CC BY
26
стаде разведения по линиям и создания заводских линий.
Список литературы
1. Ульянов А.Н. Актуальные проблемы современного овцеводства России // Овцы, козы, шерстяное дело. 2011. № 3. С. 5460.
2. Куликова А.Я. Результаты использования баранов разной кровности по отцовской породе линкольн при совершенствовании генофондного стада длинношерстных овец // Сборник научных трудов КНЦЗВ. 2019. Т.8. № 3. С. 19-23.
3. Ульянов А.Н., Куликова А.Я. Селекционно-генетические аспекты повышения
продуктивности овец южной мясной породы / А.Н. Ульянов, А.Я. Куликова, О.Г. Григорьева // Овцы, козы, шерстяное дело. 2019. № 3. С. 15-18.
4 Ульянов А.Н., Куликова А.Я. Эффективность разведения овец мясного типа и использования баранов в типе породы тексель // Овцы, козы, шерстяное дело. 2007. № 2. С. 1-4.
5. Ульянов А.Н., Куликова А.Я. Результаты прямого и реципрокного скрещивания длинношерстных овец кубанского заводского типа породы линкольн // Овцы, козы, шерстяное дело. 2019. № 1. С. 2-3.
DOI:10.34617/e8nh-z971 УДК 575.224.22:636.32/.38
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ PRL, В^ У ОВЕЦ ПОРОДЫ ЛАКОН
Селионова Марина Ивановна1, д-р биол. наук Чижова Людмила Николаевна2, д-р с.-х. наук Суржикова Евгения Семеновна2, канд. с.-х. наук Петухова Дарья Дмитриевна2, аспирант Светличный Сергей Иванович3, соискатель 1Российский государственный аграрный университет -Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева, г. Москва, Российская Федерация
2ФГБНУ «Северо-Кавказский федеральный научный аграрный центр», г. Михайловск, Российская Федерация
3ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина», г. Краснодар, Российская Федерация
Изучен полиморфизм генов пролактина (PRL), бетта-лактоглобулина(P-LG) у овец породы лакон, выращиваемых в КФХ «Николаев» Крымского района Краснодарского края. Методом ПЦР-ПДРФ, установлено, что полиморфизм генов PRL и p-LG представлен двумя аллелями РЯЬА, РЯЬВ; р-Ь6А, в-ЮВ, и тремя генотипами РЯЬАА, РЯЬАВ, РЯЬВВ; (1-ЮАА, в-ЮАВ, в-ЮВВ с разной частотой встречаемости.
Ключевые слова: полиморфизм; овцы; порода лакон; гены; PRL; p-LG
POLYMORPHISM OF PRL, B-LG GENES IN THE SHEEP OF LACAUNE BREED
Selionova Marina Ivanovna1, Dr. Biol. Sci. Chizhova Lyudmila Nikolaevna2, Dr. Agr. Sci. Surzhikova Evgenia Semenovna2, PhD Agr Sci.
Petukhova Daria Dmitrievna2, PhD student Svetlichny Sergey Ivanovich3, applicant
1Russian State Agrarian University - Moscow Timiryazev Agricultural Academy, Moscow, Russian Federation
2FSBSI«North-Caucasian Federal Agricultural Research Centre», Mikhaylovsk, Russian Federation
3Kuban State Agrarian University named after I. T. Trubilin, Krasnodar, Russian Federation
The polymorphism of prolactin (PRL), betta-lactoglobulin (P-LG) genes was studied in sheep of the Lacaune breed raised in the Nikolaev farm in the Crimean region of the Krasnodar Territory. Using PCR-RFLP, it was found that the polymorphism of the PRL and P-LG genes is represented by two alleles of PRLA, PRLB; P-LGA, P-LGB, and the three genotypes of PRL^, PRLab, PRLbb; P-LG^, P-LGAB, P-LGBB with different frequency of occurrence.
