CC BY
98
УДК: 616.053.2-342:612.017.1
Р. Т. Галеева, Г. В. Долгушкина, А. Н. Астафьева
ПОКАЗАТЕЛИ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ У ДЕТЕЙ
Проведено исследование показателей клеточного и гуморального иммунитета при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у детей (ЯБДК). Выявлена их зависимость от стадии ЯБДК, при этом наиболее выраженные изменения наблюдались в I стадию язвенной болезни («свежая» язва). Отмечено улучшение данных показателей в процессе проведения традиционной противоязвенной терапии, что свидетельствует об отсутствии необходимости проведения иммунокоррекции при ЯБДК.
Актуальность проблемы
Патология органов пищеварения у детей является одной из основных проблем в клинической медицине и имеет большое медико-социальное значение. Возникнув в детском возрасте, желудочно-кишечные заболевания могут привести к тяжелой патологии у взрослых. Одним из наиболее распространенных среди гастроэнтерологических заболеваний до настоящего времени остается язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки (ЯБДК). Рецидивирующее, прогрессирующее течение ЯБДК свидетельствует о том, что дальнейшее изучение вопросов, связанных с данной патологией, весьма актуально. Причины, влияющие на возникновение и развитие язвенной болезни (ЯБ), многообразны. При этом трудно выделить однозначно первостепенную роль какого-либо определенного фактора. В той же степени сложен и патогенез заболевания. Ряд авторов [1, 2] в генезе ЯБ особо подчеркивают значение иммунологических механизмов защиты желудочно-кишечного тракта. В литературе имеются работы, посвященные исследованию иммунитета при ЯБДК [1-5]. Полученные результаты достаточно противоречивы.
Цель исследования - изучение показателей клеточного и гуморального иммунитета при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у детей.
Материалы и методы исследования
Всего обследовано 79 детей с ЯБДК. По эндоскопическим проявлениям, согласно классификации П. Я. Григорьева и Э. П. Яковенко (2005), были выделены три группы: А - дети с I стадией ЯБ («свежая» язва) - 28 чел.; В - дети со II стадией ЯБ («начало эпителизации язвенного дефекта») - 26 чел.; С - дети с III стадией ЯБ («стадия рубца при сохраняющихся явлениях активного гастродуоденита») - 25 чел. Все дети из основной группы были равнозначны по полу, возрасту, длительности и тяжести заболевания. Контрольной группой служили здоровые сверстники - 24 чел.
Специальная программа иммунологического обследования включала определение общих иммуноглобулинов классов А, М, в (^ А, ^ М, ^ в) в сыворотке крови, содержания Т- и В-лимфоцитов, исследование циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) крови. Кроме того, в указанную программу входило определение секреторного иммуноглобулина А (8 ^ А), иммуноглобулинов классов А, М, в в желудочном соке и дуоденальном содержимом (порции А). Иммунологическое обследование проводили в группах наблюдения до и после
проведения традиционного противоязвенного лечения (антисекреторные средства, прокинетики, цитопротекторы, по показаниям - эрадикационная терапия).
Показатели клеточного иммунитета: субпопуляции лимфоцитов определяли с помощью моноклональных антител (МКА) к дифференцированным антигенам (СБ-антигенам).
Количественное определение иммуноглобулинов (^) в сыворотке крови и дуоденальном содержимом проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле, в основу которого положен метод Манчини (1965). Расчет количества иммуноглобулинов в исследуемых секретах производили с помощью калибровочной кривой, построенной по стандарту - очищенному ^, -и выражали в мг/%. При исследовании дуоденального сока принимали меры предохранения катаболического действия протеолитических ферментов на иммуноглобулины. Содержание ЦИК определяли методом В. Гашковой в модификации Б. А. Молотилова и соавторов (1982) путем осаждения из сыворотки полиэтиленгликолем (ПЭГ) м.м. 6000. Результаты выражали в мкг/мл агрегированного гамма-глобулина человека. В нормальной сыворотке ПЭГ может осаждать небольшое количество белка иной природы, нежели иммунные комплексы, поэтому термин ЦИК по отношению к здоровым детям принят условно (О. И. Пикуза, 1982).
Результаты исследования и их обсуждение Клеточный иммунитет
Интерес представило изучение зависимости показателей клеточного иммунитета от стадии язвенной болезни (рис. 1).
