CC BY
22плана лечебно-профилактических, ветеринарносанитарных и оздоровительных мероприятий в овцеводческих хозяйствах Центрального района Российской Федерации.
2. В овцеводческих комплексах и на товарных фермах профилактические дегельминтизации необходимо проводить три раза в год: в июне-июле, в конце октября и в апреле. Эффективным является чередование антигельминтных препаратов из разных групп с учетом стадий развития возбудителей, особенностей эпизоотологии гельминтозов. Для уточнения сроков внеплановых терапевтических дегельминтизаций следует периодически осуществлять лабораторные (копроовоскопиче-ские, ларвоскопические) исследования животных.
3. Для прижизненной диагностики стронгилои-доза («larva migrans»), саркоцистоза и токсоплаз-моза следует использовать реакцию непрямой ге-магглютинации (РНГА).
4. С целью регулирования, снижения уровня эпизоотического процесса при гельминтозах и протозойных инвазиях, а также для оптимизации сроков выздоровления животных рекомендуется применять высокоэффективные препараты «Мо-низен», «Эйметерм» (тольтразурил) и «Эминол».
5. Целесообразно проводить профилактические дегельминтизации, противопротозойные обработки и использовать средства патогенетической терапии при субклинических формах инвазий, так как затраты на проведение ветеринарных мероприятий при этом гораздо ниже реального экономического ущерба.
Библиографический список
1. Архипов И.А., Шемяков Д.Н. Эффективность
УДК 634.75:631.147
А.В. Поляков, д-р биол. наук, профессор, Т.А. Линник, аспирант, ГНУ ВНИИ овощеводства Россельхозакадемии Л.А. Таланова, канд. с.-х. наук, доцент, Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А. Костычева
ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗМНОЖЕНИЯ СОРТОВ ЗЕМЛЯНИКИ САДОВОЙ (FRAGARIA ANANASSA DUCH.), ХАРАТЕРИЗУЮЩИХСЯ НИЗКОЙ УСООБРАЗУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТЬЮ
микрокапсулированного альбендазола плюс при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта овец и фасциолезе коров // Матер. докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М. - 1999. - С. 18-20.
2. Даугалиева Э.Х., Курочкина К.П Иммуностимуляторы в профилактике желудочно-кишечных стронгиля-тозов овец // Ветеринарная газета. - 1997. - № 16. - С. 4.
3. Даугалиева Э.Х., Курочкина К.Г., Козявин В.Н. Паразитофауна различных популяций горных баранов (Ovis ammon) в Казахстане // Матер. докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. - М. - 2001. - С. 78.
4. Петров Ю.Ф. Паразитоценозы и ассоциативные болезни сельскохозяйственных животных. -Л., Агропромиздат. - 1988. - С. 141-157.
5. Сафиуллин РТ. Распространение и экономический ущерб от основных гельминтозов жвачных животных // Ветеринария. - 1997. - № 6. - С. 28-32.
6. Туников Г.М. Университетский комплекс в действии // Вестник РГАТУ. - 2001. - №2. - С.2-5.
7. Юркив В.А., Даугалиева Э.Х., Янгуразова
З.А., Покровский В.И., Рамазанов Р.К. Микроэколо-гические и иммунные нарушения при нематодозах в зонах экологической нагрузки // Изд. Башкирск. ун-та. - Уфа. - 1999. - 252 с.
8. Emery D.L., McClure S.J., Wagland B.M. Production of vaccines against gastrointestinal nematodes of livestock // Immunol. and Cell Biol. -1993. - 71, № 5 - S. 463-472.
9. Mcgillivery D.J., Kwong J.W., Adler B. Anthelmintic non-living vaccine // Daratech. Pty. Ltd.
- 1990. - P. 298-299.
Введение
Широкое распространение земляники садовой связано с рядом ее бесспорных преимуществ в сравнении с другими ягодными и плодовыми куль-
турами. Ценность земляники обусловливается ее скороплодностью, высокими вкусовыми качествами, привлекательным видом и красивой окраской, а также богатым биохимическим составом, пита-
© Поляков А. В., Линник Т. А., Таланова Л. А., 2013
тельностью и лечебными свойствами.
