CC BY
119
Химия растительного сырья. 2011. №4. С. 265-268.
УДК 615.322:633.884]:543.422.3.062:547.586.2
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В ЖЕЛЧЕГОННОМ СБОРЕ №2
© Я.И. Абрамова, Г.И. Калинкина , B.C. Чучалин
Сибирский государственный медицинский университет, Московский тракт,
2/7, Томск, 634050 (Россия), e-mail: [email protected]
Для оценки качества официнального желчегонного сбора №2 предложена методика количественного определения гидроксикоричных кислот методом прямой спектрофотометрии по хлорогеновой кислоте.
Ключевые слова: желчегонный сбор, спектрофотометрия, гидроксикоричные кислоты, хлорогеновая кислота.
Введение
Согласно ВФС 42-639-77 [1] стандартизация желчегонного сбора №2, в состав которого входят: цветки бессмертника песчаного, листья мяты перечной, трава тысячелистника обыкновенного, плоды кориандра посевного, проводится только по товароведческим показателям, что не соответствует современным требованиям, предъявляемым к нормативной документации на лекарственное растительное сырье и фитосборы. ФС и ФСП, согласно ОСТ 91500.05.001-00, должны содержать методики качественного обнаружения и количественного определения действующих или основных биологически активных веществ [2].
По данным литературы компоненты желчегонного сбора №2 (далее ЖС-2) содержат биологически активные соединения различных классов, основными из которых являются эфирные масла и фенольные соединения (флавоноиды, фенилпропаноиды, дубильные вещества и другие), оказывающие существенное влияние на фармакологические свойства сбора [3, 4]. Ранее для стандартизации ЖС-2 Л.П. Смирновой с соавторами была предложена методика количественного определения суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии с использованием ГСО рутина [5]. Вместе с тем авторами отмечены трудности в использовании метода добавок (ГСО рутина) для валидации предложенной методики. Наши результаты определения флавоноидов в исследуемом сборе по данной методике также подтвердили эту проблему, что ограничивает возможности ее использования. В связи с этим возникла необходимость разработки более объективной методики для оценки качества ЖС-2, что и явилось целью настоящего исследования.
Экспериментальная часть
Объектом исследования служили серийные образцы: «Желчегонный сбор №2» производства фирм ЗАО «Здоровье», Москва (серия 010109, 020309, 030809), ЗАО «Ст-Медифарм», Москва (серия 021208) и сбора «Фитогепатол №2» производства ОАО «Красногорсклексредства» (серия 20209).
Спектрофотометрическое исследование проводили на приборе СФ-2000 в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм в диапазоне 200-500 нм.
Для выбора группы БАВ, по которой можно объективно оценить качество сбора, был проведен спектральный анализ извлечений на 40% этиловом спирте (1 : 50) из ЖС-2 и его отдельных ингредиентов. Полученные данные (рис. 1) свидетельствуют о том, что спектры поглощения исследуемых извлечений не идентичны, но имеют схожий характер. Наиболее близкие максимумы поглощения зарегистрированы в области длин волн 290 нм и 327-330 нм, характерных для фенольных соединений: гидроксикоричных кислот и флавоноидов [6]. При этом область поглощения 325-330 нм наиболее часто используется для прямого спектрофотометрического определения гидроксикоричных кислот в растительных экстрактах как
* Автор, с которым следует вести переписку.
наиболее значимая для данной группы веществ [7-9]. Учитывая выше изложенное, целесообразно оценивать качество ЖС-2 по содержанию гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту, которая содержится в большинстве компонентов сбора [10, 11].
При разработке методики нами были определены оптимальные условия для извлечения гидроксикоричных кислот из ЖС-2. Оценка степени влияния дисперсности сырья на экстракцию показала нежелательность измельчения плодов кориандра, так как это приводило к извлечению из них жирных масел и появлению опалесценции, что исключало использование спектрофотометрии. Исходя из этого для количественного определения предлагаем использовать сбор с исходным измельчением компонентов (2-3 мм).
При определении основных параметров экстракции установлено (табл. 1), что максимальное извлечение гидроксикоричных кислот достигается при использовании в качестве экстрагента 60% спирта этилового при соотношении сырье - экстрагент 1 : 50. В условиях кипения динамическое равновесие в системе наступает через 30 мин.
Таким образом, по результатам проведенных исследований нами предложена методика определения содержания гидроксикоричных кислот в ЖС-2 методом прямой спектрофотометрии, основанном на измерении спектров поглощения водно-спиртовых извлечений ЖС-2 и проведении расчета суммарного содержания гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту (аналитическая длина волны 327+3 нм).
Методика количественного определения суммы гидроксикоричных кислот в желчегонном сборе №2. Около 2,0 г (точная навеска) сбора, выбранного методом квартования из 10 г, помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл 60% этилового спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Горячее извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию указанным выше способом повторяют еще раз. Извлечение фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу и после охлаждения доводят объем до метки 60% этанолом и перемешивают (раствор А).
Рис. 1. Спектры поглощения водно-спиртовых извлечений из цветков бессмертника песчаного (1), травы тысячелистника (2), мяты перечной (3) и ЖС-2 (4)
Таблица 1. Определение оптимальных условий извлечения гидроксикоричных кислот из желчегонного сбора №2
Условия экстракции Содержание гидроксикоричных кислот, % в пересчете на хлорогеновую кислоту и а.с.с.
