CC BY
37
акушерство. патология беременности и родов
Прогностическое значение компонентов врожденного иммунитета у беременных с высоким риском реализации внутриутробной инфекции
О.В.Макаров1, Л.В.Ганковская2, Л.В.Ковальчук2, И.В.Бахарева1, В.В.Романовская1, О.А.Ганковская3
'Российский государственный медицинский университет, кафедра акушерства и гинекологии лечебного факультета, Москва (зав. кафедрой - проф. О.В.Макаров);
2Российский государственный медицинский университет, кафедра иммунологии, Москва
(зав. кафедрой - проф. Л.В.Ковальчук);
3НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН, Москва
(директор - акад. РАМН, проф. В.В.Зверев)
Оценивалась прогностическая значимость комплексного исследования уровня экспрессии генов Toll-подобных рецепторов - TLR2, TLR4 и противомикробного пептида HBD-1 эпителием слизистой цервикального канала, клетками плаценты, мононуклеарными клетками крови при внутриутробной инфекции. Было обследовано 120 беременных: 65 - женщины с урогенитальной инфекцией (цитомегаловирусной, вирусом простого герпеса, уреаплазмозом, хла-мидиозом, гарднереллезом, кандидозом) и невынашиванием беременности инфекционного генеза (в 1а подгруппе -c реализацией внутриутробной инфекции; в 1б подгруппе клинические признаки внутриутробной инфекции у новорожденных отсутствовали); 25 - пациентки с урогенитальной инфекцией и своевременными родами (без реализации внутриутробной инфекции); 30 - здоровые женщины с физиологически протекающей беременностью (контрольная группа). РНК из клеток выделяли с помощью метода кисло-фенольной экстракции. Методом полимеразной цепной реакции в реальном времени определяли уровень экспрессии генов TLR2, TLR4 и HBD-1. При физиологической беременности уровень экспрессии генов TLR2 и TLR4 в клетках плаценты превышает таковой в эпителиальных клетках цервикального канала, при этом уровень экспрессии гена TLR2 значительно превосходит уровень экспрессии TLR4. В группе пациенток с невынашиванием беременности, родивших детей с признаками внутриутробной инфекции, отмечается гиперэкспрессия гена TLR2 (клетками эпителия цервикального канала в 30 раз, клетками плаценты в 7 раз) по сравнению со здоровыми беременными. Таким образом, дисбаланс компонентов врожденного иммунитета (снижение экспрессии HBD-1 и гиперэкспрессия TLR2) в эпителиальных клетках и в клетках плаценты является показателем развития осложнений беременности: преждевременных родов инфекционного генеза и реализации внутриутробной инфекции.
Ключевые слова: врожденный иммунитет, Toll-подобные рецепторы, клетки плаценты, урогенитальная инфекция, осложнения беременности
Prognostic value of components of innate immunity (TLR2, TLR4 and HBD1) in pregnant women with high risk of the implementation of intrauterine infection
O.V.Makarov1, L.V.Gankovskaya2, L.V.Kovalchuk2, I.V.Bakhareva1, V.V.Romanovskaya1, O.A.Gankovskaya3
'Russian State Medical University, Department of Obstetrics and Gynecology of Medical Faculty, Moscow
(Head of the Department - Prof. MD O.V.Makarov);
2Russian State Medical University, Department of Immunology, Moscow
(Head of the Department - Acad. of RANS, Prof. L.V.Kovalchuk);
3I.I.Mechnikov Research Institute of Vaccine and Serum, RAMS, Moscow
(Director - Acad. of RAMS, Prof. V.V.Zverev)
The aim of the research was to analyze prognostic meaningfulness of the composite study in the expression of the Toll-like receptor (TLR2, TLR4) and human P-defensin (HBD1) genes by cervical canal mucosal epitheliocytes, placental and mononuclear cells in pregnant women with intrauterine infection. There were 120 pregnant women, including 65 women with urogenital infection (caused by cytomegalovirus, herpes simplex virus, ureaplasma, chlamydia, gardnerella or candida) and miscarriage (1a subgroup with realization of intrauterine infection, 1b subgroup without realization of intrauterine infection); 25 were with urogenital infection and delivery at term (without realization of intrauterine infection); 30 were with physiological pregnancy (a control group). In the physiological pregnancy the level of expression TLR2 and TLR4 genes by placental cell was higher than mucsal epitheliocutes of cervical canal (TLR2> TLR4). Hyperactivation of expression TLR2 was observed in the group with miscarriage and realization of intrauterine infection (30 times more in cervical canal mucsal epitheliocytes, 7 times more in placental cells respectively) than that in the control group. Imbalance of components of innate immunity as decrease of expression HBD1 and hyperactivation of expression TLR2 may serve as markers of pregnancy complications (miscarriage and realization of intrauterine infection). Key words: nature immunity, Toll-like receptors (TLR), cervical mucous, preterm labor
Внутриутробная инфекция (ВУИ) - важная и нерешенная проблема акушерства и перинатологии [1-3]. ВУИ развивается у 27,4-36,6% детей, рожденных живыми, а в структуре смертности новорожденных занимает ведущее положение, обусловливая от 11 до 45% потерь [4, 5]. ВУИ является причиной широкого спектра патологии: невынашивания беременности, плацентарной недостаточности, инфекционных заболеваний плода, хронической гипоксии, мертво-рождений, пороков развития плода, синдрома задержки роста плода. Рост частоты данной патологии среди заболеваний новорожденных обусловлен увеличением числа женщин фертильного возраста с наличием той или иной урогени-тальной инфекции [2].
