CC BY
95
УДК 597.553.2:597-12
ПАТОГЕНЫ ГИДРОБИОНТОВ КАМЧАТКИ
Т. В. Гаврюсева, Н. В. Сергеенко, Е. А. Устименко, Т. В. Рязанова, Е. В. Бочкова, JI. В. Овчаренко, С. JI. Рудакова, Е. А. Грицких
Зав. лаб., н. с., м. н. с., Камчатский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии 683000 Петропавловск-Камчатский, Набережная, 18 Тел., факс: (4152) 41-27-01; (41531) 6-23-37 E-mail: [email protected]
КАМЧАТКА, ТИХООКЕАНСКИЕ ЛОСОСИ, СЕЛЬДЬ, КАМБАЛА, КРАБЫ, ВИРУСОЛОГИЯ, БАКТЕРИОЛОГИЯ, ПАРАЗИТОЛОГИЯ, ГИСТОЛОГИЯ
В настоящей работе обобщены результаты комплексных (вирусологических, бактериологических, паразитологических и гистологических) исследований гидробионтов из внутренних водоёмов и морской акватории Камчатки, проведенных в период с 2001 по 2011 гг. Представлена информация о видовом составе, распространённости инфекционных и инвазионных агентов, а также их воздействии на состояние здоровья гидробионтов.
PATHOGENIC AGENTS FOR HYDROBIONTS IN KAMCHATKA
Т. V. Gavruseva, N. V. Sergeenko, E. A. Ustimenko, Т. V. Ryazanova, E. V. Bochkova, L. V. Ovcharenko,
S. L. Rudakova, E. A. Gritskikh
Head of the lab., scientist, junior scientist, Kamchatka Research Institute of Fisheries and Oceanography 683000 Petropavlovsk-Kamchatsky, Naberezhnaya, 18 Tel., fax: (4152) 41-27-01; (41531) 6-23-37 E-mail: [email protected]
KAMCHATKA, PACIFIC SALMON, HERRING, FLOUNDERS, CRABS, VIROLOGY, BACTERIOLOGY, PARASITOLOGY, HISTOLOGY
Results of complex researches (virological, bacteriological, parasitological and histological) of freshwater and marine hydrobionts of Kamchatka for the period from 2001 to 2011 have been demonstrated. Data on taxonomic composition and distribution of infective and invasive agents and their effects on the health of hydrobionts have been generalized.
На современном этапе исследований биологии и с высоким уровнем смертности, вызванные виру-
популяционной экологии практический интерес для сами и простейшими (Johnson, 1983; Sindermann,
рыбохозяйственной науки представляет решение 1990).
проблем здоровья гидробионтов. Данных о пато- Заболевания культивируемых гидробионтов
генных организмах, вызываемых ими заболева- являются одним из главных факторов, сдерживаниях и их распространенности в популяциях про- ющих развитие мирового искусственного воспро-
мысловых гидробионтов в морях и внутренних изводства (Щелкунов, 2004; Ларцева и др., 2004).
водоемах Камчатки недостаточно. Эта информа- В результате гибели рыб от болезней аквакульту-
ция актуальна в связи с расширением ареала мно- ра теряет до 15-20% продукции (Стрелков и др.,
гих видов патогенов, обусловленным климатичес- 2005).
кими изменениями, переносом с интродуцируе- Применение комплексных (вирусологических,
мыми или культивируемыми видами (Stewart, бактериологических, паразитологических, гисто-
1991; Lafferty et al., 2004; Гаевская, 2004). В мор- логических, гистохимических, электронно-микро-
ской среде особое значение имеет проблема био- скопических) методов исследований позволяет
инвазий, связанная с переносом судами чужерод- объективно оценить состояние здоровья гидроби-
ных организмов, в том числе патогенных, способ- онтов.
ных выживать в балластных водах (Carlton, Geller, Основная цель работы лаборатории — оцен-
1993; Звягинцев и др., 2009). Исследования по- ка состояния здоровья промысловых видов рыб следних десятилетий показывают, что на числен- и ракообразных Камчатки, определение степени
ность гидробионтов значительное влияние оказы- воздействия бактериальных, паразитарных и ви-
вают инфекционные и инвазионные болезни русных патогенов на их организм, изучение эпи-
(Meyers et al., 1987; Noga, 1996). Среди промыс- зоотической обстановки в популяциях данных
ловых гидробионтов зарегистрированы эпизоотии животных.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА В период 2001-2011 гг. были обследованы гидро-бионты из внутренних водоёмов и морской акватории Камчатки (Карагинская, Петропавловск-Командорская и Камчатско-Курильская подзоны). С 1996 г. проводили систематические исследования эпизоотической обстановки на пяти лососевых рыбоводных заводах: Малкинском (МЛРЗ), Пара-тунском экспериментальном (ПЭЛРЗ), Вилюйском (ВЛРЗ), Озерки (ОЛРЗ), Кеткино (КЛРЗ). До 2003 г. обследовали пресноводные водоемы, расположенные вблизи крупных населенных пунктов Камчатки и являющиеся источниками водоснабжения для ЛРЗ — бассейны рек Авача, Паратунка и Большая. С 2004 г. начали изучение популяций лососей в крупных рыбохозяйственных водоемах — бассейнах рек Озерная (оз. Курильское), Камчатка (оз. Аза-бачье), Большая (оз. Начикинское), а также оз. Ли-ственичное, Большой Вилюй, Дальнее. С 2002 г. на шельфе Западной Камчатки начали исследования промысловых видов крабов: камчатского, синего, стригунов опилио и берди. Отлов ракообразных проводили в период осенне-зимних ловушечных съемок 2002, 2004, 2006, 2010 гг. на НИС «Аметист» и летом 2007 г. в ходе траловой съемки на НИС «Профессор Кагановский».
Кроме того, в лаборатории болезней рыб проводят исследования на товарное качество и безопасность продукции с 2006 г.—горбуши, кеты, кижуча, нерки; с 2008 г. — промысловых видов камбал (желтоперой, двухлинейной палтусовидной) и тихоокеанской сельди, с 2010 г. по «Программе мониторинга качества и безопасности продукции из ВБР» — минтая, трески, наваги, малоротой корюшки и камбал. За период работ обследовали 32 224 экз. рыб разных возрастных групп, из них заводской молоди лососей 17 682, производителей на ЛРЗ 818, молоди лососевых рыб из естественных водоемов 7797, половозрелых рыб разных видов 5927 экз. С 2002 по 2010 гг. различными методами обследовали 35 289 экз. крабов промысловых видов.
Гидробионтов отбирали методом случайных выборок. В процессе работы определяли биологические показатели, описывали клинические и патологоанатомические изменения у исследуемых особей. Единовременная выборка в зависимости от возраста особей, вида и цели исследований составляла от 15 до 135 экземпляров.