Традиционным способом размножения земляники является размножение розетками. Многие сорта-новинки, очень привлекательные по многим показателям, обладают слабой усообразующей способностью, что значительно затрудняет их размножение традиционным способом. Возникает необходимость поиска путей решения проблемы размножения этих сортов для ускоренного и массового получения высококачественного посадочного материала.
В настоящее время установлено большое значение физиологически активных веществ - регуляторов роста и развития растений в практике сельского хозяйства [5]. Большой интерес исследователей привлекает изучение эффективности воздействия регуляторов роста, однако их действие на перспективные сорта-новинки земляники садовой, которые сравнительно недавно появились на международном рынке, остается мало изученным. Исследование эффективности влияния регуляторов роста нового поколения на продуктивность и интенсивность усообразования новых высокоурожайных сортов земляники садовой, характеризующихся слабой усообразующей способностью, представляет интерес для оптимизации размножения и продвижения новых сортов.
Многие сорта земляники современного производства поражаются целым рядом различных заболеваний, которые зачастую передаются при размножении дочерними розетками от материнского растения рассаде. Для решения этой проблемы в последние годы большое значение приобрело использование метода клонального микроразмножения, позволяющего не только оздоровить, но и значительно ускорить размножение растений, что особенно актуально для сортов с затрудненным размножением розетками вследствие низкой усо-образующей способности. Разработка эффективной и воспроизводимой системы ускоренной регенерации в условиях in vitro является необходимой для клонального микроразмножения земляники садовой, особенно применительно к новым сортам с низкой усообразующей способностью.
Для регенерации in vitro растений рода Fragaria в качестве исходных эксплантов применялись: изолированные меристемы апексов усов, пыльники, листовые диски [2,6]; меристематические верхушки апикальных и боковых почек, пыльники, цветоложе, листовые диски [4]; базальные участки цветковых почек [1]; апикальные меристемы [3] и др. Информация о регенерации растений рода Fragaria из лепестков в литературе отсутствует, а информация о морфогенетической активности листа ограничена, однако на ряде других видов растений показано, что эти типы эксплантов характеризуются высокой морфогенетической активностью [7, 8].
Целью нашего исследования являлось повышение эффективности размножения сортов земляники садовой (Fragaria ananassa Duch.), характеризующихся слабой усообразующей способ-
ностью, за счет обработки регуляторами роста в условиях in vivo и оптимизации процесса клонального микроразмножения in vitro.
Объекты и методы исследований Исследования проведены в лаборатории отдела биотехнологии ГНУ ВНИИО Россельхозакаде-мии и в условиях открытого грунта.
В опыте использовали растения новых высокоурожайных сортов земляники садовой, различающихся по усообразующей способности: Тарпан, Эви 2, Эвисделайт - сорта со слабой (1-2 уса на растение), Флорина - со средней (3-5 усов на растение), Боровицкая, Камароза - с высокой (6 -10 усов на растение) усообразующей способностью.
Растения, выращиваемые в открытом грунте, в фазу бутонизации обрабатывали растворами энергии-М в концентрации 50 мг/л, дозе 1,5 мг/м2; циркона в концентрации 15 мкл/л, дозе 0,45 мкл/ м2 и 6-бензиладенина (БА) в концентрации 1 мг/л, дозе 0,03 мг/м2. Расход жидкости во всех вариантах составил 30 мл/м2. Концентрации и дозы подобраны, исходя из рекомендаций по применению данных препаратов. Обработку проводили дважды в утренние часы с интервалом в 10 суток.
Лабораторные исследования проведены в соответствии с методическими рекомендациями по получению регенерантов овощных культур и их размножению in vitro [6] и по методическим рекомендациям по микроклональному размножению садовых растений [4]. При стерилизации исходного материала использовали гипохлорит натрия в концентрации 1% и экспозиции 10 минут.