Сложности антенатальной диагностики ВУИ связаны с по-лиэтиологичностью патологии, отсутствием четкой взаимосвязи между выраженностью клинических проявлений у матери и степенью поражения плода, многофакторным влиянием инфекционного агента на плод. Из-за неспецифичности клинических проявлений ВУИ диагностика ее во время беременности затруднена и возможна лишь при сочетанном использовании клинических и лабораторно-инструменталь-ных методов исследования [6, 7].
В возникновении ВУИ важную роль играют ограниченные возможности иммунной системы беременной к своевременному распознаванию и уничтожению этиологического агента инфекции. Иммунологическая защита против различных патогенов осуществляется в результате скоординированной работы врожденной и адаптивной систем иммунитета [8, 9]. Нарушение взаимодействия в гистоиммунологических эпителиальных и плацентарных барьерах с различными инфекционными агентами сопровождается развитием инфекционного процесса у плода.
В последние годы появляются первые работы о роли механизмов врожденного иммунитета в репродуктивной функции человека [10-13].
Большое значение в развитии ряда патологических процессов, в том числе воспаления, имеют распознающие рецепторы врожденной иммунной системы: То11-подобные рецепторы (ИЯв) [14-16]. Они обеспечивают интегрирующую и регулирующую роль в активации и реализации врожденного иммунного ответа на микробные патогены. ТЬЯэ, распознавая консервативные молекулярные образцы различных патогенов, включая вирусы, бактерии, грибы, увеличивают локальный синтез цитокинов, простагландинов, хемо-кинов и противомикробных пептидов, что запускает механизм реализации воспалительного ответа [17, 18]. Первым Т1_Я, идентифицированным у человека, был Т1_Я4. Этот рецептор распознает ЛПС клеточной стенки грамотрицатель-ных бактерий. Наиболее широким спектром специфичности из всех идентифицированных ТЬЯэ обладает Т1_Я2, который связывается с липопротеинами грамположительных
Для корреспонденции:
Романовская Валентина Валерьевна, кандидат медицинских наук,
ассистент кафедры акушерства и гинекологии
Российского государственного медицинского университета
Адрес: 117152, Москва, 4-й Вятский пер., 39
Телефон: (499) 613-6308
E-mail: valentinaromano2005@yandex.ru
Статья поступила 02.02.2009 г., принята к печати 08.04.2009 г.
и грамотрицательных бактерий, пептидогликаном и липо-тейхоевой кислотой грамположительных бактерий, грибковым зимозаном.
Экспрессия TLRs доказана в эпителии эндометрия и цер-викального канала [13, 16]. Под влиянием различных микроорганизмов, инфицирующих эпителий цервикального канала, TLRs увеличивают локальный синтез провоспалитель-ных цитокинов. Плацентарная ткань при нормальной доношенной беременности также экспрессирует TLRs 1-10 на уровне генов [17]. Определенные внутриутробные инфекции во время беременности оказывают как прямое, так и непрямое влияние на выживание клеток трофобласта, что зависит от активации различных TLR.
В связи с этим особый интерес представляет изучение TLRs как маркеров прогнозирования осложнений беременности.
Имеются основания предполагать, что применение современных технологий для выявления доклинических признаков ВУИ может обеспечить раннюю диагностику данной патологии и возможность новых подходов к разработке комплексных мер профилактики и лечения.
