CC BY
8
Обнаружено, что в пределах физиологических колебаний хемилюмн-несценция существенно не зависит от рН, удельного веса и оптической плотности мочи. В течение 1 сут наблюдаются определенные изменения интенсивности хемилюминесценции мочи. У здоровых суточная кривая хе-милюминесценции имеет характерный вид — постепенное нарастание свечения днем (с максимумом между 12 и 15 ч), затем постепенное снижение к минимальному уровню ночью.
На основании анализов мочи у 160 лиц разного возраста определены нормальные параметры ее хемилюминесценции (см. таблицу). Отмечается выраженное усиление хемилюминесценции мочи в период полового созревания.
Результаты, полученные при использовании настоящего метода в комплексной оценке влияния на организм некоторых факторов различной интенсивности: инфракрасное терло, физические нагрузки и др. (Г. Л. Ту-ровец) свидетельствуют о его высокой чувствительности и перспективности для целей гигиенического нормирования.
ЛИТЕРАТУРА. Владимиров Ю. А.,, Суслова Т. Б., Олене в В. И. Хемилюминссценция, сопряженная с образованием липидных перекисей в биологических мембранах. II. Роль железа в развитии цепного окисления липидов и сверхслабого свечения. — «Биофизика», № 5, с. 836—841. — Журавлева А. И., Журавлев А. И., Асанов В. А. Хемилюминесценции мочи больных с заболеваниями периферических сосудов. — В кн.: Сверхслабые свечения в медицине и сельском хозяйстве. М., «МГУ», 1971, с. 14—15. — Т а р у с о в Б. Н., Поливода А. И., Журавлев А. И. Изучение сверхслабой спонтанной хемилюминесценции животных клеток. — «Биофизика», 1961, Л1» 4, с. 490—496. — Туровец Г. Л. Использование биофизических показателей в оценке функциональных и адаптивных возможностей детей и подростков. — В кн.: Функциональные и адаптивные возможности детей и подростков. Т. 1. М., «АПН СССР», с. 48—49. — Ш л я п и н то х В. Я., Карпухин О. Н., Постников Л. М. и др. Хемилюминесцентные методы исследования медленных химических процессов. М., «Наука», 1966.
Поступила 14/11 1974 г.
УДК 613.632:547.563.131-074
Е. А. Друян
РАЗДЕЛЬНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОМЕРОВ ТРИКРЕЗИЛФОСФАТА, ТРИФЕНИЛФОСФАТА, ФЕНОЛА, OPTO-, МЕТА- И ПАРА-КРЕЗОЛА С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Нашей задачей было определение в воздухе изомеров трикрезилфосфа-та (ТКФ), выделяемых полимерными материалами, и разделение этих изомеров в присутствии трифенилфосфата (ТФФ), фенола и изомеров крезола.
В литературе приведены сведения о различных исследованиях по идентификации отдельных пластификаторов, находящихся в пластмассах, в том числе и ТКФ (Т. Г. Липина; Haslam и соавт.; Gude). Однако ни в одной из работ перечисленных авторов не указывается на разделение ТКФ на его изомеры.
При разработке метода определения изомеров ТКФ мы использовали метод тонкослойной хроматографии с последующей элюацией окрашенных продуктов из слоя силикагеля и спектрофотометрическим их исследованием. В основу работы была положена реакция омыления ТКФ с образованием изомеров крезола. В результате омыления ТКФ получают фенол. После омыления и получения соответствующих изомеров крезола и фенола мы использовали способность их давать окрашенные продукты с пара-нитрофенилдиазонием.
Проведены специальные исследования по выявлению оптимальных условий полноты разложения ТКФ и получению азосоединений. Изучали
влияние времени, температуры и концентрации реактивов на омыление, а также на проведение реакции сочетания продуктов омыления с пара-нитрофенилдиазонием. Были выбраны оптимальные условия хроматогра-фического разделения полученных азосоединений в тонком слое. Наилучшей для разделения оказалась система растворителей бензол — метанол — диэтиламин в соотношении 10 : 1,5 : 1.
В результате предложен метод определения изомеров ТКФ в присутствии ТФФ, фенола и изомеров крезола, основанный на омылении ТКФ и ТФФ щелочью, сочетании полученной смеси фенола, орто-, мета- и пара-крезолов с диазотированным пара-нитроанилином в щелочной среде с последующим разделением смеси в тонком слое в системе растворителей бензол— метанол—диэтиламин (10: 1,5: 1). Окрашенные зоны исследуемых веществ получают в процессе хроматографирования в щелочной среде, которая создается в присутствии диэтиламина. Время разделения — не более 20—25 мин. Соединение фенола приобретает кирпичный цвет, пара-крезола — грязно-малиновый, орто- и мета-крезолов — красный, но с разными оттенками.
Rt фенола 0,20—0,24, мета-крезола 0,26—0,30, орто-крезола 0,33— 0,44 и пара-крезола 0,95—0,96 (причины значительного колебания величины Rt для о-крезола объясняются неоднородностью силуфоловых пластинок различных партий).