Для выделения вирусных патогенов использовали перевиваемые линии клеток CHSE-214 и ЕРС-1. Культивирование линий клеток и заражение проводили по общепринятым методикам (Сборник инструкций..., 1998; Fish pathology..., 1989).
При бактериологических исследованиях рыб посевы производили из почки, а при наличии патологических изменений — из поражений и других внутренних органов. От крабов отбирали пробы гемолимфы, в отдельных случаях — гепатопанк-реаса и экзоскелета (Austin, Austin, 1989). Для посевов использовали универсальные и селективные питательные среды. Идентификацию и классификацию бактерий проводили по их культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам (Holt et al., 1994). Для биохимического тестирования бактерий использовали тест-системы API 20Е, API 20NE, RapiD 20Е и Staph (BioMerieux).
Для паразитологических исследований осуществляли полное и неполное паразитологическое вскрытие (Лабораторный практикум..., 1983; Чернышева и др., 2009). Видовую принадлежность паразитов устанавливали с помощью отечественных определителей (Определитель паразитов..., 1984; Определитель паразитов..., 1987). Для фиксации, окрашивания и изготовления постоянных препаратов паразитов использовали отечественные методики (Лабораторный практикум..., 1983; Чернышева и др., 2009), для обнаружения сертифицируемых видов паразитов Myxosoma cerebralis, Ceratomyxa shasta и возбудителя пролиферативной болезни почки (PKD) — зарубежные (Blue book..., 1994).
Отобранные для гистологического и гистохимического анализа образцы внутренних органов гидробионтов фиксировали в жидкости Дэвидсона (Bell, Lightner, 1988). Дальнейшую обработку гистологических проб и окрашивание препаратов гематоксилин-эозином по Мейеру, по Граму, Рома-новскому-Гимза, Циль-Нильсену, ШИК-световым зеленым проводили по общепринятым методикам (Austin, Austin, 1989; Bancroft et al., 1990).
Для уточнения и подтверждения диагноза заболеваний проводили электронно-микроскопические исследования. Подготовку образцов проводили по общепринятой методике (Уикли, 1975; Glauert, 1991). Ультратонкие срезы просматривали под трансмиссионным электронным микроскопом HITACHI-7000.
Для определения патогенности штаммов Aeromonas salmonicida, Vibrio anguillarum, Actinomyces sp. использовали заводскую молодь лососей (Сергеенко и др., 2000; Сергеенко и др., 2004; Sergeenko, Ustimenko, 2005). Для изучения эффективности воздействия пробиотика «Суб-Про» на микробиологические показатели рыб использовали заводских сеголеток кеты (Устименко, Винник, 2011). Для определения влияния подъема-
спуска в ловушках на состояние здоровья крабов исследовали изменения состава микрофлоры гемолимфы (Рязанова, 2009).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Внутренние водоемы
В 2001 г. от половозрелой нерки, отловленной в бассейне р. Большая и используемой для заводского воспроизводства на МЛРЗ, впервые на Камчатке изолировали особо опасный патоген — вирус инфекционного некроза гемопоэтической ткани (IHNV) (Рудакова, 2003). В последующие годы вирус ежегодно выделяли у половозрелой нерки в бассейнах рек Большая, Озерная, Камчатка и Паратунка, оз. Лиственичное. Распространенность IHNV у нерки варьировала от 3,3 до 100%, в зависимости от года исследования и водоема. Наиболее неблагополучным по данному возбудителю является оз. Начикинское, где были зафиксированы вспышки инфекционного некроза гемопоэтической ткани у сеголеток нерки в 2003 и 2006 гг. При отборе проб молодь группировалась у берега, отдельные особи выглядели летаргичными и слабо реагировали на раздражители. В обоих случаях наблюдали клинические признаки заболевания: кровоизлияния у основания брюшных плавников, бледные жабры, вздутое брюшко, потемнение южных покровов, сколиоз, экзофтальмия; при вскрытии — наполненность желудочно-кишечного тракта беловатым, творожистым содержимым, увеличение селезенки и отечность почки, изменение окраски печени и почки. При вирусологических исследованиях на культурах клеток выделили вирусный агент, идентифицированный в реакции нейтрализации как вирус инфекционного некроза гемопоэтической ткани. Средний титр вируса значительно превышал эпизоотически значимый уровень (Лабораторный практикум..., 1983; Бочкова, Рудакова, 2004; Rudakova, Bochkova, 2009). В результате гистологических исследований выявили некротические изменения в гемопоэтической ткани почки и подслизистом слое желудочно-кишечного тракта, характерные для IHN (рис. 1А, Б). У этой же группы молоди у 10% рыб выявили локальные деструктивные изменения в хрящевой ткани головы и позвоночника: лизис хондроцитов и формирование гранулем эпителиального типа вокруг пораженного участка ткани. В очагах некроза обнаружили скопление плазмодиев и спор миксоспоридии Myxosoma cerebralis — особо опасного паразитарного агента (рис. 1В, Г), вызывающего «вертёж или миксозомоз лосососё-вых» (Гаврюсева, 2009а).
На нерестилище оз. Курильское провели эксперимент по возможности горизонтальной передачи IHNV от половозрелых рыб молоди нерки, в результате которого 20% мальков заразились инфекционным некрозом гемопоэтической ткани (Рудакова, Бочкова, 2008). Для определения чувствительности молоди кеты и чавычи к IHNV провели ряд экспериментов по искусственному заражению, результаты которых показали, что мальки чавычи устойчивы к данному вирусному заболеванию (Rudakova, Bochkova, 2010). В опытах с молодью кеты заражение прошло успешно, заболевание развивалось с типичными для IHN признаками. В 2003 г. совместно с учеными из США провели филогенетическое типирование 7 изолятов IHNV, выделенных у нерки из бассейна р. Большая, и сравнение их с американскими (Rudakova et al., 2007).
У лососей из естественных водоёмов выявили опасный патоген, возбудитель фурункулёза — Aeromonas salmonicida. Впервые бактерии этого вида изолировали в 1989 г. от кеты из Берингова моря (Сазонов и др., 1993). Впоследствии А. salmonicida выделили от лососей из бассейна р. Большая, р. Паратунка, и озёр Начикинское, Азаба-чье и Дальнее. Встречаемость патогена у рыб из бассейна р. Большая в разные годы исследований составила 3,3-10% (Sergeenko, Ustimenko, 2003), в оз. Начикинское — 3,3-6,7%. Чаще всего патоген выявляли у нерки из оз. Азабачье, доля инфицированных рыб в отдельные годы достигала 33% (Устименко, Сергеенко, 2011). По результатам исследования нерки из оз. Дальнее в 2011 г. 36,6% рыб были носителями возбудителя фурункулеза. Экспериментальным путём была подтверждена этиологическая роль A. salmonicida, изолированных от кеты из р. Паратунка, и установлена высокая степень патогенности бактерий (Sergeenko, Ustimenko, 2003).
