CC BY
29
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
инфекции, постановки диагноза до сероконверсии, обоснована необходимость слежения за структурой генотипов ВГС и динамикой ее изменения на региональном уровне для более точного установления связи случаев заболевания, определения путей передачи.
ПАТОГЕННЫЕ ВИДЫ BURKHOLDERIA КАК РЕЦИПИЕНТЫ ПЛАЗМИДЫ Rts1
Е.В. Молчанова
ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора
Высокая природная резистентность к антибактериальным препаратам Burkholderia pseudomallei, Burkholderia mallei, Burkholderia thailandensis и микроорганизмов cepacia-комплекса может быть обусловлена генами как хромосомной, так и плаз-мидной природы. Плазмиды широко распространены в природе и обеспечивают горизонтальный перенос детерминантов устойчивости к различным ингибирующим агентам. Исследование особенностей наследования и экспрессии генов анти-биотикорезистентности является важным этапом в изучении механизмов развития лекарственной устойчивости.
Ранее была показана способность буркхольдерий воспринимать посредством конъюгации некоторые плазмиды Inc Р-1 группы. Целью данной работы являлось изучение возможности конъюгационной передачи плазмиды Rtsl IncT группы, детерминирующей резистентность к канамицину и несущей транспозон Tn9, обуславливающий достаточную устойчивость к хлорамфениколу, что создавало условия для селекции трансконъюгантов изучаемых штаммов.
В ходе исследования были получены трансконъ-юганты всех указанных выше видов буркхольдерий с возросшей устойчивостью к хлорамфениколу в 5 и более раз. Присутствие плазмиды приводило к морфологическим изменениям колоний, что отражалось в переходе в другие морфотипы (R/S). При этом транспозонные варианты характеризовались перекрестной устойчивостью к офлоксацину и ципроф-локсацину. Определение цитопатогенности (для растения Peireskia aculeata) и вирулентности, LD50 (для золотистых хомячков) штаммов, наследовавших плазмиду, показало снижение данных показателей на 1—2 порядка. В результате культивирования полученных вариантов при непермессивных условиях были выделены ауксотрофные мутанты, зависимые от пролина и/или глутамина, что можно было расценивать как признак включения Tn9 в хромосому.
Таким образом, показано, что плазмида Rts1::Tn9 так же, как и плазмиды Р-1 группы совместимости, может быть использована в генетических исследованиях представителей рода Burkholderia.
КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ ПЕРИТОНЕАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ БЕЛЫХ МЫШЕЙ, ИНФИЦИРОВАННЫХ YERSINIA PESTIS C РАЗНЫМ ПЛАЗМИДНЫМ СОСТАВОМ
Г.Б. Мухтургин, С.А. Витязева, В.В. Войткова
ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора
Возбудитель чумы — Yersinia pestis — одна из наиболее инвазивных бактерий. Патогенность чумного микроба является биологически сложным полиде-терминантным признаком, находящимся под контро-
лем хромосомных и плазмидных генов. Способность Y. pestis к ингибированию механизмов иммунологической защиты организма и паразитированию в фагоцитах многие авторы связывают, в том числе, с наличием у чумного микроба плазмид вирулентности.
Цель работы — изучить динамику изменения субпопуляционного состава клеток перитонеальной жидкости белых мышей на ранних сроках инфекционного процесса, вызванного чумным микробом с разными фенотипическими свойствами.
Исследования проведены на 175 беспородных (18— 20 г) белых мышах обоих полов. В качестве инфекционного агента использовали: Y. pestis subsp. pestis И-2638 (pYP+pYV+pTP33+pYT+), Y pestis И-3479 faYP+, pYT+, pTP33+), Y pestis И-3480 (pYT+, pTP33+), Y pestis subsp. altaica И-2359 feYP+, pYV+, pYT+), Y. pestis subsp. altaica И-2948 (pYV+, pYT+), Y pestis И-2948/3 (pYT+).
Забор перитонеальной жидкости проводили через 30, 60, 90, 120 и 180 мин. Количественное содержание клеток оценивали методом морфологического исследования перитонеальной жидкости в мазках, окрашенных стандартным способом с применением компьютерной программы «Motic Images Plus» (версия 2).
