CC BY
27
DOI: 10.24143/2073-5529-2019-2-101-111 УДК 664.959.2:594.1
ПОЛУЧЕНИЕ ФЕРМЕНТОЛИЗАТА ИЗ ПРЕСНОВОДНОГО МОЛЛЮСКА ДРЕЙССЕНЫ ^ЫЭЭЕМА POLYMORPHA)
С. Л. Чернявская, Л. М. Есина, О. Н. Кривонос, В. В. Богомолова
Керченский отдел Азово-Черноморского филиала Всероссийского научно-исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии,
Керчь, Российская Федерация
Трубопроводы, оборудование, гидротехнические сооружения в пресноводных водоемах подвергаются массовому воздействию организма-обрастателя - двустворчатого моллюска дрейссены (Dreissena polymorpha). Данные обрастания создают трудности в эксплуатации оборудования, усиливают коррозию конструкционных материалов, а качественная утилизация моллюсков требует финансовых затрат. Предложено использование дрейссены в качестве сырья для получения ферментолизата. Представлены данные размерно-массового и химического состава сырья (мяса дрейссены). В ходе анализа модели 2-факторного эксперимента (факторами выбраны количество ферментного препарата и продолжительность ферментолиза) установлено оптимальное количество ферментного препарата (нейтральной бактериальной протеазы протозим). Проведена сравнительная характеристика образца-контроля (без добавления ферментного препарата) и ферментолизатов дрейссены: отмечено увеличение содержания белка в среднем с 3,7 до 17,8 %, сухих веществ с 7,0 до 22,7 %, аминного азота с 446,2 до 158,6 мг/100 г соответственно. Установлены периоды наиболее интенсивного увеличения значений степени гидролиза (в течение первых 2 ч ферментолиза на 2,8 % и в течение 3-4 ч -на 1,2 %), а также периоды стабилизации значений (в течение 2-3 ч и после 4 ч ферментолиза -увеличение в среднем на 0,6 %). Изучено изменение оптической плотности растворов ферментолизатов и их ТХУ-фильтратов, что позволило в сравнении оценить степень деструкции белков. Представлена технологическая схема производства ферментолизата из дрейссены со следующими параметрами ферментолиза: температура 50 °С, гидромодуль 1:1, количество ферментного препарата протозим 0,1 % к массе бланшированной дрейссены со створками, продолжительность 3-4 ч.
Ключевые слова: моллюск дрейссена, ферментолиз, протеаза протозим, аминный азот, степень гидролиза, кормовая добавка.
Для цитирования: Чернявская С. Л., Есина Л. М., Кривонос О. Н., Богомолова В. В. Получение ферментолизата из пресноводного моллюска дрейссены (Dreissena polymorpha) // Вестник Астраханского государственного технического университета. Серия: Рыбное хозяйство. 2019. № 2. С. 101-111. DOI: 10.24143/2073-5529-2019-2-101-111.
Введение
Пресноводный моллюск дрейссена (Dreissena polymorpha) относится к организмам-обрас-тателям и образует в водоемах огромные скопления на трубопроводах, оборудовании, гидротехнических сооружениях, щитах гидроэлектростанций. Такие обрастания могут вызвать затруднения с подачей воды по трубопроводам, они разрушительно действуют на конструкционные материалы, усиливая их коррозию, создают трудности в эксплуатации оборудования. В результате этого снижается срок службы оборудования и сооружений, возникает необходимость дорогостоящих ремонтов, а также остановок для очистки поверхностей [1-3]. Периодическая очистка малоэффективна, т. к. дрейссена снова быстро размножается. К тому же в результате механической очистки водоемов в районе гидротехнических сооружений образуются значительные по объему отвалы моллюска. Вследствие разложения дрейссены создается угроза биологического загрязнения (выделение аммиака, сероводорода и пр., развитие патогенной микрофлоры, паразитофауны), способного вызвать вспышку инфекционных заболеваний [1]. В связи с этим исследования по переработке дрейссены являются актуальными.