Ежегодно у рыб выявляли условно-патогенную микрофлору, которая была представлена бактериями, относящимися к 5 семействам, 7 родам, 17 видам. Наибольшее эпизоотическое значение для рыб имели подвижные аэромонады A. hydrophila, A. sobria, A. caviae. Их выделяли из язвенных поражений половозрелой нерки в оз. Начикинское, pp. Паратунка и Авача. Наиболее высокий процент инфицированных рыб с поражениями кожи (44%) выявили в оз. Начикинское. На основании клинических признаков, изоляции патогена, результатов проверки вирулентных свойств бактерий, диагностировали заболевание рыб бактериальной геморрагической септицемией (БГС).
От молоди и половозрелых лососей из всех водоёмов изолировали бактерий родов Pseudomonas,
Flavobacterium, семейства Enterobacteriaceae, которые, наряду с аэромонадами, являются обычными представителями водных микробиоценозов. Эти микроорганизмы, как правило, являются индикаторами биологического загрязнения водоема. Выявление у рыб микроорганизмов родов Staphylococcus и Actinomyces свидетельствовало об антропогенном воздействии на водоёмы. При искусственном заражении молоди рыб установили патогенную роль актиномицетов, доказательством которой были: высокая смертность инфицированных мальков, выделение от погибших рыб штаммов, идентичных исходному. Гистологическими методами выявили обширные очаги некроза в скелетной мускулатуре, а также обнаружили бактерий в соединительной, мышечной и хрящевой тканях (Сергеенко и др., 2004).
У дикой молоди тихоокеанских лососей из естественных водоемов выделили 33 вида паразитов, относящихся к 15 классам: Kinetoplastomonada — 3, Microsporidea — 1, Myxosporidia — 3, Cyrtos-
tomata — 2, Hymenostomata — 2, Peritricha — 2, Monogenea — 2, Cestoda — 4, Trematoda — 2, Nematoda — 4, Acanthocephala — 2, Hirudinea — 1, Bivalvia — 1, Crustacea — 2, Arachnida — 2. Из них девять видов остаются в теле рыб в течение морского периода. У половозрелых тихоокеанских лососей из естественных водоемов обнаружили 36 видов паразитов, относящихся к 8 классам: Kinetoplastomonada — 1, Microsporidea — 1, Myxosporidia — 7, Cestoda — 6, Trematoda — 9, Nematoda — 6, Acanthocephala — 4, Crustacea — 2 (Ob-чаренко и др., 2010). Из них 9 видами в дальнейшем заражается молодь лососей нового поколения. Гистопатологические изменения, вызванные паразитарными агентами в жабрах, почке, желудочнокишечном тракте и головном мозге у молоди рыб, носили локальный характер (Гаврюсева, 2006,2008, 2009а, б; Gavruseva, 2011).
В мускулатуре всех видов взрослых тихоокеанских лососей находили плероцеркоиды Diphyllobothrium sp. и личинки Anisakis sp., потен-
Шт
іУ •. ' ÿ і -sa^~— ^
Чі tf > * » ' * ж - 0 •
Рис. 1. Гистопатологические изменения у сеголетков нерки из. оз. Начикинское в 2006 г.: А—кариорексис (Т), цитолиз гемопоэтической ткани почки (х400 гематоксилин-эозин); Б — некроз гранулированных клеток (I) компактного слоя подслизистой оболочки желудка (х400 гематоксилин-эозин); В—лизис хондроцитов и скопление спор М. сегеЪгаШ в хрящевой ткани (I), меланизация макрофагов (ММЦ) и формирование грануляционной ткани (ГТ) вокруг поражённого участка (х50 Гимза); Г — скопление спор М. сегеЪгаШ в хрящевой ткани позвоночника (Т) (х 1000 Гимза)
циально опасные для человека и некоторых животных. Встречаемость этих паразитов была от 6,7 до 100% в разные годы. Самая высокая экстенсивность инвазии плероцеркоидами цестод выявлена у нерки в оз. Курильское — 80-100%, самая низкая в оз. Начикинское — до 13,3%. Кроме них, ежегодно в чешуйных кармашках рыб обнаруживали миксоспоридии Мухохота йегтМоЫа, а в мускулатуре — Неппе^уа г&скокке1 (Карманова, 2009; Рудакова и др., 2009а). Эти паразиты портят товарный вид рыбы и качество продукции из нее, их встречаемость составляла от 5 до 20% (рис. 2).
Рыбоводные заводы
Наиболее опасным патогеном, выявленным у молоди нерки, был вирус инфекционного некроза гемопоэтической ткани. Вспышка инфекции, вызванная 1Н>1У, зарегистрирована на МЛРЗ в
2002 г., где в одном из цехов погибло 79% выращиваемой молоди нерки. Средний титр вируса в течение эпизоотии существенно не изменялся и ос-
тавался на высоком уровне. Оставшаяся в живых молодь была уничтожена. В 2004 г. подобная эпизоотия среди молоди нерки возникла на ОЛРЗ, где погибло 33,8% рыб (Рудакова, 2003,2004; Бочкова, Рудакова, 2008).
Гистологическими и электронно-микроскопическими методами у мальков нерки подтвердили диагноз вирусного некроза гемопоэтической ткани (рис. 3) и определили патогенез заболевания (Рудакова, 2003,2004; Гаврюсева, 2006). На начальной стадии заболевания установили обширный некробиоз (пикноз, кариорексис, цитолиз) гемопоэтической ткани почки и селезенки. При дальнейшем развитии инфекции структурные нарушения отмечали в почечных канальцах и клубочках, жабрах, желудочно-кишечном тракте, поджелудочной железе, печени, скелетной мускулатуре и коже (Гаврюсева, 2004а, 2006).
При экспериментальном заражении НШУ мальков нерки отмечали характерные признаки заболевания и гистопатологические изменения.
ШЯШШш
^я V. • * %*•-.' - £ % .г . ■ >, •' • • • » > •
. X'
I ... _
ЯШ **
Рис. 2. Паразиты лососей из внутренних водоёмов Камчатки: А—внешний вид скелетной мускулатуры со вскрывшимися цистами миксоспоридии Н. гзскокке! (I); Б — споры Н. гзскокке! (Т) в цисте (х400 Циль-Нильсен); В — внешний вид кожного покрова рыбы при инвазии миксоспоридией М. с1егта1оЫа\ Г — скопление спор и плазмодиев миксоспоридии М. с1егтМоЫа (I) в чешуйном кармашке (х400, Циль-Нильсен). Обозначения: МТ — мышечная ткань, ПЛ—плазмодии, СП — споры
Для снижения экономических потерь, связанных с эпизоотиями инфекционного некроза гемопоэтической ткани, был предложен ряд профилактических мероприятий (Рудакова, 2009). Представленная на
IV Московском международном салоне инноваций и инвестиций работа «Профилактика и контроль эпизоотий инфекционного некроза гемопоэтической ткани (IHN) на лососевых рыбоводных заводах» награждена дипломом и серебряной медалью.