Цель исследования: оценить прогностическую значимость комплексного исследования уровня экспрессии генов TLR2, TLR4 и противомикробного пептида HBD-1 эпителием слизистой цервикального канала, клетками плаценты, мононуклеарными клетками крови при внутриутробной инфекции.
Для изучения экспрессии генов были использованы следующие методы: выделение общей РНК, реакция обратной транскрипции и полимеразная реакция в реальном времени. Клинические образцы (клетки слизистой цервикального канала, гомогенизат плаценты, мононуклеарные клетки) подвергали лизису и из лизата выделяли РНК. Олигонуклеоти-ды, используемые в качестве праймеров для обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции, были моделированы с помощью программы Vector NTI 8,0.
В исследование были включены 120 пациенток. В основную группу входили женщины с наличием УГИ и невынашиванием беременности инфекционного генеза (в 1а подгруппе недоношенные дети имели разнообразные локальные и системные проявления внутриутробной инфекции; в 1б подгруппе клинические признаки внутриутробной инфекции отсутствовали). Группу сравнения (3-ю группу) составили пациентки с УГИ, беременность которых закончилась своевременными родами, реализации внутриутробной инфекции не было. Контрольная группа (2-я группа) была представлена здоровыми женщинами с физиологически протекающей беременностью, которая завершилась своевременными родами.
Средний возраст в исследуемых группах составил 25,7 ± ± 0,26 года (от 19 до 42 лет). При клиническом анализе было выяснено, что пациентки 1-й, 2-й и 3-й групп достоверно не отличались по возрасту, наследственности, характеру менструальной функции.
В структуре урогенитальной инфекции у пациенток 1-й группы наиболее часто во время беременности выявлялась Ureaplasma urealyticum (29,2%). На втором месте по частоте встречаемости - Candida (27,7%). На третьем месте -вирусная инфекция: HSVII в 16,9% случаев, CMV - 13,9% (рис. 1). Данные лабораторного обследования подтвердили
Candida HPV 16/18/32 CMV
Herpes simplex virus II Gardnerella vaginalis Mycoplasma genitalis Ureaplasma urealyticum Chlamydia trachomatis
0
10
15
20
25
30
_l%
35
3-я группа
Основная подгруппа 1б
Основная подгруппа 1а
45 40 35 30 25 20 15 10
Группа контроля
Группа сравнения
Основная подгруппа 1а
Основная подгруппа 1б
Рис. 1. Структура возбудителей урогенитальной инфекции у беременных основной группы и группы сравнения (%).
* - уровень значимости различий по критерию Стьюдента, р < 0,05 по сравнению с 3 группой.
инфекционный генез невынашивания у беременных основной группы.
Субклиническое течение инфекционного процесса без выраженных системных изменений у беременных подтверждало гистологическое исследование плацент.
Нами было проанализировано течение беременности и родов у пациенток 1-й и 2-й групп. При этом оценивали частоту акушерских осложнений в зависимости от вида действующего патогенного микроорганизма. Наличие активной инфекции может способствовать развитию патологии сократительной деятельности матки, провоцируя угрозу прерывания беременности и преждевременных родов. Так, угроза прерывания беременности развилась у 45% пациенток 1а подгруппы (с реализацией ВУИ) и 26,7% 1б подгруппы основной группы, что в 2 раза выше, чем у женщин контрольной группы (13,3%) (рис. 2).
Характерным осложнением во время беременности среди женщин основной группы с наличием УГИ также является изменение индекса амниотической жидкости, причем как в сторону многоводия, так и маловодия. У здоровых беременных многоводия не отмечалось. Так, у беременных 1а подгруппы с реализацией ВУИ маловодие и многоводие в III триместре развивалось чаще (20%). У здоровых пациенток в 3,3% отмечалось маловодие (рис. 3).
Плацентарная недостаточность выявлена при УЗИ и была подтверждена гистологически у 35,5% пациенток 1а подгруппы (с реализацией внутриутробной инфекции), у 15,5% пациенток в 1б подгруппе, у 3,3% здоровых беременных. Хроническая внутриутробная гипоксия плода диагностирована у 15% пациенток 1а подгруппы (с реализацией ВУИ), в то время как среди здоровых пациенток данное акушерское осложнение не наблюдалось.
Рис. 2. Угроза прерывания беременности у беременных исследуемых групп (%).
* - уровень значимости различий по критерию Стьюдента, р < 0,05 по сравнению с группой контроля.