Т-лимфоциты (ОР3)
% 50 т 40 30 20 10 0
I II III
Отадии ЯБДК
В-лимфоциты (ОР22)
%
20
15
10
5
I II III
Стадии ЯБДК
Т-хелперы (Ой4)
%
45 40 35 30
Стадии ЯБДК
Т-супрессоры (СР8)
%
20
15
10
5
0
_1
I II III Стадии ЯБДК
Рис. 1 Зависимость количества лимфоцитов периферической крови от стадии язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, в процентах
0
На рисунке 1 показано, что общее число CD3 (Т-лимфоциты) было наибольшим в III стадию ЯБДК, при I стадии - несколько ниже, и наименьшее содержание отмечено во II стадию (р < 0,05). Количество СD22 (В-лимфоциты) при I и II стадии ЯБДК было приблизительно одинаковым, а в III стадию повышалось, однако различия были недостоверными (р > 0,05).
Количество СD4 (Т-лимфоциты/хелперы) при I стадии было выше, чем при II стадии, а в III стадию оно вновь повышалось (р < 0,01). Содержание CD8 (Т-лимфоциты/супрессоры) при I стадии было наименьшим, а по мере эпителизации язвенных дефектов (II и III стадии) их количество повышалось (р > 0,05).
Таким образом, наиболее выраженное и достоверное нарушение клеточного иммунитета наблюдается в периоде обострения ЯБДК, а точнее, в I стадию («свежая» язва). По мере эпителизации язвенного дефекта данные показатели улучшаются.
Также исследования клеточного иммунитета проводили у детей (26 чел.) в периоде обострения ЯБДК до и после проведения традиционной противоязвенной терапии. Контрольной группой служили здоровые дети аналогичных возрастных групп (24 чел.). Результаты исследований представлены в таблице 1.
Таблица 1
Показатели клеточного иммунитета у детей с ЯБДК до и после применения традиционного противоязвенного лечения, в процентах
Показатели клеточного иммунитета Статистический показатель ЯБДК, n = 26 чел. Контрольная группа, n = 24 чел.
до лечения после лечения
Лимфоциты M ± m 25 ± 0,9 29 ± 1,1 32 ± 1,78
E <0,01 >0,05
El - <0,01
Зрелые Т-лимфоциты (CD3) M ± m 42 ± 1,98 58 ± 2,41 63 ± 2,9
E <0,001 >0,05
El - >0,05
В-лимфоциты (CD22) M ± m 14 ± 1,6 16 ± 1,43 14 ± 0,81
E >0,05 >0,05
El - >0,05
Т-хелперы (CD4) M ± m 41 ± 2,31 38 ± 2,24 37 ± 1,58
E >0,05 >0,05
El - >0,05
Т-супрессоры (CDS) M ± m 16 ± 0,82 16 ± 0,91 18 ± 1,12
E >0,05 >0,05
El - >0,05
Примечание. * р - достоверность различий с контрольной группой; р1 - достоверность различий по сравнению с детьми с ЯБДК до проведения противоязвенного лечения.
Как показано в таблице 1, у детей в периоде обострения ЯБДК до проведения традиционного противоязвенного лечения, по сравнению со здоровыми детьми, имелось достоверное снижение показателей клеточного иммунитета по лимфоцитам (р < 0,01) и зрелым Т-лимфоцитам (СБ3) (р < 0,001).
В то же время по остальным статистическим параметрам клеточного иммунитета (В-лимфоциты (CD22), Т-хелперы (CD4), Т-супрессоры (CD8)) достоверной разницы не отмечено (р > 0,05), хотя имелась тенденция к повышению Т-хелперов (CD4) на высоте обострения ЯБДК.
В процессе проведения противоязвенного лечения происходило повышение показателей клеточного иммунитета по лимфоцитам (р1 < 0,01), зрелым Т-лимфоцитам (CD3) (р1 > 0,05). Остальные показатели значительных изменений не претерпевали. Отмечалась лишь тенденция к повышению среднего содержания В-лимфоцитов (CD22) (р > 0,05), к понижению Т-хелперов (CD4) (р > 0,05), содержание Т-супрессоров (CD8) осталось без изменений.
Нами также изучено абсолютное количество лимфоцитов и их субпопуляций в 1 мкл крови. Результаты исследований приведены в таблице 2.
Таблица 2
Абсолютные показатели (кл/мкл) лимфоцитов (М ± т) у детей с ЯБДК до и после применения традиционного противоязвенного лечения
Показатели клеточного иммунитета Статистический показатель ЯБДК, n = 26 чел. Контрольная группа, n = 24 чел.
