CC BY
1
Методы
© Коллектив авторов, 2024
Калинина Е.Н., Кормщикова Е.С., Коновалова Е.А., Вильданова Н.С., Йовдий А.В., Смольникова М.В.
Разработка методики количественного определения анти^-антител в реакции непрямой гемагглютинации в геле
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови» Федерального медико-биологического агентства, 610027, г. Киров, Российская Федерация
Резюме
Введение. Определение содержания анти-Б-антител практикуется как в перинатальной медицине при ведении беременности женщин с отрицательным резус-фактором, так и в Фарминдустрии для оценки специфической активности иммуноглобулина человека антирезус Rh0(D) и донорской плазмы для его производства. Существующие различия в интерпретации данных свидетельствуют об актуальности их унификации. Необходима стандартизованная аналитическая методика. Наиболее доступна в исполнении реакция непрямой гемагглютинации в геле.
Цель - разработать методику количественного определения анти-Б-антител в реакции непрямой гемагглютинации в геле.
Материал и методы. Тестировали препараты иммуноглобулина человека и плазму крови доноров. Реакцию проводили в гелевых картах ID Coombs Anti-IgG, количественную оценку - по отношению к стандартному образцу.
Результаты. Предложен порядок применения стандартного образца и расчета концентрации анти-Б-антител. Определены критерии приемлемости результатов. Подтверждены достоверность и воспроизводимость данных.
Заключение. Разработана стандартизованная методика количественного определения анти-Б-антител в реакции непрямой гемагглютинации в геле, позволяющая выражать результат в международных единицах.
Ключевые слова: анти-Б-антитела; количественное определение; реакция непрямой гемагглютинации; иммуноглобулин человека антирезус
Статья получена 17.07.2024. Принята в печать 21.08.2024. Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Калинина Е.Н., Кормщикова Е.С., Вильданова Н.С.; сбор и обработка материала - Калинина Е.Н., Коновалова Е.А., Йовдий А.В., Смольникова М.В.; написание текста -Калинина Е.Н.; редактирование - Кормщикова Е.С., Йовдий А.В.
Для цитирования: Калинина Е.Н., Кормщикова Е.С., Коновалова Е.А., Вильданова Н.С., Йовдий А.В., Смольникова М.В. Разработка методики количественного определения анти-Б-антител в реакции непрямой гемагглютинации в геле. Иммунология. 2024; 45 (5): 655-664. Б01: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-5-655-664
Для корреспонденции
Калинина Елена Николаевна -младший научный сотрудник лаборатории препаратов крови ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России, Киров, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-9754-5522
Kalinina E.N., Kormshchikova E.S., Konovalova E.A., Vildanova N.S., Yovdiy A.V., Smolnikova M.V.
Development of the methodology for quantitative determination of anti-D-antibodies by indirect hemagglutination reaction in gel
Kirov Research Institute of Hematology and Blood Transfusion, Federal Medical-Biological Agency, 610027, Kirov, Russian Federation
Abstract
Introduction. Determination of anti-D-antibodies content is practiced both in perinatal medicine during the pregnancy management for women with negative Rhesus-factor, and in pharmaceutical industry to assess of specific activity of human anti-D-immunoglobulin and donor plasma for its production. Existing differences in data interpretation indicate the relevance of their unification. A standardized analytical method is necessary. The indirect hemagglutination reaction in gel is the most accessible in implementation.
The aim was to develop a method for quantitative determination of anti-D-antibodies by indirect hemagglutination reaction in gel.
Material and methods. Human immunoglobulin preparations and donor blood plasma were tested. The reaction was carried out in ID Coombs Anti-IgG gel cards. Quantitative assessment was carried out in relation to the standard sample.
Results. The procedure for application of a standard sample and calculating of the concentration of anti-D-antibodies are proposed. The criteria for acceptance of the results are defined. The reliability and reproducibility of the results has been confirmed.
Conclusion. A standardized method for quantitative determination of anti-D-antibodies by indirect hemagglutination reaction in gel, which allows expressing the result in international units, has been developed.
Keywords: anti-D-antibodies; quantitative determination; indirect hemagglutination reaction; human anti-D immunoglobulin
Received 17.07.2024. Accepted 21.08.2024.
For correspondence
Elena N. Kalinina -Junior Researcher of the Blood Products Laboratory of KRIHBT, FMBA of Russia, Kirov, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-9754-5522
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interests. Authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. Idea and design of the study - Kalinina E.N., Kormshchikova E.S., Vildanova N.S.; collection and processing of material - Kalinina E.N., Konovalova E.A., Yovdiy A.V., Smolnikova M.V.; text writing -Kalinina E.N.; editing - Kormshchikova E.S., Yovdiy A.V.
For citation: Kalinina E.N., Kormshchikova E.S., Konovalova E.A., Vildanova N.S., Yovdiy A.V., Smolnikova M.V. Development of the methodology for quantitative determination of anti-D-antibodies by indirect hemagglutination reaction in gel. Immunologiya. 2024; 45 (5): 655-64. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-5-655-664 (in Russian)
Введение
Первостепенная задача перинатальной медицины -сохранение жизни и здоровья матери и ребенка. В перечне возможных осложнений беременности особое место занимают иммунологически обусловленные патологии. Среди них одним из наиболее тяжелых состояний считается резус-конфликт, который развивается вследствие несовместимости крови матери и плода по антигенам эритроцитов и может привести к гемолитической болезни новорожденного, перинатальной смертности и инвалидизации детей. Наибольшей имму-ногенностью среди известных антигенов эритроцитов человека обладает Б-антиген, причиной чего может являться наличие на эритроцитах большого количества соответствующих детерминант [1-4].
В перинатальной практике при ведении беременности у женщин с резус-отрицательной кровью ежемесячно определяют титр анти-Б-антител в сыворотке крови [1, 5, 6]. Для этого чаще всего используют непрямую пробу Кумбса - реакцию непрямой гемагглютина-ции в геле, основанную на способности анти-Б-анти-тел вызывать в гелевой среде видимую агглютинацию эритроцитов человека, несущих на своей поверхности Б-антиген. Этот метод нашел широкое применение
и в трансфузиологии при обследовании доноров крови и ее компонентов [7, 8]. Однако существует проблема вариабельности результатов тестирования, особенно при исследовании в разных лабораториях. Это связано со значительной дискретностью определения и недостаточной метрологической прослеживаемостью данных.
