CC BY
48
эндометрии отмечается уменьшение толщины функционального слоя и количества желез в нем.
Выводы. Состояние репродуктивной системы коров у РИД(+) коров в неблагополучных по лейкозу хозяйств оказалось со значительными патологическими процессами (эндометритом, субинволюцией матки).
СОСТОЯНИЕ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ КОРОВ В НЕБЛАГОПОЛУЧНЫХ
ПО ЛЕЙКОЗУ ХОЗЯЙСТВАХ
Метлякова А.А. Резюме
Лейкоз крупного рогатого скота представляет потенциальную опасность для генофонда племенного молочного скота. При ректальном исследовании РИД (+) коров изменения в матке и яичниках отмечены чаще, чем у РИД (-). При гистологическом исследовании яичников РИД (+) коров специфических изменений не отмечалось. Гистологические изменения в эндометрии коррелируют с изменениями в яичниках.
COWS REPRODUCTIVE SYSTEM STATUS IN LEUKEMIA UNFAVOURABLE
FARMS
Metlyakova AA.
Summary
Leukemia cattle poses a potential threat to the gene pool of breeding dairy cattle. At rectal examination RID (+) cows changes in the uterus and ovaries more marked than that of RID (-). Histological examination of the ovaries RID (+) cows specific changes were noted. The histological changes in the endometrium correlate with changes in the ovaries.
УДК 619:615.371
РАЗРАБОТКА ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИТЕЛЬНОГО БОТУЛИНИЧЕСКОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ
Мустафин Т.Р. - м.н.с.; Иванов А.А. - д.б.н.; Мустафина Э. Н. - к.в.н., с.н.с.; Садыков
Н.С. - зав. лаб., д.в.н., профессор Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности
г.Казань, e-mail: [email protected]
Ключевые слова: антитело, гипериммунизация, ботулизм, гемагглютинация.
Keywords: antibody, hyperimmunization, Cl. botulinum, hemagglutination.
Возбудители ботулизма — Clostridium botulinum — классифицируются как один вид, однако это неоднородная группа бактерий. C. botulinum представляют собой анаэробные подвижные грамотрицательные (в молодых культурах) палочки; образуют при неблагоприятных условиях овальные субтерминальные споры; продуцируют нейротоксины (ботулотоксины). Однако токсины, проявляя сходную фармакологическую активность, имеют различные антигенные свойства, т. е. антитела к одному токсину не нейтрализуют другие. Известно 8 серологических вариантов ботулотоксина и, соответственно, 8 серологических типов C. botulinum — А, В, С1, С2 (не имеет свойств нейротоксина), D, Е, F и G, которые отличаются между собой по антигенным свойствам вырабатываемых ими токсинов и некоторыми другими признаками. Токсин ботулизма представляет собой протеин, состоящий как бы из двух фрагментов, связанных дисульфидными мостиками, что обеспечивает необычную устойчивость токсин во внешней среде и длительное сохранение активности. Токсин ботулизма прочно связан с белком микроба и попадает в организм животного только при аутолизе клетки. Токсин выделяется в среду хозяина по мере синтезирования, не задерживаясь в клетке при активном росте микроба [3].
Возбудитель ботулизма относится к политропным представителям микробов, которые в ходе инфекционного процесса занимают ряд последовательных локализаций в организме, тем самым обнаруживая свою адаптированность к ряду различных органов и тканей. Однако это есть единая форма болезни, в которой разные локализации возбудителя соответствуют разным стадиям болезни (кишечник, печень, почки, легкие, нервная система). К ботулизму чувствительны люди, многие виды животных и птицы. Из лабораторных животных чувствительны белые мыши и морские свинки.
Основой лабораторной диагностики ботулинического токсина или возбудителя ботулизма является биопроба на белых мышах. В качестве экспресс методов лабораторной диагностики используют определение фагоцитарного показателя и постановку РНГА с сенсибилизированными антитоксическими сыворотками. Однако, при вскрытии животных, павших от «колбасного яда», точно поставить диагноз не всегда удается, ведь концентрация токсина в крови ничтожна. Поэтому вопрос по быстрой и точной диагностике ботулизма, в некоторых случаях, стоит весьма остро. Например, в условиях чрезвычайной ситуации, военного положения, при угрозе применения биологического оружия, а также в случаях отравления продуктами питания людей.
На сегодняшний день нет средств и методов индикации возбудителя
ботулизма, обнаружения ботулинического токсина ускоренным методом.
Цель работы настоящих исследований является, разработка современных тест-систем для выявления патогенного анаэроба Clostridium botulinum и индикации его токсина в продуктах животноводства, а также в объектах внешней среды. Все вышесказанное и обуславливает безусловную актуальность настоящей работы и необходимость создания экспресс анализа.
Материалы и методы. Проведена работа по получению поливалентной гипериммунной ботулинической сыворотки на кроликах, по следующей схеме. Для получения гипериммунной сыворотки использовали антигены (из 4х культур) приготовленные тремя методами: 1) живая культуральная жидкость с содержанием возбудителя и нейротоксического комплекса; 2) гамма - облученный; 3) инактивированный формалином. Из культур готовили образцы, которые состояли из смеси четырех (А, В, С, D) типов в соотношении 1:1:1:1, для гипериммунизации. В опыт брали 3 группы кроликов - иммунизацию проводили тремя видами антигенов, различными дозами и интервалом между введениями. Интервал между введениями 4 дня, за день до следующего введения у кроликов брали кровь, для определения титра ботулиновых антител в РНГА, РА.
Предварительно, после последнего введения взвеси, пробы крови исследовали на 3й день, а тотальное обескровливание (из сердца) провели на 7 день после последнего введения антигена. Полученная нами поливалентная сыворотка, состоящая из смеси (А,В,С,Д) типов, наработанная по схеме №1 (гипериммунизация кроликов внутривенно, внутривенно, внутривенно) с конечным титром АТ в сыворотке крови 1:64 в РНГА [5].
