CC BY
20
Полиморфизм Arg389Gly гена ADRB1
^ W W
у больных хронической сердечной недостаточностью
Алиева Т.А., Камилова У.К.
Ташкентская медицинская академия, Узбекистан
Alieva TA., Kamilova U.K.
Tashkent Medical Academy, Uzbekistan
ADRB1 Arg389Gly gene polymorphism in patients with chronic heart failure
Резюме. Изучен полиморфизм Arg389Gly гена ADRB1 у больных хронической сердечной недостаточностью (ХСН). На основании генетических исследований у пациентов с ХСН узбекской национальности определен вклад в риск прогрессирования заболевания с 389Gly аллелем Arg389Gly гена ADRB1.
Ключевые слова.: хроническая сердечная недостаточность, полиморфизм гена Arg389Gly.
Медицинские новости. - 2016. - №10. - С. 80-81. Summary. Study ADRB1 Arg389Gly gene polymorphism in patients wtth chronic heart failure (CHF). Based on genetic studies in patients with CHF Uzbeks defined contribution to the risk of disease progression with 389Gly allele Arg389Gly ADRB1 gene. Keywords: chronic heart failure, polymorphism Arg389Gly ADRB1. Meditsinskie novosti. - 2016. - N10. - P. 80-81.
В мире хроническая сердечная недостаточность (ХСН) из-за значительной распространенности, высокого уровня смертности представляет собой не только медицинскую, но и социальную проблему. Ожидается, что в ближайшие 2030 лет распространенность ХСН возрастет на 40-60%. Эта патология резко ухудшает показатели качество жизни больных и в 4 раза повышает риск летального исхода: риск внезапной смерти у пациентов с ХСН в 5 раз превышает показатель лиц, не страдающих сердечной недостаточностью [1, 5, 6]. Одним из пусковых механизмов в прогрессировании ХСН является повышение активности нейрогуморальной регуляции: активация симпатико-адреналовой системы (САС) и повышение концентрации катехоламинов, которое опосредуется через р-адренорецепторы и наблюдается еще до появления первых симптомов заболевания, а в его развернутой стадии - служит независимым предиктором смерти. В связи с этим в течение последних десятилетий большое значение придается полиморфизму генов рецепторов р-адренорецепторов в развитии проявлений и прогнозе сердечной недостаточности [3, 10]. Получен ряд научных, практических результатов по распространенности, диагностике и лечению ХСН, в том числе доказана роль генетических факторов в механизме развития заболевания [4, 7, 8].
Цель исследования - изучить полиморфизм Аrg389Gly гена ADRB1 у больных ХСН. Материалы и методы У 154 больных ХСН узбекской национальности были изучены полиморфизм Аrg389Gly гена ADRB1 и Агд^!у гена
ADRB2. Контрольную группу составили 157 здоровых лиц - мужчин узбекской национальности. Все больные были разделены на три группы по функциональному классу (ФК) ХСН согласно Нью-йоркской классификации кардиологов (NYHA), по данным проведения теста 6-минутной ходьбы (ТШХ). Пациенты с I ФК составили 27 человек, со II ФК - 58 и III ФК - 69. Группы по возрасту были сопоставимы. Для выделения ДНК из лимфоцитов периферической крови использовали модифицированный метод фенольно-хлороформной экстракции и набор «РНКсорб» ООО «Интерлабсервис» (Россия).
