CC BY
241
УДК 575:613.62
о.с. Целоусова1, о.в. Кочетова1, л.3. Ахмадишина1, Г.Ф. Корытина1, т.в. Викторова1,2
ПОЛИМОРФНЫЕ ВАРИАНТЫ ГЕНОВ ЦИТОХРОМА Р450 (СУР1А1, СУР2Е1, СУР206) В РАЗВИТИИ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ПРОФЕССИОНАЛЬНОМУ ТОКСИЧЕСКОМУ ПОРАЖЕНИЮ ПЕЧЕНИ
1Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук (Уфа)
2Башкирский государственный медицинский университет (Уфа)
С целью оценки предрасположенности рабочих, подвергающихся воздействию химических факторов производственной среды, к развитию профессиональных заболеваний, проведен анализ распределения полиморфных вариантов генов (A2455G) CYP1A1, (C1091T) CYP2E1, (С188Т) CYP2D6 цитохрома P450. Нами не выявлены, статистически значимые различия по распределению аллелей и генотипов полиморфных локусов генов CYP2E1, CYP2D6 в исследуемых группах. У рабочих с токсическим, гепатитом выявлен генетический, маркер предрасположенности к развитию болезни — генотип Ile/Val гена CYP1A1 (OR = 5,78).
Ключевые слова: цитохром P450, генетический полиморфизм, токсическое поражение печени
POLYMORPHiC VARiANTS OF GENES OF CYTOCHROME P450 (CYP1A1, CYP2E1, CYP2D6) iN DEVELOPMENT OF PREDiSPOSiTiONS TO PROFESSiONAL TOXiC DEFEAT OF THE LiVER
O.S. Tselousova1, O.V. Kochetova1, L.Z. Akhmadishina1, G.F. Koritina1, T.V. Victorova1-2
11nstitute of Biochemistry and Genetics of Ufa Scientific Center, Ufa 2Bashkortostan State Medical University, Ufa
The aim of this study was to estimate the predisposition of influencing possible factors causing chemical induced abnormal liver function on the basis of studying cytochrome P450 genes ((A4889G) CYP1A1, (C188T) CYP2D6, (C1091T) CYP2E1). No significant association, was found on CYP2D6, CYP2E1 genotypes between a reference group and petrochemical workers. Among the patients with a occupational toxic hepatitis are established genetic marker of predisposition, to development the disease: Ile/Val gene CYP1A1 (OR = 5,78).
Our results suggest that genotype Ile/Ile of gene CYP1A1 (OR = 0,17) are protective variants.
This study demonstrates a significant combined, effect of genes of cytochrome P450 in the predisposition, of occupational pathology at workers of hepthyle and. ethylebenzene-styrene.
Key words: cytochrome P450, genetic polymorphism, toxic defeat of the liver
Опасность влияния окружающей среды на организм человека состоит в ее негативном воздействии, как на здоровье отдельных индивидов, так и на приспособленность популяции в целом. В связи с этим особую актуальность приобретает оценка влияния внешнесредовых факторов на здоровье населения. При действии на организм производственных факторов развивается неспецифическая реакция, направленная на сохранение биохимического и физиологического гомеостаза человека. Выраженность ответных реакций организма, проявляющаяся в усилении деятельности адаптационных механизмов в ответ на стрессовую ситуацию, определяется не только силой и продолжительностью воздействия, но и зависит от генетических особенностей организма. Среди профессиональных заболеваний рабочих нефтехимических предприятий токсический гепатит относят к числу наиболее распространенных патологий [2]. Процессы биотрансформации гидразина и его производных (гептила), протекающие с участием цитохрома Р450 и флавинсодержащих монооксигеназ в печени, сопряжены с образованием высокореакционноспособных промежуточных продуктов (диазометан, метил-радикал, ионы диметил-диазониума)
и инициацией свободнорадикальных процессов [3]. Таким образом, при воздействии химических токсикантов вероятно повреждение печени и развития токсического гепатита [1].
Ген CYP1A1 расположен на 15 хромосоме на участке q22 — q24, экспрессируется преимущественно в печени и в легких. Транзиция аденина на гуанин в положении 2455 в 7 экзоне гена СУР1А1 приводит к замене изолейцина на валин в аминокислотной последовательности каталитического центра фермента в результате чего продуцируется энзим с активностью в 2 раза выше исходной [19].