Для профилактики резус-иммунизации беременных женщин с отрицательным резус-фактором широко применяются препараты иммуноглобулина человека антирезус Я\(Б) [5, 6, 9-12]. Их получают фракционированием иммуноспецифической (антирезусной) донорской плазмы, содержащей анти-Б-антитела - иммуноглобулины класса в (^в), специфичные к Б-антигену эритроцитов человека. Наличие этого основного компонента обусловливает фармакологическое действие, а его содержание характеризует специфическую активность указанных лекарственных средств [5, 11, 13]. Препарат вводят на 28-34-й неделе беременности при отрицательной резус-принадлежности и отсутствии в сыворотке крови женщины анти-Б-антител. В зависимости от гинекологического и перинатального анамнеза доза иммуноглобулина человека антирезус КЬ0(Б) может варьировать от 250 до 3000 международных единиц (МЕ) [1, 5, 6]. Для эффективной иммунопрофилактики резус-конфликта при беременности важнейшее значе-
ние имеет точность расчета необходимой дозы препарата на основании данных о его специфической (анти-резусной) активности.
Государственной фармакопеей Российской Федерации предписана оценка специфической активности плазмы для фракционирования и иммуноглобулинов человека [14, 15]. Для определения содержания анти-D-антител в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rh0(D) рекомендованы такие методы, как реакция непрямой гемагглютинации, конкурентный иммуно-ферментный анализ и проточная цитофлуориметрия [16-19]. Минимально допустимый титр анти^-анти-тел в антирезусной плазме установлен приказом Минздрава России, он составляет 1 : 64 [20]. Специфическая активность импортных препаратов, таких как Immunoro Kedrion, Rhesogam N, Kam RH0, Hyper RH0 S/D, Rhe-sonativ®, а также единственного на сегодняшний день отечественного продукта, выпускаемого ГБУЗ «Ивановская областная станция переливания крови», нормируется в МЕ/мл или мкг/мл [16, 17]. В связи с использованием различных единиц измерения специфической (антирезусной) активности сырья и готовой продукции могут возникать определенные затруднения при оценке их качества.
Внедрение в практику работы перинатальных центров, учреждений службы крови и фармацевтических предприятий стандартизованной аналитической методики, позволяющей выражать результат в МЕ/мл, даст возможность унифицировать данные, обеспечить адекватность оценки содержания анти^-антител, а следовательно, повысить эффективность диагностики и иммунопрофилактики резус-конфликта при беременности. С точки зрения доступности в исполнении среди известных методов определения анти^-антител явное преимущество имеет широко распространенная в клинической лабораторной практике непрямая проба Кумбса. Метрологическая прослеживаемость данных и точность определения могут быть достигнуты посредством использования стандартного образца (СО), аттестованного в МЕ/мл, и проведения внутрилаборатор-ного контроля качества исследования, что установлено соответствующими нормативными актами Российской Федерации [21, 22].
Цель исследования - разработать методику количественного определения анти^-антител в реакции непрямой гемагглютинации в геле.
Материал и методы
Лабораторные исследования. Исследовали образцы лекарственных препаратов Иммуноглобулин человека антирезус Rh0(D), раствор для внутримышечного введения 300 мкг/доза (ГБУЗ «Ивановская ОСПК», Россия), ИммунороКедрион (Кедрион С.п.А., Италия), Резона-тив (Октафарма АБ, Швеция), Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий (Китайская фармацевтическая компания, Китай), а также экспериментальные образцы антирезусного иммуноглобулина, антирезус-
ную плазму, содержащую различное количество анти-D-антител, и плазму, заготовленную от регулярного донора крови и ее компонентов.
В работе использовали стандартные папаинизиро-ванные эритроциты с фенотипами OR^ (ccDEE), ÖRjRj (ССDее) и Orr (ccdee) из набора реагентов ID-DiaCellIP-IIP-IIIP (DiaMedGmbH, Швейцария), международный СО (МСО) анти-Э-иммуноглобулина человека (NIBSC code: 16/332, Великобритания), СО содержания анти-резус-Rh0(D)-антител, полученный в ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России по оригинальной валидированной технологии (ТУ 21.20.23-001-01966992-2022), натрия хлорид, раствор для инфузий 0,9 % (ООО «МОС-ФАРМ», Россия).
Реакцию непрямой гемагглютинации проводили в гелевых картах ID Coombs Anti-IgG (DiaMed GmbH, Швейцария), используя центрифугу ID-Centrifuge L того же производства, термостат-инкубатор IN75 (Memmert, Германия), микроцентрифугу MiniSpin (Eppendorf, Гер -мания) и другое общелабораторное оборудование. Регистрировали титр антител - максимальное разведение пробы, вызывающее гемагглютинацию любой интенсивности.
Статистическая обработка. Статистическую обработку полученных данных выполняли с помощью программ MS Excel (Microsoft Corporation, США) и STA-TISTICA ver. 10.0 (Statsoft Inc., США). Среднее значение представляли в виде медианы. Размах варьирования данных характеризовали диапазоном от минимума до максимума, погрешность определения - смещением результата тестирования СО относительно аттестованного значения.
Значимость различий между выборками оценивали с использованием непараметрических критериев Манна-Уитни и Краскела-Уоллиса при доверительной вероятности 95 %. Изучали метрологические характеристики методики: аналитическую область, специфичность выявления анти-О-антител, правильность результатов и их прецизионность в условиях сходимости и внутрилабораторной воспроизводимости [23].