Другим заболеванием, предположительно вирусной природы (Smail, 1982), обнаруженным у мальков кеты на четырех заводах (OJIP3, KJIP3, BJIP3 и ПЭЛРЗ), был вирусный некроз эритроцитов — VEN (Рудакова, 2002; Бочкова, 2007). Типичным признаком заболевания являются внутри-эритроцитарные тельца-включения, видимые в цитоплазме эритроцитов при микроскопировании. Вирусный некроз эритроцитов редко является прямой причиной гибели, однако приводит к снижению адаптационных способностей и резистентности организма, в результате чего рыба погибает от различных стрессовых воздействий и вторичных инфекций (Биологические основы..., 1998).
Бактериологическими методами у рыб на JIP3 Камчатки выявили 22 вида микроорганизмов. Из них основное эпизоотическое значение у молоди лососей имели представители условно-патогенной бактериальной флоры — псевдомонады видов P. fluorescens, P. putida и флавобактерии — F. psychrophilum, Flavobacterium sp., у лососей-производителей — подвижные аэромонады A. hydrophila, A. caviae, A. sobria (Рудакова и др., 2005; Рудакова и др., 2006; Устименко, 2008а, Рудакова и др., 20096). Данные микроорганизмы входят в состав микробиоценоза воды, особенно в водоемах богатых органическими веществами. Заболевания рыб, вызываемые этими патогенами,
включены в «Перечень карантинных и особо опасных болезней рыб» (Приказ Минсельхоза РФ № 173 от 29.09.2005).
Бессимптомное носительство нетипичных штаммов возбудителя фурункулеза А. заЫопкШа отмечали у молоди кеты на КЛРЗ (2002 г.) и на ОЛРЗ (2002, 2004 гг.). Типичные и нетипичные штаммы этого патогена выделяли от производителей кеты на ПЛРЗ и ВЛРЗ, нерки — на МЛРЗ, нерки и кеты на ОЛРЗ (Зе^еепко, 1М1тепко, 2003).
При исследовании воды и кормов выявляли превышение общего микробного числа (ОМЧ) — до 5000 КОЕ/мл (аварии, поступление в водозабор талых вод и т. п.). Обнаруженные в кормах псевдомонады, стафилококки и дрожжеподобные грибы негативно влияли на состояние здоровья заводской молоди лососей, что было подтверждено гистологическими методами (Устименко и др., 2003; Гаврюсева, 2006,2007а, 2008).
Проникновение на заводы патогенных микроорганизмов возможно как с водой, поступающей через систему водоснабжения из естественных водоемов (Карманова и др., 2002), так и при неэффективной обработке оплодотворенной икры при закладке в инкубаторы (Устименко, Сергеенко, 2001).
Сравнение зараженности бактериальными патогенами разных видов заводской молоди лососей показало, что кижуч и нерка более подвержены инфекциям. Были зафиксированы вспышки заболеваний бактериального генеза, сопровождающиеся гибелью рыб у нерки на ОЛРЗ и МЛРЗ и кижуча на ВЛРЗ (Устименко, 2006; Устименко, 20086). Гистологическими методами у больного кижуча обнаружили: интерстициальный отек, обширную гиперплазию респираторного эпителия и слипание жаберных ламелл. Между жаберными филамента-
Рис. 3.ТНТЧУ у молоди нерки: А — цитопатический эффект на перевиваемой линии клеток ЕРС-1; Б — электронная микрофотография вирусных частиц
ми и на поверхности жаберных ламелл отмечали скопление нитевидных грамотрицательных бактерий длиной до 8 мкм (рис. 4А). Пикноз в клетках, гиперплазию и скопление аналогичных бактерий регистрировали на поверхности эпидермиса. В паренхиматозных органах выявили обильное кровенаполнение. После определения чувствительности к антибиотикам бактерий, изолированных от рыб, рекомендовали лечебные мероприятия. Альтернативой применению антибиотиков может быть использование пробиотических препаратов из бактерий, обладающих антагонистическим действием в отношении возбудителей заболеваний. Для проверки эффективности применения пробиотиков для заводской молоди на JIP3 Камчатки провели эксперимент, результаты которого не показали существенного влияния пробиотика «Суб-Про» на состояние здоровья рыб, что, возможно, объясняется подавлением жизнедеятельности микроорганизмов Bacillus subtilis, так как температура воды в бассейнах JIP3 не оптимальна для этого вида бактерий (Устименко, 2011).
Паразитологическими методами у заводской молоди лососей выявили четыре вида паразитов, относящихся к патогенным простейшим. Жгутиконосец Ichthyobodo necator, инфузории Apiosoma conicum, Trichodina truttae, Chilodonella piscícola разрушают поверхностный слой эпителия, вызывают нарушение кожного и жаберного дыхания. При искусственном выращивании лососей они способны вызывать энзоотии (Карманова, 1998). В 1999, 2000,2003 и 2004 гг. у молоди кеты и нерки на двух ЛРЗ отмечали паразитарную инвазию — ихтиобо-доз (костиоз), вызванную жгутиконосцем I. necator. При 100%-й встречаемости патогена интенсивность заражения достигала 50 экз. В 2003 и 2004 гг. у заводской молоди диагностировали триходиноз. В 2004 г. впервые на Камчатке у годовиков кижуча, оставленных на подращивание на ВЛРЗ, выявили опасное заболевание, вызываемое простейшим Ichthyophonus hoferi (Гаврюсева, 20076). У рыб при ихтиофонозе прежде всего повреждались васкуляризированные ткани: почка, сердце, печень, в меньшей степени — скелетная мускулатура, под-
Рис. 4. Гистопатолотческие изменения у заводской молоди: А — гиперплазия респираторного эпителия, слипание жаберных ламелл, скопление бактерий (!) (х400, Циль-Нильсен); Б—множественное скопление «покоящихся спор» Ich.thyophon.us Ьо/еп (!) в желудочке сердца (х50, гематоксилин-эозин); В — четвертая степень липоидной дистрофии гепатоцитов (Т) (х400, гематоксилин-эозин); Г — некроз эпителиальных клеток слизистой оболочки (Т) пилорического отдела желудка (Т) (х50, гематоксилин-эозин)
желудочная железа, соединительная и жировая ткани. В этих тканях выявлены многоядерные «покоящиеся споры» 50-230 мкм в диаметре. Ответной реакцией организма на внедрение данного паразита явилось образование гранулем (рис. 4Б), которые часто были окружены волокнистой соединительной тканью, иногда — со скоплениями вокруг них ме-ланоцитов, макрофагов или нейтрофилов. Лечение болезни не разработано, поэтому она наносит значительный ущерб рыбоводству за счет больших затрат на оздоровление хозяйств (Post, 1987; Справочник ветеринарного..., 1999).