Таким образом, влияние бактериальной и вирусной инфекции на течение беременности выражается в развитии ряда осложнений беременности, наиболее характерными из которых являются: угроза прерывания беременности, плацентарная недостаточность, многоводие, маловодие.
У 67,7% пациенток основной группы недоношенная беременность осложнилась преждевременным разрывом плодных оболочек. В группе сравнения при наличии УГИ и доношенной беременности отмечалось дородовое излитие околоплодных вод у 8%, раннее излитие околоплодных вод у 10% здоровых пациенток.
Нами проведено комплексное определение количественной экспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета Т1_Я2 и ЛЯД клетками слизистой цервикального канала, клетками плаценты и мононуклеарными клетками периферической крови. Результатом активации ТЬЯэ, распознающих консервативные молекулярные образцы
20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0
Группа контроля
Группа сравнения
Маловодие
Основная подгруппа 1а
Многоводие
Основная подгруппа 1б
Рис. 3. Частота развития многоводия и маловодия среди пациенток исследуемых групп (%).
* - уровень значимости различий по критерию Стьюдента, р < 0,05 по сравнению с группой контроля.
*
*
*
5
0
*
*
*
*
*
*
Эпителиальные клетки цервикального канала
Клетки плаценты
; 2,0
; 1,5
И,0
: 0,5
TLR2
TLR4
60
50
Я 40
30
20
S 10
TLR2 TLR4
Рис. 4. Экспрессия генов Toll-подобных рецепторов эпителиальными клетками цервикального канала и клетками плаценты.
* - уровень значимости по критерию Манна-Уитни, р < 0,05.
60
50
Я 40
30
20
¡8 10
Здоровые беременные (группа контроля)
УГИ / прежд. роды (основная подгруппа 1б)
ВУИ (основная подгруппа 1а)
Рис. 5. Экспрессия гена TLR2 эпителиальными клетками цервикального канала при преждевременных родах и ВУИ.
* - уровень значимости по критерию Манна-Уитни, р < 0,05 по сравнению с группой контроля.
*
*
*
-Т- *
0
0
0
различных патогенов, включая вирусы, бактерии, грибы, является увеличение локального синтеза цитокинов, хе-мокинов и противомикробных пептидов. В связи с этим проводилось определение экспрессии гена противомик-робного пептида HBD-1 в слизи цервикального канала, в клетках плаценты и мононуклеарных клетках периферической крови.
При физиологически протекающей беременности уровни экспрессии генов TLR2 и TLR4 были различны. Экспрессия TLR2 эпителиальными клетками цервикального канала превышала уровень экспрессии TLR4 в девять раз (TLR2 - (1,87 ± 0,35) х 105 копий гена, TLR4 - (0,21 ± 0,01) х 105; р < 0,05) (рис. 4). Повышенная экспрессия TLR2 клетками слизистой цервикального канала показана и у здоровых небеременных женщин [10].
В клетках плаценты, мононуклеарных клетках периферической крови экспрессия TLR2 также превышала уровень экспрессии TLR4 (рис. 4). Это можно объяснить более широким спектром микробных агентов, распознаваемых TLR2.
При исследовании экспрессии генов TLR2 и TLR4 клетками плаценты у беременных с урогенитальной инфекцией и благоприятным исходом беременности, то есть своевременными родами (группа сравнения), возрастает экспрессия гена TLR2 ((122,64 ± 16,76) х 105 копий гена) в 2 раза по сравнению со здоровыми беременными из группы контроля ((59,19 ± 5,85) х 105; р < 0,05), уровень TLR4 достоверно не изменялся. Таким образом, определенный уровень защиты от инфекционных агентов обеспечивается повышенной экспрессией TLR2 по сравнению с группой женщин с физиологически протекающей беременностью.
При сопоставлении уровня экспрессии TLR2 у женщин в конце II - III триместре с исходами беременностей удалось установить взаимосвязь многократного его повышения с развитием преждевременных родов. При невынашивании беременности инфекционного генеза (беременные основной группы) нами была отмечена гиперактивация экспрессии гена TLR2 клетками плаценты ((458,97 ± 36,06) х 105 копий гена) в 7,8 раза по сравнению с нормой ((59,18 ± 5,85) х 105;
р < 0,05). Также отмечена взаимосвязь высокого уровня экспрессии гена TLR2 клетками плаценты с развитием ПРПО. У 44 пациенток с наличием урогенитальной инфекции и несвоевременным излитием вод, входящих в основную группу, уровень экспрессии гена TLR2 превышал нормативные в 5 раз (р < 0,05), TLR4 - в 1,5 раза.
