CC BY
141
ОБЗОРЫ ЛИТЕРАТУРЫ ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИНГИБИТОРОВ... 27
УДК 616-006-085.277.3.015.44 Е.В. Степанова, М.Е. Абрамов, М.Р. Личиницер ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИНГИБИТОРОВ NFkB В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
Контактная информация:
Степанова Евгения Владиславовна, д-р мед. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ ЭДиТО адрес: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24; тел. +7(495)324-10-65; e-mail: e [email protected]
Статья поступила: 15.09.2010, принята к печати 16.09.2010.
Резюме
Одним из перспективных белков-мишеней для действия таргетной терапии является транскриптацион-ный фактор NFkB, который принимает участие в процессах канцерогенеза, и супрессия которого может привести к подавлению развития опухоли. Белок NFkB регулирует экспрессию различных генов (в том числе и некоторых протоонкогенов), вовлеченных в ингибирование апоптоза, повышение выживаемости клеток и их пролиферативной активности, стимуляцию ангиогенеза и метастазирования. Активация NFkB ассоциируется с резистентностью опухолей к различным химиотерапевтическим агентам и лучевой терапии. Конститутивная экспрессия и/или активация NFkB встречается во многих типах злокачественных опухолей, в том числе при раке молочной железы, легкого, меланоме, лимфомах и других. Высокая эффективность непрямого ингибитора NFkB - бортезомиба, свидетельствует о больших перспективах использования таких препаратов в онкологических диспансерах РФ.
Ключевые слова: онкология, таргетные препараты, NFkB.
E.V. Stepanova, M.E. Abramov, M.R. Lichinicer
NF-kB SIGNALING DISRUPTION: CLINICAL AMMPLICATION
N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center of RAMS, Moscow
Abstract
Transciptional factor NFkB is one of the target proteins involving in cancerogenesis and its suppression could reduce the tumor growth. It was shown long ago that the expression of proteins participating in apoptosis inactivation, increasing the survival and proliferative activity of cancer cells, angiogenesis stimulation and metastasis formation is under the NF-kB transcriptional factor control. It is considered that the NFkB activation correlates with drug radiotherapy resistance. The NfkB activation is a hallmarker of breast cancer, melanoma, lung cancer, lymphomas e.t. The observed high efficacy of bortezomib, NF-kB non-direct inhibitor in clinic, argue the implication of such drugs in cancer patients in Russia.
Key words: oncology, target therapy, NFkB.
Введение
Заболеваемость злокачественными новообразованиями в последние десятилетия в России непрерывно возрастает и, как показывают статистические расчеты, прирост числа онкологических больных в XXI веке будет постоянно повышаться. По оценкам ВОЗ в РФ смертность от злокачественных новообразований находится на втором месте после смертности от сердечно-сосудистых заболеваний.
Отсутствие тенденции к снижению смертно -сти от онкологических заболеваний требует разработки новых высокоэффективных режимов лечения больных. В настоящее время основными методами лечения рака остаются хирургический, лучевой и химиотерапевтический. Различные виды противоопухолевой терапии с включением различных режимов химиотерапии получают более 70 % всех больных злокачественными новообразованиями. При основных локализациях злокачественных опухолей (рак толстой кишки, легкого, молочной железы) показатель операбельности по отношению к числу заболевших не превышает 20 %, а около 50 % оперированных пациентов умирают в первые два года от прогрессирования заболевания. При этом по данным ВОЗ 40 % смертей от онкологических заболеваний
можно предотвратить использованием современных программ химиотерапии. Однако даже к эффективным химиопрепаратам через несколько курсов лечения возникает лекарственная резистентность. Существует потребность в разработке новых высокоэффективных противоопухолевых препаратов оригинального действия, обладающих низкой токсичностью.
Одним из активно изучаемых белков является NFkB, который принимает участие в процессах канцерогенеза, и супрессия которого может привести к подавлению развития опухоли. В данном обзоре рассматриваются перспективы использования NFkB в качестве мишени для противоопухолевой терапии.
