Разработка и оценка протокола идентификации Brucella spp. Методом ПЦР Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»

Инфекция и иммунитет

РАЗРАБОТКА И ОЦЕНКА ПРОТОКОЛА ИДЕНТИФИКАЦИИ BRUCELLA SPP. МЕТОДОМ ПЦР

Г.Д. Абишева1, Е.С. Шевцова1, А.Д. Каиржанова1, Т.Б. Карибаев2, И.И. Сытник2, С.Б. Тюлегенов2, А.Б. Шевцов1, К.К. Муканов1

1РГПНациональный центр биотехнологии, Астана, Казахстан 2 РГП Национальный референтный центр по ветеринарии, Астана, Казахстан

Бруцеллез — инфекционная болезнь, поражающая животных всех видов, а также человека, и представляющая собой серьезную проблему для здравоохранения и животноводства. Ранняя диагностика играет ключевую роль в борьбе с бруцеллезом. Наряду с серологическими методами, в практике используются методы прямого обнаружения возбудителя бактериологическими методами и методом ПЦР. В данной работе представлены результаты исследований по разработке ПЦР протокола идентификации бруцелл и его апробации.

В работе были использованы праймеры: Omp2a-AB-F 5'-ttcgatcgctggtgytgttg-3' и Omp2a-AB-R 5'-gtcttg-ccccagtcgtcat-3'. Оптимизацию проводили в градиенте температуры при концентрации магния от 1,5 до 3,5 mM с использованием ДНК штаммов B. abortus 19 и генетического близкого вида O. thiophenivorans.

В результате оптимальный состав реакционной смеси включал праймеры 0,35 цМ каждого, 1 Ед Taq DNA Polymerase (Fermentas); 0,2 mM каждого дНТФ; 1-х ПЦР буфер (Fermentas, 10 mM Tris-HCl (pH 8,8 при 25°C), 50 mM KCl, 0,08% (объем/объем) Nonidet Р40), MgCl2 2,5 mM. Оптимальная температура отжига праймеров — 62°C.

Оценка чувствительности протокола была проведена на ряде двукратных разведений ДНК B. abortus 19, взятых в концентрациях от 50 до 9,5 нг в реакции. Предел обнаружения составил 76 фг, или около 21 геномных копий ДНК. Проверка специфичности была проведена на образцах ДНК 64 бактериальных патогенов: B. abortus (10 штаммов), B. melitensis (10 штаммов), B. suis (5 штаммов), B. ovis (5 штаммов), B. canis (1 штамм), L. monocytogenes (5 штаммов), Clostridium spp. (5 штаммов), Enterobacteriaceae (17 штаммов), Mycobacterium spp. (6 штаммов). Специфический ПЦР продукт был выявлен только в 30 образцах ДНК Brucella spp. в остальных ДНК, включая 1 образец ДНК B. ovis ПЦР продукты отсутствовали. В результате анализа нуклеотидной последовательности 16S rRNA гена данный штамм был идентифицирован как B. bronchi-septica. Таким образом, разработанный протокол идентификации Brucella spp. методом ПЦР является высокоспецифичным тестом для применения в диагностических лабораториях.

МОНИТОРИНГ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У МАКАК ЯВАНСКИХ ПРИ ПАТОЛОГИИ БЕРЕМЕННОСТИ И РОДОВ

А.А. Агумава, О.А. Шамсутдинова, М.Г. Чикобава

ФГБУ НИИ медицинской приматологии РАМН, г. Сочи

В последние годы появляется все больше данных о связи цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) с осложнениями беременности и родов (аборты, патологические роды, мертворождения). Частота распространения ЦМВИ среди особей репродуктивного возраста и беременных самок неуклонно растет. Установлена возможность трансплацентарной и перинатальной передачи ЦМВИ детенышам от инфи-

цированных матерей во время беременности и родов за счет аспирации цервикального и вагинального содержимого.

Цель работы — определение роли ЦМВИ в патологии беременности и родов у макак яванских. Объектом исследования являлись 12 погибших самок макаки яванской репродуктивного возраста, имевших в анамнезе самопроизвольные выкидыши, интранатальную гибель плода и неонатальную смерть новорожденных. Группу сравнения составили 14 самок, не имевших в анамнезе осложнений беременности и родов. Материалом для исследования служили соскобы, взятые из цервикального отдела и полости матки погибших самок. Определение ин-фицированности обезьян ЦМВ проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для подготовки и постановки ПЦР использовали коммерческие наборы «ДНК-сорб» и «АмплиСенс CMV-FL» соответственно, производства ЦНИИ эпидемиологии (Москва).

Результаты проведенного исследования показали, что ЦМВИ была выявлена у 9 (75%) самок с патологией беременности и родов и у 4 (28,6%) самок группы сравнения. Так, ДНК ЦМВ обнаружена у 100% самок с самопроизвольными выкидышами, у 71% самок с интранатальной смертью плода и у 66% самок с неонатальной гибелью новорожденного в анамнезе. Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о более высокой частоте обнаружения ЦМВИ (р < 0,001) у самок, имеювших в анамнезе различные виды патологии беременности и родов, по сравнению с особями, не имевшими осложнений. В результате нашего исследования мы пришли к заключению, что ЦМВИ влияет на репродуктивную функцию, исход беременности и родов у самок макаки яванской. Наши данные подтверждаются основными закономерностями развития ЦМВИ у людей.

ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА ИАНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬАКТУАЛЬНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

А.В. Алабушева1, О.Е. Хохлова12, Т.А. Пируева1, О.И. Иванова1, М.В. Данжаев1

1ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого 2 Российско-японский центр микробиологии, эпидемиологии и инфекционных заболеваний, г. Красноярск

Цель: изучить микробный пейзаж гнойно-воспалительных осложнений у онкологических больных и чувствительность к антибиотикам основных возбудителей.

Материалы и методы. В период с июня 2012 г. по ноябрь 2013 г. обследовано 100 пациентов, находившихся на послеоперационном лечении в ОРИТ КККОД им. А.И. Крыжановского. По поводу злокачественных новообразований желудочно-кишечного тракта (рак желудка, пищевода, поджелудочной железы, ободочной и прямой кишки) прооперировано 83 пациента, по поводу рака легких — 17. Исследуемый материал — бронхоальвеолярное содержимое, раневое отделяемое. Выделение и идентификацию возбудителей проводили в соответствии со стандартными методиками. Продукцию бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС) у энтеробактерий определяли методом «двойных дисков» на среде