Ген CYP2Е1 картирован на 10 хромосоме (10q24.3) [11], экспрессируется, в основном, в печени, но может также присутствовать в ткани мозга и в легких. Известен ряд генетических полиморфизмов гена СУР2Е (http://www.imm.ki.se/CYPalleles/). Наиболее широко в ряде работ изучается полиморфизм промоторной области гена СУР2Е1 — ПДРФ PstI/RsaI (аллель CYP2Е1*5В), так же, как и DraI полиморфизм (аллель CYP2Е1*6), локализованный в 6 интроне. Замена G/C, приводит к потере сайта рестрикции для эндонуклеазы RsaI и образованию сайта для эндонуклеазы РвИ, что может вызывать повышение экспрессии фермента [10].
Ген CYP2D6 находится на длинном плече хромосомы 22 (локус 22q13.1) [12]. Фермент CYP2D6 (дебризохин-4-гидроксилаза) принимает участие в метаболизме дебризохина, антидепрессантов, нейролептиков, р-блокаторов, а также нитрозоаминов, компонентов табачного дыма, органических растворителей [5]. Полиморфный вариант С188Т 1-го эк-зона гена CYP2D6, приводит к замене аминокислоты пролин на серин в 34 положении белковой молекулы, в результате этого продуцируется фермент со сниженной активностью по сравнению с каталитической активностью фермента без замены [12].
Целью данного исследования явилась оценка предрасположенности рабочих, подвергающихся воздействию комплекса химических факторов производственной среды, к развитию профессиональных заболеваний печени, на основе изучения полиморфных вариантов генов цитохрома Р450 1А1, 2Е1, 2D6.
МЕТОДИКА
Нами обследованы рабочие ОАО «Салаватнефтеоргсинтез» производства: гептила (п = 202) и этилбензола-стирола (п = 243) (г. Салават) и 335 практически здоровых индивида в качестве группы контроля, жителей Республики Башкортостан, не имеющих профессионального контакта с вредными химическими веществами (средний возраст 45,12 ± 10,57 лет). Основную долю обследуемых рабочих (85,3 %) составили мужчины (средний возраст 45,60 ± 8,35) со стажем работы на вредном производстве от 8 до 40 лет (средний стаж работы 15 ± 7,57 лет). На основании комплексного медицинского анализа выраженности ответных реакций организма работающего на неблагоприятный эффект воздействия профессиональной среды были выделены четыре группы работающих: профессиональные больные (п = 73), «группа риска» (п = 163), рабочие с различной соматической патологией (п = 115), практически здоровые рабочие (п = 94) (табл. 1). Первая группа включала 73 рабочих, имеющих хронические интоксикации комплексом вредных веществ с диагнозом токсический гепатит. Вторую группу рабочих — «группу риска» составили 163 рабочих, имеющих признаки нарушения здоровья или нарушения функциональ-
ного состояния систем организма, реагирующих на действие химических веществ. В третью группу обследованных вошли 115 рабочих с различной соматической патологией. Четвертая группа включала 94 практически здоровых рабочих со стажем работы во вредных условиях более 15 лет (76,7 %). При среднем стаже работы — 10 ± 5,01 лет.
При проведение ПЦР/ПДРФ анализа ДНК выделяли из лимфоцитов периферической крови методом фенольнохлороформной экстракции. Анализ полиморфных локусов генов CYP1A1, CYP2E1, CYP2D6 проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) в стандартных условиях с использованием ранее описанных праймеров [7 — 9]. Гидролиз амплифицированных фрагментов ДНК осуществляли соответствующими рестрикта-зами фирм Hindi, PstI, AsuHPI («Сибэнзим», Россия), с последующим электрофорезом в 7 % ПААГ.