Исходя из литературных данных видно, что титры антител после иммунизации как моно- так и поливалентными антигенами одинаковы. Следовательно, при иммунизации поливалентными антигенами явление «конкуренции антигенов» отсутствовало [2].
Результаты исследований. Из поливалентной сыворотки получали глобулины, путем осаждения сульфатом аммония, на его основе создали антительный эритроцитарный диагностикум для обнаружения возбудителя Cl.botulinum и его токсина в объектах внешней среды. Антительный эритроцитарный диагностикум приготовлен на основе формалинизированных эритроцитов барана с глобулином, полученных к возбудителю ботулизма по общепринятой методике в нашей модификации.
Проведенные исследования в РНГА с использованием полиспецифического эритроцитарного антительного диагностикума, в сравнении с моновалентными ботулиническими сыворотками показало, что моносыворотки положительно реагировали в титрах 1:16 - 1:32, в то время как разработанный нами диагностикум давал положительный
результат со всеми типами (А, В, C, D, Е, F, G) в титрах от 1:8 до 1:32, при отрицательных результатах в контроле.
Заключение. На сегодняшний день нет ускоренных методов индикации возбудителя ботулизма в объектах внешней среды и в патологическом материале. Исследования продуктов питания животного происхождения на безопасность проводятся многоступенчатыми способами - посевы на питательные среды (среда Китт-Тароцци, многослойный агар и т.п.), выделение клостридий методом каталитической оксидации водорода в воде, выращивание в индифферентном газе и т.д. Окончательный результат получают биологической пробой на мышах.
По данным видно, что наиболее перспективным при получении поливалентных сывороток является использование культуральной жидкости с содержанием живого возбудителя и нейротоксического комплекса, по сравнению с инактивированными формами возбудителя. При этом титр антител в сыворотке крови был на два разведения выше.
Разработана методика получения полиспецифического эритроцитарного антительного диагностикума для экспресс индикации возбудителя ботулизма и ботулинового токсина в объектах внешней среды и патологическом материале.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и иммунология. - Омск: Изд. ОмГАУ, 1996. - С. 314 - 319.
2. Матвеев К.И. Ботулизм. - М.: Медицина, 1959. - С. 5-41, 350-361.
3. Никифоров В.Н., Никифоров В.В. Кн.: Ботулизм. - Л.: Медицина, 1985. -С 104-116. 4. Иванова М. А. Ботулизм : учеб.-метод. пособие / М. А. Иванова. - Минск : БГМУ, 2009. - 24 с. ISBN 978-985-462-801-1. 5. Иванов А. В., Мустафин Т.Р., Мустафина Э. Н. Ветеринарный врач № 3, 2013 С.8-10.
РАЗРАБОТКА ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИТЕЛЬНОГО
БОТУЛИНИЧЕСКОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ
гемагглютинацИи
Мустафин Т.Р., Иванов А.А., Мустафина Э.Н., Садыков Н.С.
Резюме
Разработана методика гипериммунизации кроликов с использованием антигенов из 4х типов, для получения полисывороток и дальнейшего использования его в получении полиспецифического эритроцитарного антительного ботулинического диагностикума. Для индикации возбудителя ботулизма и ботулинового токсина в реакции непрямой гемагглютинации, в объектах внешней среды и патологическом материале.
DEVELOPMENT OF POLYSPECIFIC ERYTHROCYTЕ BOTULINIC ANTIBODY DIANOSTIC KIT FOR INDIRECT HEMAGLUTINATION TEST
Mustafin T.R., Ivanov А. А., Mustafina E.N., Sadykov N.S.
Summary
The article privides a novel methodology of rabbit hyperimmunization of rabbits with use an antigene from 4th types and developed for receiving polyserums and its further use in receiving a polyspecific antibody botulinic diagnostic kit. A novel method was developed for indication of the causative agent of botulism and botulinic toxin in indirect hemagglutination test.
УДК 619:615.371
СОЗДАНИЕ ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКОГО БОТУЛИНИЧЕСКОГО
КОНЬЮГАТА ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
Мустафин Т.Р. - м.н.с.; Мустафина Э. Н. - к.в.н.; Чернов А.Н. - д.б.н., с.н.с.;
Садыков Н.С. - д.в.н., профессор Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности,
г.Казань, тел.: (843) 239-53-20
Ключевые слова: гипериммунизация, ботулизм, коньюгат.
Keywords: hyperimmunization, Cl. botulinum, conjugate.
Ботулизм - остро протекающая кормовая токсикоинфекция, вызываемая токсином анаэробного спорообразующего микроба Cl. botulinum. Эпидемиология ботулизма исключительно специфична и не укладывается в классические представления об эпидемиологии инфекционных болезней. По данным Л. В. Громашевского [1] источником заболевания может служить только больной человек или больное животное. С другой стороны широкое распространение возбудителя ботулизма в природе послужило причиной мнения, что возбудитель убиквитарен и может размножаться и образовывать токсин в почве.
В настоящее время известно 7 типов возбудителя ботулизма (A, B, C, D, E, F, G) соответственно вырабатывающих 7 токсинов, в свою очередь палочка типа С вырабатывает два различных токсина (Л. Месборяну, 1963; Т. И. Булатова и др., 1965), что позволяет говорить о существовании не 7, а 8 ботулинических токсинов. Все они отличаются между собой по антигенным свойствам вырабатываемых ими токсинов и некоторыми другими признаками. Каждый серовар характеризуется специфической иммуногенностью. Имеется О-антиген, который является общим для всех сероваров.