до лечения после лечения
Лимфоциты M ± m 1622 ± 89 1809 ± 102 2102 ± 64
р <0,001 <0,05
р1 - >0,05
Зрелые Т-лимфоциты (CD3) M ± m 767 ± 71 1104 ± 58 1352 ± 36
р <0,001 <0,01
р1 - >0,01
В-лимфоциты (CD22) M ± m 321 ± 35 328 ± 31 319 ± 24
р >0,05 >0,05
р1 - >0,05
Т-хелперы (CD4) M ± m 663 ± 84 781 ± 62 903 ± 29
р <0,05 >0,05
р1 - >0,05
Т-супрессоры (CD8) M ± m 236 ± 38 374 ± 33 452 ± 18
р <0,001 <0,05
р1 - <0,05
Примечание. * р - достоверность различий с контрольной группой; рх - достоверность различий по сравнению с детьми с ЯБДК до проведения противоязвенного лечения.
Как видно из таблицы 2, абсолютное число лимфоцитов, а также зрелых Т-лимфоцитов было снижено в периоде обострения ЯБДК (р < 0,001). Изменения в субпопуляциях лимфоцитов наблюдались в виде достоверного снижения содержания СD4 (Т-лимфоциты/хелперы) (р < 0,01) и CD8 (Т-лим-фоциты/супрессоры) (р < 0,001). В содержании CD22 (В-лимфоциты) существенных изменений не выявили (р > 0,05).
После проведения лечения отметили достоверное повышение абсолютного количества лимфоцитов (р < 0,05), содержания зрелых Т-лимфоцитов (р < 0,01), количества CD8 (Т-лимфоциты/супрессоры) (р < 0,05); остальные показатели - без достоверной динамики.
Таким образом, относительное и абсолютное количество лимфоцитов изменено в периоде обострения ЯБДК у детей. Нами выявлено, что традиционное противоязвенное лечение оказывает существенное влияние на содержание лимфоцитов, зрелых Т-лимфоцитов и количество CD8 (Т-лимфоци-ты/супрессоры) в сторону их увеличения (вероятно, подобные изменения связаны с наступлением ремиссии заболевания). Следовательно, при ЯБДК у детей нет необходимости назначения препаратов, стимулирующих клеточный иммунитет.
Известно, что длительные воспалительные процессы, протекающие с повреждением органов и тканей, могут служить постоянным источником антигенов, что предрасполагает к образованию персистенции иммунных комплексов. Нами определено содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) у 23 детей с ЯБДК в периоде обострения и ремиссии. Результаты выражали в мкг/мл агрегированного Y-глобулина человека. Контролем служила группа из 24 здоровых детей. Результаты исследования даны в таблице 3.
Таблица 3
Циркулирующие иммунные комплексы у детей с ЯБДК в периоде обострения и ремиссии (М ± т)
Клинические формы ЯБДК, п = 23 Число положительных случаев, % Средние показатели ЦИК, мкг/мл Частота встречаемости уровней ЦИК, %
0-160 мкг/мл 160-300 мкг/мл Более 300, мкг/мл
Период обострения 26 ± 9 146 ± 8,3 р < 0,01 74 ± 9 26 ± 9 0
Период ремиссии 22 ± 9 132 ± 5,1 p < 0,05 р1 > 0,05 7S ± 9 22 ± 9 0
Здоровые дети, п = 24 10 ± 7 117 ± 1,9 91 ± 6 10 ± 7 0
Примечание. * р - достоверность различий по отношению к здоровым детям; рх - достоверность различий по отношению к периоду обострения.
Как показано в таблице 3, у здоровых детей средний уровень ЦИК составил 117 ± 1,9 мкг/мл агрегированного У-глобулина, индивидуальные показатели у 18 из 20 не превышали 160 мкг/мл. Это значение и ниже было принято за норму, результаты выше 160 мкг/мл расценивались как положительные. При ЯБДК содержание ЦИК не зависело от клинической тяжести процесса и фазы заболевания. У 17 детей из 23 (74 ± 9%) значение ЦИК было в пределах нормальных величин. Самые высокие показатели не превышали 300 мкг/мл, которые выявлены у двух больных, имеющих сопутствующую патологию в виде атопического дерматита. Умеренное повышение показателей ЦИК имело место у детей с сочетанной патологией желудочнокишечного тракта (ЯБДК и хронический холецистит, ЯБДК и хронический колит). Следовательно, к оценке клинической значимости полученных результатов следует подходить дифференцированно. Не имеет основания рекомендовать их для широкого применения в практической работе как диагностический и прогностический критерий при ЯБДК у детей. Необходимо лишь
обратить внимание, что тенденция к повышению ЦИК при ЯБДК у детей имеется при сочетании ее с другими заболеваниями, протекающими с анти-генемией.