Математическую обработку результатов исследования проводили с использованием пакетов прикладных программ: Statistica v. 6, BIOSTAT, а также программы Hardy-Weinberg equilibrium calculator (http://oege.org/software/). Достоверность различий в частотах встречаемости изучаемых признаков между группами определяли по критерию х2 с коррекцией Йетса. О силе ассоциации генотипов с заболеваниями судили по величине отношения шансов (odds ratio, OR).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Нами изучены полиморфные локусы генов — 7-го экзона (A2455G) CYP1A1, 5' области (C1091T) CYP2E1, 1-го экзона (С188Т) CYP2D6. Распределение частот генотипов всех изученных полиморфных маркеров генов цитохрома Р450 в группах больных и здоровых индивидов соответствовало ожидаемому по Харди — Вайнбергу.
Распределение частот аллелей и генотипов гена CYP1A1 между выборкой рабочих и контрольной группой было сходным. Установлено, что частота гетерозиготного генотипа Ile/Val составила 8,70 % в производственной группе и 7,48 % — в контроле. Данные показатели соответствуют частоте гетерозиготного генотипа в популяциях европеоидов, где на его долю приходится примерно 9,30 % [15]. Анализ распределения частот генотипов полиморф-
Таблица 1
Характеристика обследованных групп рабочих
Показатель Профессиональные больные (n = 73) «Группа риска» (n = 163) Рабочие с соматической патологией (n = 115) Здоровые рабочие (n = 94)
Средний возраст, лет, М ±а 40,43 ± 6,67 45,60 ± 5,03 42,80 ± 5,99 40,20 ± 2,89
Стаж, лет: до 15 4 28 25 28
свыше 15 69 135 90 66
Пол: муж 64 134 98 81
жен 9 29 17 13
Производства: гептила 55 67 54 54
этидбензоластирола 18 96 61 40
ного локуса (A2455G) гена CYP1A1 в зависимости от выраженности патологического состояния у работающих показал существенное повышение частоты гетерозиготного генотипа 11е^а1 в группе рабочих с токсическим гепатитом (табл. 2). Так, среди больных частота гетерозиготного генотипа составила 11,27 %, что существенно выше встречаемости данного генотипа у здоровых рабочих (2,15 %) (р = 0,036, OR = 5,78, С195 % 1,08-40,85). Полученные результаты могут свидетельствовать о возможной предрасположенности лиц с гетерозиготным генотипом Пе^а! к токсическому гепатиту. У больных «группы риска» показана ассоциация аллеля Val с риском развития профессионального токсического гепатита, а также с развитием предпа-тологических состояний, вызванных воздействием промышленных факторов (табл. 2). Гетерозиготный генотип Пе^а1 встречался в пять раз чаще у рабочих «группы риска» по сравнению со здоровыми рабочими (9,82 % против 2,15 %, р = 0,029, OR = 5,30, С195 % 1,13-33,95 соответственно). Также необходимо отметить, вариант Val/Val был зарегистрирован только в «группе риска», но в силу малочисленности индивидов гомозигот по аллелю Val статистической значимости эти различия не достигли. При сравнении группы рабочих с соматической патологией и практически здоровыми рабочими выявлены достоверные различия в распределении частот гетерозиготного генотипа 11е/ Val полиморфного локуса гена CYP1A1 (р = 0,029,
OR = 5,63, 95 % С1 1,15-37,40). В группе рабочих с соматической патологией частота гетерозигот составила 11,01 %, тогда как у здоровых на их долю пришлось 2,15 % (табл. 2).
Вследствие транзиции аденина в положении 2455 на гуанин в 7 экзоне гена CYP1A1 происходит замена изолейцина на валин в аминокислотной последовательности (Ile462Val), что изменяет каталитическую активность энзима, в результате продуцируется фермент, индуцибельность которого почти в 2 раза выше, чем у фермента без замены [19]. Возможно, полиморфный вариант Val гена CYP1A1, увеличивая активность фермента, приводит к образованию большего количества токсичных интермедиатов и ускорению протекания свободно радикальных процессов в клетках. Образовавшиеся в ходе метаболизма токсичные производные промышленных углеводородов не успевают в полной мере обезвредиться, в результате чего происходит повреждение печени, проявляющееся в развитии профессионального токсического гепатита.
