CC BY
8
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 4, 2021
Габдулхакова А.Х., Минаева Н.В., Назарова Е.Л., Шерстнев Ф.С., Трегубова Е.В.,
Рыболовлева Т.Н.
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», г. Киров
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СВОБОДНОЙ ЦИРКУЛИРУЮЩЕЙ ДНК У ДОНОРОВ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Введение. Свободная циркулирующая ДНК (сцДНК) представляет собой двухцепочечные низкомолекулярные молекулы геномной ДНК различной протяженности, не связанные с клетками и определяющиеся практически во всех жидкостях организма: плазме, сыворотке, моче, слюне и спинномозговой жидкости. У здоровых людей концентрация сцДНК в крови колеблется от 0 до 100 нг/мл. При некоторых патологических и физиологических состояниях (злокачественные новообразования, воспалительные процессы, травматические повреждения, физическая нагрузка, введение лекарственных препаратов и т. п.) содержание свободных (внеклеточных) нуклеиновых кислот повышается. Одним из таких факторов может быть введение человеческого гранулоцитарного колоние-стимулирующего фактора (Г-КСФ) донорам гемопоэ-тических стволовых клеток (ГСК). Открытие феномена нейтрофильных внеклеточных ловушек (NET) как особой сети, состоящей из сцДНК с интегрированным в нее содержимым гранул нейтрофилов, изменило существующие концепции иммунологии. Согласно литературным данным, Г-КСФ напрямую влияет на способность гранулоцитов высвобождать NET и стимулирует тромбообразование, что может оказывать влияние на систему кроветворения у доноров ГСК, приводить к появлению сцДНК в трансплантационном продукте и влиять на его характеристики.
Цель. Определить уровень общей свободной циркулирующей ДНК у доноров ГСК после стимуляции Г-КСФ.
Материалы и методы. Исследованы образцы пери-
ферической крови 42 доноров ГСК перед началом введения Г-КСФ и в день первого афереза клеток. Возраст обследованных колебался от 15 до 53 лет (медиана -32,5 года). Из них 24 (57%) мужчины и 18 (43%) женщин. Выделение сцДНК проводили из сыворотки периферической крови с помощью комплекта реагентов «SileksMagNA-Direct» (ООО «Силекс», Россия) на магнитных частицах. Концентрацию сцДНК определяли с помощью набора для количественной и качественной оценки геномной ДНК человека «QuantumDNA» (ЗАО Евроген, Россия). Статистическую значимость различий количественных показателей оценивали с помощью критерия Манна-Уитни. Достоверными считали различия при р<0,05.
Результаты. Медиана концентрации сцДНК доноров до введения Г-КСФ составила 2 (диапазон колебаний: от 0 до 12) нг/мл. Медиана содержания сцДНК, выделенной из крови, взятой в день первого афереза определена на уровне 12,5 (пределы концентрации: 2 - 69) нг/мл. Выявлено статистически значимое различие, касающееся увеличения пула сцДНК у доноров ГСК, индуцированного введением Г-КСФ (р<0,001).
Выводы. Показано, что мобилизация ГСК с помощью Г-КСФ сопряжена с ростом концентрации свободной внеклеточной ДНК у практически здоровых людей - доноров клеточного трансплантата. Данное исследование является пилотным и требует дальнейшей оценки определения содержания сцДНК в крови реципиентов Г-КСФ и клеточном трансплантате.
Гарифуллин А.Д. 12, Волошин С.В.1-3-4, Мартынкевич И.С.1, Бессмельцев С.С.1, Бакай М.П.1,
Клеина Е.В.1, Линников С.Ю.1
1Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург 2Санкт-Петербургский государственный университет, г. Санкт-Петербург
3Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова» Министерства Здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
4Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова, г. Санкт-Петербург
ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ НЕКРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПРИ АУТОЛОГИЧНОЙ
ТРАНСПЛАНТАЦИИ
Введение. Аутологичная трансплантация костного мозга/гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) является стандартом лечения «молодых» и «сохранных» пациентов с множественной миеломой (ММ). Проведение этого варианта лечения несколько ограничено в ряде регионов вследствие высокого потребления эко-
номических ресурсов и доступности криобанка. Мы провели ретроспективный анализ пациентов с ММ, которым выполнялась аутологичная трансплантация с использованием некриоконсервированных ГСК.
Материалы и методы. Проведено сравнение показателей жизнеспособности ГСК и эффективности
II научно-практическая конференция молодых ученых «Актуальные проблемы гематологии и трансфузиологии»
аутоТГСК у 78 пациентов. Все пациенты получали стандартные программы терапии и находились в ремиссии. Режимом кондиционирования для проведения аутоТГСК выбрана стандартная терапия мелфа-ланом (MEL200). В зависимости от способа хранения ГСК пациенты соотнесены в группу не-КРИО - без кри-оконсервирования (п = 35), группу КРИО - с криокон-сервированием (п = 43). Продукт афереза ГСК в группе не-КРИО хранился при температуре от +4 до +6 °С в присутствии многокомпонентного раствора антикоагулянта на основе цитрата натрия сроком до 3 суток. Для группы КРИО аферезный продукт криоконсерви-ровали в присутствии диметилсульфоксида (ДМСО) и хранили при сверхнизких температурах в условиях криобанка. Жизнеспособность ГСК оценивалась дважды (после афереза и непосредственно перед реинфу-зией) по количеству CD34+ и 7AAD- клеток, а также колониеобразующей способности (КОС) ГСК.
