CC BY
118
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012
УДК 616.233-002-053.2-092:612.017.1]-078.33
А.В. Караулов1, В.А. Алешкин2, Е.А. Воропаева2, В.А. Метельская2, В.В. Слободенюк2,
М.С. Афанасьев1, А.М. Затевалов2, А.П. Топтыгина2, С.С. Афанасьев2, Ю.В. Несвижский1, Ю.Н. урбан2, Е.О. Рубальский2, Н.С. Матвеевская2
ПОКАЗАТЕЛИ КОЛОНИЗАЦИОННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ СЛИЗИСТЫХ РОТОГЛОТКИ КАК ОБЪЕКТИВНЫЕ КРИТЕРИИ МУКОЗАЛЬНОГО иммунитета при бронхитах У ДЕТЕЙ
Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова1 (119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2); Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. гН. габричевского2 (125212, Москва, ул. адмирала Макарова, д.10)
При остром и хроническом бронхите взаимосвязь рецепторов врожденного иммунитета TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 (контролируют запуск цитокинового каскада местной антиинфекционной резистентности, через который запускаются иммуноглобулиновое звено и воспалительная реакция) с микрофлорой биотопа определяет колонизационную резистентность слизистых и характеризует течение инфекционного процесса, выраженность клинических и лабораторных проявлений и исход заболевания (излечение, хронизация). Причем TLR-2 и TLR-4 реагируют в основном на бактериальные патогены, а TLR-3 и TLR-8 - на вирусные. Установлена взаимосвязь TLR с другими факторами врожденного иммунитета лизоцимом, естественной колонизацией назофарингеального эпителия, slgA и sc. Уровень IgE независим от показателей экспрессии генов TLR. Оценка уровня экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8, а также уровня интерлейкина (IL)1p, IL-8, интерферона у, фактора некроза опухли а носит диагностический и прогностический характер. Гуморальные факторы колонизационной резистентности синтезируются местно. Колонизационная резистентность выступает как интегральный показатель мукозального иммунитета.
Ключевые слова: острый бронхит, хронический бронхит, Toll-подобные рецепторы, цитокины, иммуноглобулины, гуморальные факторы врожденного иммунитета
COLONIZATION RESISTANCE INDICATORS OF OROPHARYNX MUCOUS MEMBRANE AS OBJECTIVE CRITERIA OF MUCOSAL IMMUNITY AT BRONCHITIS IN CHILDREN
A.V Karaulov, V.A. Aleshkin, E.A. Voropaeva, V.A. Metelskaya, V.V. Slobodenyuk, M.S. Afanasiev, A.M. Zatevalov,
A.P. Toptigina, S.S. Afanasiev, Yu.V Nesvizhskiy, Yu.N. Urban, E.O. Rubalskiy, N.S. Matveevskaya
Relationship of innate immunity receptors TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 (control launching of local anti-infectious resistance cytokine cascade wherethrough launching immunoglobulin part and inflammation reaction) with biotope microflora at acute and chronic bronchitis define mucous membrane colonization resistance and characterize infectious process flowing, clinical and laboratory manifestations intensity and outcome of disease (convalescence, chronization). At that TLR-2 and TLR-4 react generally on bacterial pathogens, while TLR-3 and TLR-8 on viral pathogens. Relationship TLR with other innate immunity factors lysozyme, essential nasopharyngeal epithelium colonization, sIgA and sc determined. IgE levels independent from indicators of TLR gene expression. TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 gene expression levels as well as IL-1P, IL-8, INF-y, TNF-a levels estimation carry diagnostic and prognostic character. Humoral colonization resistance factors synthetize locally. Colonization resistance come out as an integral indicator of mucosal immunity.
Key words: acute bronchitis, chronic bronchitis, Toll-like receptors, cytokines, immunoglobulins, humoral innate immunity factors
Слизистые респираторного тракта постоянно подвергаются воздействию разнообразных чужеродных веществ, аллергенов и микроорганизмов. Барьерная функция слизистых, заключающаяся в предотвращении фиксации и проникновения патогенных микроорганизмов во внутреннюю среду организма, осуществляется комплексом защитных механизмов: барьерной механической функцией слизистых, рецепторами врожденного иммунитета (в том числе Toll-подобными рецепторами - TLR), цитокиновой системой, лизоцимом, факторами адаптивного иммунитета (иммуноглобулины, иммунокомпетентные клетки). Комплекс перечисленных механизмов обе-
Караулов Александр викторович - д-р мед. наук, член-корр. РАМН, проф., зав. каф. клинической аллергологии и иммунологии, тел. 8-903-515-71-36, e-mail: [email protected]
спечивает колонизационную резистентность слизистых - первую линию защиты хозяина против инфекционных агентов с запуском каскада провоспалительных реакций, направленных в конечном счете на блокирование жизнедеятельности, дезинтеграцию и удаление патогена из организма [1, 8].
