CC BY
45
zeolite modified by ions of lanthanum at the expense of availability of ions of rare element in it has more expressed anti-ulcerogenic activity accelerating the processes of regeneration and stimulation of functional activity of gastric juice. It is shown that inhibition of the processes of lipid peroxidation, stimulation of barrier function of stomach mucous membranes are in the basis of the revealed effect.
Литература
1. Богер Б.М. Язвенная болезнь. Современные аспекты этиологии, патогенеза, саногенеза. - Новосибирск, 1986.-257 с.
2. Верхова О.А., Сорока В.Р. Биологическая роль лантанидов // Успехи современной биологии. -1980. -Т.90, №3(6). - С.365-381.
3. Кожевникова Н.М., Убашеев И.О., Митыпов Б.Б. и др. Получение модифицированных лантаном природных цеолитов - потенциальных стимуляторов регенерации животных тканей // Химия в интересах устойчивого развития. - 2001. - Т.9, №6. -
С.207-211.
4. Кушеев Ч.Б. Цеолиты Холинского месторождения при токсическом повреждении печени животных: Дисс. ... канд. вет. наук. - Улан-Удэ, 1995. - 132 с.
5. Махакова ГЛ., Орлов В.А., Николаев С.М. Фармакологическая регуляция свободнорадикальных процессов при язвенной болезни. - Улан-Удэ, 2001. - 194 с.
6. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. -JI., 1969.-424 с.
7. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарби-туровой кислоты // Современные методы в биохимии. -М., 1977. - С.66-68.
8. Туголуков В.Н. Современные методы функциональной диагностики состояния слизистой оболочки желудка и их клиническое значение. - М., 1965. -212 с.
9. Фоломеев В.Ф. Количественное определение в тканях тиоловых сульфшдрильных групп // Лабор. дело. - 1980. -№ 11. - С.653-656.
10. Фышзон-Рысс Ю.М. Современные методы исследования желудочной секреции. - М., 1972. - 249 с.
ll.Ocabe S., Roth J., Pfeifer C.Y. The acetic ulcer model - a procedure for chronic duodenal ulcer // Amer. J. diq. Dis. - Copengagen, 1971. - Vol. 16, N.2. - P.277-281.
© ТЭМУУЛЭН Д., БАТСУХ 3.. СУМЪЯА Г., ГУРБАДАМ А., БАТЦЭЦЭГ Г., ЭРДЭНЭСАЙХАН Т. -УДК 616.995.121+616-097+615.373
ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНТИГЕНОВ ИЗ TAENIA SAGINATA (TAENIARHYNCHUS SAGINA TUS) И ПОЛУЧЕНИЕ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ К НИМ
Д. Тэмуулэп, 3. Батсух, Г. Сумъяа, А. Гурбабсш, Г. Батцэцэг. Т .Эр&эпэсайхап.
(Монгольский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. Ц. Лхагвасурэн, кафедра биологии и генетики, зав - д.м.н. проф. И. Пурэвдорж. Институт ветеринарной медицины Монголии, директор - акад. Б. Бямба, Монгольский Национальный Центр инфекционных болезней, директор - доктор (Sc). Б. Бат-Очир)
Резюме. Нами были приготовлены соматический и метаболитный антигены и гипериммунные сыворотки к ним для диагностики тениидоза человека и цистицеркоза крупного рогатого скота и их активность была определена реакцией непрямой агглютинации (РИГА).
В результате проведения исследования паразитологической лабораторией Монгольского национального центра инфекционных болезней установлено. что за последние 10 лет тениидозы занимают второе место среди гельминтозов человека.
Тениидозы вызывают заболевания не только у человека, но и у животных, и причиняют огромный экономический ущерб экономике страны за счет браковки сильно пораженных туш, снижения качества инвазированного мяса, и затрат на его обезвреживание.
В нашей стране почти не изучались вопросы по распространению и эпизоотологии тениидоза и цистицеркоза, поэтому перед нами стояла задача разработать препарат для серологической диагностики тениидоза человека и цистицеркоза крупного рогатого скота и изучить распространение этих
заболеваний, возбудители которых передаются от крупного рогатого скота (Bos taurus) к человеку и от человека к крупному рогатому скоту.
Материалы и методы
1. Приготовление образца соматического антигена из Taenia saginata (T.saginata).
Получили T.saginata путем дегельминтизации зараженных T.saginata людей широко применяемыми в медицинской практике препаратами, под наблюдением врачей-эпидемиологов.