Известны способы переработки дрейссены на кормовую продукцию. Одним из таких способов является получение гранулированных комбикормов на основе моллюска дрейссена для различных животных (птицы, рыбы, раков и др.). Преимущество данного способа - практически
безотходная технология, результатом которой является способный длительно храниться в обычных условиях кормовой продукт, не требующий для производства дорогостоящих ингредиентов. Содержание сырого протеина в образцах такого корма составляет в среднем 22,2 % от массы сухого вещества, что является хорошим показателем для гранулированных кормов [1]. Проведенные опыты по скармливанию минерально-белковой добавки из высушенной и измельченной дрейс-сены малькам карпа дали положительный эффект: средний суточный привес рыб (карпа) опытной группы, получавших добавку из дрейссены в количестве 10 % рациона, был на 43,5 % выше по сравнению с контролем [4].
При исследовании биссуса дрейссены идентифицированы уникальные пики, соответствующие его специфическим белкам (рекомбинантный белок биссуса дрейссены использовался в качестве антигена для производства поликлональных антител) [5-7].
Исследования по получению протеолитического комплекса ферментов из дрейссены проводились О. А. Литвиновой [8]. Из дрейссены выделен фермент 5-фосфодиэстераза, рекомендованный для применения в медицине в качестве лечебного препарата [9].
Исследования аминокислотного состава белка дрейссены показали, что ее белок содержит все заменимые и незаменимые аминокислоты. В работе Нгуен Хай Иен дрейссена рассматривалась как сырье для производства гидролизатов, были проведены работы по получению ферментативных гидролизатов с использованием таких ферментов, как папаин, панкреатин, флавоэнзим и Corolase® L 10 [10].
Целью данной работы было получение ферментолизатов из дрейссены в створках под действием ферментного препарата протозим.
Материалы и методы
Объект исследования - пресноводный двустворчатый моллюск дрейссена Dreissena polymorpha (Pallas, 1771), добытый в Веселовском водохранилище Ростовской области в январе 2018 г. Дрейссена хранилась в замороженном виде при температуре -18 °С.
Ферментолиз проводили под действием бактериальной протеазы протозим (протеаза В), содержащей неспецифическую высокоактивную эндопептидазу для гидролиза белковых веществ с получением полипептидов, пептидов и аминокислот, рН оптимум 6,5, температурный диапазон 30-55 °С, активность 50 000 ед./г (ТУ У 24.1-32813696-016:2008).
Ферментолизаты из дрейссены получали следующим образом: дрейссену мыли, сортировали от растительности и битых раковин, бланшировали на пару 3-5 мин. Бланшированную дрейссену со створками измельчали, ферментировали с протеазой протозим при гидромодуле 1:1 и температуре 50 °С при периодическом перемешивании. Инактивировали ферменты кипячением ферментолизата в течение 3-5 мин. Охлаждали ферментолизат и выдерживали его для настаивания в течение 15-17 ч при температуре 4 ± 2 °С. Створки отделяли процеживанием. Плотный остаток отделяли центрифугированием в течение 5 мин при 4 000 об/мин. Ферменто-лизат упаривали не менее чем в 20 раз.
Химический состав дрейссены (содержание белка, воды, липидов, золы) определяли стандартными методами [11]. Пересчет белка на общий азот (No64) проводили с использованием коэффициента 6,25.
Эффективность протекания процесса ферментативного гидролиза характеризовали различными методами:
- аминный азот N^ (или формольно-титруемый азот) определяли методом Черногорцева [12];
- степень гидролиза (СГ), %, оценивали по количеству гидролизованного белка (отношение количества выделившегося аминного азота к общему азоту) [13, 14]:
N
СГ = —Sí^100,
N
^общ
где - содержание аминного азота в ферментолизате после ферментолиза в течение некоторого периода времени, мг/100 г; No^ - общий азот, мг/100 г.
Изменение концентрации белковых продуктов в ферментолизатах определяли по изменению оптической плотности разбавленных в 500 раз растворов ферментолизатов в ультрафиолетовой
области спектра, предварительно осадив высокомолекулярные белковые соединения трихлоруксусной (ТХУ) кислотой. Для этого к раствору ферментолизата добавляли 20 % ТХУ кислоту, осадок фильтровали [15]. Спектральный анализ растворов ферментолизатов и ТХУ фильтратов проводили в кварцевых кюветах с длиной оптического пути 10 мм на спектрофотометре УФ-1200 относительно дистиллированной воды и приготовленного раствора ТХУ кислоты соответственно.