Цель работы - установление роли колонизационной резистентности слизистых верхних дыхательных путей при бронхитах у детей.
Материалы и методы
Обследованы 30 клинически здоровых детей и 77 детей с острыми и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта в возрасте 3-14 лет. Детей разделили на 3 группы: 1-я - контрольная (30 клинически здоровых детей), 2-я - больные с острым бронхитом (n = 51), 3-я - больные хроническим бронхитом (n = 15).
- 255 -
ИММУНОЛОГИЯ № 5, 2012
Клинико-лабораторное обследование больных детей проводили согласно разработанной методологии: осуществляли родовую и видовую идентификацию микрофлоры с учетом четырех микроэкологических типов биотопа задней стенки глотки (ЗСГ) по разработанной оригинальной классификации; выявляли IgM-, IgG- антитела к Сhlamydophila pneumoniaе (Mеdac, Германия), Micoplasma рneumoniaе (Savyondiagnostics, Израиль), Adenovirus (DRG, Германия), к Influenza - Virus A и В (DRG, Германия), Respiratory Syncytial Virus (RSV) (DRG, Германия); инфекционный мононуклеоз диагностировали на основании содержания M- и G-антител к капсидному (VCA) антигену вируса Эпштейна-Барр (BCM, США); содержание иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgA, sIgA) и свободного секреторного компонента (sc) в слюне определяли методом радиальной иммунодиффузии (РИД) по Ман-чини; содержание в слюне интерлейкина (IL)ip, IL-4, IL-6, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, интерферона у (IFN у), фактора некроза опухоли a (TNFa), ГМ-КСФ оценивали методом проточной флюориметрии на двухлучевом лазерном автоматизированном анализаторе; устанавливали активность лизоцима; изучали индекс естественной колонизации назофарингеального эпителия (ИЕКНЭ), а также количественное содержание альбумина и общего белка в слюне [2, 5-7].
Уровень экспрессии генов TLR определяли по разработанному оригинальному методу полимеразно-цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (РВ), совмещенному с обратной транскрипцией, с использованием специфических праймеров к TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-8 [4]. Праймеры для последовательностей к TlR-2, TLR-3, TlR-4, TLR-8 подбирали с помощью программы Vector NTI. Последовательности мРНК TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-8 и GAPDH взяты в GenBank и синтезированы фирмой "Синтол" (Москва). Экспрессию генов TLR оценивали в относительных единицах (отн. ед.). Источники лигандов для TLR-2 - грамположитель-ные бактерии, респираторно-синцитиальный вирус, цитоме-галовирус (ЦМВ) и др.; для TLR-4 - грамотрицательные бактерии, респираторно-синцитиальный вирус, ЦМВ, Chlamydia pneumonia и др.; для TLR-3 - грамотрицательные бактерии, вирусы; для TLR-8 - вирусы, бактерии [8].
Дополнительно у всех детей проводили количественное определение содержания общего IgE в слюне с использованием набора реагентов «IgE общий - ИФА - БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия).
Полученные данные статистически обрабатывали в рамках параметрической и непараметрической базовой статистики с использованием /-критерия Стьюдента, коэффициента ранговой корреляции Спирмена (rs), метода х2, применяя стандартный пакет статистических программ Microsoft Excel 2007 [3].