Тенииды, полученные после дегельминтизации, тщательно промывали проточной водой. Брали только половозрелые членики для приготовления соматического антигена. Половозрелые членики гомогенизировали с помощью гомогенизатора (MOULINETTE, Испания) до получения однородной массы. Затем полученную суспензию озвучивали ультразвуком (UH-50, Тайланд) низ-
кой частоты 22 кГц в течение 10 мин и центрифугировали при 12000 g (HITACHI CR 2 IE, Япония) в течение 30 минут.
Надосадочную жидкость использовали как первичный материал для приготовления антигена. Далее проводили хроматографическое разделение полученного материала из T.saginata методом гель-хроматографии, используя ДЭАЭ-целлюлозу и хроматографическую колонку (размером 2,5x50 см). Содержание белка в элюатах определяли на спектрофотометре (JASCO, Япония) при длине волны 280 нм. Фракции, содержащие максимальные количества белков, использовали как соматический антиген [2,4,5].
2. Приготовление образцов метаболитного (экскреторно-секреторного) антигена.
В целях разработки методов получения метаболитного антигена нами были выполнены исследования с использованием различных культуральных жидкостей. Для этого неполовозрелые членики T.saginata помещали в питательные среды: RPMI-1640 (ICN Biomedicals Inc. Aurora, Ohio, США), 199 (SIGMA, США), а также в физиологический раствор, к которым добавляли для предотвращения контаминации микроорганизмами пенициллин и стрептомицин (на 1 мл 100 ЕД пенициллина, 100 мг стрептомицина, ОАО "КРАС-ФАРМА", Россия).
Культивирование проводили при температуре 37° С, в течение 5 суток. Среду меняли каждые 24 часа, и собранные среды центрифугировали при 1500 g в течение 10 минут. Надосадочную жидкость помещали в диализные мешки (SPECTRAL PORCU), Канада), затем диализовали против проточной воды в течение 24 часов при температуре +4° С и против дистиллированной воды в течение 24 часов при комнатной температуре.
Диализат концентрировали путем помещения его в 30%-ный раствор иолиэтиленгликоля (ПЭГ-600, SERVA, Германия). Концентрат использовали, как первичный материал, для приготовления метаболитного антигена из T.saginata.
Содержание белка в первичных материалах определяли на спектрофотометре (JASCO, Япония) при длине волны 280 нм.
3. Определение молекулярного веса образцов T.saginata антигенов.
Молекулярной вес соматического и метаболитного антигенов определяли методом U.K Laemmli (1970) с использованием додецилсульфат натрия (ДСН) - полиакриламидного геля электрофореза (Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis) на вертикальном аппарате для электрофореза (АТТО, Япония). Электофорез проводили при постоянном токе 40 мА на пластинку, при комнатной температуре, до тех пор пока свидетель - бромфеноловый синий - не дойдет до нижней границы геля. После окончания электрофореза гель окрашивали раствором 0,1% кумасси в ярко-синий цвет (в смеси метанол - уксусная кислота - дистиллированная вода в соотношении
5:1:5) и обесцвечивали раствором смеш (метанол - уксусном кислота - дистиллированная вода в соотношении 1:3:10). Молекулярный вес белков вышеназванных антигенов сравнивали с весом стандартных белков (цветные белковые маркеры, SIGMA, США), такие как миозин из мышц кролика с молекулярным весом 250 кДа, как р-галак-тозидаза из E.coli - 116 кДа, бычий сывороточный альбумин - 66 кДа, яичный овальбумин - 45 кДа, карбоновый ангидрид бычьих эритроцитов -29 кДа, трипсин ингибитор боба сои - 20 кДа, а-лактоальбумин молока - 14,2 кДа, аиротин молока - 6,5 кДа [1,3].
4. Приготовление гииериммунной сыворотки к антигенам T.saginata.
Соматический и метаболитный антигены использовали для иммунизации кроликов с помощью метода Fey et. al (1976), в нашей модификации. Для этого использовали полный адъювант Фрейнда (ПАФ) (DIFCO, США u WAKO, Япония). Эмульгирование адъюванта с антигенами, введение их, взятие крови у кроликов проводили но методу М. Горвица и М. Шарфа (1972). Кровь получали сиирт-ксилольным методом из ушной вены.