Количественное определение провЪдят спектрофотометрически, путем элюирования окрашенных зон локализации исследуемых веществ с хрома-тограммы 4 мл 50% перегнанным этанолом с добавлением 0,1 мл 10% щелочи. Спектрофотометрирование проводят при длине волны 515 нм для орто-и мета-крезолов, 540 нм — для пара-крезола и 490 нм — для фенола. Количество м'икрограммов вычисляют по градуировочным графикам для этих веществ. Коэффициенты пересчета крезолов на ТКФ — 1,146 и фенола на ТФФ — 1,156. Чувствительность метода — по 0,1 мкг/мл в элюате каждого вещества.
Количественное определение можно проводить визуально сравнением зон локализации проб со стандартной хроматографической шкалой. Минимально определяемые величины на хроматограмме: орто-ТКФ, мета-ТКФ, ТФФ, фенола, орто- и мета-крезолов — 0,005 мкг, пара-ТКФ и пара-крезола — 0,03 мкг. Определению не мешают резорцин, формальдегид, фурфурол, о-оксибензиловый спирт, дибутилфталат, диоктилфталат, высшие спирты фталатов, трихлорэтилфосфат, коллоксилин и центролит.
Была проверена возможность поглощения изомеров ТКФ, ТФФ, фенола и изомеров крезола из воздуха в этиловый спирт. Установлено, что при протягивании воздуха со скоростью 0,5 л/мин эти вещества поглощаются полностью в 2 поглотительных прибора с пористой пластинкой № 2, содержащих по 5 мл перегнанного этанола. Причем практически полное поглощение происходит в 1-м поглотителе'. Пробы при отборе необходимо охлаждать.
Ход анализа может быть представлен следующим образом. Содержимое поглотительных приборов сливают отдельно в колориметрические пробирки с притертой пробкой на 5—10 мл. Прибавляют 0,3 мл 10% раствора NaOH, закрывают пробирки пробками и омыляют 10 мин при 73—76°. Далее пробы концентрируют выпариванием растворителя до объема 0,3 мл. Затем нейтрализуют до рН 3—6 5н. раствором НС1 (примерно, 0,15 мл 5 н. раствора НС1) и доводят до 1 мл 0,01 н. раствором NaOH. В процессе омыления ТКФ и ТФФ образуется смесь, состоящая из изомеров крезола и фенола. К полученной смеси добавляют 0,1 мл пара-нитрофенилдиа-зония и 0,1 мл 10% раствора NaOH. Далее пробы снова нейтрализуют 5 н. раствором НС1 до рН 3—6 (примерно 0,06 мл), вследствие чего красная окраска переходит в желтую. Окрашенный продукт экстрагируют эфиром 2 раза. Эфирный слой помещают в пробирки с притертыми пробками. Избыток эфира удаляют испарением до объема 0,3 мл. На пластинку
Стандартная шкала для фотометрического определения ТКФ
Реактив Номера стандартных растворов
1 2 3 4 5 6 7
Стандартный раствор фенола 10 мкг/мл (в мл) Стандартный раствор фенола 100 мкг/мл (в мл) 0,01 и. раствор ЫаОН (в мл) Пара-нитрофенилдиазоний (в мл) 10% раствор ЫаОН (в мл) 5 и. раствор НС1 (в мл) Содержание фенола в 1 мл (в мкг) Содержание фенола в 0,1 мл, т. е. на хроматограмме (в мкг) 0,1 0,9 Во вс 3— эфи тя» 1.0 0,1 0,3 0,7 Во Во е проби 5. Дал ром 2 ски дол 3,0 0,3 0,5 0,5 все пр все пр< рки пр ее все раза, жно со 5,0 0,5 0,1 0,0 обирки эбирки имерно раство (оличе< ставля! 10,0 1.0 0,15 по 0, по 0,1 по 0,01 ры экс :тво э<| гь точи 15,0 1,5 0,20 мл мл 3 мл до трагир ирной о 1 мл 20,0 2,0 0,30 pH уют вы- 30,0 3,0
«Silufol» наносят многократно в токе холодного воздуха работающего теплоэлектровентилятора по 0,1 мл раствора проб и проводят хроматогра-фирование в системе растворителей бензол — метанол — диэтиламин (10: 1,5: 1). Разделение считают законченным, когда растворитель поднимется от линии старта на высоту 12—13 см. После этого хроматограмму вынимают, отмечают линию фронта и сушат на воздухе.
Для количественного определения веществ рекомендуют фотометрический и визуальный способы.
При фотометрическом методе полученные на хроматографической пластинке зоны локализации исследуемых проб осторожно вырезают (каждое отдельно), помещают в центрифужные пробирки и обрабатывают 4 мл 50% раствора перегнанного этанола, тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Затем пробы центрифугируют в течение 10 мин при 2500об/мин. Прозрачный слой сливают в колориметрические пробирки и добавляют по 0,1 мл 10% NaOH. Пробы фотометрируют при 515 нм для орто- и мета-ТКФ, 540 нм для пара-ТКФ и 490 нм — для ТФФ. Контролем служит раствор, состоящий из 4 мл 50% этанола с добавлением 0,1 мл 10% раствора NaOH. Количество микрограммов устанавливают по калибровочным графикам. Для построения последних готовят стандартные шкалы каждого вещества.
