CC BY
42
УДК 581.527.4:57.085.2
DOI: 10.20310/1810-0198-2017-22-5-965-969
ПРИМЕНЕНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЙ В РАЗМНОЖЕНИИ И СОХРАНЕНИИ РЕДКИХ ЭНДЕМИКОВ ФЛОРЫ КРЫМА
© И.В. Митрофанова, О.В. Митрофанова, А.Р. Никифоров, Н.П. Лесникова-Седошенко
Никитский ботанический сад - Национальный научный центр РАН 298648, Российская Федерация, Республика Крым, г. Ялта, пгт. Никита, ул. Никитский спуск, 52
E-mail: [email protected]
Впервые в Никитском ботаническом саду - Национальном научном центре РАН проводятся биотехнологические исследования по изучению особенностей развития некоторых видов реликтовых эндемиков флоры Крыма и их сохранению в условиях in vitro. Размножение растений реликтовых эндемиков в культуре существенно расширяет возможности проведения комплексных исследований в различных направлениях: для изучения феномена длительного существования в условиях малочисленности и изоляции популяций, создания генобанка in vitro семян и проростков для их реинтродукции, декоративного использования. Показана возможность формирования полноценных проростков из семян Heracleum ligusticifolium M. Bieb. (Apiaceae), Lagoseris callicephala Juz., L. purpurea L. (Asteraceae), Silene jailensis N.I. Rubtzov (Caryophyllaceae), Valerianella falconida N. Schvedtsch. (Valerianaceae) на питательных средах Monnier (1973) и Murashige, Skoog (1962). Изучено влияние регуляторов роста растений и их концентраций на морфогенетический потенциал органов и тканей проростков. Показано положительное влияние БАП на регенерационный потенциал изучаемых видов при совместном применении с ИМК и ГК3. Содержание в среде МС 0,05-0,1 мг/л БАП, 0,1 мг/л ИМК и 0,1 мг/л ГК3 увеличивало рост дополнительных побегов. Высокая регенерационная способность отмечена у S. jailensis, L. callicephala, L. purpurea и H. ligusticifolium.
Ключевые слова: биотехнологические методы; регенерация микропобегов; регуляторы роста; редкие виды
Россия обладает богатейшими генетическими ресурсами растений. Ботанические сады во всем мире, как в России, так и за рубежом, занимаются не только интродукцией и размножением ценных и редких видов растений, но и сохранением их генетического биоразнообразия для последующих поколений. В последние годы усилилось антропогенное воздействие, участились экологические и техногенные катастрофы, происходит изменение климата. Все это в конечном итоге приводит к обеднению видового состава флоры, сокращению ареалов редких видов и уничтожению растительного генофонда. Стратегия сохранения видов и сортов растений определяется рядом программных документов, таких как «Конвенция о биологическом разнообразии» [1], «Global Strategy Plant Conservation» [2], «Международная программа ботанических садов по охране растений» [3]. Координатором работ большинства научных центров по сохранению культур является Международный институт генетических ресурсов растений IPGRI в Италии.
Реликтовые эндемики представляют собой генетически оригинальную биоэкологическую группу. Реликтовыми эндемиками флоры Горного Крыма являются Heracleum ligusticifolium M. Bieb. (Apiaceae), Lagoseris callicephala Juz., L. purpurea L. (Asteraceae), Silene jailensis N.I. Rubtzov (Caryophyllaceae), Valerianella falconida N. Schvedtsch. (Valerianaceae). Популяции указанных видов труднодоступны и не выходят за пределы литогенных ландшафтов, определяемых в ботанической литературе как «скалы и осыпи» [4]. Это об-
стоятельство затрудняет изучение популяций и отдельных растений данных видов.
Современные биотехнологии позволяют осуществлять размножение и сохранение ценных редких и исчезающих видов растений, в том числе и реликтовых эндемиков флоры Крыма, что является составной частью концепции сохранения биоразнообразия растительного мира [5-8]. В связи с этим нами впервые начаты биотехнологические исследования особенностей морфогенеза in vitro реликтовых эндемиков флоры Горного Крыма [9-10]. Микроразмножение in vitro таких видов существенно расширяет возможности проведения комплексных исследований в различных направлениях: изучение феномена длительного существования в условиях малочисленности и изоляции популяций, создание генобанка in vitro ценных видов.