В течение всего периода исследований у выращиваемой молоди тихоокеанских лососей выявляли заболевания алиментарной природы. В результате гистологического и гистохимического исследования рыб описан патогенез заболевания. Для него были характерны: липоидная и цероидная дегенерация гепатоцитов (рис. 4В); расширение желчного пузыря и переполнение его желчью; фокальный некроз гемопоэтической ткани почки, не-фрокальциноз и гиалиново-капельная дегенерация цилиндрического эпителия почечных канальцев, некроз поджелудочной ткани и слизистого слоя желудка (рис. 4Г) и увеличение внутренних жировых отложений (Гаврюсева, 20046,2006,2007а,в; 2008). Выявленные гистопатологические изменения, вероятно, связаны с тем, что заводская молодь лососей получала несбалансированное питание, или корма были недоброкачественными (Устименко и др., 2003; Кальченко и др., 2009). Установлено, что при переходе на сбалансированные корма или естественное питание большинство выявленных изменений обратимо, но алиментарные заболевания существенно снижают иммунитет рыб и способствуют повышенной восприимчивости к заболеваниям различной этиологии.
Морские исследования
Г о р б у ш а. В результате комплексных исследований горбуши Карагинской и Камчатско-Курильской подзон выявлены патогены, характеризующие санитарно-эпизоотическое состояние популяций этого вида рыб и способные влиять на товарное качество рыбопродукции. От особей с поражениями кожи выделили бактерий вида Vibrio anguillarum и A. hydrophila. Этиологическая роль вибрионов в развитии патологического процесса у рыб была подтверждена экпериментальным путём— постановкой биопробы на мальках кеты (Сергеенко и др., 2000).
У горбуши обнаружены паразиты, опасные для здоровья человека: нематоды Anisakis sp. L. (экстенсивность инвазии 13,3-66,6%) и плероцеркои-ды лентецов Diphyllobothrium sp. (э. и. 5,8-20%). Также выявлены два вида ракообразных эктопаразитов — Lepeophtheirus salmonis (э. и. 15,5— 80%) и Caligus clemensi (э. и. 15—42,9%), в результате прикрепления которых на коже рыб образуются поверхностные язвы, портящие товарный вид. В 2009 г. впервые у горбуши в Карагинской подзоне был выявлен инвазионный патоген, предположительно Microsporidae gen. sp. (Сергеенко и др., 2011), наличие которого могло стать причиной разжижения мускулатуры рыб (Рудакова и др., 2009а). Для определения видовой принадлежности паразита требуются дополнительные исследования.
У половозрелой горбуши акватории Карагин-ского залива регистрировали опухоли и поверхностные язвы (рис. 5). За период исследований встречаемость новообразований была невысока и составляла от 0,004 до 0,009%.
Язвы обнаружили у 0,006-0,11% рыб от улова ставным неводом (Пугаева и др., 1995; Гаврюсе-ва и др., 1999; Пугаева и др., 2000; Карманова, 2000;
Рис. 5. Признаки патологии у горбуши из Карагинского залива Берингова моря: А — опухоль скелетной мускулатуры; Б — язвенные поражения кожи
Сергеенко, Надеева, 2007; Сергеенко и др., 2008). Опухоли, в основном, располагались в скелетной мускулатуре и в 50% случаев имели прорастания в почки, реже — в плавательный пузырь, гонады, пищевод, пилорический отдел кишечника. Гистологическими и гистохимическими методами ново-бразования диагностировали как рабдомиомы и/ или рабдосаркомы. Причиной возникновения опухолей могут быть канцерогенные вещества, вирусы (Kerstin, Yoshimizu, 1994; Ferguson, 1995).
Тихоокеанская сельдь, камбала. В ходе паразитологических исследований у сельди выявили 12 видов паразитов, относящихся к 6 классам. При гистологических исследованиях регистрировали нарушения, характерные для заболевания вирусной природы—лимфоцистоза (рис. 6). Болезнь характеризуется появлением на поверхности тела, плавниках, реже в полости тела и на внутренних органах мелких беловатых опухолей, представляющих собой пораженные вирусом гипертрофированные клетки. В семенниках сельди обнаружили ооцисты кокцидии Eimeria sardinae. При сильном заражении этот патоген вызывает час-
тичную или полную паразитарную кастрацию хозяина (Noga, 1996; Справочник ветеринарного..., 1999). При гематологических исследованиях у тихоокеанской сельди обнаружили внутриэритроци-тарные вирусоподобные включения, предположительно вирусный некроз эритроцитов—VEN (Бонк и др., 2008; Bochkova, Gavruseva, 2009).
В 2009-2010 гг. у 5—42% двухлинейной и желтоперой камбал Карагинского залива отмечали точечные кровоизлияния разной степени интенсивности, часть их которых проникала в мускулатуру (рис. 7А).
Паразитофауна камбал была представлена 21 видом, относящимся к 7 классам. В органах и тканях северной двухлинейной камбалы обнаружили простейшего паразита — I. hoferi (Бочкова и др., 2011). Этот патоген относится к облигатным и во время эпизоотических вспышек способен оказывать влияние на численность популяций морских рыб — сельди, камбал, макрели и др. В то же время он представляет собой серьезную угрозу и наносит значительный урон культивируемым лососям в Европе и Северной Америке (Noga, 1996; Sindermann, 1990).
Рис. 6. Патологические изменения у корфо-карагинской сельди: А—внешний вид рыбы, поражённой линфоцисто-зом; Б — «гигантские» клетки соединительной ткани, окруженные гиалиновой капсулой при лимфоцистозе (х100, Циль-Нильсен) ); В — семенники сельди, поражённые кокцидией Етепа ер. (I); Г — ооцисты кокцидии Етепа ер. (Т) (х400, гематоксилин-эозин)
В разные года исследований у обследованных видов рыб в мускулатуре регистрировали потенциально опасных для человека и теплокровных животных цестод (Diphyllobotrium sp.), трематод (Nanophyetus salmincola), нематод (Anisakis sp.), скребней (Corynosoma sp.).
Все представители бактериальной микрофлоры, выделенные у тихоокеанской сельди, двухлинейной, желтоперой и палтусовидной камбал, относятся к условно патогенным. Тем не менее, на основании клинических признаков (многочисленные внешние и внутренние геморрагии), бактериологических (изоляция V. anguillarum) и гистологических исследований (скопления бактерий в почке (рис. 7Б), печени, скелетной мускулатуре рыб, где наблюдали геморрагии, гидратацию и локальную деструкцию миоцитов) у двухлинейной и желтоперой камбал в 2009-2010 гг. диагностировали хроническую форму бактериального заболевания— вибриоза (Жукова и др., 2010).