Результаты и обсуждение
При анализе ассоциации патогенных вирусных и внутриклеточных бактериальных агентов при бронхитах у детей (табл. 1) выявили, что частота инфицированности ими была наивысшей при остром бронхите, достоверные различия по X2 по сравнению с таковыми при хроническом бронхите и у клинически здоровых пациентов установили при инфицировании аденовирусами (р < 0,05). Различия в обсеменен-ности слизистой ЗСГ индигенными микроорганизмами в контрольной группе и у детей с бронхитами недостоверны как по содержанию, так и по частоте встречаемости. По частоте выявляемости условно-патогенных микробов (УПМ) при бронхитах у детей (см. табл. 1) определили достоверные различия (х2) по частоте инфицирования S. aureus и грибами рода Candida при остром бронхите по сравнению с таковым при хроническом бронхите и у клинически здоровых пациентов (р < 0,05). Увеличение интенсивности колонизации ЗСГ УПМ также достоверно выше было при остром бронхите, чем при хроническом бронхите и у клинически здоровых пациентов (р < 0,05). При сопоставлении частоты опреде-
ления типа микробиоценоза ротоглотки у детей с острым и хроническим бронхитом по сравнению с аналогичным показателем у клинически здоровых детей (нормоценоз у 48,1%, промежуточный тип у 44,4%, дисбиоз у 7,4%) выявили достоверные различия. При остром бронхите нормоценоз зарегистрировали у 21,6% больных (р < 0,05), промежуточный тип микробиоценоза - у 11,8% (р < 0,01), дисбиоз - у 35,3% (р < 0,05), выраженный воспалительный процесс - у 31,4% (р < 0,01). При хроническом бронхите нормоценоз установили у 20,0% пациентов (р < 0,05), промежуточный тип микробиоценоза - у 20,0% (р < 0,01), дисбиоз - у 33,3% (р < 0,05), выраженный воспалительный процесс - у 26,7% (р < 0,01). Достоверных различий по типу микробиоценоза ротоглотки между острым и хроническим бронхитом не выявили. Патогенетическое действие ассоциации обусловлено суммированием воздействий каждого из ассоциатов с разнонаправленными механизмами их влияния на клетки макроорганизма.
При оценке уровня экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3 и TLR-8 (см. табл. 1) установили, что у пациентов с острым бронхитом они превышали таковые в группе контроля в 5-10 раз, а у больных с хроническим бронхитом - в 1,3—1,7 раза. У больных с острым бронхитом медианы уровня экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3 и TLR-8 достоверно (по х2) отличались от таковых в группе контроля при р < 0,00001, а у больных с хроническим бронхитом достоверно различались медианы только TLR-3 при р = 0,007; достоверно различались медианы экспрессии генов TLR-2 (р < 0,002), TLR-4 (р < 0,00001), TLR-3 (р = 0,0007) и TLR-8 (р < 0,00001) при сопоставлении острого и хронического бронхита. Дополнительно в каждой группе пациентов выделили четыре подгруппы (табл. 2). Достоверное повышение медианы экспрессии гена TLR-2 зарегистрировали (по х2) только при остром бронхите и микстинфекции по сравнению с таковой при хроническом бронхите и в контрольной группе при р < 0,0001. Медиана экспрессии гена TLR-4 при остром бронхите достоверно (по х2) ниже при инфицировании УПМ при сопоставлении с аналогичным показателем при хроническом бронхите (р < 0,0001), достоверно выше при микстинфекции при сопоставлении с таковой при хроническом бронхите и в контрольной группе (р < 0,0001), а без инфицирования достоверно выше в контрольной группе, чем при хроническом бронхите (р = 0,007). Медиана экспрессии гена TLR-3 при остром бронхите достоверно (по х2) выше при сопоставлении с таковой при хроническом бронхите (р < 0,006) при инфицировании вирусными патогенами и микстинфекции (р < 0,0001). Медиана экспрессии гена TLR-8 при остром бронхите достоверно (по х2) выше при сопоставлении с аналогичным показателем при хроническом бронхите (р < 0,006) при микстинфекции (р < 0,0001); при хроническом бронхите она выше таковой при остром бронхите при инфицировании вирусными патогенами (р < 0,0001), а без инфицирования достоверно выше по сравнению с таковой в контрольной группе (р = 0,001). Следовательно, при остром бронхите в ответ на выраженное бактериально-вирусное воздействие исследованные TLR отреагировали достоверным повышением экспрессии генов по сравнению с аналогичным показателем при хроническом бронхите и в контрольной группе. Причем проявилась специализация TLR: TLR-2 и TLR-4 реагировали в основном на бактериальные патогены, а TLR-3 и TLR-8 - на вирусные. Наиболее высокие значения экспрессии генов имели место при микстинфекции, что объясняется в определенной степени перекрестным действием лигандов [8]. При хроническом бронхите уровень экспрессии генов TLR в основном не отличался от такового в контрольной группе.