Для исследования морфогенетического потенциала использовали следующие типы эксплантов: лепестки, изолированные из бутона диаметром 2-5мм; основания листовых дисков размером 3 на 4 мм, изолированные в фазу раскрытия листа; апексы усов длиной 0,5-1мм. Культивирование in vitro проводили на среде MS (MurashigeT., SkoogF., 1962), содержащей 6-бензиладенин (БА) в концентрации 0,5 мг/л. На этапе размножения и укоренения в питательные среды добавляли а-нафтилуксусную кислоту (НУК) в концентрации
0,1 мг/л.Введенный in vitro материал культивировали в течение 4-5 недель, после образования побегов и корневой системы регенеранты адаптировали к условиям invivo, микроклоны были высажены в торфяные таблетки.
Экспериментальная часть Изучение воздействия регуляторов роста in vivo. В опыте использовали сорта Тарпан, Эви 2, Эвисделайт, Флорина и Камароза. Растения каждого сорта делили на четыре группы: контрольная группа без обработки и три группы, каждая из которых обрабатывалась одним из регуляторов роста (энергия-М, циркон, БА).
Для сорта Камароза наиболее эффективным оказалось воздействие препаратом энергия-М -усообразующая способность увеличилась в 1,6 раз по сравнению с контрольной группой. На сортах Эви 2 и Эвисделайт было обнаружено наи-
лучшее воздействие циркона - количество усов по сравнению с контролем увеличилось в 1,5 и в 3 раза соответственно (рисунок 1). На размножение сортов Флорина и Тарпан обработка регуляторами роста существенно не повлияла.
Потенциальная продуктивность под действием регуляторов роста также возрастала - увеличивалось количество цветоносов и количество плодоэлементов на цветоносе. Созревшие ягоды почти всех исследуемых нами сортов, обработан-
а б
Рис. 1 - Усообразование у растений сорта Эвисделайт (а - контрольная группа растений, б - группа
растений, обработанных цирконом)
ных цирконом, были больше по массе и размеру. Масса ягод сортов Флорина, Эвисделайт и Тарпан в результате обработки цирконом на 20% превысила массу ягод растений контрольной группы.
На продуктивность наилучшим образом повлияла обработка БА, в результате которой продуктивность сортов Флорина, Эви 2 и Эвисделайт в 1,4; 1,3 и 2,2 раз, соответственно, превысила продуктивность контрольных растений.
Наилучшим образом себя зарекомендовали ремонтантные сорта Флорина, Эви 2 и Эвисделайт, плодоношение которых продолжалось вплоть до октября. Ягоды у этих сортов крупные, массой 15 - 30г, плотные, характеризуются отличными вкусовыми качествами, продуктивность - до 900г с куста.
Изучение культивирования in vitro. Для клонального микроразмноженияв качестве эксплан-тов использовали лепестки из бутонов, фрагменты листа и апексы усов сортов Тарпан и Боровицкая.
Культивирование на среде MS в зависимости от сорта и типа используемого экспланта позволяет получить от 7,1% до 77,8% жизнеспособных эксплантов. У сорта Тарпан при культивировании апекса уса получено 77,8% жизнеспособных экс-плантов, в то время как культивирование лепестков и листовых эксплантов не привело к морфогенезу. У сорта Боровицкая все 3 типа эксплантов проявили морфогенетическую активность, но наиболее жизнеспособными оказались листовые экспланты и апексы усов (60,0% и 57,1% соответственно). Экспланты, полученные из лепестков, были менее жизнеспособными, но их морфогенетическая активность оказалась не меньшей по сравнению с апексами усов обоих сортов - в среднем на них образовалось по 2 почки и столько
же побегов. Морфогенетическая активность листа была выше - образовалось 3,3 почки и 3,1 побега на один эксплант (таблица1).
В процессе размножения наибольшее количество почек (16,3) и побегов (15,7) на эксплант получено у сорта Боровицкая при культивировании сегментов листа, тогда как культивирование лепестков привело к образованию 5-ти побегов на эксплант, а апексов усов у обоих сортов - к образованию 4-х побегов на эксплант (таблица 2).