Результаты
Определение порядка применения стандартного образца
В первую очередь установили аналитическую область (диапазон применения) методики, т. е. интервал концентраций, в пределах которого однозначно регистрируется титр специфических антител. Для этого тестировали МСО с аттестованным значением содержания анти-D-антител 297 МЕ/мл. Разведения образца подбирали таким образом, чтобы титр соответствовал 2-4-й микропробирке гелевой карты. Для уменьшения дискретности результата снизили кратность шага титрования с 2,0 до 1,5. В качестве разбавителя использовали 0,01 М фосфатный буферный раствор (pH 7,4), содержащий 2 г/л бычьего сывороточного альбумина (0,01 М ФБР-БСА). Заданное изначально условие было
Таблица 1. Результаты испытаний по оценке специфичности выявления анти-Б-антител
Образец Эритроциты Разведение образца (концентрация белка)/ наличие гемагглютинации (+/-)
Раствор антирезусного иммуноглобулина с концентрацией анти-Б-антител 22,5 МЕ/мл Щ+), 0Я2Я2 (ссБЕЕ) исходный (102 г/л) 1 : 2 (51 г/л) 1 : 4 (26 г/л) 1 : 8 (13 г/л) 1 : 16 (6 г/л)
+ + + + +
Щ-), 0гг (ccdee) исходный (102 г/л) 1 : 2 (51 г/л) 1 : 4 (26 г/л) 1 : 8 (13 г/л) 1 : 16 (6 г/л)
+ - - - -
Антирезусная плазма с титром анти-Б-антител 1 : 64 Щ+), 0Я2Я2 (ссБЕЕ) исходный (68 г/л) 1 : 2 (34 г/л) 1 : 4 (17 г/л) 1 : 8 (9 г/л) 1 : 16 (4 г/л)
+ + + + +
Щ-), 0гг (ccdee) исходный (68 г/л) 1 : 2 (34 г/л) 1 : 4 (17 г/л) 1 : 8 (9 г/л) 1 : 16 (4 г/л)
- - - - -
Иммуноглобулин человека нормальный (плацебо 1) Щ+), 0Я2Я2 (теБЕЕ) исходный (50 г/л) 1 : 2 (25 г/л) 1 : 4 (13 г/л) 1 : 8 (6 г/л) 1 : 16 (3 г/л)
+ - - - -
Щ-), 0гг (ccdee) исходный (50 г/л) 1 : 2 (25 г/л) 1 : 4 (13 г/л) 1 : 8 (6 г/л) 1 : 16 (3 г/л)
+ - - - -
Плазма, заготовленная от регулярного донора крови и ее компонентов (плацебо 2) Щ+), 0Я2Я2 (теБЕЕ) исходный (70 г/л) 1 : 2 (35 г/л) 1 : 4 (18 г/л) 1 : 8 (9 г/л) 1 : 16 (5 г/л)
- - - - -
Щ-), 0гг (ccdee) исходный (70 г/л) 1 : 2 (35 г/л) 1 : 4 (18 г/л) 1 : 8 (9 г/л) 1 : 16 (5 г/л)
- - - - -
Натрия хлорид раствор для инфузий 0,9 % (плацебо 3) Щ+), 0Я2Я2 (теБЕЕ) исходный (0 г/л) исходный (0 г/л) исходный (0 г/л) исходный (0 г/л) исходный (0 г/л)
- - - - -
Щ-), 0гг (ccdee) исходный (0 г/л) исходный (0 г/л) исходный (0 г/л) исходный (0 г/л) исходный (0 г/л)
- - - - -
выполнено для следующего ряда концентраций анти-Б-антител в пробе: 0,015; 0,010; 0,006; 0,004; 0,003 и 0,002 МЕ/мл. Указанный диапазон принят за аналитическую область методики. На основании полученных данных установлено, что перед проведением анализа исследуемый и стандартный образцы необходимо разбавлять до содержания анти-Б-антител порядка 0,015 МЕ/мл.
Усовершенствование способа количественного выражения результата
На следующем этапе исследования усовершенствовали алгоритм обработки результатов. Тестировали не менее 5 последовательных 1,5-кратных разведений испытуемого и стандартного образцов. Содержание анти-Б-антител, выраженное в МЕ/мл, вычисляли исходя из аттестованного значения специфической (антирезусной) активности СО и титра антител в анализируемых пробах. Для расчета использовали следующую формулу:
С -
т
-х Т
(1)
где С - содержание анти-Б-антител в испытуемом образце, МЕ/мл; ССО - содержание анти-Б-антител в СО,
МЕ/мл; ТСО - величина, обратная титру анти-Б-анти-тел в СО; Т - величина, обратная титру анти-Б-антител в испытуемом образце.
С применением такого алгоритма обработки данных можно перейти от полуколичественной оценки титра анти-Б-антител к выражению результата в МЕ/мл относительно СО.
Анализ специфичности выявления анти-Б-антител
В рамках изучения специфичности анализа оценили возможность исследования различных типов биоматериала. Для этого тестировали серии разведений экспериментального образца (раствора) антирезусного иммуноглобулина, а также антирезусной плазмы и проб, не содержащих анти-Б-антитела (плацебо), в реакции с ЯИ(+)- и ЯИ(-)-эритроцитами. В качестве плацебо использовали иммуноглобулин человека нормальный, плазму, заготовленную от регулярного донора крови и ее компонентов, натрия хлорид, раствор для инфузий 0,9 %. Результаты испытаний по оценке специфичности выявления анти-Б-антител приведены в табл. 1.
При отсутствии в пробе белка (плацебо 3) агглютинация эритроцитов не наблюдалась. Такой же результат
Таблица 2. Критерии приемлемости результатов исследования
Метрологическая характеристика Критерий приемлемости
Специфичность Отсутствие неспецифической агглютинации ЯЬ(-)-эритроцитов
Прецизионность Размах варьирования данных не более одного шага титрования
Правильность Погрешность определения не более одного шага титрования
получен при анализе плазмы крови регулярного донора. Для нормального иммуноглобулина человека положительная реакция с КИ(+)-эритроцитами отмечена только при тестировании исходной пробы. В этом случае выявленный титр антител не превышал 1 : 8, что допустимо для данной группы лекарственных препаратов [24]. Образцы, содержащие анти-Б-антитела, вызвали агглютинацию ЯИ(+)-эритроцитов во всех исследованных разведениях.
При тестировании антирезусного и нормального иммуноглобулина человека отмечена неспецифическая агглютинация КЬ(-)-эритроцитов в пробах с концентрацией белка 102 и 50 г/л соответственно. Указанные образцы представляют собой очищенную фракцию у-глобулинов, более чем на 97 % состоящую из ^в. Из этого следует, что концентрация белка, а именно ^в, > 50 г/л может приводить к неспецифической гемагглютинации. Однако таковую не вызвала донорская плазма, содержащая 70 г/л белка. Это может быть связано с тем, что в ней доля среди всех белковых фракций составляет порядка 15 %, т. е. значительно меньше, чем в препаратах иммуноглобулина. Вместе с тем при количественном определении анти-Б-антител вероятность неспецифической реакции невелика, так как аналитический диапазон методики требует разбавления испытуемых образцов не менее чем в 30 раз. За счет этого в пробах снижается концентрация белка, что нивелирует его способность вызывать неспецифическую гемагглютинацию. В данном случае для оценки специфичности анализа достаточно провести реакцию наименьшего из исследуемых разведений испытуемого образца с КЬ(-)-эритроцитами.