К р а б ы. В результате комплексных исследований был впервые определен состав основных патогенов и получены данные об их распространенности в популяциях промысловых крабов восточной части Охотского моря. У промысловых крабов четырех видов: камчатского Paralithodes
camtschaticus, синего P. platypus, крабов-стригу-нов опилио Chionoecetes opilio и Бэрда Ch. bairdi обнаружены инфекционные (бактерии 8 родов, вирусы) и инвазионные (микроспоридии 2 родов, паразитические динофлагелляты, амебы, ресничные инфузории, корнешловый рак) патогенные агенты.
По данным визуального учета, наиболее распространенным заболеванием у крабов всех исследованных видов была бактериальная панцирная болезнь ракообразных. В течение всего периода исследований больше всего особей с признаками
панцирной болезни (19,8% особей, из них 9,0% — с сильной степенью заболевания) отмечали среди крабов-стригунов опилио в осенне-зимний период 2006 г. Это не самые высокие показатели встречаемости болезни у крабов-стригунов. Так, вокруг о. Сахалин насчитывали до 30% крабов-стригунов опилио с клиническими признаками панцирной болезни (Вялова, 1999). У крабов на шельфе Западной Камчатки чаще встречалась начальная и средняя стадии заболевания, что, в большинстве случаев, не опасно для животных. К гибели ракообразных могут приводить патологические изменения органов при сильной степени заболевания, особенно в сочетании с внутренней бактериальной инфекцией (Рязанова, 2005,2006).
Первый случай заболевания вирусной этиологии у крабов в Охотском море был зарегистрирован в 2006 г. Инфекцию, предположительно герпес-подобным вирусом, выявили среди самцов синего краба промыслового размера. Гистологические исследования показали, что при этом заболевании происходит разрушение клеток эпителия лабиринта антеннальной железы и пузыря. Тяжесть патологических изменений этих органов у зараженных синих крабов позволяет предполагать, что инфекция смертельна для хозяина. С использованием метода трансмиссионной электронной микроскопии в ядрах антеннальной железы, пузыря и эозинофильном веществе обнаружили вирусные частицы (Рязанова, Елисейкина, 2010а). Заболевание отмечали только в северной части шельфа, и его встречаемость осенью-зимой 2006 и весной 2010 гг. составляла 1,4 и 3,8%, соответственно. По данным американских исследователей, в Беринговом море инфекция встречается также у камчатских P. camtschaticus и равношипых крабов L. aequispinus (Sparks, Morado, 1986).
Рис. 7. Патологические изменения камбалы из Карагинского залива Берингова моря при вибриозе: А — кровоизлияния на теле рыб; Б — скопление бактерий вокруг почечного клубочка (хЮОО, гематоксилин-эозин)
У крабов сем. Lithodidae обнаружены паразитические динофлагелляты Hematodinium sp., которых прежде не отмечали у особей этого семейства (Рязанова, 2008; Ryazanova et al., 2010). Указанный паразит является одним из опаснейших патогенов, причиняющих серьезный ущерб в популяциях более 20 видов промысловых ракообразных во многих районах Мирового океана (Meyers et al., 1987; Stentiford, Shields, 2005). В Охотском море Hematodinium sp. был впервые зарегистрирован у крабов-стригунов опилио в 2002 г. (Карманова, Рязанова, 2008). Инвазия у камчатского и синего крабов (рис. 8) была обнаружена в 2006 г., причем, в большинстве случаев, у самок и самцов непромыслового размера. По результатам визуального учета, крабов с клиническими признаками инвазии, т. е. на поздних стадиях болезни, в уловах встречается около 1%. Случаи заражения крабов-стригунов единичны.
В настоящее время у ракообразных на шельфе Западной Камчатки выявлены микроспоридии
трех родов: Р/еи/ор/гога (Оаугивеуа et а1., 1997; Устименко и др., 2006), Пге1оката и Атезоп (Рязанова, Елисейкина, 20106). Развитие микроспоридий родов Атезоп и РШзЮркога происходит в мышечной ткани, поэтому сильно зараженные ракообразные полностью или частично парализованы. Споры микроспоридий разрушают мышечные клетки, вызывают деполимеризацию волокон и постепенно замещают мышечную ткань. Напротив, микроспоридии рода Тке1оката заселяют соединительную ткань всех внутренних органов хозяина. Микроспоридий рода Тке1оката впервые обнаружили в 2004, а рода Атезоп — в 2006 г. В большинстве случаев заболевания выявляли у камчатских и синих крабов, причем клинические признаки болезни регистрировали только среди самок и самцов непромыслового размера. Доля особей с признаками заражения микроспоридиями обоих родов была низкой во все сезоны года. У самцов синих крабов, зараженных Тке1оката ер., она составляла от 0,1 до 3,4%, у самок — от 0,1 до 1,8%. Среди
2 m 9 • . / * ; * V* . * h - c:*.s
V' . , Т -ч .. * В
Рис. 8. Паразитическая динофлагеллята НетШосИтит ер. у камчатского и синего крабов:
А — внутренние органы зараженного самца камчатского краба, окруженные кремово-желтой густой гемолимфой (карапакс удален); Б—вегетативные клетки паразита (Т) в соединительной ткани яичника самки синего краба (х400, гематоксилин-эозин); В — трофонт (Т) и макродиноспора (Т) паразита в гемолимфе самца синего краба (х1000, дифференциальный фазовый контраст по методу Намарского); Г — электронная микрофотография клетки НетШосИтит ер.
камчатских крабов таких животных было 1,2 и 0,3%, соответственно. Доля крабов обоих видов с признаками заражения Атезоп ер. не превышала 1%. Исследования показали, что инвазии микроспоридией рода Тке1оката подвержены также равно-шипый краб и крабы-стригуны обоих видов (Рязанова, Метел ев, 2010).
Микроспоридии и паразитические динофлагел-ляты Hematod.in.ium ер. являются наиболее опасными простейшими патогенами, обнаруженными на шельфе Западной Камчатки. Они оказывают большее влияние на молодь и самок камчатских и синих крабов, хотя были обнаружены и у промысловых самцов этих видов, а также крабов-стригу-нов. Вызываемые указанными паразитами заболевания смертельны для ракообразных, а продукция из зараженных особей непригодна для использования.
В целом, вирусная и бактериальные инфекционные болезни оказывают большее значение на популяции крабов на шельфе Западной Камчатки, чем паразитарные инвазии. Совокупная доля особей с заболеваниями различной этиологии, способными приводить к гибели особей и/или уничтожению их промысловой ценности, составила для кра-бов-стригунов 13,2%, для синих крабов —12%, для камчатских и крабов стригунов бэрди — 10,7 и 8,1%, соответственно.