У беременных с невынашиванием беременности инфекционного генеза экспрессия гена TLR2 клетками слизистой цервикального канала возрастала в 8,7 раза по сравнению с группой здоровых беременных (рис. 5). Уровень экспрессии гена TLR4 при наличии УГИ увеличивался в 1,3 раза по сравнению с группой контроля. Следовательно, эпителиальные клетки взаимодействуют с патогенами через TLRs, которые играют важную роль в механизмах защиты во время беременности. Нарушение механизмов иммунного ответа, в частности, гиперэкспрессия TLR2 под воздействием инфекционных агентов приводит к невынашиванию беременности.
Экспрессия генов TLRs мононуклеарными клетками периферической крови изучалась во II и III триместрах беременности у женщин всех групп, так как TLRs широко экспресси-руются клетками, участвующими в воспалительном ответе: моноцитами, макрофагами, нейтрофилами и др.
Среди больных с урогенитальной инфекцией, независимо от исходов беременности, нами не установлено достоверного изменения экспрессии гена TLR2 мононуклеарными клетками. Экспрессия TLR4 увеличивалась при наличии уроге-нитальной инфекции и развитии преждевременных родов, но не более, чем в три раза. Сопоставив эти данные, мы пришли к выводу, что TLRs-опосредованные механизмы врожденного иммунитета реализуются главным образом на локальном уровне (в клетках плаценты и эпителиальных клетках цервикального канала).
Увеличение экспрессии TLRs в ответ на инфекционные патогены приводит к активации каскада адапторных молекул и продукции провоспалительных цитокинов и хемокинов. Одним из классов биологически активных веществ, вырабатываемых в ответ на активацию TLRs, являются противоми-
Плацента
- 6,0
15,0
о 4,0
г 3,0
2,0
: 1,0
Эпителий цервикального канала
: 3,0
: 2,5
Я 2,0
1,5
1,0
5 0,5
Здоровые УГИ/прежд. беременные роды
Здоровые УГИ/прежд. беременные роды
Рис. 6. Экспрессия гена НВР-1 клетками плаценты и эпителиальными клетками цервикального канала при преждевременных родах инфекционного генеза.
* - уровень значимости по критерию Манна-Уитни, р < 0,05 по сравнению с группой контроля.
кробные пептиды. Нами была изучена у беременных всех групп экспрессия гена противомикробного пептида НВО-1, который относится к р-дефензинам и синтезируется эпителием слизистых оболочек. НВО-1 экспрессируется во влагалище, эндометрии, маточных трубах, при беременности - в хорионе и плаценте [19].
При физиологической беременности (группа контроля) экспрессия гена НВО-1 эпителиальными клетками слизистой цервикального канала составила (2,51 ± 0,12) х 104 копий гена; мононуклеарными клетками периферической крови - (3,95 ± 0,64) х 104; плацентой - (5,69 ± 0,6) х 104. Нами установлена взаимосвязь низких уровней экспрессии гена противомикробного пептида НВО-1 клетками плаценты, эпителиальными клетками цервикального канала, мононуклеарными клетками периферической крови с развитием преждевременных родов в основной группе. Преимущественно снижение экспрессии НВО-1 отмечалось эпителиальными клетками цервикального канала в 6,4 раза по сравнению с контролем ((2,51 ± 0,12) х 104 копий гена в группе контроля, (0,39 ± 0,02) х 104 в основной группе; р < 0,05) (рис. 6). Однако в группе сравнения у беременных с УГИ и благоприятным исходом (своевременными родами без реализации ВУИ) определялся повышенный уровень экспрессии гена НВО-1 мононуклеарными клетками периферической крови и эпителием цервикального канала: (3,95 ± 0,64) х 104 (группа контроля), (30,71 ± 4,1) х 104 (группа сравнения); (2,5 ± 0,15) х 105 (группа контроля), (3,14 ± 0,23) х 104 (группа сравнения) соответственно; р < 0,05 .
