CC BY
60
Parasitoses of circus and domestic rabbits in the Moscow Region and the Republic of Moldova. Pasechnic V.E. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Helminthology.
Summary. Totally 565 rabbits were examined using coproovoscopy and coprolarvoscopy. In 4 of 5 circus rabbits one recorded Trichostrongylus retortaeformis, Eimeria magna; in rabbits from the Moscow Region - Passalurus ambigius, T. retortaeformis, Eimeria magna, E. perforans and finally in rabbits from the Republic of Moldova - T. retortaeformis, P. ambigius, Trichocephalus leporis, E. magna, E. media, E. stiedae and E. perforans.
ПРИМЕНЕНИЕ МИКРОЯДЕРНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛАСТОГЕННЫХ И АНЕУГЕННЫХ НАРУШЕНИЙ В КОСТНОМ МОЗГЕ САМОК МЫШЕЙ И КЛЕТКАХ ИХ ЭМБРИОНОВ
ПРИ ТРИХИНЕЛЛЕЗЕ
Пашинская Е.С.
УО «Витебский государственный медицинский университет», Беларусь
Введение. Ранее при использовании микроядерного анализа В.Я. Бекишем было установлено, что Himenolepis nana, Ascaris suum, Trichinella spiralis, Toxocara canis и их метаболиты обладают мутагенным воздействием на клетки костного мозга и семенников мышей самцов линии СВА [1]. Однако до сих пор микроядерный тест не применяется при изучении кластогенных и анеугенных нарушений в эмбриональных клетках при трихинеллезе.
Цель. Изучить кластогенное и анеугенное нарушения в костном мозге самок мышей и клетках их эмбрионов при трихинеллезе.
Материалы и методы. За основу исследования возможных кластогенных и анеугенных нарушений нами был взят метод микроядерного анализа, разработанный ранее В.Я. Бекишем в нашей модификации [3]. Исследование проведено на 80 самках и 40 самцах белых беспородных мышей. Скрещивание проводилось в соотношении 2 самки к 1 самцу на протяжении 24 часов. Беременность определяли по наличию сперматозоидов в мазке из влагалища. Беременные самки были разделены на контрольную и опытную группы, которые исследовались на 4-ый, 7-ой, 12-ый и 14-ый дни беременности соответственно. Контрольной группе животных вводили внутрижелудочно 0,2 мл крахмального геля, а подопытных самок заражали инвазионной культурой T.spiralis в дозе 20 личинок на 1 г массы тела животного в 1 -ый день беременности.
На 4-ый, 7-ой, 12-ый и 14-ый дни беременности производили забой самок мышей контрольной и опытной групп, выделяли бедренные кости и матки с эмбрионами. От каждого животного брали по 2 жизнеспособных эмбриона и помещали в заранее пронумерованные чашки Петри. Образцы измельчали посредством гомогенизатора Поттера до получения однородной
387
массы. К полученным суспензиям добавляли по 5 мл среды RPMI-1640 (pH=7,2) и переносили в первый ряд пробирок с V=10 мл соответственно нумерации для осаждения крупных частиц. Далее верхний слой гомогенной массы без крупных фрагментов помещали во 2-й ряд пробирок соответственно нумерации и доводили объем до 5 мл с помощью среды RPMI-1640. Путем десятиминутного центрифугирования при 1100 об/мин и температуре 8 С° производили отмывку гомогената. После первой отмывки супернатант удаляли полностью, добавляли по 5 мл среды RPMI-1640 (pH=7,2) в каждую пробирку и ресуспензировали осадок. Далее проводили второе центрифугирование. После окончания 2-го центрифугирования оставляли в пробирке 0,5 мл полученной взвеси, которую тщательно перемешивали. Затем с помощью вариопипетки на пронумерованные предметные стекла наносили 20 мкл суспензии и делали мазок с использованием стекла со сточенным под углом краем. Препараты высушивали в стандартных условиях лаборатории.
Для фиксации препаратов использовали раствор Мая-Грюнвальда, а окраску фиксированных микропрепаратов производили по Паппенгейму [2]. Полученные микропрепараты промывали в дистиллированной воде и высушивали в течение 24 часов при комнатной температуре.
Далее проводили анализ на микроскопе Leica DM 750 (при увеличении 1000 х). Просчитывалось по 1000 клеток с целыми оболочками на стадии интерфазы. Так как эритроциты в костном мозге находятся на разных стадиях созревания, микроядра в поли- и нормохроматофильных эритроцитах анализировались отдельно. Так же производился расчет процентного соотношения крупных/средних/мелких микроядер.
Результаты обрабатывали статистически с применением программы Excel 2002. Был произведен расчет средней арифметической и ее стандартного отклонения (M+SD). Достоверность выявленных различий определяли по t-критерию Стьюдента.
Результаты. При проведении микроядерного анализа в клетках костного мозга контрольной группы самок мышей количество микроядер в полихроматофильных эритроцитах на 4-й день беременности составило 0,90+0,74 (% соотн. 0/25/75), на 7-ой день - 1,2+0,63 (% соотн. 0/25/75), на 12ый день - 0,7+0,67 (% соотн. 0/0/100), на 14-ый день - 0,9+0,74 (% соотн. 0/22/78). В нормохроматофильных эритроцитах костного мозга самок контрольной группы микроядер обнаружено не было.
