CC BY
37
ПОТЕНЦИРОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДИАГНОСТИКИ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ
БАКТЕРИАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ
Д.А. Евглевский
Аннотация.Достигнуто повышение эффективности стафило-стрептококковой с протеино-синегнойной анатоксин-вакцины путем выращивания микроорганизмов на разработанной синтетической среде и новыми способами детоксикации и полимеризации.
Ключевые слова: стафилококки, анатоксин, этоний, аллерген, тюгоогдатэт.
Стафилококки и вызываемые ими свыше 100 различных болезней - маститы, артриты, пневмонии,
гнойные и раневые инфекции, пищевые отравления, сепсис отдельно и в ассоциации со стрептококками, протеем, синегнойной палочкой и появление лекарственной устойчивости, создали необходимость формирования разных направлений исследований.
В этом плане актуальны исследования в изучении воздействия региональных факторов внешней среды, в том числе геомагнитных на стафилококки, разработка более современных методов и средств подавления посторонней микрофлоры, элективных и накопительных средств и способа получения аллергена и анатоксин-
вакцины и повышение эффективности антибиотикован-тибиотикоустойчивым стафилококкам, стрептококкам, синегнойной палочке.
Целью исследований явилась разработка плотной и жидкой синтетической среды и способа для выделения и выращивания стафилококков получения аллергена и анатоксин-вакцины и изучения их свойств, создания биологической модели аллергии для определения и контроля активности аллергена и повышения биоцид-ной эффективности антибиотиков к бактериям, вирусам и плесневым грибам.
В работе использованы лабораторные и свежевыде-ленные плазмокоагулирующие золотистые стафилококки и стрептококки Pr.mirabis, и Ps.furoginasa. Для выращивания стафилококков,стрептококков,синегнойной палочки,протея,сальмонелл и Е.соИ была разработана жидкая синтетическая питательная среда и на ее минеральной основе создана плотная среда с 2,5% агаром для выделения микроорганизмов вместо мясопептонно-го глицеринового бульона. Полноту детоксикации и полимеризации экзо-, эндо- и суперэнтотоксинов обеспечивали вначале 0,2-0,3% раствором формальдегида при 40-42°С в течение 2-3 суток , а затем 0,2-0,3% раствором этония в том же режиме, а в последующем применением глутарового альдегида отдельно и с этонием. Полученную анатоксин-вакцину использовали для профилактики и лечения ожоговых и рваных ран, дерматитов, маститов и т.д. Аллергенную активность и специфичность стафилококкового нативного аллергена определяли на морских свинках, сенсибилизированных суспензий из автоклавированных стафилококков без адъюванта Фрейнда с убитыми микобактериями туберкулеза.
Изучено, что рост и развитие микроорганизмов на питательных средах зависит от качества адаптации. При изготовлении ряда вакцин выращивание микроорганизмов проводят на синтетических питательных средах с известными химическими компонентами. В то же время для получения стафилококковой, стрептококковой, протеино-синегнойных анатоксин-вакцины для ветеринарной и гуманной медицины используют мясо и казеиногидролизатные бульоны для выращивания микроорганизмов.
В результате исследований определен рациональный состав синтетической среды для выращивания стафилококков, Е.соИ, сальмонелл, микобактерий туберкулеза, протея и синегнойной палочки, содержащие в граммах в 1 литре: лимонной кислоты - 6-7; янтарной кислоты - 2-3; аспарагина или глицина 3-4; фосфорнокислого калия 2-х замещенного - 3,0; хлористого натрия -0,5 (для стафилококков - 5-6), сернокислого магния - 0,5; сернокислого цинка - 0,3; сернокислого железа - 0,1 и глицерина - 40-50 мл. Реакцию среды устанавливают 5-10% раствором аммиака до 7,0-7,0 перед автоклавированием (для стафилококков7,5-7,6).
В 2-х литровых бутылях с объемом синтетической среды 1,0 л накопление стафилококков после 9-12 суточного выращивания достигает 10-12 млрд/мл, а на мясогидролизатном глицериновом бульоне 3-4 млрд/мл и густая слизеподобная масса после 2-3-х дневного выращивания протея и синегнойной палочки.
Апробированная жидкая синтетическая среда в цельном виде и разведении 1:1 1:2 с 2,5% агаром с успехом использована для выделения и поддержания указанных микроорганизмов на плотной минеральной среде с 2,5% агаром.
Суспензия выращенных стафилококков на жидкой синтетической среде после автоклавирования использована для получения анатоксин-вакцины, а культу-ральная жидкость после отделения фильтрацией от бак-
териальной массы для изготовления нативного безаль-бумозного стафилококкового аллергена.
Из-за отсутствия демонстративно выраженной аллергии при стафилококкозе предложен рядом исследователей способ сенсибилизации (аллергизации) морских свинок суспензией из автоклавированных стафилококков с адъювантом Фрейнда, содержащие убитые микобактерии туберкулеза во взвеси с жидким парафином и ланолином (Быдаров С.В., 1965 г, Фрадкин В.А., 1990).