Планирование 2-факторного эксперимента осуществляли с помощью пакета Statgraphics Plus, используя в качестве параметра поверхности отклика design name - сеПга1 composite blocked cube-star (табл. 1).
Таблица 1
План эксперимента с натуральными значениями факторов и функцией отклика
Режим ферментолиза Факторы эксперимента Функция отклика
Количество ферментного препарата (Х1), %, к массе бланшированного мяса дрейссены Продолжительность ферментолиза (X2), мин N™ (Y), мг/100 мг
1 0,60 225 39,2
2 0,20 90 22,4
3 1,00 90 44,8
4 0,20 360 36,4
5 1,00 360 50,4
6 0,60 225 28,0
7 0,03 225 22,4
8 1,17 225 42,0
9 0,60 34 19,6
10 0,60 415 28,0
Наименьшие и наибольшие значения факторов, заданные при планировании эксперимента, представлены в табл. 2.
Таблица 2
Наименьшие и наибольшие значения факторов, заданные при планировании эксперимента
Фактор Наименьшее значение Наибольшее значение
Х1, % 0,2 1,0
Х2, мин 90,0 360,0
Статистическую обработку результатов исследований проводили общепринятыми методами при доверительной вероятности p < 0,95 [16].
Результаты и их обсуждение
Средняя длина дрейссены составляла 1,8 см, средняя масса - 0,65 г (рис. 1).
Рис. 1. Внешний вид пресноводного моллюска дрейссены
Из-за загрязненности дрейссены илом, травой, обрастаниями потери при мойке и сортировании дрейссены составили 44,1 %. Общие потери с учетом размораживания и мойки - 50,2 %.
Масса сырого тела моллюска составляла 14 % от массы моллюска. Средний выход бланшированного мяса - 11-17,5 % от массы бланшированной дрейссены.
Мясо дрейссены мороженое характеризуется низким содержанием липидов и белка, бланшированное мясо содержит значительное количество белка (табл. 3).
Таблица 3
Химические показатели мяса дрейссены
Сырье Химические показатели
Белок, % ^общ, мг/100 г Вода, % Сухие вещества, % Липиды, % Зола, % ^ам, мг/100 г рН
Мясо дрейссены мороженое (без створок) 5,6 896,0 91,6 8,4 0,4 1,1 11,2 6,8
Мясо дрейссены бланшированное (без створок) 17,3 2 768,0 72,7 27,3 0,4 8,0 67,1 7,0
Вследствие нейтрального значения рН фарша из мяса дрейссены и использования протеазы, проявляющей наибольшую активность в диапазоне нейтральных рН, необходимости понижать или повышать рН не было. Ферментолиз проводили при естественных значениях рН сырья.
В результате проведения исследований согласно плану эксперимента (см. табл. 1) получена математическая модель, которая (с точностью Я^иагеё = 98,3 %) описывает исследуемую зависимость:
У = 7,78134 + 14,3498X1 + 0,108654X2 + 12,031Х12 - 0,0388889X1X2 - 0,000124828Х22.
Поверхность отклика Кам от заданных факторов эксперимента представлена на рис. 2.
Количество ферментного препарата,, %
Рис. 2. Поверхность отклика (зависимость значений аминного азота ферментолизата дрейссены от количества ферментного препарата и продолжительности ферментолиза)
Программой определено решение - параметры ферментолиза, при которых достигается максимум значения функции отклика (Ы^):
- количество ферментного препарата - 1,1 % к массе бланшированного мяса дрейссены;
- продолжительность ферментолиза - 253 мин (4,2 ч).
Учитывая, что средний выход бланшированного мяса из размороженной дрейссены составил 12 %, для удобства расчета полученное количество ферментного препарата было пересчитано относительно бланшированной дрейссены со створками, оно составило 0,1 %.
С целью уточнения продолжительности ферментолиза, при которой происходит замедление процесса накопления аминного азота, изучены характеристики ферментолизатов в течение 2-5 ч ферментолиза в сравнении с образцом-контролем (без добавления ферментного препарата)
(параметры ферментолиза: температура 50 °С, гидромодуль 1:1, количество ферментного препарата - 0,1 % к массе бланшированной дрейссены со створками). Результаты исследований представлены на рис. 3 и в табл. 4.