Показано, что наиболее выраженные изменения показателей клеточного состава перитонеальной жидкости экспериментальных животных зарегистрированы у белых мышей, инфицированных Y. pestis subsp. pestis И-2638 и Y. pestis subsp. altaica И-2948. Детальный анализ показал, что в случае применения Y. pestis subsp. pestis И-2638, в отличие от других исследованных штаммов, в перитонеальной жидкости выявлены незрелые и атипичные формы тучных клеток с низким функциональным потенциалом, что указывает на развитие компенсаторно-приспособительной реакции в ответ на введение патогена и может быть связано с наличием в геноме плазмиды рТР33.
Таким образом, морфофункциональная характеристика тучных клеток отражает общую адаптивную перестройку организма в ответ на введение антигена и может служить диагностическим критерием тяжести болезни при инфекционном процессе, вызванном Y. pestis.
ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА ИЗ СЫРЬЯ COLURIA GEOIDES (ROSACEAE) ПРИ СТАФИЛОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
Н.П. Неделькина1, С.В. Дутова1, Ю.В. Ростовцева1, М.Р. Карпова2
1ФГБОУ ВПО Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова, г. Абакан
2ГБОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Важную роль в инфекционной патологии человека играет золотистый стафилококк, практически в 100% случаев его обнаруживают при гнойных заболеваниях мягких тканей и кожных покровов. Лечебный эффект настойки из сырья Coluria geoides (Rosaceae) при стафилококковой инфекции было установлено нами ранее (Дутова и др., 2012). Целью настоящего исследования явилась оценка профилактического действия этого препарата на экспериментальной модели генерализованной стафилококковой инфекции.
Стафилококковую инфекцию моделировали вну-трибрюшинным однократным введением S. Œureus штамма 209Р в дозе, равной '/2 от LD50 (1 млрд клеток) белым 2-месячным аутбредным мышам обоего пола.
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Животные экспериментальной группы получали фитопрепарат в течение 5 дней до заражения (50 мг/ кг веса, в желудок). Забор материала осуществляли периодически, определяли динамику освобождения организма животных от возбудителя, гематологические показатели, активность фагоцитоза. Результаты обрабатывали с использованием IBM SPSS Statistics 19, независимые группы сравнивали с помощью непараметрического U-теста Манна—Уитни (р < 0,05).
Со 2-х по 10-е сутки после заражения у животных обеих групп наблюдали клинические признаки генерализованной стафилококковой инфекции. Возбудитель определялся в органах животных контрольной группы до 20 суток наблюдения, в группе, животных, получавших фитопрепарат — до 15 суток. Доля животных с положительной высеваемостью стафилококков в опытной группе была достоверно меньше, чем в контрольной: на 7-е сутки инфекционного процесса S. аureus высевался из печени и селезенки у 28,6% мышей контрольной группы и у 14,3% мышей опытной группы, из почек — у 35,7 и 28,6% животных соответственно. Лейкоцитоз регистрировали у животных обеих групп на 5-е сутки после заражения (14,18—14,30 х 109/л), в остальные дни абсолютное число лейкоцитов крови у животных контрольной и экспериментальной групп было в норме и различалось недостоверно. Лейкоцитоз у животных развивался за счет увеличения доли ней-трофилов, причем в контроле на 5-е сутки отмечали гиперрегенеративный сдвиг лейкоцитарной формулы влево (индекс ядерного сдвига составил 0,94). В опытной группе регистрировали менее выраженный сдвиг влево (индекс ядерного сдвига составил 0,25). Фагоцитарная активность нейтрофилов у экспериментальных животных была достоверно выше аналогичных показателей контрольных мышей в начале и в конце инфекции, в период с 5-х по 10-е сутки отличалась незначительно.
Таким образом, препарат C. geoides оказывает профилактическое действие при стафилококковой инфекции: ускоряет элиминацию возбудителя и стимулирует фагоцитоз нейтрофилов, существенно не влияя на процессы иммунопролиферации.