Определение критериев приемлемости результатов исследования
Для обеспечения достоверности и воспроизводимости данных определили порядок внутрилабораторного контроля качества исследования. Критерии приемлемости результатов тестирования сформулировали на основании требований к валидации аналитических методик и точности результатов клинических лабораторных исследований исходя из перечня общепринятых метрологических характеристик с учетом дискретности измерения [21, 25-30]. Установленные нормы приведены в табл. 2.
Оценка пригодности методики
Пригодность разработанной методики оценивали посредством метрологических испытаний с проверкой правильности данных и их прецизионности в условиях сходимости и внутрилабораторной воспроизводимости. Тестировали препараты иммуноглобулина человека
антирезус-ЯЬ^Б) трех производителей и антирезусную плазму, заготовленную от доноров с титром анти-D-антител в сыворотке крови 1 : 64, 1 : 1024 и 1 : 4096.
На преаналитическом этапе исследования отказались от применения двух различных реагентов. Для приготовления последовательных разведений образцов вместо раствора ID-Diluent 2 (LISS) использовали 0,01 М ФБР-БСА, рекомендованный для предварительного (первичного) разбавления проб. Исследование выполняли 2 аналитика, каждый провел по 6 определений специфической (антирезусной) активности всех испытуемых образцов с использованием ЯЬ(+)-эритроцитов с двумя разными фенотипами - 0R2R2 и 0RjRr Количественную оценку осуществляли по отношению к СО содержания антирезус-Rh0(D)-антител с аттестованным значением 52,8 (35,2-52,8) МЕ/мл. Правильность результатов проверяли путем тестирования независимого ряда разведений МСО (297 МЕ/мл). О специфичности анализа судили по наличию агглютинации Rh(-)-эритроцитов с фенотипом 0гг в реакции с наименьшим разведением каждой пробы.
Данные всех метрологических испытаний признаны достоверными, поскольку погрешность определения специфической (антирезусной) активности МСО не превышала один шаг титрования. Специфичность выявления анти-Э-антител подтверждена отсутствием агглютинации Rh(-)-эритроцитов. На основании соответствия методики критериям правильности и специфичности сделан вывод о том, что 0,01 М ФБР-БСА пригоден не только для предварительного разбавления образцов, как указано в 0ФС.1.8.2.0004.15, но и для приготовления их последовательных разведений. Доказана прецизионность результатов тестирования в условиях сходимости и внутрилабораторной воспроизводимости. Максимальный размах варьирования определяемой характеристики составил один шаг титрования. Сравнительный анализ показал статистическую эквивалентность данных, полученных разными аналитиками (р > 0,05 для критерия Манна-Уитни, рис. 1, 2).
Обсуждение
В ходе проведенного исследования разработана методика количественного определения анти-О-анти-тел, основанная на реакции непрямой гемагглютинации в геле, которая широко применяется в клинической лабораторной практике. Взятая за основу непрямая проба Кумбса позволяет оценить только титр анти-D-антител, а также не включает в себя использование СО и верификацию результатов исследования при каждой постановке. В то же время и в Российской Федерации, и за рубежом с целью обеспечения метрологической прослеживаемо-
1200-,
1000-
« s
& -i К w
800-
600-
¿O 400-
® 3
и &
О
200-
0
p = 0,699 r
p = 0,180
p = 0,394
Препарат 1 Препарат 2 Препарат 3
Щ Аналитик 1 ^ Аналитик 2 Наименование лекарственного препарата Рис. 1. Результаты анализа препаратов иммуноглобулина человека антирезус КЬ0(Б)
30 -,
25-
20-
? 1М5 з s
¿à
&
о
10-
5-
0
0,282
n = 6
титр 1 : 4096
p = 0,640
n = 6
титр 1 : 1024
p = 0,378 n = 6 n = 6
титр 1 : 64
Щ Аналитик 1 Аналитик 2
Титр анти-Б антител в сыворотке крови донора Рис. 2. Результаты анализа антирезусной плазмы
6
n
сти и точности данных при контроле качества лекарственных средств предписано применять аттестованные СО [22, 25-28, 31-33]. В отношении оценки специфической (антирезусной) активности их примерами могут служить выпускаемый Национальным институтом биологических стандартов и контроля Великобритании (National Institute for Biological Standards and Control - NIBSC) международный стандарт анти-Э-иммуноглобулина WHO International Standard for anti-D Immunoglobulin (NIBSC code: 16/332), а также ФСО 3.2.00452 «Стандартный образец активности иммуноглобулина человека антирезус Rh0(D) (содержание анти-Б-антител IgG)», который включен в реестр фармакопейных СО на базе ФГБУ НЦЭСМП Минздрава России [31, 34-39]. Исходя из этого основным этапом создания стандартизованной аналитической методики посчитали разработку способа применения СО. Благодаря тестированию параллельно с испытуемым образцом ряда разведений СО, помимо титра анти-D-антител, можно определить их концентрацию в МЕ/мл, а значит, унифицировать результаты анализа. Кроме того, применение СО позволяет оценить достоверность получаемых данных в рамках внутрилабораторного контроля качества исследования.
Уменьшение кратности шага титрования снижает дискретность определения и размах варьирования, способствуя повышению точности результатов. Применение в качестве разбавителя 0,01 М ФБР-БСА является альтернативой использованию импортного раствора ID-Diluent 2 (LISS), рекомендованного производителями гелевых карт. Согласно ОФС.1.8.2.0004.15, только предварительное разбавление испытуемого образца предусмотрено осуществлять с помощью 0,01 М ФБР-БСА. Возможность его использования для приготовления последовательных разведений пробы исключает необходимость применения на преаналитическом этапе исследования двух различных реагентов. Определение аналитической области методики (от 0,002 до 0,015 МЕ/мл) и порядка предварительного разбавления пробы (до 0,015 МЕ/мл) дает возможность тести-
ровать меньшее количество разведений испытуемого и стандартного образцов, и, как следствие, сократить расход реагентов, время проведения анализа и трудозатраты.