В данном примере аллергия будет проявляться на два инфекционных патогена и кожные реакции на стафилококковый аллерген будут недостоверными.
При подкожном введении суспензии из стафилококков и микобактерий туберкулеза у морских свинок образовались гнойные абсцессы. Для устранения указанного недостатка и достижения поставленной цели предложен способ сенсибилизации морских свинок 5,0 миллиардной взвесью автоклавированных стафилококков, сорбированных на гидроокиси алюминия в объеме 1,0 мл.
Внутрикожное введение нативного стафилококкового аллергена в объеме 0,1 мл в разведении 1:10 и 1:20 вызывало у сенсибилизированных морских свинок гиперемию кожи на боковой поверхности в диаметре 12,0±0,5 и 10,0±0,5 соответственно.
Получение стафилококковой анатоксин-вакцины проводили из автоклавированной суспензии стафилококков, выращенной на жидкой синтетической среде путем детоксикации и полимеризации экзо-, эндо- и суперэнтеротоксинов одним 0,3 - 0,6% раствором формальдегида и при 42-45°С в течение 5-7 суток.
Однако полной инактивации токсино-аллергенов одним формальдегидом не получилось. Это проявилось аллергическими реакциями у морских свинок. Из полученных данных следовало, что стафилококковые ток-сино-аллергены одним формальдегидом не инактиви-руются и соответственно не обеспечивалось получения эффективного анатоксина.
Стабильно полная инактивация всего комплекса стафилококковых токсино-аллергенов в концентрации 1,0±0,1 мг/мл достигалась обработкой вначале 0,2-0,3% раствором формальдегида при 42-45°С в течение 2-3 суток, а затем 0,2-0,3% раствором этония в том же режиме, а в последующем вместо формальдегида с успехом апробированы глутаровый альдегид рядом бесчетвертичных аммониевых соединений (Биопаг -Д, алкил-демитилбензил аммоний и др.)
Полученная стафилококковая анатоксин-вакцина (САВ) обеспечила профилактику стафилококкоза птиц путем двукратного аэрозольного распыления 1,5 литра препарата на птичник объемом 5000 м3 с 40 тысячами цыплят, а также при лечении дерматитов, гнойно-некротических и ожоговых ран и лечении коров, больных маститом, без антибиотиков. В дальнейшем деток-сикацией и полимеризацией антибиотиков по способу получения анатоксинов повысили и эффективность в отношении резистентных стафилококков и стрептококков.
Более эффективным оказалось применение стафилококковой анатоксин-вакцины в смеси с диметил-сульфоксидом в соотношении 1:1 или со стрептококковой анатоксин-вакциной отдельно и в ассоциации с протеино-синегнойной анатоксин-вакциной.
Из полученных результатов следует, что разработанная синтетическая питательная среда обеспечивает стабильно высокое накопление стафилококков, протея и синегнойной палочки, необходимой для получения анатоксин-вакцины с помощью двух детоксикаторов вначале 0,2-0,3% раствором формальдегида, а затем 0,2-0,3% раствором этония или других четвертичных
аммониевых соединений или с 0,2-0,3% раствором глу-тарового альдегида.
Для контроля активности безальбумозного натив-ного стафилококкового аллергена и полноты детокси-кации и инактивации токсино-аллергенов предложена безопасная модель аллергии путем сенсибилизации морских свинок суспензией из автоклавированных стафилококков, сорбированных на гидроксиде алюминия.
Повышение лечебно-профилактической эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины достигнуто в смеси с диметилсульфоксидом в соотношении 1:1 или со стрептококковой анатоксин-вакциной отдельно и в комплексе с протеино-синегнойной вакциной.
Особую ценность представляет модификация антибиотиков путем детоксикации и полимеризации 0.2% раствором формальдегида, 0.2% раствором глутарового альдегида отдельно из бесчетвертичными аммониевыми соединениями (этоний, Биопаг- 9 и т.д.) по принципу получения анатоксинов.
Проведенные исследования позволяют сделать вывод, что разработанные способы получения и применения стафилококкового аллергена и биологической модели для его контроля, а также стафилококковой анатоксин-вакцины отдельно и в комплексе со стрептококковой и протеино-синегнойной вакцинами позволили решить поставленные задачи исследований.
Список использованных источников
1 Коротяев А.И., Бабичев С.В. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. -СПб., 1998. - С. 141-150.
2 Фрадкин В.А. Диагностика и лечебные аллергены. - М., Медицина, 1990. - 255 с.
3 Быдаров С.В. Экспериментальная микробиология. - М.: Изд-во София, 1965. - С. 112-113.
Информация об авторе
Евглевский Дмитрий Анатольевич - кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник ГНУ Курский НИИ агропромышленного производства, тел. (4712)53-77-05, 58- 27- 60.