Семейство
транскрипционных факторов Rel/NFKB
Белок NFkB был открыт в 1986 г. группой исследователей под руководством Дэвида Балтимора (David Baltimore) [2] и был выделен из зрелых В-лимфоцитов как ядерный белок, связанный с энхан-серной областью легкой цепи иммуноглобулина каппа, что легло в основу его названия [2; 27]. Изначально его считали транскрипционным фактором, характерным только для В-лимфоцитов, но позже было показано, что он представлен во всех типах клеток [3].
Основная физиологическая функция ЫРкВ заключается в быстром перепрограммировании экспрессии большого набора генов при инфекции, воспалении и некоторых стрессорных воздействиях. Наряду с генами, контролирующими иммунный ответ и деление клеток, ЫРкВ активирует группу генов, продукты которых подавляют апоптоз [1].
Семейство транскрипционных факторов КеШРШ состоит из нескольких структурно сходных белков, встречающихся у различных организмов - от насекомых до человека [3].
У позвоночных семейство представлено пятью клеточными белками, подразделяемых на две функциональных группы: первая из них включает с-Йе1, Ые1Л (р65) и Ые1В, а вторая - ЫРкВ-1 (р50/р105) и ЫРкВ-2 (р52/р100). Члены второй группы существуют в виде предшественников - р100 и р105 (с Мм 100 и 105 кОа соответственно).
Все белки семейства КеШРкВ для осуществления своих функций формируют гомо- и гетеродимеры, в результате получаются разнообразные димерные комплексы. Наиболее известный из них -гетеродимер р50Же1Л, связанный с ингибиторной субъединицей 1кВа.8 Образование гетеродимеров между р52 и р50 или их гомодимеров приводит к возникновению транскрипционно неактивных ядерных комплексов. Однако при взаимодействии этих димеров с Вс13 образуются транскрипционно активные триммеры [6]. Представители семейства ЫеШРкВ проявляют различную способность к образованию димеров, разное сродство к кВ-сайтам и разную способность к связыванию с ингибиторами ЫРкВ [3]. Таким образом, в различных типах клеток могут быть активны разные представители семейства КеШРкВ, что дает широкие возможности для их регуляции, в том числе для тканеспецифичности [26].
ЫЕкБ в развитии и прогрессии опухолей
Транскриптационный фактор ЫРкВ принимает участие в процессах канцерогенеза. Его супрессия может привести к подавлению развития опухоли. Показано, что белок ЫРкВ регулирует экспрессию различных генов (в том числе и некоторых протоонкогенов), вовлеченных в ингибирование апоптоза, повышение выживаемости клеток и их пролиферативной активности, стимуляцию ангиогенеза и мета-стазирования - основных процессов, участвующих в развитии и прогрессии опухолей [26]. В исследованиях показано, что активация ЫРкВ ассоциируется с резистентностью опухолей к различным химиотерапевтическим агентам и лучевой терапии. Конститутивная экспрессия и/или активация ЫРкВ встречается во многих типах злокачественных опухолей, в том числе при раке молочной железы, легкого, меланомы, лимфомах и других. Активация ЫРкВ, вызванная гипоксией и понижением рН в опухолевой ткани, характерна не только для опухолевых, но и для окружающих нормальных клеток (т.н. опухолевого микроокружения).
Поэтому неудивительно, что в большинстве клеточных линий опухолей человека независимо от их происхождения - лейкозов или солидных опухолей -ЫРкВ постоянно активирован [8]. В здоровых же клетках подобное явление наблюдается крайне редко. Исключение составляют Т- и В-клетки, тимоциты, моноциты и астроциты на стадии пролиферации. Конститутивно активный ЫРкВ был найден не только в клеточных линиях, но и в образцах тканей опухолей, взятых у пациентов. Еще более важно то, что подавление активности ЫРкВ в этих образцах останавливало пролиферацию и стимулировало апоптоз [5].
Что может вызывать такую конститутивную активацию NFkB в опухолевых клетках, выяснено не полностью. В числе возможных причин называют мутации IkBa, повышенную активность Б26-протеа-сом, гиперэкспрессию провоспалительных цитокинов [21]. Некоторые канцерогены (DMBA, сигаретный дым) и опухолевые промоторы могут вызывать активацию NFkB [4; 13].