20 2,00+0,09
Концентрация этанола 40 2,47+0,07
в экстрагенте, % 60 2,95+0,09
80 2,61+0,07
15 1,96+0,09
Время 30 2,84+0,10
экстрагирования, мин 45 2,68+0,04
60 2,49+0,06
1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 95% этиловым спиртом до метки, перемешивают (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре СФ-2000 при длине волны 327 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 95% раствор спирта этилового.
Содержание суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту и абсолютно сухую массу сбора в процентах (X) вычисляют по формуле:
х _ Б х V 1 х V з х 100
т х Е 1<% х V 2 х (100 - Ш ) ’
где Б - оптическая плотность испытуемого раствора; е\%^ = 531 - удельный показатель поглощения РСО хлорогеновой кислоты при 327 нм; т - масса сбора, г; VI - объем раствора А, мл; У2 - аликвота раствора
А, мл; V - объем раствора Б, мл; W - потеря в массе при высушивании сбора, %.
Для проверки воспроизводимости и ошибки методики проведено пять независимых определений для различных серий сбора. Результаты статистической обработки свидетельствуют о том, что ошибка методики с доверительной вероятностью 95% не превышает 5% (табл. 2).
С целью исключения систематической ошибки методики проведены опыты с добавками хлорогеновой кислоты к навеске сбора. Установлено, что относительная ошибка не превышает ±5%, т.е. находится в пределах случайной ошибки разработанной методики и отсутствует систематическая ошибка (табл. 3).
Таблица 2. Метрологическая характеристика методики количественного определения гидроксикоричных кислот в желчегонном сборе №2
Ї X Б Б(КВ) Р (%) №9 Ах Е
4 2,29 0,08734 0,00763 95 2,78 ±0,11 ±4,80
Таблица 3. Результаты количественного определения гидроксикоричных кислот в желчегонном сборе №2 с добавками хлорогеновой кислоты (содержание суммы гидроксикоричных кислот в исследуемом образце - 0,0446 г)
Добавлено РСО хлорогеновой кислоты, г Ожидаемое содержание гидроксикоричных кислот, г Полученное содержание гидроксикоричных кислот, г Относительная ошибка %
0,0050 0,0496 0,0520 ±4,84
0,0050 0,0496 0,0500 ±0,81
0,0050 0,0496 0,0475 -4,23
0,0120 0,0566 0,0540 -4,59
0,0120 0,0566 0,0590 ±4,24
0,0120 0,0566 0,0550 -2,83
0,0210 0,0656 0,0630 -3,96
0,0210 0,0656 0,0680 ±3,66
0,0210 0,0656 0,0670 ±2,13
Заключение
Разработана методика количественного определения суммы гидроксикоричных кислот в офици-нальном желчегонном сборе №2 методом прямой спектрофотометрии по хлорогеновой кислоте. Установлено, что данная методика отличается удовлетворительными метрологическими характеристиками. Содержание суммы гидроксикоричных кислот в желчегонном сборе №2 составляет 2,18-2,40%.
Список литературы
1. Временная фармакопейная статья 42-639-77. Сбор желчегонный №2.
2. ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».
3. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; семейство Л81егасеае. Л., 1988. 280 с.
4. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; семейство Я^асеае - Elaeagnaceae. Л., 1988. 357 с.
5. Смирнова Л.П., Первых Л.Н. Количественное определение суммы флавоноидов в желчегонном сборе // Хи-мико-фармацевтическийжурнал. 1999. №3. С. 37-39.
6. Марахова А.И. Физико-химический анализ фенольных соединений лекарственного растительного сырья // Фармация. 2009. №3. С. 52-55.
7. Куркин В.А., Авдеева О.И., Авдеева Е.В., Мизина П.Г. Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот в надземной части Echinacea purpurea (L.) Moench. // Растительные ресурсы. 1999. Т. 34. №2. С. 81-85.
8. Сампиев А.М., Давитавян Н.А. Количественное определение флавоноидов, изофлавонодов и фенолкарбоно-вых кислот в траве стальника полевого // Химико-фармацевтический журнал. 2009. №7. С. 25-31.
9. Адиходжаева КБ. Хроматоспектрофотометрический метод определения суммы фенолкарбоновых кислот в препарате танацини соцветиях пижмы обыкновенной// Химико-фармацевтический журнал. 1979. №5. С. 113-115.
10. Бенетис Р., Радушене И., Якштас В., Янулис В., Пуоджюнене Г., Милашюс А. Количественное определение фенольных соединений в лекарственном сырье тысячелистника обыкновенного методом ВЭЖХ // Химикофармацевтический журнал. 2008. №3. С. 51-54.
11. Czinner Е., Hagymasi K., Blazovics A., Kery A., Szoke Е., Lemberkovics Е. In vitro antioxidant properties of Helichrysum arenarium (L.) Moench. // Journal of Ethnopharmacology. 2000. V. 73. Pp. 437-443.
Поступило в редакцию 19 января 2011 г.
После переработки 27 июля 2011 г.