Key words: polymorphism; sheep; Lacaune breed; genes; PRL; P-LG
ДНК-технологии занимают важное место в ряду перспективных методов, используемых в животноводстве. В настоящее время идентифицирован целый ряд ДНК-маркеров, оказывающих влияние на развитие количественных и качественных признаков у сельскохозяйственных животных. Преимущества селекции с помощью маркеров (Marker Assisted Selection, MAS) в том, что они стабильны в онтогенезе, независимы от условий внешней среды, определяются в раннем возрасте, что очень важно, также их определение не требует больших затрат, но при этом значительно улучшается качество селекционного процесса и повышается его эффективность. Важной характеристикой маркеров является полиморфизм, представляющий собой изменения в нуклеотидной последовательности ДНК маркера, обусловленные различными типами мутаций, его проявления - аллельный спектр. Наличие двух или более аллелей является необходимой предпосылкой для использования локуса в качестве возможного генетического маркера [3]. Общеизвестным методом анализа полиморфизма генов является полимеразная цепная реакция с последующей рестрикцией амплифици-рованных фрагментов, соответствующей рестрикционной эндонуклеазой (ПЦР-ПДРФ). По длинам получаемых фрагментов после расщепления возможен вывод об отсутствии или наличие точечной му-
тации, а также о гомозиготности или ге-терозиготности по данному аллелю [4, 5].
Растущий интерес к высококачественным сырам из овечьего молока привел к обширным исследованиям, направленным на использование генетического потенциала овец в производстве молока. Гены PRL и p-LG являются функциональными генами-кандидатами, которые могу быть использованы в качестве перспективных маркерных генов, связанных с признаками молочной продуктивности.
Для России молочное овцеводство не является традиционным направлением, но в последние годы в нашу страну локально завозятся импортные молочные породы овец - бентхаймер, остфризская, лакон, ассаф для чистопородного разведения и скрещивания с местными овцами. В 2015 году в село Молдаванское Крымского района Краснодарского края из Департамента Аверон, находящимся на юге Франции, были завезены овцы породы лакон ^асаипе). Порода лакон характеризуется достаточно высоким уровнем продуктивности: способны давать более 400 литров молока за сезон, от овец-рекордисток получают до 650 литров (до 5-6 литров в сутки) [1, 2]. Генетические вариации генов-кандидатов, затрагивающие экономические признаки (такие как рост, надои молока, репродуктивные признаки), стимулируют исследовательский интерес.
Ген пролактина у овец расположен на 20 хромосоме, является ответственным за выработку протеина и лактозы в молоке, он кодирует фермент пролактина, который играет большую роль в развитии молочной железы. Уменьшение экспрессии гена PRL, связанное с уменьшением секреции молока, позволяет предположить, что пролактин является функциональным геном-кандидатом, который может быть использован в качестве позиционного маркерного гена, связанного с признаками молочной продуктивности [6, 7].
Ген р-лактоглобулин расположен в 3 хромосоме овцы и является одним из специфических генов, которые влияет на молочную продуктивность. В гене выявлено три доминантных аллелях (А, В и С), которые отличаются одной или несколькими аминокислотными заменами. Варианты А и В являются наиболее распространенными, вариант С встречается редко. Полиморфное действие гена ¡З-Ю влияет на компоненты молока, включая содержание белка, жира и лактозы, а также влияние генетических вариантов белка на свойства молока [7, 8].
Вышеизложенное определило актуальность и цель настоящих исследований и послужило основанием для изучения полиморфизма генов PRL, p-LG, контролирующих молочную продуктивность овец породы лакон.
Таблица 1 породы
Своеобразие аллельного спектра гена PRL в популяции овец породы лакон, выразилось в высокой (0,98) частоте встречаемости аллеля РЯЬА, низкой (0,02) аллеля РЯЬВ, а также высокой (97,0 %) ча-
Методика исследований. Лабораторные исследования проводились в аккредитованной лаборатории иммуноге-нетики и ДНК-технологий ВНИИОК-филиал ФГБНУ «Северо-Кавказский ФНАЦ». Свидетельство ПЖ - 77N008326 от 18.04.2018 г. Биологическим материалом являлась ДНК выделенная из цельной крови, полученной из яремной вены от овцематок (n = 87), выращиваемых в КФХ «Николаев» Краснодарского края, Крымского района. Для выделения ДНК из крови использовали наборы реагентов Diatom™ DNA Prep 100 ООО Лаборатория «Изоген» г. Москва. ПЦР-ПДРФ проводили на программируемом четырехканальном термациклере «Терцик» (Россия) в объёме 20 мкл с использованием праймеров, приведенных в работе (Jawasreh et al., 2019) и эндонуклеаз для рестрикции (HaeIII, RsaI). Детекцию результатов осуществляли методом горизонтального электрофореза в 2-3 % агарозном геле при ультрафиолетовом свете после окрашивания бромистым этидием.