Контроль 2ч ферментолиз 3ч ферментолиз 4ч ферментолиз 5ч ферментолиз Образцы ферментализатов дрейссены
Рис. 3. Зависимость накопления аминного азота от продолжительности ферментолиза дрейссены
Таблица 4
Химические показатели ферментолизатов дрейссены и образца-контроля
Образцы ферментолизатов Показатели
Белок, % ^бщ, мг/100 мг Вода, % Сухие вещества, %
Контроль 3,7 584,0 93,0 7,0
2 ч ферментолиз 17,7 2 824,0 77,7 22,3
3 ч ферментолиз 17,8 2 840,0 77,7 22,4
4 ч ферментолиз 18,1 2 896,0 76,9 23,1
5 ч ферментолиз 17,4 2 776,0 77,3 22,8
С увеличением продолжительности ферментолиза происходит постепенное накопление аминного азота в ферментолизатах. В исследуемых образцах в течение 2-3 ч ферментолиза содержание аминного азота увеличивается в 3 раза, за 4-5 ч - в 4 раза по сравнению с контролем.
Значения белка (общего азота) образцов 2-5 ч ферментолиза в среднем в 5 раз больше, чем в контроле, что указывает на протекание процессов расщепления белков, полипептидов под действием ферментного препарата и на переход азотистых соединений в ферментолизат. Существенных различий в содержании белка (общего азота) в образцах с различной продолжительностью ферментолиза не выявлено.
Выход ферментолизата во всех образцах был примерно одинаковым и в среднем составил 3,5 % от массы бланшированной дрейссены со створками. Плотный остаток в образцах с ферментным препаратом составил 5,8 % от массы бланшированной дрейссены со створками, в контрольном образце - лишь 1,9 %. Такое различие, вероятно, можно объяснить тем, что в образце-контроле непрогидролизованное мясо моллюска было отделено вместе со створками при процеживании и в плотный остаток не попало.
Содержание белка в плотном остатке в среднем составляет 7,2 % при массовой доле воды 70,8 %, поэтому плотный остаток в виде влажной пасты, высушенной крупки, порошка или гранул может быть использован в качестве кормовой добавки для сельскохозяйственных животных и птиц, а также в качестве компонента различных комбикормов.
Степень гидролиза ферментолизатов находится в пределах 4,4-6,7 % (рис. 4).
7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0
1,6
5,0
4,4
6,2
-6т7-
Контроль 2ч ферментолиз 3ч ферментолиз 4ч ферментолиз 5ч ферментолиз
Образцы ферментализатов дрейссены
Рис. 4. Степень гидролиза в образце-контроле и 2-5 ч ферментолизатах дрейссены
Поскольку степень гидролиза наиболее интенсивно увеличивается в течение первых 2 ч (на 2,8 %) и 3-4 ч (на 1,2 %) ферментолиза, а в течение 2-3 ч и после 4 ч ферментолиза отмечается стабилизация значений степени гидролиза (увеличение на 0,6 и 0,5 % соответственно), ферментолиз целесообразно проводить продолжительностью от 2 до 4 ч.
Одним из способов оценки степени деструкции белков в ферментолизатах считается изменение оптической плотности растворов за счет ТХУ неосаждаемых низкомолекулярных пептидов (белковые соединения с молекулярной массой более 2 кДа под действием раствора ТХУ кислоты выпадают в осадок) [14]. Результаты исследований оценки эффективности ферментолиза спектральным методом представлены на рис. 5.
240 245 250 255
- контроль
- 3 ч-ТХУ
контроль-ТХУ 4 ч ферментолиз
Длина волны,нм
—•— 2 ч ферментолиз
2 ч-ТХУ
5 ч ферментолиз
- 3 ч ферментолиз
- 5 ч-ТХУ
Рис. 5. Изменение оптической плотности ферментолизатов и их ТХУ фильтратов в зависимости от продолжительности ферментолиза
8,0
1,2
1,1
0.9
0,8
Б 0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
4 ч-ТХУ
В образцах с ферментным препаратом спектры ТХУ фильтратов на графике располагаются ниже (меньше оптическая плотность), чем спектры этих же растворов ферментолизатов. Спектры образца-контроля не имеют такой зависимости.