Существующие гелевые карты и готовые эритро-цитарные реагенты рекомендованы для исследования сыворотки или плазмы крови. Относительное содержание в них составляет в среднем 15 % белковой фракции, тогда как для препаратов иммуноглобулина человека этот показатель не опускается ниже 97 % [15, 40, 41]. Высокая концентрация белка, в частности ^в, может вызывать неспецифическую агглютинацию эритроцитов при определении специфической (антирезусной) активности иммуноглобулиновых препаратов. Оценка специфичности выявления анти-Б-антител в реакции наименьшего разведения испытуемого образца с ЯИ(-)-эритроцитами позволяет уменьшить количество результатов, которые не соответствуют критериям приемлемости и требуют проведения повторного тестирования. Установленные требования к достоверности и воспроизводимости результатов могут послужить основой внутрилабораторного контроля качества исследования.
Метрологические испытания доказали, что разработанная методика удовлетворяет требованиям специфичности, правильности, сходимости, внутрилабораторной воспроизводимости и пригодна для оценки концентрации анти-Б-антител (МЕ/мл) в антирезусной плазме и в препаратах иммуноглобулина человека антирезус ^о(Б).
Заключение
В рамках исследования на основе реакции непрямой гемагглютинации в геле разработана стандартизованная методика количественного определения анти-Б-антител, позволяющая унифицировать результаты анализа и повысить их точность. Оценка содержания анти-Б-антител в МЕ/мл облегчит расчет профилактической дозы иммуноглобулина человека антирезус Ий0(Б), что будет способствовать повышению эффективности иммунопрофилактики резус-конфликта при беременности.
■ Литература
1. Ветров В.В., Иванов Д.О., Черминых С.В. Заболеваемость гемолитической болезнью новорожденных при резус-конфликте и ее профилактика. Проблемы женского здоровья. 2016; 11 (3): 52-63. EDN: https://elibrary.ru/xhdetx
2. Pegoraro V., Urbinati D., Visser G.H.A., Di Renzo G.C., Zipur-sky A., Stotler B.A., Spitalnik S.L. Hemolytic disease of the fetus and newborn due to Rh0(D) incompatibility: A preventable disease that still produces significant morbidity and mortality in children. PLoS One. 2020; 15 (7): e0235807. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone. 0235807
3. Минеева Н.В., Пашкова И.А., Кробинец И.И., Сысоева Е.А. Аллосенсибилизация к антигенам эритроцитов (обзор литературы). Онкогематология. 2015; 10 (4): 60-5. DOI: https://doi.org/10.17650/1818-8346-2015-10-4-60-65
4. Донсков С.И. Группы крови системы Rhesus. Теория и практика. Москва : ВИНИТИ РАН, 2005. 392 с.
5. Павлова Н.Г. Анти-D-иммунопрофилактика. Журнал акушерства и женских болезней. 2015; 64 (3): 52-7. DOI: https://doi. org/10.17816/J0WD64352-57
6. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 20.10.2020 № 1130н «Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю «акушерство и гинекология»». URL: https://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_367763/
7. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 20.10.2020 № 1134н «Об утверждении порядка медицинского обследования реципиента, проведения проб на индивидуальную совместимость, включая биологическую пробу, при трансфузии донорской крови и (или) ее компонентов». URL: https://www.consultant.ru/ document/cons_doc_LAW_367744/
8. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 28.10.2020 № 1170н «Об утверждении порядка оказания медицинской помощи населению по профилю «Трансфузиология»». URL: https://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_369099/
9. Оловникова Н.И., Николаева Т.Л., Эршлер М.А. Иммунопрофилактика резус-иммунизации: перспектива создания моноклональ-ного иммуноглобулина для предупреждения гемолитической болезни новорожденных. Иммунология. 2018; 39 (1): 74-80. DOI: https://doi. org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-74-80
10. Чечеткин А.В., Данильченко В.В., Григорьян М.Ш., Воробей Л. Г., Плоцкий Р. А. Анализ показателей деятельности службы крови Российской Федерации в 2019 году. Трансфузиология. 2020; 21 (3): 200-10. EDN: https://elibrary.ru/elqqwg
11. Ожерельева М.А., Кравченко Е.Н., Ветров В.В., Иванов Д.О., Куклина Л. В. Профилактика гемолитической болезни новорожденного и ее тяжелых форм при резус-конфликте (обзор литературы). Детская медицина Северо-запада. 2015; 6 (3): 42-8. EDN: https://eli-brary.ru/vviksb
12. Silver R.M. RhD immune globulin: over 50 years of remarkable progress! BJOG. 2016; 123 (8): 1347. DOI: https://doi.org/10.1111/1471-0528.13868
13. Shaz B.H., Hillyer C.D., Reyes G.M. Transfusion Medicine and Hemostasis: Clinical and Laboratory Aspect, 3rd ed. Philadelphia, PA : Elsevier, 2018. 1048 p.
14. Министерство здравоохранения Российской Федерации. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. ФС.3.3.2.0001.19 «Плазма человека для фракционирования». 2019. URL: https://pharmacopoeia.regmed.ru/ pharmacopoeia/izdanie-14/plasma-cheloveka-dlya-fraktsionirovaniya/
15. Министерство здравоохранения Российской Федерации. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. ОФС.1.8.1.0003.15 «Иммуноглобулины человека». 2018. URL: https:// pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-14/1/1-8/1-8-1/immu-noglobuliny-cheloveka/
16. European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 11th edition Supplement 11.5. Human Anti-D Immunoglobulin. 2024. URL: https://pheur.edqm.eu/ subhome/11-5
17. European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 11th edition Supplement 11.5. Human Anti-D Immunoglobulin for intravenous administration. 2024. URL: https://pheur. edqm.eu/ subhome/11-5
18. European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 11th edition Supplement 11.5. Human Anti-D Immunoglobulin, assay of (2.7.13.). 2024. URL: https://pheur.edqm.eu/ subhome/11-5
19. Шведова Е.В., Кудашева Э.Ю., Климов В.И. Методы оценки специфической активности препаратов иммуноглобулина человека антирезус Rh0(D): современное состояние проблемы. Иммунология. 2020; 41 (3): 256-61. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-3-256-261
20. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 21.11.2022 № 750н «Об утверждении порядка иммунизации доноров для заготовки иммуноспецифической плазмы». URL: https:// www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_146049/
21. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 26.05.2003 № 220 «Об утверждении отраслевого стандарта «Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов». URL: https://www. consultant.ru/document/cons_doc_LAW_100796/
22. Министерство здравоохранения Российской Федерации. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания. 0ФС.1.1.0007 «Стандартные образцы». 2023. URL: https://pharmaco-poeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/standartnye-obraztsy-/
23. Реброва О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. Москва : МедиаСфера, 2002. 312 с.