Для иммунизации но методу Fey et. al. (1976) первую инъекцию смеси антигена с ПАФ вводили в подушечки лап в дозе 0,25 мл в каждую. Содержание белка составляло 40,1 мг/мл (метаболитный антиген) и 31-48,8 мг/мл (соматический антиген) антигена кролика. Через 21 день делали повторную внутримышечную инъекцию в смеси антигена с ПАФ двух местах, в той же дозе. Через 710 дней после последней иммунизации брали кровь и исследовали реакцию непрямой гемагг-лютинации (РНГА).
Сущность нашей модификации состоит в том, что после иммунизации провели серию внутривенных инъекций антигенами без ПАФ. На 15-16 дни после иммунизации, внутримышечно вводили антигены в дозе 5 мг/мл, затем через неделю в течение двух дней подряд внутривенно инъецировали антигены [б].
5. Определение активности антигенов и антисывороток.
Активность соматического и метаболитного антигенов и антисывороток к T.saginata определяли но РНГА [7].
РНГА ставили с эритроцитами барана, фиксированными формальдегидом но методу R. Wain-bach (1958).
Взятие крови у баранов и приготовление эритроцитов проводили но общепринятым методикам. Для сенсибилизации эритроцитов антигенами T.saginata исиользовали хлористый хром (J. Jandle & R. Simons, 1957).
Результаты и обсуждение
В процессе хроматографического разделения соматический антиген элюировался 4 фракциями, состоящими из 0,688 мг/мл, 0,235 мг/мл, 0,253 мг/мл,
0,184 мг/мл белковых компонентов (рис.1).
1 1
Д 2 4
\ 3 V д г А
——'' —— — —■<' *
16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66 71 76 61 66
96 101 106 111 116 121 126 131 136 141
Рис. I. Выявление 4 фракции соматического антигена из ТжщииПа
В наших исследованиях наибольшее количество метаболитов продуцировалось неполовозрелыми члениками Т.вадиШа в физиологическом растворе (80,2 мг/мл) и среде 199 (48,9 мг/мл) в течение первых 24 часов, а в дальнейшем количество метаболитов постепенно снижалось во всех культуральных жидкостях (табл. 1).
Таблица 1.
Количество выделенных метаболитов неполовозрелыми члениками T.saginata (в мг/мл)
Название питательных сред Количества, выделенных метаболитов в течение часов
24 часов 48 72 96
ЯРМТ-1 640 21,6 18,2 21,31 22,9
С реда 199 48,9 41,9 41,8 30,1
Физиологический раствор 80,2 32,7 44,1 21,9
После 5 суток неполовозрелые членики Тжщ1-миа не выделяли метаболитов. Отсюда следует, что используемые культуральные жидкости не способны полностью заменить организм человека, однако поддерживают жизнеспособность неполовозрелых члеников Tsaginata в течение 5 суток.
При изучении молекулярного веса антигенов Tsaginata установлено наличие 11 фракции с молекулярным весом 6,5-220 кДа соматического антигена и 12 фракций с молекулярным весом 7,5116 кДа метаболитного антигена (электрофоре-грамма 1).
Соматические и метаболитные антигены Т.эа-ginata испытывали с гинериммунными сыворотками к вышеназванным антигенам.
Результаты РИГА но изучению активности соматического и метаболитного антигенов из Tsaginata и гинериммунных сывороток к ним даны в таблицах 2 и 3.
Электрофореграмма 1. Молекулярные весы белков антигенов Т.8а§та1а
- Соматический антиген Т.ваднШа;
- Молекулярный вес метаболита в физиологическом растворе;
- Молекулярный вес метаболита в среде ЯРМ1-1640;
- Молекулярный вес метаболита в среде 199.
Таблица 2.
Результаты изучения активности соматического антигена и гипериммунной сыворотки РПГЛ
Разведение сыворотки Разведение антигена
о Я о "Я- О эо о о гч СП о о со см о ю (Ч о </■> о тГ гч о
1:10 # # # # # # # # # # #
1:20 # # # # # # # # # # #
1:40 # # # # # # # # # # #
1:80 # # # # # # # # # - -
1:160 # # # # # # # - - - -
1:320 # # # # # #
1:640 # # # # # #
1:1280 # # # # # #
1:2560 # # # # # #
1:5120 # # # # # #
Таблица 3.
