CC BY
1
№ 12(117)
/А UNIVERSUM:
/YV\ МЕДИЦИНА И ФАРМАКОЛОГИЯ
декабрь, 2024 г.
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ НАУКИ
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ
DOI - 10.32743/Un iMed.2024.117.12.18853
РАЗРАБОТКА МЕТОДА ВЭЖХ ПРИ АНАЛИЗЕ МНОГОКОМПОНЕНТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА «РЕГИДРЕЙД ЦИНК»
Холтураева Гулноза Миркамиловна
докторант 3 курса кафедры фармацевтичсекой химии Ташкентский фармацевтический институт Республика Узбекистан, г. Ташкент E-mail: [email protected] https://orcid.org/0009-0009-2312-1044
Ганиева Хилола Гайратовна
д-р фарм. наук., доц., Ташкентский фармацевтический институт Республика Узбекистан, г. Ташкент Старший технический консультант USP/PQM+ E-mail: regulatoryuzb@gmail com
Убайдуллаев Кудратилла Асадуллаевич
канд. хим. наук., проф., Ташкентский фармацевтический институт Республика Узбекистан, г. Ташкент
DEVELOPMENT OF THE HPLC METHOD IN THE ANALYSIS OF THE MULTICOMPONENT DRUG «REGIDREYD ZINC»
Gulnoza Kholturaeva
3rd course PhD researcher department of pharmaceutical chemistry
Tashkent pharmaceutical institute Republic of Uzbekistan, city Tashkent
Hilola Ganieva
Dr. Parm. Sciences, assistant professor, Tashkent pharmaceutical institute, Senior technical adviser USP/PQM+ Republic of Uzbekistan, city Tashkent
Kudratilla Ubaydullaev
Candidate of chem. Sciences, professor, Tashkent pharmaceutical institute Republic of Uzbekistan, city Tashkent
АННОТАЦИЯ
В данной статье представлена разработанная методика высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) количественного определения активных веществ в многокомпонентном лекарственном препарате «Ре-гидрейд Цинк», содержащем в своем составе глюкозу, натрия цитрат дигидрата и хлориды. Изучено влияние температурного режима хроматографической колонки, подвижной фазы, а также определена длина волны, обеспечивающей разделение глюкозы, натрия цитрата и ионов хлоридов при их совместном присутствии. Разработанные условия хроматографирования для метода ВЭЖХ позволяют обеспечить оптимальное разделение активных веществ при их совместном присутствии в растворе, идентифицировать и провести оценку их количественного содержания в лекарственном препарате «Регидрейд Цинк».
Библиографическое описание: Холтураева Г.М., Ганиева Х.Г., Убайдуллаев К.А. РАЗРАБОТКА МЕТОДА ВЭЖХ В АНАЛИЗЕ МНОГОКОМПОНЕНТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА «РЕГИДРЕЙД ЦИНК» // Universum: медицина и фармакология: электрон. научн. журн. 2024. 12(117). URL: https://7universum.com/ru/med/archive/item/18853
A unIversum:
№12(117)_декабрь, 2024 г.
ABSTRACT
A method of high-performance liquid chromatography (HPLC) for quantitative determination of active substances in the multicomponent drug «Regidreyd Zinc» containing glucose, sodium citrate dihydrate and chlorides has been developed. The effect of the temperature regime of the chromatographic column, mobile phase, and the wavelength ensuring the separation of glucose, sodium citrate and chloride ions in their joint presence has been studied. The developed chromatography conditions for the HPLC method allow for optimal separation of active substances in their joint presence in solution, identification and assessment of their quantitative content in the drug «Regidreyd Zinc».
Ключевые слова: регидратационный раствор, высокоэффективная жидкостная хроматография, одностадийный метод, устойчивость, подвижная фаза, контроль качества.
Keywords: rehydration solution, high performance liquid chromatography, one-step method, stability, mobile phase, quality control.
Введение
По данным ВОЗ (2024), диарея является третьей по значимости причиной детской смертности, унося ежегодно жизни около 443 832 детей в возрасте до пяти лет. Каждый год во всем мире регистрируется около 1,7 миллиарда случаев диареи у детей. Диарея обычно является симптомом инфекции в кишечном тракте, которая может быть вызвана различными бактериальными, вирусными и паразитарными организмами. Самая серьезная угроза, которую представляет диарея - это обезвоживание. Диарею следует лечить с помощью раствора для пероральной регидратации. Оральные регидратационные растворы и цинк всасываются в тонком кишечнике и восполняют воду, а также электролиты, сокращая продолжительность эпизода диареи на 25 % и способствуя уменьшению объема стула на 30 % [2; 9; 10].