Технологическая схема производства ферментолизата из дрейссены представлена на рис. 6.
Рис. 6. Технологическая схема производства ферментолизата из дрейссены
В зависимости от технических характеристик используемого оборудования режимы некоторых операций могут меняться (в частности, бланширования, центрифугирования, фасования).
Заключение
Пресноводный двустворчатый моллюск дрейссена Dreissena polymorpha, добытый в Весе-ловском водохранилище Ростовской области в январе 2018 г., характеризуется небольшими размерами (средняя длина составляет 1,8 см, масса - 0,65 г). Химический состав мороженого (содержание белка 5,6 %, воды 91,6 %, золы 1,1 %) и бланшированного (содержание белка 17,3 %, воды 72,7 %, золы 8,0 %) мяса дрейссены значительно отличается, кроме содержания липидов (0,4 %).
Анализом модели 2-факторного эксперимента (факторами выбраны количество ферментного препарата и продолжительность ферментолиза) получено уравнение и поверхность отклика, описывающие исследуемую зависимость (Кам от заданных факторов). Установлено оптимальное количество ферментного препарата протозим, необходимого для проведения ферментолиза - 0,1 % к массе бланшированной дрейссены со створками.
Получены образцы ферментолизатов дрейссены, которые характеризуются большим содержанием белка (в среднем 17,8 %), сухих веществ (22,7 %), аминного азота (158,6 мг/100 г), чем образец-контроль (3,7; 7,0 и 46,2 % соответственно).
Установлено наиболее интенсивное увеличение значений степени гидролиза в течение первых 2 ч (на 2,8 %) и 3-4 ч (на 1,2 %) ферментолиза со стабилизацией значений в течение 2-3 ч и после 4 ч ферментолиза (увеличение на 0,6 и 0,5 % соответственно).
Изучено изменение оптической плотности растворов ферментолизатов и их ТХУ фильтратов, что позволяет в сравнении оценить степень деструкции белков.
Отмечена возможность использования плотного остатка ферментолизатов дрейссены в виде влажной пасты, высушенной крупки, порошка или гранул в качестве кормовой добавки для сельскохозяйственных животных и птиц или компонента различных комбикормов (содержание белка составляет в среднем 7,2 % при массовой доле воды 70,8 %).
Составлена технологическая схема производства ферментолизата из дрейссены с проведением ферментолиза по следующему режиму: температура 50 °С, гидромодуль 1:1, количество ферментного препарата протозим 0,1 % к массе бланшированной дрейссены со створками, продолжительность 2-4 ч.
СПИСОК ЛИТЕРА ТУРЫ
1. Гамага В. В., Каблов В. Ф., Костин В. Е., Родионов С. Н., Соколова Н. А. Улучшение экологической ситуации в районах гидротехнических сооружений за счет сбора и утилизации моллюсков рода Дрейссена. URL: https: //cyberleninka.ru/article//uluchshenie- ekologicheskoy- situatsii-v-rayonah-gidrotehnicheskih -sooruzheniy-za-schet-sbora-i-utilizatsii-mollyuskov- roda-dreyssena (дата обращения: 16.11.2018).
2. Пат. РФ № 2478114. Многослойное комбинированное противообрастающее покрытие, обеспечивающее репеллентно-хемобиоцидную защиту / Безносов В. Н., Суздалева А. Л., Митяева Ю. Д., Минин Д. В., Коткин К. С.; опубл. 27.03.2013.
3. Копша А. В. Влияние биообрастания дрейссеной на работу водозаборных сооружении // Экологические проблемы и здоровье населения: материалы Всерос. науч.-практ. конф. (Пенза, 21-22 июня 2017 г.). URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=30248732 (дата обращения: 16.11.2018).
4. Ахметзянова Н. Ш., Егоров Ю. Е. Значение моллюска дрейссены как природного биофильтра и кормового объекта // Воспроизводство естественных популяций ценных видов рыб: тез. докл. Между-нар. конф. (Санкт-Петербург, 20-22 апреля 2010 г.). СПб.: Изд-во ГосНИОРХ, 2010. С. 15-17.