Возможные стратегии инактивации NFkB
Существует несколько стратегий инактивации NFkB. Способностью ингибировать NFkB обладают множество веществ - как природных, так и синтетических, которые используют разные механизмы, блокируя различные этапы пути активации NFkB. Но необходимы более детальные исследования, чтобы понять, насколько специфичны эти ингибиторы в отношении опухолевых клеток и будут ли они влиять на другие сигнальные пути. Далее приводятся примеры различных стратегий инактивации NFkB в ответ на один ли более стимулов.
Воздействие на уровне взаимодействия между NFkB и ДНК
Некоторые вещества способны напрямую блокировать взаимодействие NFkB с кВ-сайтами на ДНК, что определялось по количеству NFkB, способного связываться с ДНК после добавления ингибитора. Один из способов не дать NFkB связаться с ДНК -ввести в клетку «обманку» (decoy) для транскрипционных факторов, которая представляет собой двухцепочечный олигодезоксинуклеотид, содержащий последовательность, аналогичную кВ-сайтам, и таким образом ингибируют транскрипционно-активные димеры NFkB [12].
Известны другие вещества, препятствующие связыванию NFkB с ДНК, предсердный натрий-уретический пептид, некоторые металлы (например, хром, кадмий, золото, меркурий, цинк), рабаверин, фениловый эфир кофеиновой кислоты, вазоактивный интерстициальный пептид.
Протеосомная деградация ингибиторной субъединицы Можно воздействовать на пути, по которым происходит ингибирование NFkB в клетке. Протеа-сомные ингибиторы ингибируют 26Б-протеасому, необходимую для деградации 1кВ.
Таким образом, NFkB не может высвободиться из комплекса с ингибитором и не попадает в ядро [25]. Так действуют пептиды альдегидов -химостатин и леупептин (были разработаны и другие, но они не имели достаточной селктивности - ингибировали и сериновые, и цистеиновые протеазы); лактацистеин, PS-341 (бортезомиб), ингибитор убиквитин-лигазы, циклоспорин А [11].
Существуют и другие ингибиторы деградации NFkB, но механизм их действия неизвестен: капса-цин, белок оболочки вируса гепатита С, глиотоксин грибов, IL-13 и пероксид ванадия.
Фосфорилирование IkB
Поскольку фосфорилирование 1кВа является ключевым сигналом для активации NFkB, то вещества, предотвращающие фосфорилирование и, следовательно, последующее убиквитинирование и деградацию 1кВа, являются игибиторами NFkB.
Такими свойствами обладают аспирин, ибупро-фен, оксид азота, простагландин А, сангвинарин и YopJ (его синтезирует Yersiniapseudotuberculosis) [26].
Недавно было показано, что 4-гидрокси-2-ноненаль, продукт перекисного окисления липидов, предотвращает фосфорилирование 1кВа за счет прямого ингибирования IKK [17]. Кроме того, недавно был выделен пептид, который селективно связывает IKKy и не дает ей войти в холофермент IKK. Этот пептид в ответ на провоспалительные цитокины в системах с мышами сохраняет уровень активности NFkB на базальном уровне [20]. Тамоксифен и ра-локсифен эффективно подавляли фосфорилирование и деградацию 1кВа и индуцировали апоптоз в клетках множественной миеломы.
Воздействие на ингибиторные субъединицы
Еще одна стратегия - увеличение количества ингибитора 1кВа. Это могут осуществлять Р-амилоид, глюкокортикоиды (например, дексаметазон или преднизон), IL-10 и IL-13 [18].
Транспорт NFkB в ядро
Другой подход к подавлению активности NFkB - использование трансмембранных пептидов, которые не дают NFkB переместиться в ядро. Эти пептиды несут участок белка р50, содержащий NLS и конкурентно ингибирущий транспорт настоящих NFkB [19]. Примером могут служить SN-50197 и о ,о -бисмиристоил тиаминдисульфид.
Гликопротеид, выделенный из луковиц растения Urginea indica, проявляет проапоптотическое и атиангиогенное действие. Это вещество блокирует транспорт NFkB из цитоплазмы в ядро.
Супрессия NFkB за счет трансфекции генов
Наиболее очевидная цель - ген IcBa. Для выполнения поставленной задачи необходимо внести модификации в определенные сайты - сайты фосфо-рилирования (ser32 и 36 заменяют на аланин) и уби-квитинирования (lys21 и 22 замещают аргинином), чтобы не допустить их деградации. Такой «супер-репрессор» задерживает NFkB в цитоплазме [7].