Гуморальный иммунитет
Проведено определение содержания сывороточных иммуноглобулинов в зависимости от стадии язвенного процесса. Результаты исследования представлены в таблице 4.
Таблица 4
Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови у детей с ЯБДК в зависимости от стадии язвенного процесса (М ± т)
Стадии ЯБДК Статистический показатель Содержание иммуноглобулинов, г/л
А М в
I стадия («свежая» язва), п = 28 чел. М ± т 0,71 ± 0,1 1,02 ± 0,1 14,78 ± 0,84
р <0,001 >0,05 <0,001
II стадия («начало эпителизации язвенного дефекта»), п = 26 чел. М ± т 0,54 ± 0,06 0,91 ± 0,06 13,61 ± 0,71
р <0,001 >0,05 <0,001
р1 >0,05 >0,05 >0,05
III стадия («стадия рубца при сохраняющихся явлениях активного гастродуоденита», п = 25 чел. М ± т 0,93 ± 0,07 0,86 ± 0,05 10,04 ± 0,43
р <0,001 >0,05 <0,001
р1 >0,05 >0,05 >0,05
р2 <0,001 >0,05 <0,001
Здоровые дети, п = 24 чел. М ± т 1,38 ± 0,11 0,91 ± 0,07 9,76 ± 0,31
Примечание. * р - достоверность различий по отношению к здоровым детям; р1 - достоверность различий по отношению к I стадии ЯБДК; р2 - достоверность различий по отношению к II стадии ЯБДК.
Как показано в таблице 4, у детей в периоде обострения ЯБДК достоверно снижен уровень иммуноглобулина А в сыворотке крови, при этом наименьшие показатели наблюдались во II стадию язвенного процесса («начало эпителизации язвенного дефекта») (р < 0,001). Уровень иммуноглобулина М существенных изменений не претерпевал, лишь у 7% детей он имел тенденцию к снижению (р > 0,05). Иммуноглобулин в превышал показателей здоровых детей в 89% случаев, причем наибольший уровень отмечен при I стадии ЯБДК («свежая» язва) (р < 0,001). Таким образом, низкий уровень ^ А в обострении ЯБДК можно объяснить потреблением его на инактивацию повреждающего фактора слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.
В задачу исследования входило также изучение динамики содержания иммуноглобулинов, частоты их выявления в дуоденальном содержимом (порции А) при ЯБДК в зависимости от стадии язвенного процесса. Результаты анализа представлены в таблице 5.
Согласно представленным данным в таблице 5, в периоде обострения ЯБДК отмечалось достоверное снижение 8 ^ А (р < 0,05) в дуоденальном содержимом, при этом у 31,6 ± 8,7% детей в I стадию («свежая» язва), у
43,2 ± 9,7% во II стадию («начало эпителизации язвенного дефекта») он отсутствовал. Достоверных сведений в изменении уровня ^ М, ^ в по сравнению со здоровыми детьми не выявили (р > 0,05).
Таблица 5
Содержание иммуноглобулинов классов А, М, в (М ± т), частота их выявления в дуоденальном содержимом (порции А) у детей при разных стадиях ЯБДК
Статисти- ческий показатель Уровень иммуноглобулинов Частота выявления, %
А М О А М О
I стадия («свежая» язва), п = 28 чел.
М ± т 0,007 ± 0,003 0,010 ± 0,002 0,025 ± 0,009 68,4 ± 9,0 56,7 ± 9,7 54,3 ± 9,6
Р <0,05 >0,05 >0,05
II стадия («начало эпителизации язвенного дефекта»), п = 26 чел.
М ± т 0,009 ± 0,003 0,013 ± 0,003 0,028 ± 0,01 56,8 ± 10,0 55,1 ± 9,8 43,6 ± 10,0
Р <0,05 >0,05 >0,05
Рі >0,05 >0,05 >0,05
III стадия («стадия рубца при сохраняющихся явлениях активного гастродуоденита»), п = 25 чел.
М ± т 0,014 ± 0,006 0,016 ± 0,004 0,025 ± 0,01 81,01 ± 8,0 58,5 ± 11,2 61,9 ± 10,3
Р >0,05 >0,05 >0,05
Рі >0,05 >0,05 >0,05
Р2 >0,05 >0,05 >0,05
Ремиссия, п = 25 чел.