Была проанализирована структура патологии новорожденных, родившихся от пациенток, включенных в исследование. От 120 матерей родились живыми 118 новорожденных. В двух случаях отмечалась интра- и антенатальная гибель детей с экстремально низкой массой тела в результате глубокой недоношенности и асфиксии. В основной группе у 65 беременных с преждевременными родами родились недоношенные дети в сроке гестации 26-36 нед. У 20 детей от матерей данной группы были клинические
признаки ВУИ, состояние при рождении данных детей было тяжелое, обусловленное недоношенностью и внутриутробной инфекцией. В группе контроля у 30 беременных с нормально протекающей беременностью и своевременными родами дети родились доношенными. Все новорожденные данной группы родились в удовлетворительном состоянии без видимых пороков развития. В группе сравнения родились доношенные дети от 25 беременных с урогенитальной инфекцией. Преимущественно дети из основной группы требовали длительного лечения по поводу недоношенности и внутриутробной пневмонии с переводом на второй этап выхаживания: 70% (14) из 1а подгруппы с реализацией ВУИ и 42,2% (19) из 1б подгруппы без реализации ВУИ. Длительность пребывания в стационаре недоношенных новорожденных детей колебалась от 10 до 40 дней.
В 1а подгруппе основной группы недоношенных новорожденных с реализацией ВУИ от матерей с УГИ оценка состояния новорожденных по шкале Апгар на 1 и 5 минуте составляла соответственно 6,1 ± 0,4 и 6,4 ± 0,6 балла. Средняя масса таких детей при рождении была 1730 ± 134 г. В 1б подгруппе основной группы недоношенных детей без реализации ВУИ от матерей с УГИ оценка была соответственно 7,0 ± 0,3 и 7,75 ± 0,3 балла, средняя масса детей составила 2410 ± 103 г. В массо-ростовых показателях не было достоверных различий между группой сравнения и контрольной группой: в группе здоровых беременных оценка состояния новорожденных составила 8,5 ± 0,4 и 8,6 ± 0,38 балла, средняя масса -3430 ± 148 г; в группе сравнения оценка по шкале Апгар была 7,7 ± 0,33 и 8,4 ± 0,36 балла, масса - 3590 ± 154 г.
Наличие признаков ВУИ было исследовано в основной группе у недоношенных детей от матерей с УГИ. При анализе течения раннего неонатального периода отмечена наибольшая частота реализации ВУИ (развитие внутриутробной пневмонии) в основной группе при преждевременных родах - 24,6% (16). Другие клинические проявления ВУИ у детей, рожденных матерями 1-й группы (кандидоз, энтероколит, кожно-геморрагический синдром и др.), отмечались примерно с одинаковой частотой, и нередко имело место сочетание двух и более признаков у одного ребенка.
Также у новорожденных от женщин основной группы чаще отмечались неспецифические клинические признаки, такие как отечный синдром (11%), гипербилирубинемия (18,5%), свидетельствующие о напряженном состоянии адаптационных механизмов в условиях отрицательного влияния инфекционного и гипоксического факторов. У 40% (26) детей от матерей основной группы отмечалось развитие гипоксического поражения ЦНС, у 20% отмечалось ВЖК различной степени. Достоверного различия недоношенных детей с СЗРП от матерей основной группы с УГИ и доношенных детей с СЗРП от матерей группы сравнения не отмечалось (4,6% и 4,0% соответственно).
Мы проводили клинико-иммунологические параллели между изменением уровня экспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета Т1_Я2 и Т1_Я4 клетками плаценты, эпителия цервикального канала и мононуклеарными клетками периферической крови женщин основной группы и наличием реализации ВУИ у их новорожденных. В этом же
*
-Г *
0
_1_
_1_
_1_
J
Здоровые УГИ/срочн.роды УГИ/прежд.роды Реализация ВУИ беременные (группа (основная (основная
(группа контроля) сравнения) подгруппа 1б) подгруппа 1а)
Т1_Р2
Т1.В4
Рис. 7. Экспрессия генов Toll-подобных рецепторов клетками плаценты при преждевременных родах и ВУИ.
* - уровень значимости по критерию Манна-Уитни, р < 0,05 по сравнению с группой контроля. По оси ординат - отношение показателя экспрессии гена Т1_Я исследуемой группы по сравнению с контролем (показатель контроля принят за единицу).
контексте проведен анализ экспрессии гена противомик-робного пептида НВО-1, так как сигнальная функция ТЬЯв осуществляется путем индукции экспрессии дефенсинов, обладающих способностью уничтожать микроорганизмы и стимулировать фагоцитоз.