Создание высокоэффективных многокомпонентных лекарств является одной из основных практических задач современной фармации, поэтому важна проблема контроля, связанная с точной оценкой качественного и количественного состава препаратов. Анализ многокомпонентных лекарственных средств, в состав которых входят субстанции различной природы, обычно сопряжен с определенными трудностями. В настоящее время метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) является одним из основных для анализа лекарственных препаратов сложного состава [7; 8].
В литературе отсутствуют методики проведения одностадийного ВЭЖХ-анализа при совместном присутствии глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлоридов в регидратационных растворах, однако описаны способы их индивидуального определения в той или иной лекарственной форме [3].
Известно, что глюкозу в лекарственных препаратах количественно определяют методом поляри-метрии [4]. Разница углов вращения испытуемого и контрольного растворов составляет угол вращения глюкозы в растворе препарата. Количественное определение натрия цитрата дигидрата в лекарственных препаратах проводят методом титрования и ВЭЖХ [6], а хлориды аргентометрическим методом анализа [5]. Недостатками данных методик является их многостадийность и, как следствие, трудоемкость, длительность и неудовлетворитель-
ная точность определения количества фармацевтических активных субстанций лекарственных средств.
Как отмечено выше, в литературе отсутствуют какие-либо известные одностадийные способы проведения ВЭЖХ-анализа регидратационных растворов при совместном определении глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлоридов.
Целью настоящей работы является разработка одностадийной методики количественного определения активных фармацевтических субстанций многокомпонентного раствора регидратационного действия «Регидрейд Цинк» методом ВЭЖХ с обеспечением полного разделения пиков глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлоридов.
Материалы и методы
Приготовление раствора испытуемого образца (РИО): 50 мл раствора препарата «Регидрейд Цинк» помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят водой до метки и перемешивают. Фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,22 мкм, первые 5 мл фильтрата отбрасывают.
Приготовление рабочего стандартного образца (РСО) глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлоридов: ввзвешивают 0,6750 г глюкозы (безводного), 0,1450 г натрия цитрата дигидрата и 0,2206 г натрия хлорида (точные навески) и переносят в мерную колбу объемом 100 мл. Добавляют 70 мл воды и встряхивают для растворения. Полученный раствор доводят водой до метки, перемешивают и фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,22 и первые 5 мл фильтрата отбрасывают.
Приготовление подвижной фазы (ПФ): в отдельных колбах растворяют 1,0 г ортофосфорной кислоты или 1,0 г перхлорной кислоты в 1000 мл воды для инъекции. Полученные растворы по отдельности фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,45 мкм.
По 10,0 мкл РИО и РСО последовательно хрома-тографируют на жидкостном хроматографе «LC-40 Prominence» (Shimadzu, Япония) с УФ-детектором и колонкой 8,0^300 мм заполненным сорбентом ShimPack SCR-102H с размером частиц 7 мкм, с использованием в качестве ПФ систему 0,1 % раствора ортофосфорной кислоты или 0,1 % перхлорной кислоты. Получают не менее 5 хроматограмм каждого раствора.
Содержание глюкоза (X), в 1 мл препарата, в граммах, вычисляют по формуле:
X = ■
В2х m x 100 x Р В x 100 x 50 x 100
где: В2 - площадь пика глюкоза на хроматограмме РИО;
В1- площадь пика глюкоза на хроматограмме РСО;
Р - количество глюкозы в исходной субстанции, в (%);
m - масса взятого стандартного образца для анализа, в граммах;
Содержание хлоридов (X), в 1 мл препарата, в граммах, вычисляют по формуле:
X=
A2x mx100 x Р x 0,6067 А x 100 x 50 x 100
где: A2 - площадь пика хлоридов на хроматограмме РИО;
Ai- площадь пика хлоридов на хроматограмме РСО;
Р - количество хлоридов в исходной субстанции,
в %;
m - масса взятого стандартного образца для анализа, в граммах;
Содержание натрия цитрата дигидрата (X), в i мл препарата, в граммах, вычисляют по формуле:
X=
C2x m x 100 x P С x 100 x 50 x 100
где: C2 - площадь пика натрия цитрата дигидрата на хроматограмме РИО;
Ci- площадь пика натрия цитрата дигидрата на хроматограмме РСО;
Р - количество натрия цитрата дигидрата в исходной субстанции, в %;
m - масса взятого стандартного образца для анализа, в граммах.
Результаты и обсуждение
Проведение ВЭЖХ-анализа на хроматографе «LC-20» Shimadzu и колонке ShimPack SCR-102 H, 8,0х300 мм, 7 мкм, катионообменный Н форме, позволяет получить эффективное разделение глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлоридов. Меньший внутренний диаметр колонки позволяет уменьшить расход подвижной фазы (ПФ).
