии (PH-домен), имеющий сродство к фосфатидилинозитол (3,4,5)-трис-фосфату (PIP3). PIP3, продуцируемый PI3K, является важным интермедиатом инсулинового сигнального каскада. BTK не влияет на чувствительность клеток к инсулину и на дифференцировочный потенциал мезен-химных стромальных клеток (МСК). Это обстоятельство

позволяет использовать BTK в качестве сенсора инсулиновой сигнализации для МСК.

С помощью генно-инженерных методов мы создали плазмиду, содержащую ген BTK-GFP. Правильность нуклеотидной последовательности плазмиды была подтверждена секвенированием. Затем была проведена трансдукция иммортализованных МСК (hTERT МСК) с помощью лентивирусных частиц, содержащих целевую плазмиду. В «состоянии покоя» наблюдается равномерное свечение цитоплазмы клетки. При развитии ин-сулинового сигнального каскада BTK-GFP связывается с образующимся PIP3, заякориваясь в примембранном пространстве. Вследствие этого после стимуляции клеток инсулином флуоресценция в реальном времени наблюдается преимущественно в области, прилежащей к клеточной мембране. Видимые различия во флуоресцентной картине между «состоянием покоя» и состоянием стимуляции инсулином позволяют говорить о том, что BTK-GFP является перспективным сенсором инсулиновой чувствительности. Подобная модель является незаменимым инструментом для изучения механизмов развития ИР и поисков способов её коррекции. Работа выполнена при поддержке РФФИ (Грант № 20-01500508, Клеточные механизмы регуляции гормональной чувствительности и дифференцировки стволовых клеток, роль регуляторных субпопуляций).

МИКРОФЛЮИДНОЕ УСТРОЙСТВО

ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ВОСПАЛЕНИЯ

И РЕМОДЕЛИРОВАНИЯ ЭНДОТЕЛИЯ IN VITRO

А.Ю. Федотов1, О.В. Баранов1, В.С. Комлев1,

С.А. Мирахмедова2, И.А. Золотухин2

1 ФГБУН Институт металлургии и материаловедения им. АА. Байкова РАН, Москва, Россия

2 ФГАОУ ВО Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова МЗ РФ, Москва, Россия

e-mail: [email protected]

Ключевые слова: микрофлюидные устройства, эндотелий,

регенерация, веноспецифическое воспаление.

Одним из заболеваний сосудистой системы, связанным со значительной нагрузкой на систему здравоохранения, является варикозная болезнь нижних конечностей. Ее распространенность очень высока, среди взрослого населения в Российской Федерации она достигает 30%. При отсутствии своевременной помощи или недостаточной медицинской активности населения варикозная болезнь приводит к развитию тяжелых инвалидизирую-щих осложнений, включая трофические язвы и тромбофлебит. В основе развития варикозной трансформации подкожных вен лежит ремоделирование венозной стенки в результате так называемого веноспецифического воспаления. Под последним понимают комплекс молекуляр-но-клеточных взаимодействий, приводящих к структурной перестройке гладкомышечных клеток и внеклеточного матрикса. В патологическом процессе активное участие принимает эндотелий венозных сосудов, продуцирующий целый ряд субстанций, обеспечивающих рекрутинг лейкоцитов в венозную стенку. Изучение веноспеци-фического воспаления в настоящее время затруднено, поскольку требует проведения экспериментальных исследований на животных или клинических исследований с участием пациентов, что сложно в административном, этическом и финансово-экономическом аспектах. Одним

Гены & Клетки XVII, №3, 2022