Анализ средних значений экспрессии генов ТЬЯэ клетками плаценты у пациенток основной группы показал достоверное и значительное их повышение при реализации внутриутробной инфекции новорожденных. Экспрессия гена Т1_Я2 при невынашивании беременности инфекционного ге-неза и реализации внутриутробной инфекции новорожденных в 7 раз превышала норму ((группа контроля - здоровые беременные - (59,19 ± 5,85) х 105 копий гена, группа с реализацией ВУИ - (420,48 ± 36,02) х 105; р < 0,05)), Т1_Я4 в 3 раза ((группа контроля - (0,59 ± 0,06) х 105, 1а подгруппа с реализацией ВУИ - (1,77 ± 0,28) х 105; р < 0,05)) (рис. 7).
Экспрессия гена Т1_Я2 эпителием цервикального канала при реализации ВУИ возрастала в 30 раз ((группа контроля - здоровые беременные - (1,87 ± 0,35) х 105 копий гена, 1а подгруппа - с реализацией ВУИ - (59,14 ± 9,43) х 105; р < 0,05)) (рис. 5). При изучении экспрессии гена Т1_Я4 эпителием цервикального канала у группы беременных с реализацией ВУИ оказалось, что уровень экспрессии превышал контрольный в 3,5 раза.
У женщин, родивших детей с признаками ВУИ, уровень экспрессии гена НВО-1 уменьшался, более выраженное изменение отмечалось в плаценте - в 3,24 раза по сравнению с нормой ((группа контроля - здоровые беременные -(5,69 ± 0,59) х 104 копий гена, 1а подгруппа - с реализацией ВУИ - (1,76 ± 0,22) х 104; р < 0,05)).
Итак, по отношению к НВО-1 установлена обратная зависимость - достоверное снижение значений экспрессии гена эпителиальными клетками цервикального канала и клетками плаценты у беременных с невынашиванием беременности и реализацией ВУИ новорожденных (рис. 6, 8).
Экспрессия ТЬЯэ при данных осложнениях, наоборот, резко возрастает. В группе сравнения при урогенитальной инфекции и благоприятном исходе беременности у беременных женщин наблюдается увеличение уровня экспрессии гена НВО-1, реализации ВУИ у их новорожденных не наблюдалось. Это, по-видимому, можно объяснить неполноценностью механизмов противомикробной защиты на границе «мать-плод», следствием чего и является распространение инфекции.
Таким образом, можно предположить, что иммуногенети-ческие особенности могут приводить к неполноценности системы врожденного иммунитета как одного из основных факторов защиты от инфекции в системе «мать-плод». Изучение рецепторов сигнальной трансдукции ТЬЯэ в цепи: ли-ганд (патоген) - рецептор - сигнал - клеточный ответ - позволяет по-новому осмыслить функциональное значение врожденного иммунитета при беременности.
Нами приведены результаты изучения показателей врожденного иммунитета в норме у беременных, а также убедительные данные о То11-опосредованной патологической гиперактивации врожденного иммунитета при инфекции у беременных, которая является причиной, приводящей к невынашиванию беременности, активации внутриутробной инфекции и другим осложнениям. Показано, что ТЬЯэ могут служить маркерами осложнений беременности, а также потенциальной мишенью для новых терапевтических вмешательств.
Сочетание повышенной экспрессии гена Т1_Я2 и недостаточной экспрессии гена НВО-1 является чувствительным тестом, позволяющим выделить группу риска по возникновению преждевременных родов. Дисбаланс параметров врожденного иммунитета наблюдался при реализации ВУИ.
Исследование параметров врожденного иммунитета на ранних сроках беременности позволяет прогнозировать вероятность развития данных осложнений и своевременно назначать и проводить корригирующую терапию.
° 6,0
X
га 5,5
5,0 4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0
Здоровые беременные (группа контроля)
Клетки плаценты
ВУИ
(основная подгруппа 1а)
Мононуклеарные клетки периферической крови
Рис. 8. Экспрессия гена HBD-1 клетками плаценты и мононукле-арными клетками периферической крови при ВУИ.
* - уровень значимости по критерию Манна-Уитни, р < 0,05 по сравнению с группой контроля.
*
*
*
0
*
Литература
1. Протоколы диагностики, лечения и профилактики внутриутробных инфекций у новорожденных детей / Под ред. Н.Н.Володина. - М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. - С.7-9.
2. Кулаков В.И., Гуртовой Б.Л., Анкирская А.С., Антонов А.Г. Актуальные проблемы антимикробной терапии и профилактики инфекций в акушерстве, гинекологии и неонатологии // Акуш. и гин. - 2004. - №1. - С.3-6.