Предварительные исследования по разработке способа количественного определения АФС раствора регидратационного действия позволили установить, что оптимальными компонентами ПФ (элюент) является система, 0,1 % раствора ортофос-форной кислоты, при скорости подачи потока подвижной фазы 0,6 мл/мин. Установлено, что такое ПФ обеспечивает оптимальное разделение глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлоридов. С целью минимизации потенциально негативных факторов, связанных с использованием кислотных растворов: ортофосфорной, перхлорной, трифлуорацетатной, сульфатной кислоты, в составе ПФ был использован 0,5 % раствор калия дигидрофосфата. Кроме того, использованная в заявленном способе ПФ позволяет достигнуть высокой симметрии и остроты пиков глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлоридов.
Проведение ВЭЖХ-анализа при температуре хроматографической колонки 350С, 400С и 500С в течение 20 мин. и длине волны 190 нм, 195 нм, 200 нм, 210 нм, 240 нм обеспечивают оптимальное разделение глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлоридов, а именно при длине волны 195 нм достигается максимальный фактор отклика между аналитическим сигналом и количеством АФС, и при 500С количество теоретических тарелок хроматографии (теоретическая ступень разделения) глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлоридов достигается максимальное разделение АФС.
В результате экспериментальных исследований по определению АФС методом ВЭЖХ-анализа установлены оптимальные условия хроматографирова-ния:
Колонка ShimPack SCR-102 H, 8,0х300 мм, 7 мкм
ПФ 0,1% раствора ортофосфорной кислоты
Длина волны 195 нм (УФ-детектор)
Температура колонки 500С
Скорость потока 0,6 мл/мин
Объем введения 10 мкл
Время анализа 20 мин
По результатам проведенной хроматографии фиксируют время удерживания пика для хлоридов и натрия цитрата дигидрата около 9,6 мин. и для глюкозы 12,7 мин. Стоит отметить, что время удерживания может варьироваться от системы к системе,
от колонки к колонке, со скоростью потока, которая составляет до 0,6 мл/мин.
Результаты хроматограммы указан ниже на рисунках 1, 2, 3 и 4.
Рисунок 1. Хроматограмма раствора РСО глюкозы
Рисунок 2. Хроматограмма раствора РСО натрия цитрата дигидрата
Рисунок 3. Хроматограмма раствора РСО хлоридов
Рисунок 4. Хроматограмма раствора испытуемого образца (РИО) «Регидрейд Цинк»
Из рисунков 1-4 видно, что время удерживания пиков составляет для хлоридов и натрия цитрата дигидрата около 9,6 мин. и для глюкозы 12,7 мин. Пики, полученные на хроматограмме РИО «Регидрейд Цинк», совпадают со временем удерживания пиков раствора РСО глюкозы, хлоридов и дигитрат натрия цитрата.
Таблица 1.
Метрологические характеристики результатов количественного определения активных веществ
«Регидрейд Цинк» (P=95%, t (P, f) =2,78)
Статистическую обработку результатов проводили согласно ГФ XV [1]. Точность методик оценивали с помощью критерия Стьюдента по результатам 5 измерений.
Заявленные количества 13,5 мг/мл 2,9 мг/мл 2,68 мг/мл
Название образца Глюкоза (мг/мл) Натрия цитрата дигидрата (мг/мл) Хлориды (мг/мл)
1 13,71 2,91 2,70
2 13,58 2,90 2,70
3 13,73 2,89 2,69
4 13,74 2,89 2,70
5 13,71 2,89 2,70
Среднее значение 13,69 2,89 2,69
Относительное стандартное отклонение (%) 0.4 0.3 0.1
Результаты, представленные в таблице 1, показывают, что содержание глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлориды в препарате составляет в среднем 13,69 мг/мл, 2,89 мг/мл, 2,69 мг/мл. Относительная ошибка среднего определения глюкозы, натрия цитрата дигидрата и хлориды в препарате составляет 0,4 %, 0,3 %, 0,1 %.
Надежность метода оценивалась путем преднамеренных изменений условий метода, как указано ниже:
• Обычные условия
• Изменение скорости потока - (скорость потока 0,55 мл/мин и 0,65 мл/мин)
• Изменение температуры колонки - (45°C и 55°C)
Критерии приемлемости:
1. Коэффициент симметрии пика (tailing factor) для глюкозы, натрия цитрат дигидрата и хлоридов от первой инъекции стандартного раствора-1 должен быть в пределах 0,8-1,8.
2. Количество теоретических тарелок глюкозы, натрия цитрат дигидрата и хлоридов после первой инъекции стандартного раствора должно быть не менее 2000.
3. Относительное стандартное отклонение для площади пика глюкозы, натрия цитрат дигидрата и хлоридов из пяти повторных инъекций стандартного раствора должно составлять не более 2,0 % [11].