Для изучения воздействия промысла на состояние здоровья ракообразных в период ловушечной съемки 2006 г. был поставлен эксперимент. Его результаты показали, что в результате подъема крабов в ловушках происходит заметное снижение бактерицидных свойств их гемолимфы. Кроме того, в результате резкой смены давления возникает газовая эмболия, которая приводит к повреждению тканей внутренних органов (Рязанова, 2009).
Программа мониторинга качества и безопасности продукции из ВБР
При исследовании мускулатуры, печени и гонад рыб выявили семь видов паразитов, потенциально опасных для здоровья человека и теплокровных животных: личиночные стадии цестод рода БіркуПвЬоігіит, N. хигтепісоїа, Ругатісосер-каїих ркосагит, трематоды N. хаїтіпсоїа, нематод рода Апізакіз и СоШгасаесит о$си1аЫт и скребень С. хШітохит (рис. 9).
Личинками анизакид наиболее заражена печень минтая, плероцеркоидами дифиллоботриид и метацеркариями трематоды N. хаїтіпсоїа — мускулатура палтусовидной камбалы. Цестод N. зигтепісоїа чаще всего встречали в печени и гонадах минтая, в мускулатуре трески; личинок скребня С. зігитотт — в печени двухлинейной камбалы.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В результате многолетних комплексных исследований был определен состав основных патогенов гидробионтов и получены данные об их распространенности во внутренних водоемах и морских акваториях Камчатки.
В результате вирусологического, бактериологического и паразитологического обследования лососей в основных рыбохозяйственных водоемах Камчатки выявлены два особо опасных патогена (возбудители фурункулеза А $аІтопісМа и инфекционного некроза гемопоэтической ткани), которые могут быть причиной гибели молоди и влиять на численность популяций. Нерестовые водоемы бассейна р. Большая, оз. Азабачье и Дальнее неблагополучны сразу по двум из них, оз. Курильское — только по 1НЫУ.
В результате мониторинговых исследований производителей лососей на ЛРЗ Камчатки регист-
<‘1
Рис. 9. Паразиты, портящие товарное качество рыбопродукции: А — скребень С. зЯитовит; Б — личинки нематод рода А тяаЫя в мускулатуре рыб
рировали вирус инфекционного некроза гемопоэти-ческой ткани у нерки на ЛРЗ «Озерки» и Малкин-ском и возбудитель фурункулёза А. йсйтотсШа — у нерки и кеты на ЛРЗ «Озерки». У заводской молоди лососей диагностировали алиментарные, вирусные, бактериальные и паразитарные заболевания. Описали патогенез инфекционного некроза ге-мопоэтической ткани, алиментарного и бактериальных заболеваний. Определили факторы, способствующие возникновению и развитию заболеваний различной этиологии среди заводских лососей. Выявили и проанализировали пути проникновения патогенов на заводы. Оценили санитарное состояние воды и кормов по микробиологическим показателям. Подтвердили негативное влияние некачественных кормов и воды на состояние здоровья заводской молоди лососей. Для снижения экономических потерь, связанных с эпизоотиями инфекционного некроза гемопоэтической ткани, были рекомендованы профилактические мероприятия.
У лососевых рыб, тихоокеанской сельди, промысловых видов камбал, трески, минтая, наваги, малоротой корюшки выявили паразитов, потенциально опасных для человека и некоторых теплокровных животных, а также влияющих на товарное качество продукции. В результате исследования рыб из различных промысловых районов Камчатки определили виды, имеющие наибольшее эпидемиологическое значение в распространении дифиллоботриоза и анизакиоза.
У промысловых крабов на шельфе Западной Камчатки зарегистрирован ряд инфекционных и инвазионных патогенов. Описаны патоморфологические признаки заболеваний. Установлено, что из инфекционных заболеваний наиболее опасной для крабов является герпес-вирусная инфекция, зарегистрированная только у синего краба. Из паразитарных агентов к наиболее опасным относятся микроспоридии родов Тке1оката и Атезоп, а также паразитические динофлагелля-ты НетШосИтит ер. Заболевания встречаются чаще у молоди и самок крабов-литодид. В целом, по полученным нами данным, уровень встречаемости инфекционных и инвазионных заболеваний у промысловых крабов на шельфе Западной Камчатки в настоящее время относительно невысок.
В целом санитарно-эпидемиологическое состояние обследованных гидробионтов в настоящее можно считать удовлетворительным. Однако наличие в популяциях промысловых рыб и ракообразных Камчатки ряда опасных патогенов обуславливает проведение дальнейшего мониторинга эпизоо-
тической обстановки. Постоянный контроль позволит выявить очаги распространения патогенов различной этиологии, что необходимо для прогнозирования развития и влияния болезней на численность промысловых объектов, а также качество и безопасность водных биоресурсов.
Перспективы. Будут продолжены исследования популяций промысловых видов рыб с целью определения видового и количественного состава паразитов, опасных для здоровья человека и теплокровных животных и ухудшающих товарное качество рыбной продукции. В дальнейшем сотрудниками лаборатории планируется: выявление в нерестовых водоемах гидробионтов, служащих резервуаром для особо опасных патогенных агентов; разработка и освоение экспресс-методов выделения и идентификации микроорганизмов, патогенных для рыб.
Планируется продолжение мониторинга состояния здоровья промысловых крабов и эпизоотической ситуации в популяциях ракообразных на шельфе Западной Камчатки и в других районах. Необходимо накопление данных о патогенных организмах, стадиях их развития, сезонной динамике и распространении вирусов, бактерий и паразитов, и их воздействии на популяции гидробинтов. Это позволит применять меры по профилактике распространения болезнетворных агентов в другие районы обитания, а также отслеживания возможного появления у гидробионтов в водах Камчатки новых патогенов в результате биоинвазий и/или иных причин.
На основе данных об опасных и портящих товарное качество продукции патогенах, обнаруженных у крабов, будут предложены дополнения к правилам санитарно-ветеринарной экспертизы ракообразных, которые позволят определить перечень патогенов, обязательных для контроля.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Биологические основы марикулыуры. 1998. Под ред. Л.А. Душкиной. М.: ВНИРО. С. 258-260.
Бонк A.A., Бочкова Е.В., Гаврюсева Т.В., Рудакова C.JI. 2008. Комплексное обследование тихоокеанской сельди Карагинскош залива. Петропав-ловск-Камчатский: КамчатГТУ. С. 132-137.
Бочкова Е.В. 2007. Сравнительный анализ состояния здоровья молоди кеты (Oncorhynchus keta) разного происхождения в пресноводный период жизни // Вопр. рыболовства. Т. 8. № 3 (31). С. 525-537.
Бочкова Е.В., Гаврюсева Т.В., Овчаренко Л.В., Жукова Л. А. 2011. Комплексные исследования состояния здоровья двух промысловых видов камбал Берингова моря: Матер. III Междунар. конф. «Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб» (Борок, 18-22 июля 2011 г.). М.: РГАУ-МСХА им. К.А. Тимирязева. С. 85-89.