Целью данного исследования было изучить регене-рационные способности органов и тканей и разработать отдельные этапы клонального микроразмножения реликтовых эндемиков флоры Горного Крыма.
Исследования выполняли в лаборатории биотехнологии и вирусологии растений ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад -Национальный научный центр РАН».
В качестве объектов исследования использовали органы и ткани видов H. ligusticifolium, L. callicephala, L. purpurea, S. jailensis, V. falconida, произрастающих ex situ. Все эти виды внесены в Красную книгу Республики Крым и относятся к 3 категории редкости [11]. В работе придерживались общепринятых и разработан-
ных в лаборатории биотехнологии и вирусологии растений методов [12-13]. При получении асептической культуры семян применяли последовательную ступенчатую стерилизацию 70 % этанолом в течение 1 минуты, 0,5 % раствором «Дез ТАБ» в течение 10 минут и 0,4 % раствором антибиотика цефотаксим в течение 10 минут. После каждого реагента экспланты промывали 3 раза в стерильной дистиллированной воде и затем помещали на безгормональные среды МС (Murashige, Skoog, 1962) [14] и Монье (Monnier, 1973) [15]. Для индукции морфогенеза и регенерации микропобегов из апикальной части и сегментов полученных проростков в среду MC вводили 0,05-0,2 мг/л 6-бензиламино-пурина (БАП), 0,01-0,2 мг/л а-нафтилуксусной кислоты (НУК) и 0,1 мг/л гибберелловой кислоты (ГК3). В качестве контроля использовали среду без регуляторов роста. Все среды содержали 30 г/л сахарозы и 9 г/л агара. Перед автоклавированием рН среды доводили до 5,6-5,7 с помощью 0,1 н. раствора HCl или 0,1 н. раствора КОН. Питательные среды автоклавировали при температуре 120 °С в течение 5 минут в стерилизаторе LAC 5060S («DAIHAN LABTECH», Южная Корея). Все работы проводили в асептических условиях бокса биологической безопасности SC2 («ESCO», Сингапур). Субкультивирование эксплантов выполняли через 3-4 недели. Культуральные сосуды содержали в специальном помещении с 16-часовым фотопериодом, интенсивностью освещения 37,5 мкМ м-2 с-1 при температуре 21 ± 2 °С или в камере моделирования климатических условий для роста растений MLR-352-PE («Panasonic», Япония). Опыты повторяли трижды в 10-кратной повторности. Обработку полученных данных осуществляли с помощью программы STATISTICA for Windows, 6.0 (StatSoft, Inc. 1984-2001).
В результате проведенных исследований разработаны этапы клонального микроразмножения 5 видов реликтовых эндемиков флоры Крыма: H. ligusticifolium, L. callicephala, L. purpurea, S. jailensis, V. falconida. Прорастание семян и получение полноценных проростков изучаемых видов отмечали на питательных средах Монье [15] и Мурасиге и Скуга [14] на 4-60 сутки культивирования, в зависимости от генотипа [12-13]. В опытах по индукции морфогенеза в условиях in vitro в качестве регулятора роста использовали БАП, являющийся наиболее эффективным цитокинином при микроразмножении растений. Изучение влияния БАП на регенерационный потенциал этих видов показало положительное воздействие совместного применения БАП, ИМК и ГК3. Введение в среду МС 0,05-0,1 мг/л БАП, 0,1 мг/л ИМК и 0,1 мг/л ГК3 значительно увели-
чивало рост дополнительных побегов. Через 12-28 суток в базальной части таких эксплантов происходило формирование адвентивных почек, микропобегов и микророзеток. При этом полученные данные показали различия коэффициента размножения в зависимости от генотипа. Высокая регенерационная способность отмечена у вида S. jailensis. Выращивание in vitro сегментов проростка H. ligusticifolium позволило выявить эндогенный признак этого вида: способность к репродуктивной функции корня и побегов с листьями. Так, через 2-6 субкультивирований коэффициент размножения достигал у видов: S. jailensis 1:30-1:36, L. callicephala и L. purpurea - 1:18-1:22, H. ligusticifolium - 1:81:20, V. falconida - 1:2 (рис. 1).