Так как в предложенных условиях хода омыления ТКФ и ТФФ происходит их полное разрушение и образование 3 изомеров крезола и фенола, можно готовить стандартные шкалы из орто-, мета- и пара-крезолов и фенола, согласно таблице. Шкалы обрабатывают как при анализе проб, но без омыления и концентрирования. Объем эфирной вытяжки, содержащий азосоединения, должен составлять точно 1 мл. После хроматографирова-ния и элюации измеряют оптическую плотность полученных окрашенных растворов и строят калибровочные графики по средним данным. При визуальном определении готовят 1 хроматограмму стандартов из эталонных растворов смеси изомеров крезола с фенолом, с содержанием от 0,005 до 2 мкг каждого вещества (орто-, мета-, пара-крезолов и фенола) на хромато-грамме. Сравнивая интенсивность окраски зон локализации исследуемых веществ с окраской стандартов, определяют содержание каждого вещества в пробе.
Точность и воспроизводимость результатов проверена на ряде искусственных проб. Результаты определения изомеров ТКФ в воздухе показывают, что коэффициент вариации не превышает 5,06%.
Поскольку в техническом ТКФ часто в виде примесей присутствуют изомеры крезола (орто-, мета- и пара-) и фенол, они поглощаются в параллельно отобранной пробе при аспирации воздуха со скоростью 0,5 л/мин через поглотительный прибор с пористой пластинкой № 1 (малой модели).
В качестве поглотительного раствора используется 2 мл 0,01 н. раствора NaOH. Определение ведут аналогично описанному, но без процессов омыления и концентрирования проб выпариванием. Хроматографирование происходит в той же системе с последующим элюированием и спектрофото-метрированием полученных растворов на длинах волн: для орто- и мета-крезолов — 515 нм, для пара-крезола — 540 нм и для фенола — 490 нм. По разнице концентраций изомеров крезола, полученных при омылении пробы, и крезолов, определяемых без омыления (в параллельной пробе), высчитывают количество ТКФ в воздухе. Аналогично определяют количество ТФФ.
ЛИТЕРАТУРА. Липина Т. Г. Хроматографическое разделение фенолов. — В кн.: Труды по химии и химической технологии. Т. 3. Горький, 1965, с. 111. — J u d е A. Zur Papierchromatographie von PVC-Weichmachern. — »Kunststoffe», 1962, Bd 52, S. 679. — H a s 1 a m G.. Sopp.ett W.. Willis H. A. The analytical examination of plasticizers obtained from ^polyvinyl chloride compostitions. — <J. appl. Chem. (London)», 1951, v. 1, p. 112.
Поступила 21/111 1975 г»
УДК 613.83-07:812.015.32-08 7,5
О. И. Юрасова, Н. А. Онищенко, И. Н. Елисеев
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИНАМИКИ ОКИСЛЕНИЯ МЕЧЕНОЙ ГЛЮКОЗЫ В САНИТАРНО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
В настоящей статье рассматриваются подходы к оценке результатов эксперимента, полученных методом прижизненного определения динамики окисления меченой глюкозы, на примере обследования крыс, которых подвергали хронической затравке хлористым никелем, и обследования крыс, получавших однократно фармакологические дозы препаратов типа антиги-поксантов. Интенсивность окисления меченой глюкозы определяли в течение 3 ч у контрольных и подопытных животных. Перед обследованием на протяжении 5 мес подопытные крысы получали с водопроводной водой из автопоилок раствор хлористого никеля из расчета 5 мг/кг, при комплексной затравке на протяжении 5 мес они вдыхали хлористый никель в концентрации 0,5 мг/м3 и одновременно получали с водопроводной водой из автопоилок раствор хлористого никеля в дозе 5 мг/кг. Контрольных и подопытных животных обследовали после введения им общемеченой глюкозы (1—6)_14С , так как ожидали изменения процесса декарбоксилирования в цикле трикарбоновых кислот.
В исследовании других крыс использовали гипоксическую смесь (10% 02 и 90% Смесь поступала в эксикатор с животным под большим давлением, при этом скорость движения воздуха в поглотительных сосудах составляла примерно 0,34 л/мин. Подопытным крысам других групп перед обследованием вводили аминазин или дроперидол соответственно в дозах 25 или 0,4 мг/кг, вызывающих гипотермический эффект. Аминазин вводили подкожно за 1 ч до обследования; после введения дроперидола животных обследовали через 20—30 мин.
Нас интересовало влияние гипоксии и антигипоксантов на путь прямого окисления глюкозы, поэтому животных обследовали после введения им глюкозы- 1-14С. Всем контрольным и подопытным крысам перед обследованием внутримышечно вводили одинаковые весовые количества меченой глюкозы, равные 0,6 мг. Выдыхаемая двуокись углерода поглощалась 20% ЫаОН, а количество 14С в поглотительных сосудах определяли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика венгерской фирмы «Гамма».
3 Гигиена и санитария М 10
65