24. Министерство здравоохранения Российской Федерации. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. 0ФС.1.8.2.0004.15 «Испытание на анти^-антитела в лекарственных препаратах иммуноглобулинов человека». 2018. URL: https://phar-macopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-14/1/1-8/1-8-2/ispytanie-na-anti-d-antitela-v-lekarstvennykh-preparatakh-immunoglobulinov-che-loveka/
25. European Medicines Agency (EMA). ICH Topic Q2 (R2) Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology. 2023. URL: https:// www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/ich-q2r2-guide-line-validation-analytical-procedures-step-5-revision-1_en.pdf
26. European Medicines Agency (EMA). ICH guideline M10 on bioanalytical method validation and study sample analysis. 2023. URL: https://www. ema.europa.eu/en/ich-m10-bioanalytical-method-validation-scientific guideline
27. International Organizational for Standardization (ISO). International standard ISO 5725-4:2020 «Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 4: Basic method for the determination of the trueness of a standard measurement method». 2020. URL: https://www.iso.org/ru/standard/69421.html
28. Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии. Государственный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений». 2002. URL: https://docs.cntd.ru/document/1200029978
29. Министерство здравоохранения Российской Федерации. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания. ОФС. 1.1.0012 «Валидация аналитических методик». 2023. URL: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/vali-datsiya-analiticheskikh-metodik/
30. Министерство здравоохранения Российской Федерации. Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания. ОФС. 1.1.0013 «Статистическая обработка результатов физических, физико-химических и химических испытаний». 2023. URL: https:// pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/statistiches-kaya-obrabotka-rezultatov-fizicheskikh-fiziko-khimicheskikh-i-khimi-cheskikh-ispytaniy/
31. World Health Organization (WHO). WHO Technical Report Series. No. 932. Annex 2. Recommendation for the preparation, characterization, and establishment of international and other biological reference standards. 2006. URL: https://www.who.int/publications/m/item/annex-2-trs-no-932
32. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 20.03.2020 № 202 «О метрологической службе Министерства
здравоохранения Российской Федерации в сфере обращения лекарственных средств для медицинского применения». URL: https://www. consultant.ru/document/cons_doc_LAW_353452/
33. Межгосударственный совет по стандартизации, метрологии и сертификации. Межгосударственный стандарт ГОСТ 8.315-2019 «Государственная система обеспечения единства измерений. Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения». 2019. URL: https://internet-law.ru/gosts/gost/72205/
34. Меркулов В.А., Саканян Е.И., Волкова Р.А., Климов В.И., Шемерянкина Т.Б., Яшкир В. А. Фармакопейные стандартные образцы и практика их применения в отечественной системе стандартизации лекарственных средств. Химико-фармацевтический журнал. 2016; 50 (4): 40-3. DOI: https://doi.org/10.30906/0023-1134-2016-50-4-40-43
35. Вильданова Н.С., Кормщикова Е.С., Калинина Е.Н., Воробьев К. А., Парамонов И.В., Кудашева Э.Ю. Этапы стандартизации препаратов антирезусного иммуноглобулина человек по показателю «Специфическая активность». БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2022; 22 (3): 288-95. DOI: https://doi.org/10.30895/2221-996X-2022-22-3-288-295
36. Корнилова О.Г., Нечаев А.В., Хуснатдинова Е.А., Яковлев А.К., Олефир Ю.В. Особенности разработки и аттестации стандартного образца содержания анти^-антител в препаратах иммуноглобулинов человека. Химико-фармацевтический журнал. 2020; 54 (3): 61-4. DOI: https://doi.org/10.30906/0023-1134-2020-54-3-61-64
37. Шведова Е.В., Клепикова А.Г., Фадейкина О.В., Шведов Д.В., Борисевич И.В., Солдатов А.А. Разработка фармакопейного стандарт-
ного образца для количественного определения активности иммуноглобулина человека антирезус Rh0(D). Иммунология. 2023; 44 (3): 358-67. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2023-44-3-358-367
38. Fox B., Sharp G., Atkinson E., Roberts G., Rigsby P., Stud-holme L. The third international standard for anti-D immunoglobulin: international collaborative study to evaluate candidate preparations. Vox sanguinis. 2019; 7: 740-8. DOI: https://doi.org/10.1111/vox.12822
39. Вильданова Н.С., Кормщикова Е.С., Бутина Е.В., Попо-нина Е.А., Йовдий А.В., Шерстнев Ф.С., Воробьев К.А., Парамонов И.В., Кудашева Э.Ю., Тарасов А.Н. Разработка алгоритма формирования базы доноров плазмы для производства стандартного образца содержания антирезус Rh0(D) антител IgG. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2021; 24 (8): 13-20. DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2021-08-02
40. Министерство здравоохранения Российской Федерации. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. ФС.3.3.2.0007.15 «Иммуноглобулин человека нормальный». 2018. URL: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-14/3/3-3/ 3-3-2/immunoglobulin-cheloveka-normalny/
41. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 28.10.2020 № 1166н «Об утверждении порядка прохождения донорами медицинского обследования и перечня медицинских противопоказаний (временных и постоянных) для сдачи крови и (или) ее компонентов и сроков отвода, которому подлежит лицо при наличии медицинских показаний, от донорства крови и (или) ее компонентов. URL: https://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_369040/
■ References
1. Vetrov V.V., Ivanov D.O., Cherminyh S.V. Incidence of hemolytic disease of newborns in Rhesus conflict and its prevention. Problemy zhenskogo zdorovja. 2016; 11 (3): 52-63. EDN: https://elibrary.ru/xhdetx (in Russian)
2. Pegoraro V., Urbinati D., Visser G.H.A., Di Renzo G.C., Zipur-sky A., Stotler B.A., Spitalnik S.L. Hemolytic disease of the fetus and newborn due to Rh0(D) incompatibility: A preventable disease that still produces significant morbidity and mortality in children. PLoS One. 2020; 15 (7): e0235807. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone. 0235807
3. Mineeva N.V., Pashkova I.A., Krobinets I.I., Sysoeva E.A. Allosen-sibilisation to erythrocyte antigens (literature review). Oncohematology. 2015; 4 (10): 60-5. DOI: https://doi.org/10.17650/1818-8346-2015-10-4-60-65 (in Russian)
4. Donskov S.I. Blood groups of the Rhesus system. Theory and practice. Moscow: VINITI RAS, 2005. 392 p. (in Russian)