Другая цель для внесения генов - HDAC3, деацетилаза гистонов. Этот фермент ацетилирует RelA и помогает ему связываться с IicBa. Экспрессия HDAC3 в клетках культуры HeLa, стимулированных TNF-a, подавляла связывание NFkB с ДНК и понижала уровень RelA с соответствующим повышением количества неактивного комплекса IkBo/NFkB в цитозоле [10]. Этот механизм контролирует длительность активации NFkB и таким образом может быть использован в борьбе его с постоянной активацией.
И, наконец, присутствие различных проапопто-тических клеточных белков в цитоплазме подавляет антиапоптотическое действие NFkB. Внесение в клетку гена Erg1 (транскрипционный фактор, активируемый такими стимулами как NFkB) предотвращает активацию NFkB в системах in vitro и in vivo. Erg1 способен образовывать димеры с RelA (р65). Такой димер не способен связываться со своими промоторами на ДНК [9]. Ген RAI (RelA-associated inhibitor) также кодирует белок, который в конечном итоге связывается с RelA и подавляет антиапоптотическую активность NFkB.206 Par-4 (prostate apoptosis response-4) ингибирует IKK и активирует апоптотический путь через Fas [9]. Кроме того, Par-4 инактивирует Bcl-2, хорошо известный про-апоптотический онкоген. Примеры других белков: E2F-1210 (способствует продвижению клетки по клеточному циклу, потеря его экспрессии ведет к развитию многих опухолей), р53 (контролирует клеточный цикл) и циклин E-cdk2 могут подавлять активность NFkB с помощью транскрипционного коактиватора
CRB/p300 [15]. Для того, чтобы NFkB связался с соответствующим участком ДНК, CRB^300 должен его ацетилировать. Р53 и циклин Е конкурируют за связывание с комплексом CRB/p300 и препятствуют его связыванию с NFkB. Нужно отметить, что такой антагонизм между NFkB и р53 еще обсуждается, поскольку, например, известно, что р53 способен активировать NFkB [15].
Использование антисмысловых РНК и малых интерферирующих РНК Антисмысловые РНК, подавляющие экспрессию таргетных генов, можно использовать в терапевтических целях. Выделим три стратегии, по которым работают анти-мРНК. Первая подразумевает использование одноцепочечных олигонуклеотидов, подавляющих экспрессию РНК. Вторая использует каталитически активные олигонуклеотиды - рибозимы - чтобы запустить расщепление ДНК, в третьей применяются siRNA [28].
Другие вещества,
способные подавлять активность NFkB, но механизм действия которых неизвестен Различные антиоксиданты тоже могут предотвращать активацию NFkB в ответ на различные стимулы, такие как TNF-a, IL-1, форболовый эфир, LPS, УФ-излучение, за счет неизвестных механизмов [22] Примеры таких антиоксидантов: дисуль-фурам, куркумин, глутатион и витамин С. Различные препараты также способны ингибировать NFkB. Сюда относятся индометацин, тамоксифен, дексаметазон, салиндак [23].
Токотриенол, разрабатываемый для лечения диабетической нефропатии, заметно понижает количество р65 в ядре. Ксантохумол, флавоноид, выделенный из хмеля (Humulus lupulus), способен подавлять активность NFkB в культуре клеток гиперплазии эпителия простаты (ВРН-1), но не оказывает никакого действия на клетки PC-3. Теми же свойствами обладает продукт окисления ксантохумола -ксантоауренол - только имеет большую эффективность. Интересно, что при снижении активности NFkB его концентрация в ядре повышается [14].
Бортезомиб (Велкейд) -непрямой ингибитор NFkB -в клинической практике Бортезомиб - ингибитор протеосомы 26S. Он представляет собой трипептид Pyz-Phe-boroLeu (пу-разоновая кислота, фенилаланин и лейцин, несущий борную кислоту вместо карбоксильной группы). Показано, что он подавляет пролиферацию и/или стимулирует апоптоз в различных типах опухолей, включая рак молочной железы, желудка, яичников, поджелудочной железы и др. В настоящее время он одобрен для клинического использования в лечении множественной миеломы. В исследование SUMMIT было включено 220 пациентов, получивших ранее в среднем 6 программ терапии, 91 % из них были рефрактерны к последней [16].