В случае повышения концентрации БАП до 0,51,0 мг/л отмечали формирование каллуса, оводнение у образующихся микророзеток и микропобегов и их нек-ротизацию. На безгормональной среде МС (контроль) образования дополнительных побегов и розеток не наблюдали.
В условиях in vitro для исследуемых видов характерно развитие слабой корневой системы (в виде тонких нитчатых корней), что значительно затрудняет их преадаптацию ex vitro. В настоящее время нами начата разработка специальных субстратов для адаптации регенерантов в асептических условиях.
Таким образом, разработаны отдельные этапы кло-нального размножения реликтовых эндемиков флоры Крыма и отмечено, что применение методов культуры органов и тканей является оптимальным условием размножения H. ligusticifolium, L. callicephala, L. purpurea, S. jailensis, V. falconid и их сохранения в виде генобанка in vitro с последующей репатриацией в природу.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Convention on Biological Diversity. URL: www.plant-conservation-report-en.pdf (accessed: 10.04.2017).
2. Global Strategy Plant Conservation. URL: www.botanicgar-dens/ie/gspc/pdfs/gspc.pdf (accessed: 10.04.2017).
3. Международная программа ботанических садов по охране растений / пер. с англ. Ю. Лисиной; под ред. И. Смирнова, В. Тихоновой. М., 2000. 57 с.
4. Шхагапсоев С.Х. Географический анализ скально-осыпной флоры Кабардино-Балкарского высокогорного государственного заповедника // Горные регионы: природа и проблема рационального использования ресурсов. Орджоникидзе, 1987. С. 51-56.
5. Митрофанова И.В. Биотехнологии оздоровления, размножения и сохранения садовых культур // Биотехнология как инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира (физиолого-биохимические, эмбриологические, генетические и правовые аспекты): материалы 7 Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 30-летию отдела биотехнологии растений Никитского ботанического сада. Симферополь: ИТ «АРИАЛ», 2016. С. 10.
6. Молканова О.И., Васильева О.Г., Коновалова Л.Н. Научные основы сохранения и устойчивого воспроизводства генофонда растений в культуре in vitro // Вестник Удмуртского университета. 2015. Т. 25. Вып. 2. С. 95-100.
7. Новикова Т.И., Набиева А.Ю., Полубоярова Т.В. Сохранение редких и полезных растений в коллекции in vitro Центрального сибирского ботанического сада // Вестник Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Вестник ВОГС). 2008. Т. 12. № 4. С. 564-572.
8. Cruz-Cruz C.A., Gonzälez-Arnao M.T., Engelmann F. Biotechnology and conservation of plant biodiversity // Resources. 2013. V. 2. P. 7395. DOI: 10.3390/resources2020073.
9. Митрофанова И.В., Митрофанова О.В., Никифоров А.Р., Лесни-кова-Седошенко Н.П., Иванова Н.Н., Челомбит С.В., Жданова И.В. Особенности введения в условия in vitro некоторых реликтовых эндемиков флоры Горного Крыма // Бюллетень ГНБС. 2016. Вып. 121. C. 62-69.
10. Митрофанова И.В., Митрофанова О.В., Никифоров А.Р., Лесни-кова-Седошенко Н.П., Челомбит С.В. Биотехнологические особенности культивирования реликтового эндемика флоры Горного Крыма Silene jailensis N.I. Rubtzov // Актуальные проблемы химии, биотехнологии и сферы услуг: материалы Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием. Иркутск, 2017. С. 86-90.
11. Красная книга Республики Крым. Растения, водоросли и грибы / отв. ред. А.В. Ена и А.В. Фатерыга. Симферополь: ООО «ИТ «АРИАЛ», 2015. 480 с.
12. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964. 272 с.
13. Митрофанова И.В., Митрофанова О.В., Корзина Н.В., Леснико-ва-Седошенко Н.П., Иванова Н.Н., Тевфик А.Ш., Пилипчук Т.И., Заяц А.Ю., Челомбит С.В., Мелихова Г.И. Методические аспекты в исследовании органогенеза и соматического эмбриогенеза in vitro представителей семейств Ranunculaceae, Cannaceae, Moraceae, Rosaceae, Myrtaceae, Oleaceae, Actinidiaceae // Сборник научных трудов ГНБС. 2014. Т. 138. С. 102-136.
14. Murashige T., Skoog F. А revised medium for rapid growth and bioas-says with Tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. 1962. V. 15. № 3. P. 473-497.