5. Anderson K. E., Waite J. H. Immunolocalization of Dpfp1, a byssal protein of the zebra mussel Dreissena polymorpha. URL: http://jeb.biologists.org/content/iexbio/203/20/3065.full.pdf (дата обращения: 16.11.2018).
6. Gilbert T., Sone E. The byssus of the zebra mussel (Dreissena polymorpha): spatial variations in protein composition. URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20924840 (дата обращения: 21.11.2018).
7. Gantayet A., Ohana L., Sone E. Byssal proteins of the freshwater zebra mussel, Dreissena polymorpha. URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23211030 (дата обращения: 16.11.2018).
8. Литвинова О. А. Разработка технологии ферментного препарата из моллюска дрейссены (Dreissena polymorpha Pallas). URL: http://tekhnosfera.com/razrabotka-tehnologii-fermentnogo-preparata-iz-mollyuska-dreyssena-dreissena-polymorpha-pallas#ixzz5MB5fEUsM (дата обращения: 02.12.2018).
9. Пат. СССР № 566589. Способ получения 5'-фосфодиэстеразы / Бердышев Г. Д., Югай Н. В., Луценко Н. А.; опубл. 1977, Бюл. № 28.
10. Нгуен Хай Иен. Разработка технологии ферментативных гидролизатов из пресноводного моллюска дрейссены (Dreissenum polymorpha Pallas) и зеленой мидии (Perna viridis): автореф. дис. ... канд. техн. наук. М., 2009. 25 с.
11. ГОСТ 7636. Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа. М.: Изд-во стандартов, 1985. 125 с.
12. Черногорцев А. П. Переработка мелкой рыбы на основе ферментирования сырья. М.: Пищ. пром-сть, 1973. 90 с.
13. Разумовская Р. Г. Получение гидролизатов, белковой массы и концентратов из мелкой рыбы // Рыбное хозяйство. 1973. № 6. С. 66-69.
14. Мухин В. А., Новиков В. Ю. Ферментативные белковые гидролизаты тканей морских гидробионтов: получение, свойства и практическое использование. Мурманск: ПИНРО, 2001. 97 с.
15. Головин А. Н. Контроль производства рыбной продукции. М.: Пищ. пром-сть, 1992. Ч. 1. 348 с.
16. Орлов А. И. Математика случая: вероятность и статистика - основные факты. М.: МЗ-Пресс, 2004. 110 с.
Статья поступила в редакцию 21.12.2018
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ
Чернявская Светлана Леонидовна - Россия, 298300, Керчь; Керченский отдел Азово-Черноморского филиала Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии»; канд. техн. наук; старший научный сотрудник лаборатории технологий переработки водных биоресурсов; [email protected].
Есина Любовь Михайловна - Россия, 298300, Керчь; Керченский отдел Азово-Черноморского филиала Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии»; зав. лабораторией технологий переработки водных биоресурсов; esina_l_m @azniirkh.ru.
Кривонос Ольга Николаевна - Россия, 298300, Керчь; Керченский отдел Азово-Черноморского филиала Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии»; инженер I категории лаборатории технологий переработки водных биоресурсов; [email protected].
Богомолова Валерия Викторовна - Россия, 298300, Керчь; Керченский отдел Азово-Черноморского филиала Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии»; канд. техн. наук; старший научный сотрудник лаборатории технологий переработки водных биоресурсов; [email protected].