При анализе результатов животных опытных групп достоверное увеличение микроядер в полихроматофильных эритроцитах косного мозга самок выявлено при исследовании: на 4-ый день беременности - в 2, 1 раза (% соотн. 5/10/85), на 12-ый день беременности - в 3,57 раза (% соотн. 16/28/56) и на 14-ый день - в 3,3 раза (% соотн. 13/33/54). Достоверное увеличение количества микроядер в нормохроматофильных эритроцитах костного мозга обнаружено на 12-ый день беременности - 0,5+0,53 и на 14-день беременности - 0,7+0,48 соответственно.
388
У эмбрионов контрольной группы количество клеток с микроядрами составило 1,2+0,79 (% соотн. 0/25/75) на 4-ый день беременности, на 7-ой день беременности - 0,8+0,79 (% соотн. 0/29/71), на 12-день беременности -1,3+0,82 (% соотн. 15/23/62) и на 14-ый день беременности - 0,9+0,57 (% соотн. 0/22/78).
Результаты опытных групп животных показали, что достоверное изменение количества клеток с микроядрами у эмбрионов наблюдается на 14ый день беременности, что в 1,88 раза (% соотн. 12/30/58) превышает контрольные показатели.
Заключение. Полученные результаты показали, что метаболиты T. spiralis обладают анеугенным и кластогенным воздействиями на костный мозг самок мышей. Это характеризует достоверное увеличение количества микроядер в полихроматофильных эритроцитах в костном мозге самок на 4ый, 12-ый и на 14-ый дни в 2,1-3,57 раз. Наблюдается тенденция к увеличению размеров микроядер до средних и крупных. Достоверное увеличение количества микроядер в нормохроматофильных эритроцитах костного мозга мышей выявлено на 12-ый день беременности - 0,5+0,53 и на 14-день беременности - 0,7+0,48 соответственно.
Достоверное изменение количества клеток с микроядрами у эмбрионов наблюдается на 14-ый день беременности, что в 1,88 раза (% соотн. 12/30/58) превышает контрольные показатели.
Полученные результаты могут свидетельствовать о том, что трихинеллы и их метаболиты обладают анеугенным и кластогенным воздействиями на соматические клетки беременных самок мышей, которое характеризуется повышением числа поли- и нормохроматофильных эритроцитов с микроядрами, а так же увеличением их размеров до средних и крупных. Менее значимые цитогенетические изменения, обнаруженные в клетках эмбрионов на миграционной стадии трихинеллеза, можно объяснить воздействием плацентарного барьера несколько уменьшающего повреждающее действие трихинелл и их метаболитов.
Литература: 1. Бекиш В.Я. Состояние генома хозяина при
гельминтозах / В.Я. Бекиш, О.-Я.Л. Бекиш // Витебск.- Изд. ВГМУ. - 2004. -С. 40-43. 2. Меньшиков В. В. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / В. В. Меньшиков, Л. Н. Делекторская, Р. П. Золотницкая и др.; Под ред. В. В. Меньшикова._- М.: Медицина, 1987, - 368с.: ил._3. Пашинская Е.С., Применение микроядерного теста для определения кластогенных и анеугенных нарушений в эмбриональных клетках / Е.С. Пашинская, В.В. Побяржин//Достижения фундаментальной, клинической, медицины и фармации (Матер. 66-й научной сессии УО “ВГМУ”, под ред. В.П. Дейкало). -2011, Витебск. - С. 444-446.
Application of micronucleus test for determination of clastogenic and aneugenic damages in bone morrow of mice females and their embryonic cells at Trichinella spiralis infection. Pashinskaya E.S. Vitebsk State Medical University.
389
Summary. T. spiralis and their metabolites showed clastogenic and aneugenic effects on somatic cells of pregnant mice females. Those effects manifested in increase of poly- and normochromatophylic erythrocytes with micronuclei in dependence on gestation stage. The poor cytogenetic alterations in embryonic cells were seen on migration stage of T. spiralis development what could be explained by action of placental barrier which weakened the harmful action of T. spiralis larval.
ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЙ И РАДИОЭКОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ МЛЕКОПИТАЮЩИХ В МЕСТАХ РАДИОАКТИВНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ
Пельгунов А.Н.
Центр паразитологии Института проблем экологии и эволюции
им. А.Н. Северцова РАН
Введение. За время существования атомной энергетики произошло более 150 аварий различных типов, среди которых Чернобыльская стала самой крупной экологической катастрофой, как по количеству выброшенных в окружающую среду радиоактивных веществ, так и по площади загрязненной территории [1]. В результате загрязнения радионуклидами обширных территорий, они были выведены из сферы хозяйственной деятельности. В связи с этим возникло много проблем - экологических, социальных, экономических и других, среди которых приоритетной остается реабилитация таких территорий и возможность их использования
Проведенные к настоящему времени исследования убедительно показывают значительное воздействие радиоактивного загрязнения на биоценозы и его элементы.
Материалы и методы. Материал нами был собран в зоне аварии Чернобыльской АЭС в трех местах исследований: Белоруссия (Могилевская область), Украина (30-км зона ЧАЭС) и Россия (Брянская область). Все три места работ располагаются в Припятско-Деснинском полесье
Объектами наших исследований были паразиты грызунов и охотничье -промысловых копытных [2, 3].
Результаты исследований.
Нематоды грызунов. Под действием хронического облучения, в первую очередь изменяется иммунологический статус популяции животных. Это приводит к увеличению зараженность животных паразитами и в частности нематодами. Паразитарная нагрузка на популяции хозяина возрастает не только за счет увеличения количества зараженных животных, но и за счет значительного увеличения интенсивности инвазии;
Слабым звеном при радиоактивном загрязнении биоценозов в данных паразитарных системах является хозяин.
390