15. Monnier M. Croissance et developpement des embryons globulaires de Capsella bursa-pastoris cultives in vitro dans un milieu a la base d'une nouvelle solution minerale // Bull. Soc. Bot. France, Memoires, Coll. Morphologie. 1973. P. 179-194.
Поступила в редакцию 15 июня 2017 г.
Митрофанова Ирина Вячеславовна, Никитский ботанический сад - Национальный научный центр РАН, г. Ялта, пгт. Никита, Республика Крым, Российская Федерация, доктор биологических наук, зав. отделом биологии развития растений, биотехнологии и биобезопасности, е-тай: [email protected]
Митрофанова Ольга Владимировна, Никитский ботанический сад - Национальный научный центр РАН, г. Ялта, пгт. Никита, Республика Крым, Российская Федерация, доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник лаборатории биотехнологии и вирусологии растений отдела биологии развития растений, биотехнологии и биобезопасности, е-таД: [email protected]
Никифоров Александр Ростиславович, Никитский ботанический сад - Национальный научный центр РАН, г. Ялта, пгт. Никита, Республика Крым, Российская Федерация, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории флоры и растительности, е-пшк [email protected]
Лесникова-Седошенко Нина Павловна, Никитский ботанический сад - Национальный научный центр РАН, г. Ялта, пгт. Никита, Республика Крым, Российская Федерация, научный сотрудник лаборатории биотехнологии и вирусологии растений отдела биологии развития растений, биотехнологии и биобезопасности, е-mail: [email protected]
UDC 581.527.4:57.085.2
DOI: 10.20310/1810-0198-2017-22-5-965-969
USE OF BIOTECHNOLOGY METHODS FOR PROPAGATION AND CONSERVATION OF RARE ENDEMIC PLANT SPECIES OF THE CRIMEAN FLORA
© I.V. Mitrofanova, O.V. Mitrofanova, A.R. Nikiforov, N.P. Lesnikova-Sedoshenko
Nikita Botanical Gardens - National Scientific Center of RAS 52 Nikitsky Spusk St., Nikita Urban-Type Settlem., Yalta, Republic of Crimea, Russian Federation, 298648
E-mail: [email protected]
First in Nikita botanical gardens - National scientific center of RAS, biotechnological researches on studying some special features of the development in some relict endemic plant species of the Crimean flora and their conservation in vitro are carried out. Successful propagation of relict endemic plant species in culture significantly expands the possibilities of complex studies in various directions: to study the phenomenon of prolonged existence in spite of their small number and isolated populations, to create in vitro gene bank for seeds and seedlings in order to their reintroduction, to decorative use. The possibility of normal seedlings formation from the seeds of Heracleum ligusticifolium M. Bieb (Apiaceae), Lagoseris callicephala Juz., L. purpurea L. (Asteraceae), Silene jailensis N.I. Rubtzov (Caryophyllaceae), Valerianella falconida N. Schvedtsch. (Valerianaceae) on Monnier (1973) and Murashige, Skoog (1962) media are demonstrated. The
effect of plant growth regulators and their concentrations on organs and tissues morphogenetic capacity in seedlings is studied. It was noted that BAP had positive effect of on the regeneration capacity in the studied species in the combination with IBA and GA3. MS medium supplemented with 0.05-0.1 mg/L BAP, 0.1 mg/L IBA and 0.1 mg/L GA3 increased the growth of the adventitious shoots. High regenerative capacity was noted in S. jailensis, L. callicephala, L. purpurea and H. ligusticifolium. Keywords: biotechnology methods; microshoot regeneration; growth regulators; rare species
REFERENCES
1. Convention on Biological Diversity. Available at: www.plant-conservation-report-en.pdf (accessed 10.04.2017).
2. Global Strategy Plant Conservation. Available at: www.botanicgardens/ie/gspc/pdfs/gspc.pdf (accessed 10.04.2017).
3. Smirnov I., Tikhonova V. (eds.). Mezhdunarodnaya programma botanicheskikh sadov po okhrane rasteniy [International Program of Botanic Gardens for Plants Protection]. Moscow, 2000, 57 p. (In Russian).