ИЕКНЭ у детей с острым и хроническим бронхитом (см. табл. 1) не различались между собой, но были достоверно выше, чем в группе контроля приp < 0,05. Показатели активности лизоцима, уровень альбумина и общего белка достоверно не отличались при остром и хроническом бронхитах от таковых в контрольной группе.
- 256 -
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
Таблица 1 Факторы колонизационной резистентности слизистых верхних дыхательных путей при бронхите у детей
Фактор Острый бронхит (п = 51) частота встречаемости 51/32 Хронический бронхит (п = 15), частота встречаемости 15/9 Клинически здоровые (п = 30), частота встречаемости 30/14
Вирусные патогены, IgM-антитела, %
Вирус Эпштейна-Барр 2/4 1/6,7 0
Вирус простого герпеса 1/2 1/6,7 0
Респираторно-синцитиальный вирус 3/6 0 0
Вирус гриппа А 5/10 2/13,3 0
Вирус гриппа В 3/6 0 0
Аденовирус 21/41,2 2/13,3 0
Ch. pneumonia 5/10 2/13,3 0
M. pneumonia 3/5,8 2/13,3 0
Индигенная микрофлора
Streptococcus spp. а-гемолитический 7,65 ± 3,88 7,67 ± 3,99 7,52 ± 3,06
Neisseria spp. 7,56 ± 3,24 7,13 ± 3,35 7,52 ± 4,01
УПМ
Е. coli 3/5,9% 0 2/7,4%
S.aureus 21/41,2% 1/6,7% 5/16,7%
Грибы рода Candida 27/53% 3/20% 7/22,2%
K. рneumoniaе 7/13,7% 1/6,7% 1/3,7%
Enterobacter spp. 3/5,9% 0 0
Коагулазоотрицательные стафилококки 2/3,9% 1/3,9% 0
P. аeruginosa 2/3,9% 1/3,9% 0
УПМ, lg КОЕ/мл 6,11 ± 2,56 3,76 ± 1,32 2,82 ± 2,16
Рецепторы врожденного иммунитета (М ± m/медиана)
TLR-2 109,73 ± 88,9/52,78 25,44 ± 19,68/25,17 18,95 ± 7,5/15,13
TLR-4 147,8 ± 156,83/66,11 44,08 ± 66,84/11,43 31,7 ± 12,12/21,2
TLR-3 98,1 ± 75,05/47,98 30,85 ± 26,49/20 17,19 ± 17,48/6,16
TLR-8 135,06 ± 110,97/47,65 21,65 ± 17,51/6,47 13,39 ± 15,72/7,23
Цитокины, отреагировавшие повышением уровня
IL-1P 154,76 ± 123,15 24,77 ± 18,88 3,29 ± 3,06
IL-8 236,97 ± 198,98 214,21 ± 130,71 25,2 ± 24,93
INFy 42,85 ± 29,67 15,11 ± 10,47 10,47 ± 8,90
TNFa 42,85 ± 29,67 15,11 ± 10,47 10,47 ± 8,90
GM-CSF 5,34 ± 3,85 3,08 ± 2,25 0,98 ± 0,83
Иммуноглобулины
IgG, мкг на 1 мг общего белка 8,6 ± 3,0 5,17 ± 2,77 3,4 ± 1,3
IgM, мкг на 1 мг общего белка 0,92 ± 0,73 3,19 ± 4,38 0
IgA, мкг на 1 мг общего белка 0,58 ± 1,0 0 0
sIgA, мкг на 1 мг общего белка 29,05 ± 12,25 13,52 ± 10,73 6,01 ± 1,62
IgE, ME/мл 0,78 ± 0,15 0,86 ± 0,17 0,47 ± 0,06
sc, мкг на 1 мг общего белка 35,22 ± 11,44 35,15 ± 13,24 17,5 ± 3,88
Дополнительные факторы
ИЕКНЭ, баллы 98,7 ± 39,5 104,2 ± 43,4 32,0 ± 9,5
Активность лизоцима, % 24,8 ± 11,8 34,6 ± 2,8 50,0 ± 9,0
Альбумин, г/л 7,1 ± 1,6 4,2 ± 2,0 6,0 ± 2,0
Общий белок, г/л 11,2 ± 3,0 6,9 ± 3,0 9,8 ± 3,3
- 257 -
ИММУНОЛОГИЯ № 5, 2012
По сравнению с контрольной группой (см. табл. 1) выявили достоверное повышение концентрации sIgA и sc (p < 0,01), а также IgE, IgM и IgG (p < 0,05) у больных хроническим и острым бронхитом, однако достоверные различия между группами больных отсутствовали.