Этим практически безнадежным пациентам начали терапию бортезомибом. В результате исследования в 70 % случаев произошла стабилизация болезни, у 35 % больных получен объективный ответ. Исследование SUMMIT доказало, что бортезо-миб эффективен против клеток множественной мие-ломы, рефрактерных к существующим методам терапии, и является единственным средством спасения для пациентов с тяжелыми формами рецидивирующей и рефрактерной множественной миеломы.
В исследовании АРЕХ сравнивали эффективность бортезомиба и дексаметазона в терапии множественной миеломой [24]. Через 8 мес. на терапию дексаметазоном 18 % пациентов дали частичные ответы, а 38 % эффективных ответов было получено на терапию бортезомибом. Через 8 мес. наблюдательный комитет остановил исследование ввиду не-этичности его продолжения, и все пациенты из группы дексаметазона были переведены на бортезо-миб в силу его очевидной большей эффективности. Через год уровень ответов этих пациентов вырос до 45 %. Ведутся клинические испытания при других злокачественных опухолях.
Бортезомиб - один из самых дорогих препаратов, закупаемых государством, применяется для лечения множественной миеломы. Сейчас единственный в РФи производитель разрешенного к продаже бортезомиба - бельгийско-швейцарская фирма Janssen-Cilag (торговая марка «Велкейд», данные реестра лекарственных средств).
В 2009 г. на приобретение бортезомиба потрачено около 5,2 млрд руб.
Литература
Заключение
Таким образом, белки семейства ЫРкВ могут рассматриваться в качестве мишени для разработки препаратов направленного действия.
Они активно задействованы в развитии и прогрессии опухолей, конститутивно активированы во многих типах опухолей и ассоциированы с неблагоприятным прогнозом течения болезни.
Становится понятно, что лекарственные препараты должны подавлять активность ЫРкБ не полностью, но с высокой селективностью.
Требуется дальнейшие исследования и поиск высокоселективных ингибиторов данного семейства, обладающих высокой специфичностью противоопухолевого действия и низкой токсичностью, которые будут широко востребованы в онкологических диспансерах РФ.
Работа поддержана Министерством образования и науки РФ (государственный контракт 02.512.12.2035).
1. Копнин Б.П. Молекулярные механизмы канцерогенеза / Энциклопедия клинической онкологии. Под ред. Давыдова М.И. - М.: РЛС-Пресс, 2004. - С. 34-53.
2. AggarwalB.B. Nuclear factor-кВ: the enemy within // Cancer Cell. - 2004. - 6. - P. 203-8.
3. Aim K.S, Aggarwal B.B. Transcription factor NF-кВ: a sensor for smoke and stress signals//Ann N Y Acad Sci. - 2005. - 1056. - P. 218-33.
4. Anto R.J., Mukhopadhyay A., Shishodia S. et al. Cigarette smoke condensate activates nuclear transcription factoncB through phosphorylation and degradation of iKB(alpha): correlation with induction of cyclooxygenase-2 // Carcinogenesis. - 2002. - 23(9). - P. 1511-8.
5. Bharti AC, Aggarwal B.B. Nuclear factor-кВ and cancer: its role in prevention and therapy//Biochem Pharmacol. - 2002. - 64(5-6). - P. 883-8.
6. Bours V., Franzoso G, Azarenko V et al. The oncoprotein Bcl-3 directly transactivates through к В motifs via association with DNA-binding p50B homodimers // Cell. - 1993. - 72. - P. 729-39.
7. BuirsV. Stable inhibition of nuclear factor kB in cancer cells does not increase sensitivity to cytotoxic drugs//Cancer Res. - 1999. - 59. - P. 811-5.
8. Carg A., Aggarwal B.B. Nuclear transcription factor-KB as a target for cancer drug development // Leukemia. - 2002. -16. - P. 1053-68.
9. Chapman NR, Perkins N.D. Inhibition of the RelA(p65) NF-kB subunit by Egr-1//J Biol Chem. - 2000. - 275. - P. 4719-25.
10. Chen L.F., Fischle W, Verdin E, Greene W. C. Duration of nuclear NF-kB action regulated by reversible acetylation // Science. - 2001. - 293. - P. 1653-7.