5. Pavlova N.G. Anti-D-immunoprophylaxis. Journal of obstetrics and women diseases. 2015; 64 (3): 52-7. DOI: https://doi.org/10.17816/ JOWD64352-57 (in Russian)
6. Order of the Ministry of Health of the Russian Federation of October 20, 2020 No. 1130n «On approval of the procedure for providing medical care on the profile «obstetrics and gynecology»». URL: https://www. consultant.ru/document/cons_doc_LAW_367763/ (in Russian)
7. Order of the Ministry of Health of the Russian Federation of October 20, 2020 No. 1134n «On approval of the procedure for medical examination of the recipient, conducting tests for individual compatibility, including a biological sample, during the transfusion of donor blood and (or) its components». URL: https://www.consultant.ru/document/cons_ doc_LAW_367744/ (in Russian)
8. Order of the Ministry of Health of the Russian Federation of October 28, 2020 No. 1170n «On approval of the procedure for providing medical care to the population on the profile «transfusiology»». URL: https:// www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_369099/ (in Russian)
9. Olovnicova N.I., Nicolaeva T.L., Ershler M.A. Immunization of rhesus immunization: the prospect of a monoclonal immunoglobu-lin to prevent haemolytic disease of the new-born. Immunologiya. 2018; 39 (1): 74-80. DOI: https://doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-74-80 (in Russian)
10. Chechetkin A.V., Danilchenko V.V., Vorobey L.G., Grigo-ryan M Sh., Plotsky R.A. Analysis of the performance indicators of the Blood Service of the Russian Federation in 2019. Transfusiology. 2020; 21 (3): 200-10. EDN: https://elibrary.ru/elqqwg (in Russian)
11. Ozhereleva M.A., Kravchenko E.N., Vetrov V.V., Ivanov D.O., Kuklina L.V. Prevention of Rh immunization in Russia and foreign countries. Children's medicine of the North-West. 2015; 6 (3): 42-8. EDN: https://elibrary.ru/vviksb (in Russian)
12. Silver R.M. RhD immune globulin: over 50 years of remarkable progress! BJOG. 2016; 123 (8): 1347. DOI: https://doi.org/10.1111/1471-0528.13868
13. Shaz B.H., Hillyer C.D., Reyes G.M. Transfusion Medicine and Hemostasis: Clinical and Laboratory Aspect, 3rd ed. Philadelphia, PA: Elsevier, 2018. 1048 p.
14. The Ministry of Health of the Russian Federation. The State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV edition. FS.3.3.2.0001.19 «Human plasma for fractionation». 2019. URL: https ://pharmacopoeia. regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-14/plasma-cheloveka-dlya-fraktsion-irovaniya/ (in Russian)
15. The Ministry of Health of the Russian Federation. The State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV edition. OFS. 1.8.1.0003.15 «Human immunoglobulins». 2018. URL: https://pharmacopoeia.regmed. ru/pharmacopoeia/izdanie-14/1/1-8/1-8-1/immunoglobuliny-cheloveka/ (in Russian)
16. European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 11th edition Supplement 11.5. Human Anti-D Immunoglobulin. 2024. URL: https://pheur.edqm.eu/subhome/11-5
17. European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 11th edition Supplement 11.5. Human Anti-D Immunoglobulin for intravenous administration. 2024. URL: https://pheur. edqm.eu/ subhome/11-5
18. European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 11th edition Supplement 11.5. Human Anti-D Immunoglobulin, assay of (2.7.13.). 2024. URL: https://pheur.edqm.eu/ subhome/11-5
19. Shvedova E.V., Kydasheva E.Yu., Klimov V.I. Methods for evaluating the specific activity of preparations of human antirhesus Rh0(D): current status of the problem. Immunologiya. 2020; 41 (3): 256-61. DOI: https://doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-74-80 (in Russian)
20. Order of the Ministry of Health of the Russian Federation of November 21, 2022 No. 750n «On approval of the procedure for immunization of donors for the procurement of immunospecific plasma». URL: https:// www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_146049/ (in Russian)
21. Order of the Ministry of Health of the Russian Federation of May 26, 2003 No. 220 «On approval of sector standard "Rules for carrying out in-laboratory quality control of quantitative methods of clinical laboratory
tests using control materials"». URL: https://www.consultant.ru/document/ cons_doc_LAW_100796/ (in Russian)
22. The Ministry of Health of the Russian Federation. The State Pharmacopoeia of the Russian Federation XV edition. OFS.1.1.0007.18 «Standard samples». 2023. URL: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmaco-poeia/izdanie-15/1/1-1/standartnye-obraztsy-/ (in Russian)
23. Rebrova O.Yu. Statistical analysis of medical data. Moscow: MediaSphera, 2002. 312 p. (in Russian)
24. The Ministry of Health of the Russian Federation. The State Pharmacopoeia of the Russian Federation XV edition. OFS.1.8.2.0004.15 «Testing for anti-D antibodies in medicinal preparations of human immunoglobulin». 2018. URL: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmaco-poeia/izdanie-14/1/1-8/1-8-2/ispytanie-na-anti-d-antitela-v-lekarstven-nykh-preparatakh-immunoglobulinov-cheloveka/ (in Russian)
25. European Medicines Agency (EMA). ICH Topic Q2 (R2) Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology. 2023. URL: https:// www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/ich-q2r2-guide-line-validation-analytical-procedures-step-5-revision-1_en.pdf
26. European Medicines Agency (EMA). ICH guideline M10 on bioanalytical method validation and study sample analysis. 2023. URL: https://www. ema.europa.eu/en/ich-m10-bioanalytical-method-validation-scientific guideline
27. International Organizational for Standardization (ISO). International standard ISO 5725-4:2020 «Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 4: Basic method for the determination of the trueness of a standard measurement method». 2020. URL: https://www.iso.org/ru/standard/69421.html
28. Federal Agency for Technical Regulation and Metrology. National standard of the Russian Federation GOST R ISO 5725-4-2002 «Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results. Part 4. Basic method for the determination of the trueness of a standard measurement method». 2002. URL: https://docs.cntd.ru/document/1200029978 (in Russian)
29. The Ministry of Health of the Russian Federation. The State Pharmacopoeia of the Russian Federation XV edition. OFS.1.1.0012 «Validation of analytical methods». 2023. URL: https://pharmacopoeia.regmed. ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/validatsiya-analiticheskikh-metodik/ (in Russian)