Результаты, полученные для эксперимента по устойчивости, представлены ниже в таблице 2.
A UNIVERSUM:
/YV\ МЕДИЦИНА И ФАРМАКОЛОГИЯ
Таблица 2.
Результаты исследования устойчивости метода ВЭЖХ
Параметры Коэффициент симметрии пика (tailing factor) Количество теоретических тарелок От станда носительное тное отклонение
Глюкоза Натрия цитрат дигидрат Хлориды Глюкоза Натрия цитрат дигидрат Хлориды Глюкоза Натрия цитрат дигидрат Хлориды
При обычных условиях (специфичность) 1,314 1,339 1,103 11231 10180 8867 0,52 1,63 0,13
Низкая скорость потока (0,55 мл/мин) 1,323 1,350 1,088 11625 10729 8720 0,53 0,48 0,23
Высокая скорость потока (0,65 мл/мин) 1,327 1,353 1,118 11277 10314 8727 0,06 0,27 0,07
Низкая температура (45°С) 1,301 1,322 1,119 11717 10545 9164 0,27 0,81 0,20
Высокая температура (55°С) 1,326 1,346 1,090 11686 10776 8692 0,07 0,65 0,05
Было обнаружено, коэффициент симметрии пика для глюкозы, натрия цитрат дигидрата и хлоридов от первой инъекции стандартного раствора составляет от 1,301 до 1,327 для глюкозы, 1,322 до 1,353 для натрия цитрат дигидрата и от 1,088 до 1,119 для хлоридов. Было обнаружено, что количество теоретических тарелок пиков глюкозы, натрия цитрат дигидрата и хлоридов от первой инъекции стандартного раствора составляют от 11231 до 11717 для глюкозы, 10180 до 10776 для натрия цитрат дигидрата и от 8692 до 9164 для хлоридов. Также было установлено, что (RSD, %) относительное стандартное отклонение для площади пика глюкозы, натрия цитрат дигидрата и хлоридов из пяти повторных инъекций стандартного раствора, что составляет от 0,06 % до 0,53 % для глюкозы, 0,27 % до
1,63 % для натрия цитрат дигидрата и от 0,05 % до 0,23 % для хлоридов.
Заключение
Итак, разработан способ количественного определения глюкозы, натрия цитрат дигидрата и ионов хлорида в пероральном регидратационном растворе «Регидрейд цинк». Созданные условия хроматогра-фирования позволяют провести сквозной анализ активных веществ по качественным и количественным показателям единовременно. ВЭЖХ метод анализа глюкозы, натрия цитрат ди-гидрата и хлоридов соответствует критериям приемлемости в исследовании надежности. Данный метод можно считать устойчивым к условиям испытания.
Список литературы:
1. Государственная фармакопея РФ XV издания. - 2023.
2. Диарея. По материалам ВОЗ // Педиатрическая фармакология. - 2013. -Т.10. - № 3. - С. 98-107.
3. Патент на полезную модель. - № FAP 2551. - 2024.
4. Проект ФСП 42Уз-23832192-4514-2022 «Регидрейд Цинк» раствор для приёма внутрь.
5. Проект ФСП 42Уз-23832192-4593-2021 «Регидрейд Цинк» раствор для приёма внутрь.
6. Проект ФСП 42Уз-29399767-4169-2020 «Орокс» раствор для внутреннего применение 250 мл.
7. Пшеничнов Е.А., Кондрашева К.В. Разработка и валидация методики определения подлинности и количественного содержания эноксипарина натрия в инъекционных препаратах методом ВЭЖХ // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2023. - Т.12. - №1. - С.76-83.
8. Deshmukhe P.M., Charde M.S., Chakole R.D. A review on HPLC method development and validation // Indonesia Journal of Public Policy Review. - 2021. - Vol. 21. - № 4. - Pp. 66-82.
№ 12(117)
UNIVERSUM:
МЕДИЦИНА И ФАРМАКОЛОГИЯ
декабрь, 2024 г.
9. Diarrhoeal disease. WHO, 07.03.2024 [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/diarrhoeal-disease (дата обращения: 27.10.2024).
10. Redkar M., Spegel C., Tesado C., Thakor P., Chatteijee A., Shinde U., Suyawanshi D. Wide variability in osmolality of reconstituted powered oral rehydratation salts due to9 disparity in the method of preparation among Indian consumers // Journal of Applied Pharmaceutical Science. - 2022. - Vol. 12(06). - Pp. 224-229.
11. WHO Expert Committee on Specifications for pharmaceutical preparations. Annex 3: Guidelines on validation. -Geneva, 2019. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://docs.yandex.ru/docs/view?tm=1733210590&tld (дата обращения: 24.06.2023).