Исследования, проведенные в группах лиц, подвергающихся воздействию полиароматиче-ских углеводородов, показали, что гетерозиготный генотип гена С^1А1 ассоциирован с повышением частоты хромосомных аберраций [13]. Так, у рабочих алюминиевого производства и производства кокса было обнаружено достоверное повышение уровня метаболитов ПАУ в моче у носителей гено-
Распределение генотипов и аллелей гена CYP1A1 у обследованных рабочих
Таблица 2
Генотипы Аллели
Ме/Ме МеМаІ Val Маі 11е Val
Группа профессиональных больных
п 63 8 0 134 8
Р ± Sp (%) 88,73 ± 3,75 11,27 ± 3,75 0 94,37 ± 1,93 5,63 ± 1,93
р 0,036* 0,036* - 0,040* 0,040*
OR (СІ) 0,17 (0,02-0,924) 5,78 (1,08-40,85) - 0,18 (0,02-0,94) 5,49 (1,06-38,16)
«Группа риска»
п 146 16 1 308 18
Р ± Sp (%) 89,57 ± 2,39 9,82 ± 2,33 0,61 ± 0,61 94,48 ± 1,27 5,52 ± 1,27
р 0,029* 0,029* 0,765 0,024* 0,024*
OR (СІ) 0,19 (0,029-0,879) 5,30 (1,13-33,95) 2,30 (0,243-55,57) 0,19 (0,030-0,845) 5,38 (1,184-33,97)
Группа рабочих с соматической патологией
п 97 12 0 206 12
Р ± Sp(%) 88,99 ± 2,99 11,01 ± 2,99 0 94,50 ± 1,54 12,50 ± 1,54
р 0,029* 0,029* - 0,032* 0,032*
OR (СІ) 0,19 (0,027-0,872) 5,63 (1,15-37,40) - 0,19 (0,029-0,845) 5,36 (1,118-35,17)
Группа здоровых рабочих
п 91 2 0 184 2
Р ± Sp(%) 97,85 ± 1,50 2,15 ± 1,50 0 98,92 ± 0,76 1,08 ± 0,13
Примечание: *р - при сравнении с группой здоровых рабочих, статистически значимые различия.
Таблица 3
Распределение генотипов и аллелей гена CYP2D6 у обследованных рабочих
Генотипы Аллели
СС СТ ТТ С Т
Группа профессиональных больных
п 37 11 7 85 25
Р ± Sp (%) 67,27 ± 6,32 20,0 ± 5,39 12,73 ± 4,49 77,27 ± 3,99 22,73 ± 3,99
р 0,579 0,186 1,000 0,611 0,611
OR (СІ) 0,74 (0,314-1,741) 2,25 (0,733-7,055) 0,87 (0,275-2,740) 0,81 (0,422-1,567) 1,23 (0,638-2,373)
«Группа риска»
п 91 15 10 197 35
Р ± Sp (%) 78,45 ± 3,82 12,93 ± 3,11 8,62 ± 2,61 84,91 ± 2,35 15,09 ± 2,35
р 0,803 0,715 0,336 0,364 0,364
OR (СІ) 1,17 (0,545-2,493) 1,34 (0,477-3,853) 0,57 (0,203-1,574) 1,35 (0,746-2,421) 0,74 (0,413-1,340)
Группа рабочих с соматической патологией
п 56 10 15 122 40
Р ± Sp(%) 69,14 ± 5,13 12,35 ± 3,65 18,52 ± 4,32 75,31 ± 3,38 24,69 ± 3,38
р 0,473 0,845 0,632 0,324 0,324
OR (СІ) 0,72 (0,328-1,569) 1,27 (0,413-3,964) 1,36 (0,527-3,567) 0,73 (0,405-1,309) 1,37 (0,764-2,472)
Группа здоровых рабочих
п 53 7 10 113 0,364
Р ± Sp(%) 75,71 ± 5,12 10,0 ± 3,58 14,29 ± 4,18 80,71 ± 3,33 19,29 ± 3,33
типа 11е^а1 [4]. Мег1о et а!., (1998) были получены аналогичные результаты в исследованиях проведенных в Италии на офицерах, подвергающихся воздействию бензпиренов воздуха [14].