4. Shkhagapsoev S.Kh. Geograficheskiy analiz skal'no-osypnoy flory Kabardino-Balkarskogo vysokogornogo gosudarstvennogo zapovednika [Geographic analysis of rocky-scree flora of Kabardino-Balkarskogo high mountain state reserve]. Gornye regiony:priroda i problema ratsional'nogo ispol'zovaniya resursov [Mountain Regions: Nature and Problems of Rational Use of Resources]. Ordzhoni-kidze, 1987, pp. 51-56. (In Russian).
5. Mitrofanova I.V. Biotekhnologii ozdorovleniya, razmnozheniya i sokhraneniya sadovykh kul'tur [Biotechnology of enhancement, breeding and preservation of orchard crops]. Materialy 7 Mezhdunarodnoy nauchno-prakticheskoy konferentsii, posvyashchennoy 30-letiyu otdela biotekhnologii rasteniy Nikitskogo botanicheskogo sada «Biotekhnologiya kak instrument sokhraneniya bioraznoobraziya rastitel'nogo mira (fiziologo-biokhimicheskie, embriologicheskie, geneticheskie i pravovye aspekty) » [Materials of the 7th International Scientific-Practical Conference, Devoted to 30 Anniversary of Biotechnology Department of Plants of Nikita Botanical Gardens "Biotechnology as an Instrument of Biodiversity Preservation of Vegetable World (Physiological-Biochemical, Embryological, Genetic and Legal Aspects)"]. Simferopol, LLC PP "ARIAL", 2016, p. 10. (In Russian).
6. Molkanova O.I., Vasileva O.G., Konovalova L.N. Nauchnye osnovy sokhraneniya i ustoychivogo vosproizvodstva genofonda rasteniy v kul'ture in vitro [The scientific basis for conservation and sustainable reproduction of plant genofond in culture in vitro]. Vestnik Udmurtskogo universiteta — Bulletin of Udmurt University, 2015, vol. 25, no. 2, pp. 95-100. (In Russian).
7. Novikova T.I., Nabieva A.Yu., Poluboyarova T.V. Sokhranenie redkikh i poleznykh rasteniy v kollektsii in vitro Tsentral'nogo sibirskogo botanicheskogo sada [Rare and useful plants' conservation in the in vitro collection of Central Siberian Botanical Garden]. Vestnik Vavilovskogo obshchestva genetikov i selektsionerov — Vavilov Journal of Genetics and Breeding, 2008, vol. 12, no. 4, pp. 564572. (In Russian).
8. Cruz-Cruz C.A., Gonzâlez-Arnao M.T., Engelmann F. Biotechnology and conservation of plant biodiversity. Resources, 2013, vol. 2, pp. 73-95. DOI: 10.3390/resources2020073.
9. Mitrofanova I.V., Mitrofanova O.V., Nikiforov A.R., Lesnikova-Sedoshenko N.P., Ivanova N.N., Chelombit S.V., Zhdanova I.V. Osobennosti vvedeniya v usloviya in vitro nekotorykh reliktovykh endemikov flory Gornogo Kryma [Special features of in vitro introduction of some relict endemic species from Mountain Crimea flora]. Byulleten' Gosudarstvennogo Nikitskogo botanicheskogo sada — Bulletin of the State Nikitsky Botanical Gardens, 2016, no. 121, pp. 62-69. (In Russian).
10. Mitrofanova I.V., Mitrofanova O.V., Nikiforov A.R., Lesnikova-Sedoshenko N.P., Chelombit S.V. Biotekhnologicheskie osobennosti kul'tivirovaniya reliktovogo endemika flory Gornogo Kryma Silene jailensis N.I. Rubtzov [Biotechnology features of relict endemic from Mountain Crimea flora Silene jailensis N.I. Rubtzov culture]. Materialy Vserossiyskoy nauchno-prakticheskoy konferentsii s mezhdunarodnym uchastiem «Aktual'nye problemy khimii, biotekhnologii i sfery uslug» [Proceedings of All-Russian Scientific-Practical Conference with International Participation "Actual Problems of Chemistry, Biotechnology and Services"]. Irkutsk, 2017, pp. 86-90. (In Russian).
11. Ena A.V., Fateryga A.V. (executive eds.). Krasnaya kniga Respubliki Krym. Rasteniya, vodorosli i griby [Red Data Book of the Republic of Crimea. Plants, Algae and Fungi]. Simferopol, LLC PP "ARIAL", 2015, 480 p. (In Russian).