11. Cusack J.C. Jr, LiuR, Houston M. etal. Enhanced chemosensitivity to CPT-11 with proteasome inhibitor PS-341: implications for systemic nuclear factor-KB inhibition // Cancer Res. - 2001. - 61. - P. 3535-40.
12. D’Acquisto F, Ialenti A., Ianaro A. et al. Local administration of transcription factor decoy oligonucleotides to nuclear factor-KB prevents carrageenin-induced inflammation in rat hind paw // Gene Ther. - 2000. - 7. - P. 1731-7.
13. Dong G, Chen Z, Kato T, Van Waes C. The host environment promotes the constitutive activation of nuclear factor-KB ...// Cancer Res. - 1999. - 59. - P. 3495-504.
14. Emily C. Colgate, Cristobal L. Miranda, Jan F. Stevens et al. Xanthohumol, a prenylflavonoid derived from hops induces apoptosis and inhibits NF-kB activation in prostate epithelial cells // Cancer Letters. - 2007. - 246. - P. 201-9.
15. Ikeda A., Sun X., Li Y. et al. p300/CBP-dependent and -independent transcriptional interference between NF-kB RelA and p53 // Biochem Biophys Res Commun. - 2000. - 272. - P. 375-9.
16. Jagannath S. SUMMIT/CREST Investigators. Bortezomib in combination with dexamethasone for the treatment of patients with relapsed and/or refractory multiple myeloma with less than optimal response to Bortezomibe alone // Haema-tologia. - 2006. - 91. - P. 929-34.
17. JiC, KozakKR, MarnettLJ. IkB kinase, a molecular target for inhibition by 4-hydroxy-2-nonenal//J Biol Chem. - 2001. - 276. - P. 18223-8.
18. Lentsch A.B., Shanley T.P., Sarma V., Ward P.A. In vivo suppression of NF-k B and preservation of I к B alpha by interleukin-10 and interleukin-13 // J Clin Invest. - 1997. - 100. - P. 2443-8.
19. Lin Y.Z., Yao S.Y., Veach RA, Torgerson T.R., Hawiger J. Inhibition of nuclear translocation of transcription factor NF-KB...//J Biol Chem. - 1995. - 270. - P. 14255-8.
20. May M.J., D Acquisto F, Madge L.A. et al. Selective inhibition of NF-kB activation by a peptide that blocks the interaction of NEMO with the IkB kinase complex // Science. - 2000. - 289. - P. 1550-4.
21. O’Connell M.A., Cleere R, Long A. et al. Cellular proliferation and activation of NF к B are induced by autocrine production of tumor necrosis factor alpha in the human T lymphoma line HuT 78//J Biol Chem. - 1995. - 270(13). - P. 7399-404.
22. PahlH.L. Activators and target genes of Rel/NF-KB transcription factors//Oncogene. - 1999. - 18. - P. 6853-66.
23. Palombella V.J., Rando OJ, GoldbergA.L., Maniatis T. The ubiquitinproteasome pathway is required for processing the NF-k B1 precursor protein and the activation of NF-k B//Cell. - 1994. - 78. - P. 773-85.
24. Richardson P.G. Extended follow-up of a phase 3 trial in relapsed multiple myeloma: final-to-evant results of the APEX trial // Blood. - 2007. - 110. - P. 3557-60.
25. Russo S.M., Tepper J.E., Baldwin A.S. Jr. et al. Enhancement of radiosensitivity by proteasome inhibition: implications for a role of NF-kB // Int J Radiat Oncol Biol Phys. - 2001. - 50. - P. 183-93.
26. SethiG, Sung B, Aggarwal B.B. Nuclear Factor-KB Activation: From Bench to Bedside//Exp Biol Med. - 2008. - 233(1). - P. 21-31.
27. Shishodia S., Aggarwal B.B. Nuclear factor-KB activation mediates cellular transformation, proliferation, invasion an-giogenesis and metastasis of cancer // Cancer Treat Res. - 2004. - 119. - P. 139-73.
28. SurabhiR.M., GaynorR.B. RNA interference directed against viral and cellular targets inhibits human immunodeficiency 1 replication // J Virol. - 2002. - 76. - P. 12963-73.