При анализе частот полиморфного варианта (С-1091Т) гена CYP2E1 не выявлено достоверных различий между группами сравнения. Частота встречаемости гетерозиготного генотипа С1С2 составила 4,2 % в группе рабочих, что не существенно отличается от таковой в контрольной выборке, где она составила 6,4 %. В исследованиях, проведенных среди рабочих монголоидных популяций, показана связь аллеля Т гена CYP2Е1 с нарушением функции печени при высоких концентрациях винилхлорида [21]. Обнаружены четкие ассоциации мутации регуляторной области гена и мутации 6-го экзона с развитием профессиональной интоксикации у рабочих производства 1,3-бутадиена и стирола [17, 20]. Однако, в исследовании Vodicka et а!. (2002) не было выявлено статистически значимых различий в распределении гетерозиготного генотипа гена CYP2Е1 при изучении рабочих прозводства 1,3-бутадиена в Греции [16]. В работе Pavanello et а!. (2000) указывается на малую информативность полиморфных ло-кусов гена С^2Е1 при проведении ассоциативных исследований в популяциях европеоидов [18].
При изучении распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта С188Т гена CYP2D6 в группе рабочих и в контроле статистически достоверных различий обнаружено не было. Частота аллеля Т достигала 17,20 % среди рабочих и
19,75 % в контрольной группе. Распределение частот аллелей и генотипов в группах больных с профессиональной патологией и здоровых рабочих было сходным (табл. 3). Показано, что в группе рабочих с токсическим гепатитом частота гетерозиготного генотипа СТ составила 20,0 %, тогда как в группе здоровых 10,0 %, в то же время гомозиготный генотип ТТ у профессиональных больных встречался с частотой 12,73 % против 14,29 % у здоровых рабочих. Имеющиеся литературные данные указывают на предрасположенность к ряду производственных патологий (гепатит, цирроз) лиц, являющихся быстрыми метаболайзерами [9]. Признано, что ген CYP2D6 является важным биомаркером, определяющим предрасположенность к заболеваниями центральной нервной системы, которые вызываются воздействием марганца на организм [6].
Таким образом, в результате проведенного исследования была установлена взаимосвязь генотипа Пе^аі гена CYP1A1 (OR = 5,78) с повышенным риском развития токсического поражения печени у рабочих производств гептила и этилбензола-стирола, при воздействии комплекса химических веществ производственной среды, в то время как маркером устойчивости рабочих изученных производств на воздействие вредных факторов и развитием токсического гепатита может быть генотип Пе/Пе гена CYP1A1 (OR = 0,17).
Работа выполнена при частичной финансовой поддержке грантов РГНФ 07-06-00058а, РФФИ 08-04-97007-р_поволжье_а
ЛИТЕРАТУРА
1. Зимин Ю.В. Молекулярные механизмы метаболитической адаптации патологически измененной печени при токсическом гепатите / Ю.В. Зимин, С.П. Сяткин, Т.Т. Березов // Вопр. мед. химии. — 2001. — № 3. — С. 29 — 33.
2. Измеров Н.Ф. Прошлое, настоящее и будущее профпатологии / Н.Ф. Измеров // Медицина труда и промышленная экология. — 2001. — № 1.
- С. 1-9.
3. Куценко С.А. Основы токсикологии: научнометодическое издание. — СПб.: Фолиант, 2004.
- 720 с.
4. A study of multiple biomarkers in coke oven workers-a cross-sectional study in China / G. Pan [et al.] // Carcinogenesis. — 1998. — Vol. 19, N 11.
- P. 1963—1968.
5. A tobacco smoke-derived nitrosamine, 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone, is activated by multiple human cytochrome P450s including the polymorphic human cytochrome P4502D6 / C.L. Crespi [et al.] // Carcinogenesis. — 1991. — Vol. 12, N 7. — P. 1197—1201.
6. Butkiewicz D. Modulation of DNA adduct level in human mononuclear white blood cells and granulocytes by CYP1A1, CYP2D6 and GSTM1 genetic polymorhisms. / D. Butkiewicz, E. Grzybowska, K. Hemminki // Mutation Research. — 1998. — Vol. 415. — P. 97—108.
7. Combined genetic polymorphism and risk for development of lung cancer / R. El-Zein [et al.] // Mutat. Res. — 1997. — Vol. 381, N 2. — P. 189 — 200.
8. Detection of CYP1A1 Polymorphism Using Designed RFLP and Distributions of CYP1A1 Genotypes in Japanese / T. Oyama [et al.] // Int. Arch. Occup. Environ. Health. — 1995. — Vol. 67. — P. 253 — 256.