ЩИСУООЦ Электрофореграмма ПЦР продуктов полиморфизма Arg389Gly гена ADRB1. 1 -отрицательный контроль; 2 - положительный контроль; 3, 5, 6, 8-10, 12, 13 - дикий генотип Arg/ Arg; 4, 7, 11 - гетерозиготный генотип Arg/Gly, 14 -гомозиготный генотип Gly/Gly
ЛИДаП Частота распределения аллелей и генотипов полиморфизма Аrg389Gly гена ADRB1 в исследуемой группе пациентов и популяционной выборке
1руппа n Частота аллелей Частота распределения генотипов
Arg Gly Arg/Arg Arg/Gly Gly/Gly
n % n % n % n % n %
Основная группа 154 243 78,9 65 21,1 96 62,3 51 33,1 7 4,5
ФК I 27 37 68,5 17 31,5 13 48,1 11 40,7 3 11,1
ФК II 58 91 78,4 25 21,5 34 58,6 23 39,6 1 1,7
ФК III 69 115 83,3 23 16,7 49 71,0 17 24,6 3 4,3
Контрольная группа 157 253 80,6 61 19,4 102 46,5 49 31,2 6 3,8
МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ
№ 10 •2016
80
ШЯЯ Различия аллелей и генотипов полиморфизма 801253 гена ADRB1 в подгруппе ФК I и контрольной группе
Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов в группах Статистическое различие
подгруппа ФК I, n=27 контроль, n=157
Аллель Агд 37 253 Х2=4,0; Р=0,04; OR=1,9; 95% ДИ 1,006-3,609
Аллель Gly 17 61
Генотип Агд/Агд 13 102 Х2=2,8; Р=0,09; 0R=0,5; 95% ДИ 0,2199-1,14
Генотип Агд^ 11 49 Х2=0,9; Р=0,3; 0R=1,5; 95% ДИ 0,6551-3,505
Генотип Gly/Gly 3 6 Х2=2,6; Р=0,1; 0R=3,1; 95% ДИ 0,737-13,43
Генотип Агд/ Gly + Gly/Gly 14 55 Х2=2,8; Р=0,09; 0R=2,0; 95% ДИ 0,877-4,548
^аблица^^ Различия аллелей и генотипов полиморфизма rs1801253 гена ADRB1 в подгруппах ФК I и ФК III
Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов в группах Статистическое различие
подгруппа ФК I, n=27 подгруппа ФК III, n=69
Аллель Arg 37 115 Х2=5,2; Р=0,02; 0R=2,3; 95% ДИ 1,109-4,758
Аллель Gly 17 23
1енотип Arg/Arg 13 49 Х2=4,4; Р=0,03; 0R=0,4; 95% ДИ 0,1515-0,9479
1енотип Arg/Gly 11 17 Х2=2,4; Р=0,1; 0R=2,3; 95% ДИ 0,8191-5,399
1енотип Gly/Gly 3 3 Х2=1,5; Р=0,2; 0R=1,7; 95% ДИ 0,5192-14,56
1енотип Arg/ Gly + Gly/Gly 14 20 Х2=4,4; Р=0,04; 0R=2,6; 95% ДИ 1,055-6,599
При заборе биоматериала были использованы стандартные вакуумные пробирки Vacutainer Becton Dickinson International (США) с ЭДТА. Концентрацию и чистоту выделенной ДНК измеряли на спектрофотометре NanoDrop 2000 (США) при длине волны A260/280 нм. Чистота образцов выделенной ДНК, определяемая отношением A260/280, составила 1,7/1.8. Это указывает на весьма незначительное содержание загрязняющих белков или других макромолекул в растворах выделенной ДНК, и эти образцы могут использоваться в ПЦР без дополнительной очистки. Далее с образцами выделенной ДНК была проведена стандартная ПЦР с детекцией продуктов амплификации на программируемых термоциклерах фирмы «Applied Biosystems» (США) и «Corbett Research», (Quagen, Германия). Документирование результатов электрофореза проводили с использованием Geldok видеосистемы «Биоком» (Россия) (рисунок).
Результаты и обсуждение
Анализ полученных данных показал, что распределение генотипов Arg389Gly у больных ХСН было следующим: Arg/Arg у пациентов с I ФК ХСН составил 62,3%, II ФК - 58,6% и III ФК - 71%. Arg/Gly генотипы составили у больных с ФК 40,7%, II ФК - 39,5% и III ФК ХСН - 24,6% (табл. 1). У лиц контрольной группы показатель Arg/ Arg составил 46,5% и Arg/Gly - 31,2%.