PRODUCING ENZYMATIC HYDROLYZATE FROM FRESHWATER MOLLUSC DREISSENA POLYMORPHA
S. L. Chernyavskaya, L. M. Esina, O. N. Krivonos, V. V. Bogomolova
Azov-Black Sea Branch of the ofAll-Russian Research Institute of Fisheries and Oceanography,
Kerch Department, Kerch, Russian Federation
Abstract. Pipelines, mechanisms and hydraulic structures laid on the bottom of freshwater bodies are exposed to massive exposure of fouling organisms - mollusks Dreissena polymorpha. Such fouling hinders the equipment operation and increases the corrosion of materials, besides, utilization of mollusks (Dreissena polymorpha) requires financial expenditure. Therefore, to solve the problem, dreissena was suggested to be used as a raw material for producing enzymatic hydrolyzate. The data of the mass-size and chemical composition of the raw materials (dreissena flesh) are presented. During the analysis of the model of a 2-factor experiment (the amount of enzyme preparation and the duration of fermentolysis were taken as factors) there was defined the optimal amount of enzyme (bacterial protease - protozyme). The comparative analysis of a control sample (without adding the enzyme) and enzymatic hydrolyzates of dreissena was carried out. There was stated the increase in protein content (3.7-17.8%), in dry matter (7.0-22.7%), amine nitrogen (446.2-158.6 mg/100 g). The periods of the most intensive increase in the degree of hydrolysis (during the first 2 hours of enzymatic hydrolysis by 2.8% and further 3-4 hours by 1.2%), as well as periods of values stabilization (during 2-3 hours and after 4 hours of enzymatic hydrolysis an increase by 0.6% on average). The change in the optical density of hydrolyzate solutions and their TCA-filtrates has been studied, which helped to compare the degree of protein destruction. There has been presented the technological chart of producing enzymatic hydrolyzates from dreissena with following conditions for fermentolysis: temperature 50 °C, water ratio 1:1, quantity of enzyme protozyme 0.1% to the mass of blanched dreissena with valves, duration 3-4 hours.
Key words: mollusk, dreissena, fermentolysis, protease protozyme, amine nitrogen, degree of hydrolysis, food additive.
For citation: Chernyavskaya S. L., Esina L. M., Krivonos O. N., Bogomolova V. V. Producing enzymatic hydrolyzate from freshwater mollusk Dreissena polymorpha. Vestnik of Astrakhan State Technical University. Series: Fishing Industry. 2019;2:101-111. (In Russ.) DOI: 10.24143/20735529-2019-2-101-111.
REFERENCES
1. Gamaga V. V., Kablov V. F., Kostin V. E., Rodionov S. N., Sokolova N. A. Uluchshenie ekologicheskoi situatsii v raionakh gidrotekhnicheskikh sooruzhenii za sehet sbora i utilizatsii molliuskov roda Dreissena [Improving ecological conditions in the regions with hydrotechnical constructions due to gathering and utilization of Dreissena mollusks]. Available at: https: //cyberleninka.ru/article//uluchshenie- ekologicheskoy- situatsii-v-rayonah-gidrotehnicheskih -sooruzheniy-za-schet-sbora-i-utilizatsii-mollyuskov- roda-dreyssena (accessed: 16.11.2018).
2. Beznosov V. N., Suzdaleva A. L., Mitiaeva Iu. D., Minin D. V., Kotkin K. S. Mnogosloinoe kombinirovannoe protivoobrastaiushchee pokrytie, obespechivaiushchee repellentno-khemobiotsidnuiu zashchitu [Multi-layer combined anti-foul cover providing repellent-chemobiocide protection]. Patent RF, no. 2478114, 27.03.2013.
3. Kopsha A. V. Vliianie bioobrastaniia dreissenoi na rabotu vodozabornykh sooruzhenii [Impact of Dreissena biofouling on water intake structures operation]. Ekologicheskie problemy i zdorov'e naseleniia: materialy Vserossiiskoi nauchno-prakticheskoi konferentsii (Penza, 21-22 iiunia 2017 g.). Available at: https:// eli-brary.ru/item.asp?id=30248732 (accessed: 16.11.2018).
4. Akhmetzianova N. Sh., Egorov Iu. E. Znachenie molliuska dreisseny kak prirodnogo biofil'tra i kormovogo ob"ekta [Importance of mollusk Dreissena as a natural biofilter and food object]. Vosproizvodstvo estestvennykh populiatsii tsennykh vidov ryb: tezisy dokladov Mezhdunarodnoi konferentsii (Sankt-Peterburg, 20-22 aprelia 2010 g.). Saint-Petersburg, Izd-vo GosNIORKh, 2010. Pp. 15-17.
5. Anderson K. E., Waite J. H. Immunolocalization ofDpfpl, a byssal protein of the zebra mussel Dreissena polymorpha. Available at: http://ieb.biologists.org/content/iexbio/203/20/3065.full.pdf (accessed: 16.11.2018).
6. Gilbert T., Sone E. The byssus of the zebra mussel (Dreissena polymorpha): spatial variations in protein composition. Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20924840 (accessed: 21.11.2018).
7. Gantayet A., Ohana L., Sone E. Byssal proteins of the freshwater zebra mussel, Dreissena polymorpha. Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23211030 (accessed: 16.11.2018).