Максимальный процент укоренения in vitro обнаружен у побегов сорта Тарпан (100%). Усорта Боровицкая лучше шло укоренение побегов, полученных в культуре листа - доля укоренившихся побегов составила 92,6% (рисунок 2), а побегов, полученных из апекса уса и из лепестка - 87,5% и 60,0% соответственно (таблица 3).
Наблюдения за адаптацией регенерантов в условиях in vivo показали, что от 86,4% до 100% изученных растений-регенерантов земляники садовой, полученных in vitro, успешно адаптируются. Процент растений-регенерантов сорта Боровицкая, адаптировавшихся к обычным условиям среды, оказался выше в сравнении с сортом Тарпан -лишь 86,4% растений этого сорта адаптировались к условиям in vivo, тогда как все 100% растений-регенерантов сорта Боровицкая, полученные из лепестка и из апекса уса, а также 92,2% растений, полученных из листовых эксплантов, успешно прижились в условиях in vivo (таблица 3).
Проведенные исследования позволили получить 19 растений-регенерантов сорта Тарпан, культивированных из апекса уса (рисунок 3) и 66 растений-регенерантов сорта Боровицкая, из которых 3 растения культивированы из лепестка, 59
- из листа и 4 - из апекса уса.
Таблица 1 - Регенерационная активность in vitro различных типов эксплантов земляники садовой (среда MS, сахароза 3%, агар 6 г/л, БА 0,5 мг/л, рН 5,6)
Сорт Тип экспланта Получено жизнеспособных экс-плантов,% Образовалось
почек, шт. на 1 эксплант побегов, шт. на 1 эксплант
Тарпан лепесток 0 0 0
лист 0 0 0
апекс уса 77,8 2,5 2,0
Боровицкая лепесток 7,1 2,0 2,0
лист 60,0 3,3 3,1
апекс уса 57,1 2,3 2,0
Таблица 2 - Размножение земляники садовой in vitro (среда MS, сахароза 3%, агар 6 г/л, БА 0,5 мг/л,
НУК 0,1 мг/л, рН 5,6)
Сорт Тип экспланта Образовалось
Почек шт. на 1 эксплант Побегов шт. на 1 эксплант
Тарпан лепесток 0 0
лист 0 0
апекс уса 4,3 4
Боровицкая лепесток 5,0 5,0
лист 16,3 15,7
апекс уса 4,8 4,0
Таблица 3 - Укоренение побегов (среда MS, сахароза 3%, агар 6 г/л, БА0,5 мг/л, НУК 0,1 мг/л, рН 5,6) и адаптация растений-регенерантов земляники садовой к условиям in vivo
Сорт Тип экспланта Образовалось побегов с корнями, % Высажено invivo растений-регенерантов, шт. Адаптировалось растений к условиям invivo
шт. %
Тарпан лепесток 0 0 0 0
лист 0 0 0 0
апекс уса 100 22 19 86,4
Боровицкая лепесток 60,0 3 3 100
лист 92,6 64 59 92,2
апекс уса 87,5 4 4 100
Результаты исследований
Воздействие регуляторов роста in vivo. Использование регуляторов роста позволило повысить продуктивность и интенсивность размножения земляники садовой за счет усиления усообразую-щей способности, причем эффективность тех или иных регуляторов роста зависела от сорта. Интенсивность усообразования у сортов, характеризующихся слабой усообразующей способностью (Эви
2 и Эвисделайт), под действием циркона в концентрации 15 мкл/л увеличилась в 1,5 и 3 раза соответственно по сравнению с контрольной группой. На размножение сортов Тарпан и Флорина обработка регуляторами роста существенно не повлияла - показатели числа усов у обрабатываемых растений незначительно отличались от показателей контрольных растений. Для сорта Камароза наиболее эффективным оказалось воздействие
препаратом энергия-М - усообразующая способность увеличилась в 1,6 раз. Изученные нами регуляторы роста, характеризуясь сортоспецифично-стью, оказывают общий стимулирующий эффект на растения земляники садовой: повышают интенсивность размножения усами и продуктивность.