Согласно полученным результатам, группа контроля и общая группа больных ХСН недостоверно отличались по частотам аллелей и генотипов. Наиболее распространенным в исследуемых группах оказался гомозиготный дикий генотип Arg389Arg выявленный в 62,3% случаев (96/154) в объединенной выборке пациентов с ХСН и в 46,5% (102/157) - в
популяционной выборке, однако при статистической обработке достоверных отличий получено не было (х2=0,2; Р=0,6; OR=0,9; 95% ДИ 0,56—1,417). Благоприятный аллель Агд389 выявлен в 78,9% хромосом в основной группе больных и 80,6% - в популяционной выборке, и здесь также различия не достигли уровня статистической значимости (Р>0,05).
Гомозиготный по неблагоприятному аллелю генотип Gly389Gly встречался в объединенной группе больных в 4,5% (7/154) и в 3,8% (6/157) - в популяционной выборке (%2=0,04; Р=0,8; ОР=1,1; 95% ДИ 0,368-3,415). Неблагоприятный аллель Gly389 выявлен в 21,1% хромосом в группе пациентов с ХСН и в 19,4% - в контрольной группе (х2=0,3; Р=0,6; ОР=1,1; 95% ДИ 0,750-1,641).
Частота гетерозиготного генотипа Агд/ 01у в исследованных группах и подгруппах больных ХСН была сходной и не достигла статистически значимых отличий от группы контроля (Р>0,05).
Однако при анализе распределения частот неблагоприятных аллелей и генотипов полиморфизма ге1801253 среди различных подгрупп больных ХСН выявлено значимое влияние данного полиморфизма на течение ХСН (табл. 2). В подгруппе лиц с ХСН с ФК I достоверно чаще встречались аллель 389Gly (31,5%) и генотип Gly/Gly (11,1%) по сравнению с группой контроля (19,4% и 3,8% соответственно). Как видно, частота аллеля 389Gly в 1,9 раза значительно выше в данной подгруппе больных, чем у здоровых доноров (х2=4,0; Р=0,04; ОЯ=1,9; 95% ДИ 1,006-3,609).
Согласно рассчитанному коэффициенту соотношения шансов при носитель-стве генотипа Gly/Gly риск формирования ФК I у данной подгруппы больных достоверно выше в 3,1 раза (х2=2,6; Р=0,1;
OR=3,1; 95% ДИ 0,737-13,43), чем у представителей группы сравнения без сердечно-сосудистых заболеваний. Низкая частота генотипа Gly/Gly в популяционной выборке, вероятно, происходила в связи с жестким отбором, то есть неслучайной элиминацией функционально неполноценного генотипа в популяции. При этом, несмотря на низкую частоту в нашей популяции (3,8%), полученные значения уровней значимости для данного генотипа позволяют обнаружить статистически достоверную ассоциацию с развитием ХСН с ФК I (Р<0,05). Эти данные еще больше укрепляют позицию неблагоприятного генотипа Gly/Gly гена ADRB1 как маркера, ассоциированного с формированием ХСН и, вероятно, обусловливающего нарушение функции ßl-рецептора [2, 9].
Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного локуса rs1801253 гена ADRB1 с разной степенью тяжести выявил увеличение частоты редкого аллеля 389Gly у больных ХСН с ФК I по сравнению с подгруппой ХСН с ФК III (х2=5,2; Р=0,02; OR=2,3; 95% ДИ 1,109-4,758), что свидетельствует о наличии тенденции к ассоциации редкого аллеля с клинической формой заболевания (табл. 3).
При сравнении остальных подгрупп больных с различной степенью тяжести ХСН с популяционной выборкой и между собой нами не были выявлены статистически достоверные различия частоты аллелей и генотипов.
Таким образом, у больных ХСН узбекской национальности определен вклад в риск прогрессирования заболевания 389Gly аллеля Arg389Gly гена ADRB1.
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. Агеев Ф.Е, Арутюнов ГЛ., Беленков Ю.Н. Хроническая сердечная недостаточность. - М., 2010. - С.336.
№ 10 • 2016
МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ