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТРЕПТОКОККОВ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ВО ВЬЕТНАМЕ
А.Г. Носик, Ю.Ю. Ильясов
ФГБУ НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург
Стрептококки являются одними из самых распространенных возбудителей инфекционных заболеваний человека. При этом инфекционные процессы, вызываемые ими в условиях тропиков, как правило, протекают тяжелее и стремительнее. В настоящее время данные об особенностях штаммов стрептококков во Вьетнаме практически отсутствуют, поэтому целью данного исследования было выделение стрептококков групп А, С, G у детей младшего школьного возраста и их характеристика с использованием молекулярно-эпидемиологических и генетических подходов.
В результате микробиологического исследования материала с задней стенки глотки и миндалин у 659 детей выделено 46 штаммов стрептококков группы А (GAS), 2 штамма стрептококков группы С (GCS)
и 44 штамма стрептококков группы G (GGS). С помощью разработанного метода ПЦР-идентификации на основе видоспецифичной области гена cpn60, кодирующего белок теплового шока HSP60, определена их принадлежность к трем видам — S. pyogenes (46 штаммов — GAS), S. anginosus (1 штамм — GCS, 38 штаммов — GGC), S. dysgalactiae subsp. equisimilis (1 штамм — GCS, 6 штаммов — GGS). Штаммы S. anginosus, S. dysgalactiae subsp. equisimilis проанализированы на наличие генов вирулентности scpС/G, lmb, nga, slo, кодирующих факторы патогенности S. pyogenes. Так, гены scpC/G и nga, кодирующие C5а пептидазу и НАД-гликогидролазу, соответственно, были обнаружены у 100% штаммов S. dysgalactiae subsp. equisimilis, но отсутствовали у S. anginosus. Гены вирулентности lmb и slo, кодирующие белок, связывающий ламинин и стрептолизин O соответственно, были обнаружены у всех штаммов S. dysgalactiae subsp. equisimilis, и лишь у 66,7 и 40,0% S. anginosus. Учитывая, что пары генов scpC/G-lmb; nga-slo являются сцепленными у S. pyogenes, эти данные доказывают определенные генетические перестройки у вьетнамских штаммов S. anginosus.
С целью определения доминирующих emm-типов проведено ешш-типирование штаммов S. pyogenes. Были выявлены следующие генотипы: emm4.0, emm12.0, emm44.0, emm58.0 и другие, в том числе, редко встречающиеся emm104.0 и emm109.0.
Для установления степени генетического родства штаммы S. pyogenes были проанализированы методом электрофореза в пульсирующем электрическом поле. Анализ данных показал высокую степень генетической гетерогенности и специфические генетические линии, характерные для Вьетнамского региона.
Исследования поддержаны грантом РФФИ № 13-04-01864а.
БОКАВИРУС В СТРУКТУРЕ ОРВИ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА, ИНФИЦИРОВАННЫХ ГЕРПЕСВИРУСАМИ
Н.В. Околышева, Л.Б. Кистенева2, А.Г. Боковой1, Е.Н. Выжлова3, В.В. Малиновская3, А.П. Фисенко1
1 Центральная клиническая больница с поликлиникой Управления делами Президента РФ, Москва
2 ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского МЗ РФ, Москва
3 ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ, Москва.
Цель: изучить частоту встречаемости бокавиру-са и его влияние на клеточный иммунитет у детей раннего возраста с персистирующей герпесвирус-ной инфекцией в период разгара ОРВИ. Материалы и методы: обследованы 22 ребенка от 1 года до 3-х лет, поступивших в инфекционное отделение ЦКБ с признаками ОРВИ: клинические анализы крови и мочи; серологическое исследование крови (IgM и IgG к вирусу Эпштейна—Барр, цитомегаловиру-су и вирусу герпеса 6 типа (ИФА); исследование крови, слюны, мочи на наличие ДНК ЭБВ, ЦМВ и ВГ-6 (ПЦР), исследование крови на клеточный иммунитет (субпопуляции лимфоцитов), мазок из ротоглотки на ДНК и РНК респираторных вирусов (ПЦР).
Результаты. У 10 детей из 22 (45%) (1 группа), поступавших в стационар с признаками ОРВИ верифицирована бокавирусная инфекция (обнаружение РНК бокавируса в мазках из носоглотки