12. Butenko R.G. Kul'tura izolirovannykh tkaney i fiziologiya morfogeneza rasteniy [Culture of Isolated Tissues and Physiology of Plants Morphogenesis]. Moscow, Nauka Publ., 1964, 272 p. (In Russian).
13. Mitrofanova I.V., Mitrofanova O.V., Korzina N.V., Lesnikova-Sedoshenko N.P., Ivanova N.N., Tevfik A.Sh., Pilipchuk T.I., Zayats A.Yu., Chelombit S.V., Melikhova G.I. Metodicheskie aspekty v issledovanii organogeneza i somaticheskogo embriogeneza in vitro predstaviteley semeystv Ranunculaceae, Cannaceae, Moraceae, Rosaceae, Myrtaceae, Oleaceae, Actinidiaceae [Methodological aspects in the study of organogenesis and somatic embryogenesis in vitro of representetives in families Ranunculaceae, Cannaceae, Moraceae, Rosaceae, Myrtaceae, Oleaceae, Actinidiaceae]. Sbornik nauchnykh trudov Gosudarstvennogo Nikitskogo botanicheskogo sada — A Collection of Scientific Works of State Nikitsky Botanical Garden, 2014, vol. 138, pp. 102-136. (In Russian).
14. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with Tobacco tissue cultures. Physiol. Plant., 1962, vol. 15, no. 3, pp. 473-497.
15. Monnier M. Croissance et developpement des embryons globulaires de Capsella bursa-pastoris cultives in vitro dans un milieu a la base d'une nouvelle solution minerale. Bull. Soc. Bot. France, Memoires, Coll. Morphologie, 1973 pp. 179-194. (In French).
Received 15 June 2017
Mitrofanova Irina Vyacheslavovna, Nikita Botanical Gardens - National Scientific Center of RAS, Yalta, Nikita UrbanType Settlem., Republic of Crimea, Russian Federation, Doctor of Biology, Head of Biology of Plant Development, Biotechnology and Biological Safety Department, e-mail: [email protected]
Mitrofanova Olga Vladimirovna, Nikita Botanical Gardens - National Scientific Center of RAS, Yalta, Nikita UrbanType Settlem., Republic of Crimea, Russian Federation, Doctor of Biology, Professor, Main Research Worker of Biotechnology and Virology of Plants Laboratory of Biology of Plant Development, Biotechnology and Biological Safety Department, e-mail: [email protected]
Nikiforov Aleksander Rostislavovich, Nikita Botanical Gardens - National Scientific Center of RAS, Yalta, Nikita Urban-Type Settlem., Republic of Crimea, Russian Federation, Candidate of Biology, Senior Research Worker of Flora and Vegetation Laboratory, e-mail: [email protected]
Lesnikova-Sedoshenko Nina Pavlovna, Nikita Botanical Gardens - National Scientific Center of RAS, Yalta, Nikita Urban-Type Settlem., Republic of Crimea, Russian Federation, Research Worker of Biotechnology and Virology of Plants Laboratory of Biology of Plant Development, Biotechnology and Biological Safety Department, e-mail: [email protected]
Для цитирования: Митрофанова И.В., Митрофанова О.В., Никифоров А.Р., Лесникова-Седошенко Н.П. Применение биотехнологий в размножении и сохранении редких эндемиков флоры Крыма // Вестник Тамбовского университета. Серия Естественные и технические науки. Тамбов, 2017. Т. 22. Вып. 5. С. 965-969. DOI: 10.20310/1810-0198-2017-22-5-965-969
For citation: Mitrofanova I.V., Mitrofanova O.V., Nikiforov A.R., Lesnikova-Sedoshenko N.P. Primenenie biotekhnologiy v razmnozhenii i sokhranenii redkikh endemikov flory Kryma [Use of biotechnology methods for propagation and conservation of rare endemic plant species of the Crimean flora]. Vestnik Tambovskogo universiteta. Seriya Estestvennye i tekhnicheskie nauki — Tambov University Reports. Series: Natural and Technical Sciences, 2017, vol. 22, no. 5, pp. 965-969. DOI: 10.20310/1810-0198-2017-22-5-965-969 (In Russian, Abstr. in Engl.).