Культивирование in vitro. Отмечено, что регенерационная активность in vitro земляники садовой зависит от сорта и типа экспланта, используемого для клонального микроразмножения. Сорт с низкой усообразующей способностью Тарпан проявляет меньшую морфогенетическую активность, чем сорт с высокой интенсивностью усообразования Боровицкая. Регенерация из уса более стабильна -морфогенез наблюдался у обоих сортов с одинаковой интенсивностью (4 побега на эксплант), тогда как культивирование лепестков и листовых эксплантов было эффективным только у сорта Боровицкая, а у сорта Тарпан не привело к формированию почек и побегов. Для сорта Боровицкая наиболее эффективно культивирование листовых эксплантов (15,7 побегов на эксплант).Лепесток характеризуется высокой регенерационной активностью (5 побегов на эксплант), но, учитывая его высокую чувствительность при введении in vitro, требует использования более мягкого режима стерилизации.
Выводы
1. Регуляторы роста энергия-М, циркон и 6-бен-зиладенин могут быть использованы для стимулирования интенсивности усообразования и тем самым увеличивать выход розеточной рассады у сортов со слабой усообразующей способностью, а также для повышения продуктивности. Препарат энергия-М в концентрации 50 мг/л повышает усо-образующую способность сорта Камароза в 1,6 раза; препарат циркон в концентрации 15 мкл/л у сортов Эви 2 и Эвисделайт - в 1,5 и 3 раза соответственно, а также способствует увеличению массы ягод на 20 %; 6-бензиладенин, используемый в концентрации 1 мг/л, повышает продуктивность в 1,3-2,2 раза.
2. Культивирование апексов усов in vitro эффективно для получения посадочного материала сортов с низкой усообразующей способностью -позволило получить 19 адаптированных растений-регенерантов сорта Тарпан,что свидетельствует о
возможности использования этого типа экспланта для in vitro размножения сортов со слабой усооб-разующей способностью. Для сорта Боровицкая наиболее эффективно культивирование листовых эксплантов (15,7 побегов на эксплант). Высокая жизнеспособность, массовое образование побегов, хорошая укореняемость и приживаемость свидетельствуют о том, что этот тип экспланта также может успешно использоваться при in vitro размножении земляники садовой.
Библиографический список
1. Алексеенко, Л.В. Особенности размножения нейтральнодневных и ремонтантных сортов земляники invitro^a ... канд. с.-х. наук: 06.01.07 / Лилия Владимировна Алексеенко. - М., 1998. - 168 с.
2. Высоцкий, В.А. Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодных растений: дис. ... д-ра.с.-х. наук: 06.01.07 / Валерий Александрович Высоцкий. - М., 1998. -321 с.
3. Говорова, Г.Ф. Земляника: прошлое, настоящее, будущее / Г.Ф. Говорова, Д.Н. Говоров.
- М.: ФГНУ Росинформагротех, 2004. - 348 с.
4. Деменко, В.И. Микроклональное размножение садовых растений: учебное пособие. - М.: Изд-во МСХА, 2007. - 55 с.
5. Ефименко, В.В. Некоторые физиологические аспекты влияния регуляторов роста и развития на растения земляники садовой Fragaria ananassa Duch.: дисс. ... канд.с.-х. наук:03.00.12 / Виталий Васильевич Ефименко. - Брянск, 2006. - 147 с.
6. Поляков, А.В. Получение регенерантов овощных культур и их размножение in vitro: методические рекомендации. - М.: ГНУ ВНИИО Рос-сельхозакадемии, 2005. - 36 с.
7. Torne, J.M. Embryogenesis induction in petals of Araujiasericifera / J.M. Torne, P. Rodriques, A. Manich, I. Claparolos, M.A. Santos. - Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 1997.- V. 51. - P. 95 - 10.
8. Wojciechowicz, M.K. Comparison of regenerative potential of petals, stamens and pistils of five Sedum species in vitro / M.K. Wojciechowicz. -Biodiversity, Research and Conservation, 2007. - V. 5 - 8. - P. 87 - 94.