3. Серов В.Н., Тютюнник В.Л., Зубков В.В. и др. Перинатальные потери у беременных с инфекционными заболеваниями и плацентарной недостаточностью // Акуш. и гин. - 2002. - №3. - С.16-21.
4. Безнощенко Г.Б., Долгих Т.И., Кривчик Г.В. Внутриутробные инфекции (вопросы диагностики и врачебной тактики). - М.: Медицинская книга, 2003. - 88 с.
5. Гриноу А., Осборн Д., Сазерленд Ш. Врожденные, перинатальные и неона-тальные инфекции. - М.: Медицина, 2000. - 287 с.
6. Кан Н.Е. Современные технологии в диагностике и прогнозировании внутриутробных инфекций. Автореф. дис...д. м. н. - М., 2005.
7. Сидорова И.С. Внутриутробная инфекция: Ведение беременности, родов и послеродового периода. - М.: Медпресс, 2008. - С.65-70.
8. Сухих Г.Т, Ванько Л.В. Иммунология беременности. - М., 2003. - С.269-283.
9. Moffett A., Loke Y.W. The immunological paradox of pregnancy: a reappraisal // Placenta. - 2004. - №25. - P.1-8.
10. Fazelil A., Bruce C., Anumba D.O. Characterization of Toll-like receptors in the female reproductive tract in humans // Human Reprod. - 2005. - V.20(5). -P.1372-1378.
11. Guleria I., Pollard J.W. The Trophoblast Is a Component of the Innate Immune System during Pregnancy // Nat. Med. - 2000. - №6. - P.589-593.
12. Romero R. Novel aspects of neutrophil biology in human pregnancy // Am. J. Reprod. Immunol. - 2005. - №53. - P.275.
13. Schaefer T.M., Fahey J.V., Wright J.A. et al. First trimester trophoblast cells mount a potent antiviral response upon exposure to viral dsRNA // Am. J .Reprod. Immunol. - 2005. - №53. - P.299.
14. Ковальчук Л.В., Хорева М.В., Варивода А.С. Врожденные компоненты иммунитета: Toll-подобные рецепторы в норме и при иммунопатологии // ЖМЭИ. - 2005. - № 4. - C.96-104.
15. Medzhitov R., Janeway Jr C.A. Innate immunity // New Engl. J. Med. - 2000, Aug. - P.338-344.
16. Young S.L., Lyddon T.D., Jorgenson R.L., Misfeldt M.L. Expression of Toll-like receptors in human endometrial epithelial cells and cell lines // Am. J. Reprod. Immunol. - 2004. - №52. - P.67-73.
17. Abrahams V.M., Mor G. Toll-like receptors and their role in the trophoblast // Placenta. - 2005. - №26. - P.540-547.
18. Zhang D., Zhang G., Hayden M.S. et al. A Toll-like receptor that prevents infection by uropathogenic bacteria // Science. - 2004. - V.303. - P.1522-1526
19. Feng Y., Pan X., Huang N. et al. The human beta-defensins expression in female genital tract and pregnancy-related tissues. - Sichuan: Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban, 2003. - V.34(2). - P.217-219
Информация об авторах:
Ганковская Людмила Викторовна, доктор медицинских наук,
профессор кафедры иммунологии медико-биологического факультета
Российского государственного медицинского университета
Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1
Телефон: (495) 434-9000
E-mail: gan@rsmu.ru
Ковальчук Леонид Васильевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой иммунологии медико-биологического факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1 Телефон: (495) 434-9000 E-mail: lkov@rsmu.ru
Бахарева Ирина Викторовна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии Российского государственного медицинского университета Адрес: 117152, Москва, 4-й Вятский пер., 39 Телефон: (499) 613-6308 E-mail: iribahareva@mail.ru
Романовская Валентина Валерьевна, кандидат медицинских наук,
ассистент кафедры акушерства и гинекологии
Российского государственного медицинского университета
Адрес: 117152, Москва, 4-й Вятский пер., 39
Телефон: (499) 613-6308
E-mail: valentinaromano2005@yandex.ru
Ганковская Оксана Анатольевна, кандидат медицинских наук,
ведущий научный сотрудник НИИ вакцин и сывороток
им. И.И.Мечникова РАМН
Адрес: 115088, Москва, ул. 1-я Дубровская, 15
Телефон: (495) 674-8145
E-mail: oksgan@yandex.ru