9. Frequencies of CYP2D6 mutant alleles in a normal Japanese population and metabolic activity of dextromethorphan O-demethylation in different CYP2D6 genotypes / T. Kubota [et al.] // Br. J. Clin. Pharmacol. — 2000. — Vol. 50, N 1. — P. 31—34.
10. Hayashi S. Genetic polymorphisms in the 5'-flanking region change transcriptional regulation of the human cytochrome P450IIE1 gene / S. Hayashi, J. Watanabe, K. Kawajiri // J. Biochem. — 1991. — Vol. 110, N 4. — P. 559 — 565.
11. Kolble K. Regional mapping of short tandem repeats on human chromosome 10: cytochrome P450 gene CYP2E, D10S196, D10S220 and D10S225
Сведения об авторах:
/ K. Kolble // Genomics. - 1993. - Vol. 18. -P. 702-704.
12. Localization of the CYP2D gene locus to human chromosome 22q13.1 by polymerase chain reaction, in situ hybridization, and linkage analysis / A.C. Gough [et al.] // Genomics. — 1993. — Vol. 15, № 2. - P. 430-432.
13. Markers of genetic susceptibility in human environmental hygiene and toxicology: the role of selected CYP, NAT and GST genes / R. Thier [et al.] // Int. J. Hyg. Environ. Health. - 2003. - Vol. 206, N 3. - P. 149-171.
14. Merlo F. Urinary excretion of 1-hydroxypyrene as a marker for exposure urban air levels of polycyclic aromatic hydrocarbons / F. Merlo, A. Andreassen, A. Westen // Cancer Epidem. Biomarkers. Prev. -1998. - Vol. 7, N 2. - P. 147-155.
15. Metabolic Gene Polymorphism Frequencies in Control populations / S. Garte [et al.] // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prevention. - 2001. - Vol. 10, N 12. - P. 1239-1248.
16. New aspects in the biomonitoring of occupational exposure to styrene / P. Vodicka [et al.] // Int. Arch. Occup. Environ. Health. - 2002. - Vol. 75. -P. 75-85.
17. Occupational exposure to styrene: modulation of cytogenetic damage and levels of urinary metabolites of styrene by polymorphisms in genes CYP2E1, EPHX1, GSTM1, GSTT1 and GSTP1 / J.P. Teixeira [et al.] // Toxicology. - 2004. - Vol. 195, N 2-3.
- P. 231 -242.
18. Pavanello S. Biological indicators of geno-toxic risk and metabolic polymorphisms / S. Pavanello, E. Clonfero // Mutat. Res. - 2000. - Vol. 463, № 3.
- P. 285-308.
19. Persson I. In vitro kinetics of two human CYP1A1variant enzymes suggested to be associated with interindividual differences in cancer susceptibility / I. Persson, I. Johansson, M. Ingelman-Sundberg // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1997. -Vol. 231, N 1. - P. 227-230.
20. Possible impact of human CYP2E1 polymorphisms on the metabolism of acrylonitrile / R. Thier [et al.] // Toxicol. Lett. - 2002. - Vol. 128, N 1-3.
- P. 249-255.
21. The GST T1 and CYP2E1 genotypes are possible factors causing vinyl chloride induced abnormal liver function / C.Y. Huang [et al.] // Arch. Toxicol.
- 1997. - Vol. 71, N 8. - P. 482-488.
Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук, Уфа, 450054, Пр. Октября,71; факс: (3472)356088; e-mail: [email protected] Целоусова Ольга Сергеевна, аспирант.
Кочетова Ольга Владимировна, к.б.н., науч. сотрудник.
АхмадишинаЛейсанЗинуровна, к.б.н., науч. сотрудник.
Корытина Гульназ Фаритовна, к.б.н., ст. науч. сотрудник.
Викторова Татьяна Викторовна - д.м.н., заведующая лабораторией экологической генетики человека. Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук, Уфа, 450054, Пр. Октября,71; факс: (3472)356088; e-mail: [email protected]; д.м.н., заведующая кафедрой биологии; Башкирский государственный медицинский университет, Уфа, 450000, ул. Ленина, 3.