Результаты изучения активности метаболитпого антигена и гипериммунной сыворотки РНГА
Разведение антигена
Разведение сыворотки 1:10 1:20 1:40 о ОС О О о СП о % О (N ft О
1 10 # # # # # # # # # # #
1 20 # # # # # # # # # # #
1 40 # # # # # # # # # # #
1 80 # # # # # # # # # # #
1 160 # # # # # # # # # # -
1 320 # # # # # # # - - -
1 640 # # # # # #
1 1280 # # # # # #
1 2560 # # # # # #
1 5120 # # # # # #
Из таблиц 2 и 3 видно, что титр соматического и метаболитного антигенов составлял 1:640 и специфических агглютинов к соматическому антигену1 - 1:160 и к метаболитному - 1:320.
Таким образом, методом культивирования неполовозрелых члеников в средах 11РМ1-1640 и 199 и в физиологическом растворе получен метабо-литный, иммунологический активный антиген, содержащий 21,6 мг/л, 48,9 мг/мл, 80,2 мг/мл белков соответственно. Исследования методом гель-хроматографии соматического и метаболитного антигенов Т.за§ша1а обнаружили наличие 11 и 12 фракций антигена с молекулярным весом 6,5-220 кДа и 7,5-116 кДа соответственно. Титр соматического и метаболитного антигенов составлял 1:640, а специфических агглютинов к соматическому антигену - 1:160 и к метаболитному -1:320.
PREPARATION OF ANTIGENS FROM OAENIA SAGINATA (TAENIARHYNCHUS SAGINATUS) AND OBTAINING THE HYPERIMMUNE SERUM TO THEM
D. Temuulen, Z. Batsukh, G. Sumiya, A. Gurbadam, G. Battsetseg, T. Erdenesaikhan
(National Medical University of Mongolia, Institute of Veterinary Medicine,
National Research Center for Infectious Diseases)
We have prepared somatic and secretory antigens and hyperimmune sera to these antigens for serodiagno-sis of human Taenia saginata and bovine cysticercosis and their activity was defined by the reaction of indirect haemagglutination test (IHA).
Литература
1. Зильбер Jl.А. Иммунологические методы исследований. -Москва, 1967. - С.50-115.
2. Allan J.C., Avila G. et al. Immunodmgnosis oftaeina-sis by corpoantigen detection // Parasitology. 1990. dec. - Vol. 101, N.3 - P.473-477.
3. Joshua G.W. et al. Protein antigens in the cyst fluid of Taenia saginata cysticerci // Parasitology. - 1989. -oct. - VoL99, N.2. - P.265-274.
4. Juan Pedro Laclette. et al. Purification of antigen В from Taenia sqlium Cyst cerci by Affinity to Mammalian Collagen // Parasitology. - Vol.76, N.2. - P.273-275.
5. Maizels R.M., Blaxter M.L. Robertson B.D. Parasite antigens Parasite Genes. - New-York. Cambridge, 1991.
6. Xin Zhuan, Su and Annie K. Prestwood Isolation of trichinella-spesific antigens for diagnosis by gradient monoclonal antibody affinity chromotography // Parasitology. - Vol.76, N.6. - 1990. - P.842-848.
7. Morakote N. Charuchinda K. Evaluation of coun-terimmunoelectrophoresis for serodiagnosis of human cysticercosis. // Southeast Asian J Trop med Public Health. - 1986. - Dec. - Vol. 17, N.4. - P.537-42.
© МИНЬКОВ С. А., ВАСИЛЫДОВ М.К., МИНЬКОВ А.С., ЛЯХТЕР Т.Г. -УДК 616.716.4:616-006.634
СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ АМЕЛОБЛАСТОМЫ НИЖНЕЙ ЧЕЛЮСТИ
С. А. Миньков, М.К. Василъцов, А. С. Миньков, Т.Г.Аяхтер.
(Иркутский государственный медицинский университет - ректор акад., МТА и АН ВШ, д.м.н., ироф. А.А. Майборода; кафедра хирургической стоматологии, зав. - доц. И.И. Левен, кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии, зав. - д.м.н., ироф. Л.С. Васильева)
Резюме. На основании поисковых экспериментов (кролика) получены модели по клиникоморфологическим характеристикам соответствующих амелобластомной структуре опухолей человека. Делается вывод в сравнении с материалом взятым у собак о приоритетном значении кроликов как животных выбора при получении моделей амелобластомной опухоли.
Состояние проблемы этиологии и патогенеза ни тесно связано с вопросом происхождения эии-амелобластом на протяжении длительного време- телиальной ткани внутри челюстных костей и