При анализе местной продукции цитокинов (см. табл. 1) у детей с острым бронхитом отметили 50-кратное повышение содержания ГЬ-ф (р < 0,001), 10-кратное повышение уровня IL-8 и TNFa (р < 0,001) и 4—5 кратное повышение концентрации INFy и GM-CSF (р < 0,001), а у детей с хроническим бронхитом отметили 8-кратное повышение уровня IL-ф, IL-8 и TNFa (р < 0,05) и 3-кратное повышение содержания GM-CSF (р < 0,05) по сравнению с таковыми в контроле. При сопоставлении острого и хронического бронхита достоверные различия (р < 0,05) выявили по уровню IL-ф и INFy. Содержание IL-6, IL-9, IL-10, IL-12 практически не различалось во всех исследуемых группах.
При остром бронхите отсутствовала корреляционная связь между концентрацией УПМ и TLR, УПМ и цитокинами. Зарегистрировали слабую корреляционную связь между уровнем УПМ и содержанием IgM (r = 0,37); среднюю - между содержанием УПМ и уровнем альбумина (г = 0,47), между концентрацией УПМ и уровнем общего белка (г = 0,49). Сильно коррелировали между собой показатели экспрессии генов TLR-2 и TLR-3 (г = 0,94), TLR-4 и TLR-8 (г = 1), TLR-3 и TLR-8 (г = 0,73). Уровень экспрессии генов TLR-2 сильно коррелировал с высоким содержанием цитокина IL-1P (г = 0,89), зарегистрировали среднюю корреляционную связь с уровнем INFy (r = 0,42). Выявили среднюю корреляционную зависимость между экспрессией генов TLR-4 и содержанием IL-8 (г = 0,5). Уровень экспрессии генов TLR-3 сильно коррелировал с высоким содержанием цитокина IL-1P (г = 0,81). Отметили среднюю корреляционную зависимость между экспрессией генов TLR-8 и содержанием IL-8 (г = 0,5). Следовательно, установили корреляционную прямую зависимость между TLR и цитокинами. Не выявили корреляционной зависимости между уровнем общего белка, альбумина, IgE и TLR, ИЕКН. Определили сильную корреляционную зависимость между уровнем альбумина и общего белка (r = 0,99), среднюю - между активностью лизоцима и уровнем IL-1P (г = 0,44). Установили сильную корреляционную связь между активностью лизоцима и уровнем TLR-2 (г = 0,73), TLR-4 (г = 0,67), TLR-3 (г = 0,72), TLR-8 (г = 0,76), а также между уровнем sIgA и содержанием TLR-2 (г = 0,79), TLR-4 (г = 0,76), TLR-3 (г = 0,60), TLR-8 (г = 0,66); среднюю - между уровнем !дМ и концентрацией TLR-2 (г = 0,52), TLR-4 (г = 0,43), а также слабую - между уровнем !§М и содержанием TLR-3 (г = 0,34), TLR-8 (г = 0,39). Выявили сильную корреляционную зависимость между уровнем IgG и концентрацией sIgA (r = 0,70), среднюю - между содержанием IgG и уровнем sc (r = 0,42), между концентрацией IgM и уровнем sIgA (r = 0,31). Установили корреляционную зависимость уровня IgG: сильную - с уровнем IL-8 (r = 0,66); среднюю - с TNFa (г=0,53). Определили корреляционную зависимость уровня IgM: среднюю - с содержанием INFy (r = 0,48); слабую - с уровнем GM-CSF (r = 0,34). Установили корреляционную зависимость уровня sIgA: среднюю - с содержанием IL-8 (r = 0,44); слабую - с INFy (r = 0,35). Установили средню корреляционную связь между уровнем sc и содержанием TNFa (r = 0,51). Не зарегистрировали повышения уровня альбумина в слюне при наличии сильной корреляционной связи с содержанием общего белка, что указывало на местный синтез гуморальных мукозальных компонентов слюны. Таким образом, при остром бронхите в ответ на достоверно высокую инфекционную нагрузку (в виде микстинфекции вирусными патогенами и УПМ) повышается уровень экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3 и TLR-8, которые запускают в верхних дыхательных путях продукцию провоспалительных цитокинов IL-8, TNFa и IL-1P, приводящих в свою очередь к повышению содержания иммуноглобулинов, что можно расценивать как выраженную местную воспалительную иммунологическую