Результаты. Не было достоверных различий в количестве CD34+ клеток х 106/кг, в уровне 7AAD- клеток, в показателях общей КОС. Однако, отмечена достоверная разница в проценте утраты CD34+ клеток от момента афереза до момента реинфузии, что вероятнее всего обусловлено воздействием факторов внешнего окружения. Типичные для инфузий криокон-сервированных с ДМСО ГСК явления отсутствовали в группе не-КРИО. У 29 из 43 пациентов контрольной
Санкт-Петербург 18-19 ноября 2021 г.
группы КРИО (67,4%) при проведении реинфузии ГСК были отмечены реакции характерные для ДМСО Аналогичные проявления в группе не-КРИО закономерно полностью отсутствовали. У всех пациентов было констатировано полноценное восстановление кроветворения при выписке из стационара. Восстановление нейтрофилов было достигнуто на 11-й (диапазон 9-14) и тромбоцитов на 12-й день (диапазон 8-19) в группе не-КРИО, на 10-й (диапазон 8-14) и 12-й (диапазон 8-20) день в группе КРИО. Проведение трансплантации ГСК позволило увеличить количество полных ответов, МОБ-негативных ответов и уменьшить величину опухолевой нагрузки.
Выводы. Метод хранения ГСК без криоконсерви-рования не уступает традиционному методу с ДМСО. Безопасность АТГСК при ММ с применением некрио-консервированных ГСК подтверждается отсутствием побочных эффектов ДМСО, аналогичными сроками восстановления гемопоэза, низкой потребностью в заместительной гемокомпонентной терапии и частотой развития большинства посттрансплантационных осложнений. Применение некриоконсервированных ГСК делает аутотрансплантацию при ММ более доступной, в том числе, в лечебных учреждениях, не имеющих в своей структуре криобанка.
Гришина Ж.В., Ядгаров М.Я., Базанович С.А., Павлова А.А.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный научно-клинический центр спортивной медицины и реабилитации Федерального медико-биологического агентства», г. Москва
РЕФЕРЕНТНЫЕ ИНТЕРВАЛЫ УРОВНЯ ГЕМОГЛОБИНА И СЫВОРОТОЧНОГО ЖЕЛЕЗА В КРОВИ ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ СПОРТСМЕНОВ
Введение. Для достижения высоких спортивных результатов необходимо поддержание адекватной интенсивности аэробных физических нагрузок и высокого уровня кислородтранспортной функции крови. Для своевременного выявления отклонений в показателях кислородтранспортной системы крови и ранней диагностики анемических состояний у профессиональных спортсменов врачу важно ориентироваться на референтные интервалы (РИ) показателей крови, адаптированные для спортсменов, с учетом пола, возраста и спортивной специализации. По данным наблюдений, именно в рамках углубленного медицинского обследования (УМО) спортсменов сборных команд России впервые выявляются отклонения в обмене железа.
Цель. Рассчитать референтные интервалы показателей концентрации гемоглобина и содержания сывороточного железа на выборке профессиональных спортсменов разного пола и возраста.
Материалы и методы. Были обследованы спортсмены - члены спортивных Сборных команд России в возрасте от 16 до 38 лет шести групп видов спорта: циклических, скоростно-силовых, сложно-координационных, игровых и единоборств, включающих 40 спортивных дисциплин. Общее количество обследованных спортсменов - 5245, из них 3167 спортсменов мужского и 2078 женского пола. Спортивная квалификация обследованных спортсменов: 396 человек име-
ли различные спортивные разряды, 2178 являлись кандидатами в Мастера спорта (КМС), 2671 спортсмен имел квалификацию Мастер спорта (МС) и выше.
При расчете РИ анализируемых параметров крови были исключены результаты обследования спортсменов, не допущенных к учебно-тренировочному процессу по итогам прохождения УМО по состоянию здоровья. Исследования проводились на базе ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна и ФГБУ ФНКЦСМ ФМБА России. Параметры крови измерялись с помощью полуавтоматического биохимического анализатора BioSystems BTS-350. Взятие крови проводилось утром натощак.
С использованием критерия Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиефорса и критерия Шапиро-Уилка, оценивался тип распределения данных. В дальнейшем проводилась элиминация статистических выбросов с использованием критерия Шовене и метода Тьюки. В случае соответствия данных нормальному закону распределения применялся стандартных подход к построению РИ на основе t-критерия Стьюдента, в противном случае доверительный интервал рассчитывался для логнормального распределения с расчётом коэффициента разности.
Результаты. В результате сравнительного анализа рассчитанных РИ концентрации гемоглобина у спортсменов разного возраста и пола с РИ, приняты-