8. Litvinova O. A. Razrabotka tekhnologii fermentnogo preparata iz molliuska dreisseny (Dreissena polymorpha Pallas) [Developing technologies of enzyme preparation from mollusk Dreissena (Dreissena polymorpha Pallas)]. Available at: http:// tekhnosfera.com/razrabotka-tehnologii -fermentnogo-preparata-iz-mollyuska-dreyssena -dreissena-polymorpha-pallas#ixzz5MB5fEUsM (accessed: 02.12.2018).
9. Berdyshev G. D., Iugai N. V., Lutsenko N. A. Sposobpolucheniia 5'-fosfodiesterazy [The way of producing 5'-phosphodiesterase]. Patent SSSR, no. 566589, 1977.
10. Nguen Khai Ien. Razrabotka tekhnologii fermentativnykh gidrolizatov izpresnovodnogo molliuska dreisseny (Dreissenum polymorpha pallas) i zelenoi midii (Perna viridis). Avtoreferat dis. ... kand. tekhn. nauk [Developing technologies of enzyme hydrolyzates from freshwater mollusks Dreissenum polymorpha pallas and Perna viridis. Diss.Abstr. ... Cand.Tech.Sci.]. Moscow, 2009. 25 p.
11. GOST 7636. Ryba, morskie mlekopitaiushchie, morskie bespozvonochnye i produkty ikh pererabotki. Metody analiza [GOST 7636. Fish, sea mammals, sea invertebrates and their processed products]. Moscow, Izd-vo standartov, 1985. 125 p.
12. Chernogortsev A. P. Pererabotka melkoi ryby na osnove fermentirovaniia syr'ia [Processing small fish using fermentation of raw materials]. Moscow, Pishchevaia promyshlennost' Publ., 1973. 90 p.
13. Razumovskaia R. G. Poluchenie gidrolizatov, belkovoi massy i kontsentratov iz melkoi ryby [Producing hydrolyzates, protein mass and concentrates from small fish]. Rybnoe khoziaistvo, 1973, no. 6, pp. 66-69.
14. Mukhin V. A., Novikov V. Iu. Fermentativnye belkovye gidrolizaty tkanei morskikh gidrobiontov: poluchenie, svoistva i prakticheskoe ispol'zovanie [Enzyme protein hydrolyzates of sea hydrobiont tissues: processing, properties and practical use]. Murmansk, PINRO Publ., 2001. 97 p.
15. Golovin A. N. Kontrol'proizvodstva rybnoiproduktsii [Control over fish product processing]. Moscow, Pishchevaia promyshlennost' Publ., 1992. Part 1. 348 p.
16. Orlov A. I. Matematika sluchaia: veroiatnost' i statistika - osnovnye fakty [Case mathematics: reliability and statistics as main factors]. Moscow, MZ-Press, 2004. 110 p.
The article submitted to the editors 21.12.2018
INFORMATION ABOUT THE AUTHORS
Chernyavskaya Svetlana Leonidovna - Russia, 298300, Kerch; Azov-Black Sea Branch of the of All-Russian Research Institute of Fisheries and Oceanography, Kerch Department; Candidate of Technical Sciences; Senior Researcher of the Laboratory of Processing Technologies of Aquatic Bioresources; [email protected].
Esina Lyubov Mikhailovna - Russia, 298300, Kerch; Azov-Black Sea Branch of the of All-Russian Research Institute of Fisheries and Oceanography, Kerch Department; Head of the Laboratory of Processing Technologies of Aquatic Bioresources; esina_l_m @azniirkh.ru.
Krivonos Olga Nikolaevna — Russia, 298300, Kerch; Azov-Black Sea Branch of the of All-Russian Research Institute of Fisheries and Oceanography, Kerch Department; I category Engineer of the Laboratory of Processing Technologies of Aquatic Bioresources; [email protected].
Bogomolova Valeriia Victorovna — Russia, 298300, Kerch; Azov-Black Sea Branch of the of All-Russian Research Institute of Fisheries and Oceanography, Kerch Department; Candidate of Technical Sciences; Senior Researcher of the Laboratory of Processing Technologies of Aquatic Bioresources; [email protected].