Таблица 2
Влияние характера инфицирования на выраженность экспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета
Группа Рецептор врожденного иммуните-
пациен- Инфицированность та (медиана)
тов TLR-2 TLR-4 TLR-3 TLR-8
С острым Вирусные патогены 40,51 16,66 44,29 0,21
бронхи- том УПМ 52,78 66,11 55,63 39,45
Микстинфекция 127,75 178,25 111,85 167,95
Интактные - - - -
С хрони- Вирусные патогены 50,61 15,98 22,07 34,4
ческим бронхи- УПМ 28,66 159,78 68,35 32,59
том Микстинфекция 14,29 7,65 14,25 2,39
Интактные 15,62 11,86 25,75 37
Клини- Вирусные патогены - - - -
чески здоровые УПМ - - - -
Микстинфекция 21,36 35,17 - -
Интактные 17,14 29,09 17,19 13,38
Примечание. Вирусные патогены - пациенты, инфицированные только вирусными патогенами (диагностическое значение IgM-антител было не ниже 1:100); УПМ - пациенты, инфицированные только УПМ (интенсивность колонизации не менее 5 lg КОЕ/мл); микстинфекция - пациенты с сочетанной вирусной и бактериальной инфицированностью; интактные - пациенты с невыявленной инфи-цированностью патогенами.
реакцию макроорганизма, отражающую остроту инфекционного процесса и способствующую локализации инфекционного процесса, а также к стимуляции продукции дополнительных цитокинов соседними неинфицированными клетками. В ротоглотке нарастание уровня иммуноглобулинов, sIgA и sc обусловлено их синтезом in situ. Уровень экспрессии TLR прямо коррелирует с содержанием sIgA и лизоцима, что свидетельствует об их взаимосвязи как компонентов колонизационной резистентности, отражающих состояние врожденного иммунитета, и не коррелируют с повышенными показателями ИЕКНЕ, что говорит о низкой адгезивной способности эпителия ротоглотки в отношениии УПМ. Все вместе указывает на высокий уровень колонизационной резистентности как показателя мукозального иммунитета. Отсутствует связь между содержанием TLR и уровнем IgE.
При хроническом бронхите отсутствовала прямая корреляционная связь между концентрацией УПМ и уровнем TLR, содержанием УПМ и уровнем цитокинов. Сильная корреляция имела место между уровнем экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 (r = 0,91), TLR-2 и TLR-3 (r = 0,97), TLR-2 и TLR-8 (r = 0,65), TLR-4 и TLR-3 (r = 0,94), TLR-3 и TLR-8 (r = 0,73), средняя - между TLR-4 и TLR-3 (r = 0,56). Корреляционной зависимости между повышенным уровнем цитокинов, IgE, общего белка, альбумина и уровнем экспрессии генов TLR не выявили. Обнаружили сильную корреляционную зависимость между уровнем альбумина и содержанием общего белка (r = 1,00); среднюю - между уровнем лизоцима и содержанием альбумина (r = 0,43), уровнем лизоцима и содержанием общего белка (r = 0,44), уровнем лизоцима и концентрацией IL-1P (r = 0,47), уровнем лизоцима и содержанием IL-8 (r = 0,56), уровнем лизоцима и содержанием INFy (r = 0,53), уровнем лизоцима и концентрацией GM-CSF (r = 0,46), между уровнем альбумина и содержанием INFy (r = 0,54), между уровнем общего белка и содержанием INFy (r = 0,52), между уровнем альбумина и содержанием GM-CSF (r = 0,46), между уровнем общего белка и содержанием GM-CSF (r = 0,45); слабую - между ИЕКНЕ и уровнем общего белка (r = 0,31), между уровнем альбуми-
- 258 -
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