30. The Ministry of Health of the Russian Federation. The State Pharmacopoeia of the Russian Federation XV edition. OFS.1.1.0013 «Statis-tical processing of the results of a physical, physic-chemical and chemical tests». 2023. URL: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/ izdanie-15/1/1-1/statisticheskaya-obrabotka-rezultatov-fizicheskikh-fiziko-khimicheskikh-i-khimicheskikh-ispytaniy/ (in Russian)
31. World Health Organization (WHO). WHO Technical Report Series. No. 932. Annex 2. Recommendation for the preparation, characterization, and establishment of international and other biological reference standards. 2006. URL: https://www.who.int/publications/m/item/annex-2-trs-no-932
32. Order of the Ministry of Health of the Russian Federation of March 20, 2020 No. 202 «On the Metrological Service of the Ministry of Health of the Russian Federation in the sphere of circulation of medi-
Сведения об авторах
Калинина Елена Николаевна - мл. науч. сотр. лаб. препаратов крови ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России, Киров, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-9754-5522
Кормщикова Елена Сергеевна - канд. биол. наук, зав. лаб. препаратов крови ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России, Киров, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8158-8445
cines for medical use». URL: https://www.consultant.ru/document/cons_ doc_LAW_353452/ (in Russian)
33. Interstate Council for Standardization, Metrology and Certification. Interstate standard GOST 8.135-2019 «State system for ensuring the uniformity of measurements. Reference materials of composition and properties of substances and materials. Basic principles». 2019. URL: https://internet-law.ru/gosts/gost/72205/ (in Russian)
34. Merculov V.A., Sakanyan E.I., Volkova R.A., Klimov V.I., Sheme-ryankina T.B., Yashkir V.A. Pharmacopoeial reference samples and practice of their use in the national system of standardization of medical products. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2016; 50 (4): 40-3. DOI: https:// doi.org/10.30906/0023-1134-2016-50-4-40-43 (in Russian)
35. Vildanova N.S., Kormshchikova E.S., Kalinina E.N., Voro-biev K.A., Paramonov I.V., Kudasheva E.Yu. Human anti-D immunoglo-bulin preparations: potency standardization milestones. Biological products. Prevention, diagnosis, treatment. 2022; 22 (3): 288-95. DOI: https:// doi.org/10.30895/2221-996X-2022-22-3-288-295 (in Russian)
36. Kornilova O.G., Nechaev A.V., Khusnatdinova E.A., Yakov-lev A.K., Olefir Yu.V. Development and validation of a standard sample for determining the content of anti-D antibodies in preparations of human immunoglobulins. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2020; 54 (3): 61-4. DOI: https://doi.org/10.30906/0023-1134-2020-54-3-61-64 (in Russian)
37. Shvedova E.V., Klepikova A.G., Fadeikina O.V., Shvedov D.V., Borisevich I.V., Soldatov A.A. Development of a Pharmacopoeia Standard for the quantitative determination of the activity of human immunoglobulin antirhesus Rh0(D). Immunologiya. 2023; 44 (3): 358-67. DOI: https://doi. org/10.33029/1816-2134-2023-44-3-358-367 (in Russian)
38. Fox B., Sharp G., Atkinson E., Roberts G., Rigsby P., Stud-holme L. The third international standard for anti-D immunoglobulin: international collaborative study to evaluate candidate preparations. Vox sanguinis. 2019; 7: 740-8. DOI: https://doi.org/10.1111/vox.12822
39. Vildanova N.S., Kormshchikova E.S., Butina E.V., Popo-nina E.A., Yovdiy A.V., Sherstnev F.S., Vorobiev K.A., Paramonov I.V., Kudasheva E.Yu., Tarasov A.N. Development of an algorithm for formation of a plasma donor base for producing a standard sample of anti-D antibody. Problems of biological, medical and pharmaceutical chemistry. 2021; 24 (8): 13-20. DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2021-08-02 (in Russian)
40. The Ministry of Health of the Russian Federation. The State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV edition. FS.3.3.2.0007.15 «Immunoglobulin human normal». 2018. URL: https://pharmacopoeia. regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-14/3/3-3/3-3-2/immunoglobulin-che-loveka-normalny/ (in Russian)
41. Order of the Ministry of Health of the Russian Federation of October 28, 2020 No. 1166n «On approval of the procedure for passing a medical examination by donors and a list of medical contraindications (temporary and permanent) for donating blood and (or) its components and the timing of withdrawal, to which a person is subject in the presence of temporary medical indications, from donation of blood and (or) its components». URL: https://www.consultant.ru/document/cons_doc_ LAW_369040/ (in Russian)
Authors' information
Elena N. Kalinina - Junior Researcher of the Blood Products Lab. of KRIHBT, FMBA of Russia, Kirov, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-9754-5522
Elena S. Kormshchikova - PhD, Head of the Blood Products Lab. of KRIHBT, FMBA of Russia, Kirov, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8158-8445
Коновалова Екатерина Анатольевна - лаборант-исследователь лаб. препаратов крови ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России, Киров, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8508-6365
Вильданова Наталия Сергеевна - лаборант-исследователь лаб. препаратов крови ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России, Киров, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-0791-0571
Йовдий Анна Васильевна - канд. мед. наук, зав. лаб. иммуногематологии ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России, Киров, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-2496-0308
Смольникова Мария Викторовна - мл. науч. сотр. лаб. иммуногематологии ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России, Киров, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-3423-5700
Ekaterina A. Konovalova - Laboratory Assistant-researcher of the Blood Products Lab. of KRIHBT, FMBA of Russia, Kirov, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-8508-6365
Nataliya S. Vildanova - Laboratory Assistant-researcher of the Blood Products Lab. of KRIHBT, FMBA of Russia, Kirov, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-0791-0571
Anna V. Yovdiy - PhD, Head of the Immunohematology Lab. of KRIHBT, FMBA of Russia, Kirov, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-2496-0308
Maria V. Smolnikova - Junior Researcher of the Immunohematology Lab. of KRIHBT, FMBA of Russia, Kirov, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-3423-5700