М ± т 0,014 ± 0,007 0,016 ± 0,004 0,025 ± 0,01 89,7 ± 6,4 60,2 ± 10,0 63,3 ± 10,1
Р >0,05 >0,05 >0,05
Рі >0,05 >0,05 >0,05
Р2 >0,05 >0,05 >0,05
Рз >0,05 >0,05 >0,05
Здоровые дети, п = 24 чел.
М ± т 0,021 ± 0,006 0,016 ± 0,008 0,027 ± 0,009
Примечание. * р - достоверность различий по отношению к здоровым детям; р1 - достоверность различий по отношению к I стадии ЯБДК; р2 - достоверность различий по отношению к II стадии ЯБДК; р3 - достоверность различий по отношению к III стадии ЯБДК.
В ремиссии ЯБДК уровень ^ А в дуоденальном содержимом возрастал в два раза по сравнению с I стадией ЯБДК, однако аналогичного показателя здоровых детей не достигал. Содержание ^ М, ^ в в периоде ремиссии существенно не изменялось, и результаты оказались недостоверными (р > 0,05).
При проведении корреляционного анализа в общей группе больных выявлена достоверная связь между уровнем иммуноглобулинов А, М, в в сыворотке крови и порции А дуоденального содержимого (для ^ А корреляционный коэффициент г = 1,26; для ^ М г = 1,01; для ^ в г = 1,00).
Проводили исследование секреторных иммуноглобулинов класса А, М, в и в желудочном соке. Однако независимо от исходного уровня pH секреторные иммуноглобулины не удалось обнаружить ни в периоде обострения,
ни в периоде ремиссии ни в одном случае. По всей видимости, это связано с протеолитическим фактором желудочного сока, который приводит к быстрому расщеплению иммуноглобулинов.
Определенный интерес, на наш взгляд, представляло изучение динамики сывороточных и секреторных иммуноглобулинов в процессе проведения традиционного противоязвенного лечения. При этом по динамике показателей как сывороточных, так и секреторных иммуноглобулинов на фоне лечения выявили умеренное повышение ^ А, уровень ^ М, в достоверно не изменялся.
Таким образом, при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки в периоде обострения обнаружены наиболее низкие показатели как сывороточного, так и секреторного ^ А. Очевидно, это свидетельствует о недостаточности иммунной защиты и снижении резистентности слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки. Традиционная противоязвенная терапия оказывает положительный эффект на сывороточный и секреторный ^ А, тем самым повышая как общую, так и местную иммунную защиту организма.
Выводы
1. У детей при ЯБДК наблюдаются отчетливые сдвиги в показателях клеточного и гуморального иммунитета.
2. Выявлена зависимость показателей клеточного и гуморального иммунитета от стадии ЯБДК, при этом наиболее выраженные изменения наблюдались в I стадию язвенной болезни («свежая язва»).
3. Отмечено улучшение показателей клеточного и гуморального иммунитета в процессе проведения традиционной противоязвенной терапии, что свидетельствует об отсутствии необходимости проведения иммунокоррекции при ЯБДК.
Список литературы
1. Бейер, Л. В. Факторы местного иммунитета гастродуоденальной системы и кишечника у здоровых людей / Л. В. Бейер, В. Г. Дорофейчук, Н. И. Толкачева // Педиатрия. - 1993. - № 1. - С. 4-7.
2. Шеляпина, В. В. О состоянии местного и гуморального иммунитета при гастродуоденальной и билиарной патологии у детей / В. В. Шеляпина, Т. В. Фокина // Проблемы иммунологии и аллергологии в детской гастроэнтерологии (республиканский сборник статей). - Н. Новгород, 1991. - С. 5-10.
3. Бороновец, И. Н. Иммунологические изменения при язвенной болезни / И. Н. Бороновец, Г. А. Сверчкова // Здравоохранение Белоруссии. - 1993. - № 1. -С. 14-16.
4. Лившиц, Е. Г. Клинико-иммунологические аспекты заболеваний желудочнокишечного тракта у детей / Е. Г. Лившиц, Д. Х. Гардовская, В. Я. Гринберг [и др.] // Педиатрия. - 1991. - № 9. - С. 11-17.
5. Шеляпина, В. В. Показатели местного и общего иммунитета при комплексном лечении гастродуоденита у детей / В. В. Шеляпина, Т. В. Фокина, П. К. Жел-вакова // Педиатрия. - 1989. - № 8. - С. 19-22.