на и содержанием IL-1P (r = 0,36), между уровнем общего белка и концентрацией IL-1P (г = 0,34). Установили слабую корреляционную зависимость между ИЕКНЕ и уровем TLR-4 (r = 0,37), TLR-3 (r = 0,35), среднюю - между ИЕКНЕ и содержанием TLR-8 (г = 0,52). Определили сильную корреляционную зависимость между уровнем экспрессии генов TLR-8 и уровнем sIgA (r = 0,63), IgM (r = 0,69); слабую - между IgG и TLR-3 (r = 0,25), между уровнем IgG и содержанием TLR-8 (r = 0,34); слабую - между уровнем sc и содержанием TLR-3 (r = 0,32), между уровнем sc и содержанием TLR-8 (r = 0,32). Выявили слабую корреляционную зависимость между концентрацией IgM и уровнем sIgA (r = 0,31); сильную - между содержанием IgG и уровнем sIgA (r = 0,77), концентрацией IgG и содержанием sc (r = 0,74); среднюю - между уровнем IgG и содержанием IgM (r = 0,44), между концентрацией IgM и уровнем IgE (r = 0,43), между концентрацией IgM и уровнем sc (r = 0,60), между концентрацией sIgA и уровнем sc (r = 0,57), между концентрацией IgE и содержанием sc (r = 0,59). Установили сильную корреляционную зависимость уровня IgM с содержанием TNFa (r = 0,69). Не зарегистрировали повышение уровня альбумина в слюне при наличии сильной корреляционной связи с содержанием общего белка, что указывало на местный синтез гуморальных мукозальных компонентов слюны. Таким образом, при хроническом бронхите в ответ на слабую инфекционную нагрузку (в виде микстинфекции вирусными патогенами и YnM) уровень экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 не повышается; отсутствует прямая корреляционная связь со сниженным уровнем цитокинов, IgM, sIgA по сравнению с таковым при остром бронхите; отмечен хронический, вялотекущий воспалительный процесс. Уровень экспрессии TLR практически прямо не коррелирует с уровнем sIgA и лизоцима; коррелирует с повышенным ИЕКНЕ, что может способствовать повышению адгезии YnM на клетках эпителия. Выявленные изменения свидетельствуют о нарушении колонизационной резистентности как показателя мукозального иммунитета, что приводит к прогрессирующему течению инфекционного процесса и дисбалансу в процессах деструкции и репарации, сопутствующих воспалению. Выявление повышенного уровня sIgA и IgM по сравнению с таковым в контроле обусловлено его пониженным местным синтезом. Отсутствует связь между содержанием TLR и концентрацией IgE.
У клинически здоровых детей установили среднюю прямую корреляционную связь между уровнем YnM и содержанием TLR-2 (r = 0,43). Корреляционной связи между уровнем YnM и концентрацией цитокинов не выявили. Среднюю корреляционную связь обнаружили между концентрацией YnM и активностью лизоцима (r = 0,59). Сильная корреляция имела место между уровнем экспрессии генов TLR-2 и TLR-3 (r = 0,83), TLR-2 и TLR-8 (r = 0,74), TLR-4 и TLR-3 (r = 0,97), TLR-4 и TLR-8 (r = 0,85) TLR-3 и TLR-8 (r = 0,74). Установили среднюю корреляционную связь между содержанием IL-1 и уровнем экспрессии генов TLR-2 (r = 0,63), концентрацией IL-10 и содержанием TLR-2 (r = 0,43); слабую - между уровнем IL-9 и концентрацией TLR-2 (r = 0,36); сильную - между концентрацией TNFa и содержанием TLR-2 (r = 0,72). Не выявили корреляционной зависимости между уровнем общего белка, ^Е и TLR. Обнаружили сильную корреляционную зависимость между уровнем альбумина и содержанием TLR-3 (r = 0,64). ИЕКНЕ сильно коррелировал с концентрацией TLR-8 (r = 0,80) и слабо - с содержанием TLR-3 (r = 0,34); активность лизоцима сильно коррелировала с уровнем TLR-3 (r = 1,0) и слабо - с уровнем TLR-8 (r = 0,37). Установили сильную корреляционную связь между концентрацией TLR-8 и содержанием IgG (r = 1,0), sIgA (r = 1,0), sc (r = 1,0); слабую - между уровнем TLR-4 и содержанием sIgA (r = 0,39). Выявили сильную корреляционную зависимость между концентрацией IgG и содержанием ^Е (r = 0,64), уровнем sIgA и содержанием ^Е (r = 0,63); среднюю - между концентрацией IgG и уровнем sIgA (r = 0,45).