Результаты исследований и их обсуждение. Генотипирование установило, что полиморфизм изучаемых генов, представлен двумя аллелями: пролактина (PRL) аллелями PRLA и PRLB; ß-лактоглобулина (ß-LG) аллелями ß-LGA и ß-LGB, и тремя генотипами: PRLAA, PRL AB, PRL BB; ß-LGAA, ß-LGAB, ß-LGBB с разной частотой встречаемости (таблица 1).
стотой встречаемости генотипа РЯ1АА, очень низкой (3,0 %) РЯЬАВ и отсутствием генотипа РЯЬВВ.
Особенность распределения аллеля в-ЮВ в исследуемой популяции овец, вы-
- Частота встречаемости аллелей и генотипов генов PRL и ß-LG овец лакон
Ген Частота встречаемости
генотипов, % аллелей
АА ВВ АВ А В
PRL 97,0 0 3,0 0,98 0,02
ß-LG 8,0 45,0 47,0 0,32 0,68
разилась в большей (0,68), почти в 2 раза, частоте встречаемости чем аллеля ¡3^А (0,32). Доля животных с гетерозиготным ¡3^АВ и гомозиготным в-LGВВ генотипами была сравнительно одинаковой (47,0 и 45,0 %) соответственно, отмечена низкая (8,0 %) встречаемость гомозиготного генотипа ¡3^м.
Выводы. Методами ДНК-диагностики изучен полиморфизм генов, контролирующих молочную продуктивность овец породы лакон. Полученные результаты свидетельствуют о своеобразии породного, популяционного генофонда овцематок данной породы. Исследования подтвердили, что изучение полиморфизма генов актуально в связи с проблемой обеднения генофондов, из-за риска полного исчезновения определенных аллелей. Проведение регулярных скрининго-вых работ по выявлению желательных генотипов, создаст условия для накопления селекционно-значимых генетических маркеров в племенном стаде овец породы лакон, разводимого в хозяйстве Краснодарского края.
Список литературы
1. Вобликова, Т. В. Изучение опыта ведения прибыльного молочного овцеводства в России и республике Азербайджан, анализ факторов, определяющих уровень и динамику объема производства овечьего молока / Т. В. Вобликова, Я. Н. Зайка // «Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства»: материалы XXI Международной научно-практической конференции: в 2 ч. Ч 2 / редкол.: А. И. Портной (гл. ред.) [и др.]. - Горки: БГСХА. 2018. 210 с.
2. Светличный, С.П. Пилотный проект промышленного производства овечьего
молока на Кубани / С.И. Светличный, Н.Н. Бондаренко, Н.В. Меренкова, М.И. Селио-нова, С.В. Свистунов // Овцы, козы, шерстное дело. 2019. № 1. С. 20-24.
3. Селионова, М.И. Геномные технологии в селекции сельскохозяйственных животных / М.И. Селионова, А.-М.М. Айба-зов // Сельскохозяйственный журнал. 2014. №7 (1).
4. Селионова, М. И. Породные особенности аллельного профиля генов, контролирующих молочную продуктивность крупного рогатого скота / М. И. Селионова, Л. Н. Чижова, Е. С. Суржикова и др. // АгроЗооТехника. 2019. № 1. Т. 2. С. 3.
5. Широкова, Н. В., Оптимизация техники проведения ПЦР-ПДРФ для генотипи-рования овец / Н. В. Широкова, Ю. А. Колосов, Л. В. Гетманцева, А. В. Радюк, Н. Ф. Ба-коев // Научный журнал КубГАУ -Scientific Journal of KubSAU. 2015. №113.
6. Gras, M. A. Prolactin polymorphism effect over production traits types at Transyl-vanian Merino sheep / M. A. Gras, C. M. Rotar, R. S. Pelmus, C. M. Lazar, E. Ghita, H. Grosu // Scientific Papers: Animal Science and Biotechnologies 2017. 50(1). Р.56 - 59.
7. Jawasreh, K. Effect and Interaction of p-Lactoglobulin, Kappa Casein, and Prolactin Genes on Milk Production and Composition of Awassi Sheep / K. Jawasreh, A.A. Amareen, P. Aad // Animals 2019. 9(6). Р. 382.
8. Padilla, P. Polymorphisms of a-lactoalbumin, p-lactoglobulin and prolactin genes are highly associated with milk composition traits in Spanish Merino sheep / P. Padilla, M. Izquierdo, M. Martinez-Trancon, J. Carlos Parejo, et al. // Livest. Sci. 2018. 217. Р. 26-29.
