CC BY
33
• Разработка метода иммунотерапии (CAR-T терапии) СА125-позитивнных опухолей
Ключевые слова: рак яичника, опухолевый антиген СА-125, иммунотерапия опухолей, CAR-T терапии, химерный Т-клеточный рецептор
Keywords:
ovarian cancer, tumor antigen CA-125, tumor immunotherapy, CAR-T therapy, chimeric T-cell receptor
Боженко В.К., Киселева Я.Ю., Шишкин А.М., Кулинич Т.М., Джикия Е.Л., Солодкий В.А.
ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации
117997, Российская Федерация, г. Москва, ул. Профсоюзная, д. 86, стр. 1 Email: [email protected]
Development of immunotherapy method (CART therapy) for CA125-positive tumors
Bozhenko V.K., Kiseleva Y.Yu., Shishkin A.M., Kulinich T.M., Dzhikia E.L., Solodky V.A.
Russian Research Center of Roentgenology and Radiology 86 Profsoyuznaya str., GSP-7, Moscow, 117997, Russian Federation Email: [email protected]
Терапия гематологических опухолей с использованием CAR-Т технологии показала высокую эффективность в клинических исследованиях и включена в арсенал стандартных вариантов лечения. Однако эффективность технологии CAR-T в отношении солидных опухолей находится в стадии разработки. Нами получена плазмидная конструкция, несущая ген химерного Т-клеточного рецептора к опухолевому антигену СА-125, который наиболее часто экспрессируют клетки рака яичника (и некоторых других опухолей). В работе проведено исследование эффективности применения CAR-T лимфоцитов в отношении солидных вариантов СА-125 позитивных опухолей.
Цель исследования. Оценить противоопухолевую эффективность цитотоксических Т-лимфоцитов, генетически модифицированных химерным Т-клеточным рецептором, специфичным к антигену СА-125.
Материалы и методы. Исследование проведено в условиях in vitro на моделях СА-125 позитивных культур клеток рака яичника OVCAR-3, OVKATE и с использованием контрольной линии MCF-7 (рак молочной железы), не экспрессирующей СА125. Т-лимфоциты, выделенные методом магнитной сепарации, трансфецировали плазмидной конструкцией CAR-CA125 с использованием электопоратора (Amaxa Nucleofector, Lonza). Данный метод позволял добиться 70% эффективности трансфекции при достаточной выживаемости лимфоцитов, количество жизнеспособных Т-лимфоцитов составляло 63,6±12,2%. Цитотоксические эффекты в отношении опухолевых клеток оценивали с помощью МТТ-теста и методом проточной цитофлуориметрии (Cytomix FC 500, Beckman Coulter) — оценка апоптоза и некроза при окраске
Annexin V-FITC/PI, а так же на приборе RTCA iCELLIgence (ACEA Biosciences). Контролем специфичности являлись ЛАК клетки (лимфокинактивированные лимфоциты).
Результаты. Лимфоциты, трансфецированные CAR-CA125, оказывали специфическое цитотоксическое воздействие на клетки, экспрессирующие СА-125. 24 часовая инкубация с генно-модифицированными лимфоцитами (CAR-CA125), в количестве 1/10, снижала количество жизнеспособных клеток в культурах OVCAR-3 и OVKATE до 26,7% и 33% соответственно, в контрольной культуре MCF-7 до 74,2% (МТТ-тест). При воздействии ЛАК, количество живых клеток снижалось независимо от типа клеточной линии и составляло 34,7% и 42,6% в культурах OVCAR-3 и OVKATE, 32,1% в MCF-7. Уровень апоптоза клеток линий OVCAR-3, OVKATE был выше при воздействии трансфецированных CAR-CA125 лимфоцитов (37,5% и 40,6%), чем при инкубации с ЛАК (12,5%, 18,9%). В культуре MCF-7 показано отсутствие достоверных отличий в уровне апоптоза, индуцированного ЛАК-клетками и трансфецированными Т-лимфоцитами. Однако, воздействие ЛАК-клеток на MCF-7 вызывало достоверное увеличение уровня некроза (17,8%), а воздействие лимфоцитов, трансфецированных CAR-CA125, не приводило к увеличению уровня некроза.
Т. о. показано, что лимфоциты, трансфецированные CAR-CA125, оказывают специфический цитотоксический эффект на СА-125 — позитивные клетки рака яичника, при этом гибель клеток происходит преимущественно по пути апоптоза.
Работа проведена при поддержке Минобрнауки России.
Материалы Первого Международного Форума онкологии и радиологии. Москва, 23-27 сентября 2019 г. 73