Корреляционной связи между уронем иммуноглобулинов и содержанием цитокинов не обнаружили. Следовательно, у клинически здоровых детей уровень экспрессии генов TLR, гуморальных факторов колонизационной резистентности, выраженная прямая зависимость между содержанием TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8, а также между концентрацией TLR и уровнем лизоцима, между концентрацией TLR и ИЕКНЭ объясняются антигенной стимуляцией поступающими извне микроорганизмами в обычных условиях.
Таким образом, при остром и хроническом бронхите взаимосвязь рецепторов врожденного иммунитета TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 (контролируют запуск цитокинового каскада местной антиинфекционной резистентности, через который запускаются иммуноглобулиновое звено и воспалительная реакция) с микрофлорой биотопа определяет колонизационную резистентность слизистых и характеризует течение инфекционного процесса, выраженность клинических и лабораторных проявлений и исход заболевания (излечение, хронизация). Причем TLR-2 и TLR-4 реагируют в основном на бактериальные патогенны, а TLR-3 и TLR-8 - на вирусные. Установили взаимосвязь содержания TLR с другими факторами врожденного иммунитета - уровнем лизоцима, естественной колонизацией назофарингеального эпителия, содержанием sIgA и sc. Уровень ^Е независим от показателей экспрессии генов TLR. При бронхите 5-кратное повышение уровня экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 и цитокинов IL-1p, IL-8, INFy, TNFa свидетельствует о хорошей местной антиинфекционной резистентности, а отсутствие повышения указывает на ее нарушение и хроническое течение заболевания (носит диагностический и прогностический характер). Гуморальные факторы колонизационной резистентности синтезируются местно. Колонизационная резистентность выступает как интегральный показатель мукозального иммунитета.
ЛИТЕРАТУРА
1. Абатуров А.Э. Mолекулярные механизмы неспецифической защиты респираторного тракта: распознавание патоген-ассоциированных молекулярных структур // Журн. здоровье ребенка. - 2006. - Т. 2, № 2. - С. 14-18.
2. Байракова А.Л., Алешкин В.А., Воропаева Е.А. и др. Способ диагностики хронического урогенитального хламидиоза.-Пат. № 2327995 РФ. Зарегистрирован 27.06.2008.
3. Гланц С. Mедико-биологическая статистика. - M.: Практика, 1999.
4. Зверев В.В., Несвижский Ю.В., Воропаева Е.А. и др. Mикроэ-кология и гуморальный иммунитет слизистых открытых полостей человека в норме и при патологических состояниях. Учебное пособие для системы послевузовского профессионального образования врачей. - M., Aстрахань. - 2011.
5. Караулов А.В., Метельская В.А., Алешкин В.А. и др. Awrara клетками назофарингеального и буккального эпителия ин-дигенных и условно-патогенных микроорганизмов как показатель резистентности респираторного тракта детей с бронхитами и пневмониями // Иммунопатология, Aллергология, Инфектология. - 2010. - № 3. - С. 37-46.
6. Метельская В.А., Алешкин В.А., Воропаева Е.А. и др. Колонизационная резистентность и иммунологическая реактивность слизистых ротоглотки у детей в норме и при бронхолегочных заболеваниях // Вестн. PAMH - 2010. - № 7. - С. 10-15.
7. Топтыгина А.П., Метельская В.А., Воропаева Е.А. и др. Изменение в цитокиновом профиле сыворотки крови и слюны детей при остром и хроническом бронхите // Рос. иммунол. журн. - 2011. - Т 5(14), № 2. - С. 145-149.
8. Хламидийная инфекция. Новые аспекты патогенеза, иммунологии, верификации и лечения инфекции у человека и приматов / Под ред. A.B. Караулова, С.С. Aфанасьева, B.A. Aлешкина, БА. Лапина. - M., Изд-во ПервогоMПMY им. HM. Сеченова. - 2012.
Поступила 20.07.12
- 259