Бочкова Е.А., Рудакова С.Л. 2004. Инфекционный некроз гемопоэтической ткани (IHN) в популяции нерки Oncorhynchus nerka (Walbaum) озера На-чикинское (Камчатка) // Расшир. матер. Всерос. науч.-практ. конф. «Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб» (Борок, 16-18 июля
2003 г.). М.: ООО «Авось-ка». С. 404—416.
Бочкова Е.В., Рудакова С.Л. 2008. Влияние биотехнологий, используемых при воспроизводстве нерки, на течение эпизоотий инфекционного некроза гемопоэтической ткани / Сб. науч. тр. «Вопросы рыбного хозяйства Беларуси». Минск: РУП «Ин-т рыб. хоз-ва». Вып. 24. С. 387-390.
Вялова Г.П. 1999. Некроз панцирных покровов крабов у побережья Восточного Сахалина // Рыбохоз. исслед. в Сахалино-Курильском районе и сопредельных акваториях. Т. 2. С. 126-131.
Гаврюсева ТВ. 2004а. Гистопатологические изменения при инфекционном некрозе гемопоэтической ткани (IHN) у мальков нерки Oncorhynchus nerka (Walbaum) на Малкинском ЛРЗ в период эпизоотии // Вопр. рыболовства. Т. 5. № 1 (17). С. 132-146.
Гаврюсева Т.В. 20046. Гистопатологические изменения при алиментарном токсикозе у искусственно выращиваемых мальков тихоокеанских лососей на рыбоводных заводах Камчатки // Расшир. матер. Всерос. науч.-практ. конф. «Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб» (Борок, 16-18 июля2003 г.). М.: ООО «Авось-ка». С. 276-286.
Гаврюсева Т.В. 2006. Морфологические изменения у молоди тизоокеанских лососей из естественных водоёмов и на рыбоводных заводах Камчатки: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. Владивосток: Ин-т биологии моря, 24 с.
Гаврюсева Т.В. 2007а. Патоморфологический анализ заводской молоди тихоокеанских лососей Камчатки // Расшир. матер. Междунар. науч.-практ. конф. «Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов-2» (Борок, 17-20 июля 2007 г.). М.: Россельхозака-демия. С. 327-331.
Гаврюсева Т.В. 20076. Первый случай ихтиофоно-за у молоди кижуча Oncorhynchus kisutch (Wal-
baum) в условиях аквакультуры на Камчатке // Биология моря. Т. 33. № 1. С. 49-53.
Гаврюсева ТВ. 2007в. Патоморфологические изменения при алиментарном токсикозе у молоди тихоокеанских лососей рода Oncorhynchus на Камчатке // Исследования водных биологических ресурсов Камчатки и северо-западной части Тихого океана. Сб. науч. тр. Камчат. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 9. С. 170-184.
Гаврюсева Т.В. 2008. Сравнительный анализ патоморфологических изменений у молоди тихоокеанских лососей из естественных водоемов и на рыбоводных заводах Камчатки // Вопр. рыб. хоз-ва Беларуси: Сб. науч. тр. Минск: РУП «Ин-т рыб. хоз-ва». Вып. 24. С. 397-399.
Гаврюсева Т.В. 2009а. Влияние паразитарных агентов на молодь тихоокеанских лососей в озерах Камчатки // Тез. докл. X Съезда Гидробиол. об-ва при РАН (Владивосток, 28 сентября - 2 октября 2009 г.). Владивосток: Дальнаука. С. 86-87.
Гаврюсева Т.В. 20096. Влияние абиотических и биотических факторов на состояние здоровья молоди тихоокеанских лососей в ранний пресноводный период // Исследования водных биологических ресурсов Камчатки и северо-западной части Тихого океана. Сб. науч. тр. Камчат. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 14. С. 84-99.
Гаврюсева Т.В., Карманова И.В., Пугаева В.П., Рудакова С.Л., Сазонов А.А., Сергеенко Н.В., Ус-тименко Е.А. 1999. Заболеваемость половозрелой горбуши (Oncorhynchus gorbuscha W.) Карагин-ского залива // Тез. науч.-практ. конф. «Проблемы охраны и рационального использования биоресурсов Камчатки». Петропавловск-Камчатский. С. 50-52.
Гаевская А.В. 2004. Паразитологические аспекты интродукции чужеродных организмов в морские экосистемы // Морський еколопчний журнал. Т. 3. № 1. С. 18-22.
Жукова Л.А., Бочкова Е.В., Устименко Е.А., Гаврюсева Т.В. 2010. Вибриоз у камбал в Карагин-ском заливе // Паразиты Голарктики: Сб. науч. статей Междунар. симп. (Петрозаводск, 4—8 октября, 2010 г.). Петрозаводск: Изд-во инт-та биологии Карельского науч. центра. Т. 1. С. 106-108.
Звягинцев А.Ю., Ивин В.В., Кашин И.А. 2009. Население балластных вод в порту Владивосток // Биология моря. Т. 35. № 1. С. 29—40.
Кальченко Е.И., Гаврюсева Т.В., Юрьева М.И. 2009. Физиолого-биохимические показатели моло-
ди кеты при выращивании на импортных комбикормах // Исследования водных биологических ресурсов Камчатки и северо-западной части Тихого океана. Сб. науч. тр. Камчат. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 12. С. 58-71.
Карманова ИВ. 1998. Паразиты тихоокеанских лососей в эпизоотической обстановке паразитозов в
бассейне реки Паратунки (Камчатка): Автореф. дис_
канд. биол. наук. М.: Ин-т паразитол. РАН, 23 с.
Карманова ИВ. 2000. Микроспоридия Р/еи/ор/гога ер. у половозрелой горбуши в Карагинском заливе // Исслед. биол. и динамики числен, пром. рыб камчатского шельфа. Петропавловск-Камчатский: КамчатНИРО. Вып. 5. С. 170-174.
Карманова ИВ. 2009. Миксо- и микроспоридии у тихоокеанских лососей на Камчатке // Вестник КамчатГТУ. Петропавловск-Камчатский: КГТУ. Вып. 9. С. 54-60.
Карманова И.В., Пугаева В.П., Рудакова С.Л., Линева Г.П., Сергеенко Н.В., Гаврюсева Т.В., Устименко Е.А. 2002. Пути проникновения патогенов молоди тихоокеанских лососей на рыбоводные заводы Камчатки // Исследования водных биологических ресурсов Камчатки и северо-западной части Тихого океана. Сб. науч. тр. Камчат. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 6. С. 303-307.
Карманова И.В., Рязанова Т.В. 2008. Паразитические динофлагелляты рода НетМосИтит у промысловых крабов шельфа Западной Камчатки // Тез. докл. Междунар. конф. «Биоразнообразие и экология паразитов наземных и водных ценозов». М.: Центр паразитологии ИПЭЭ. С. 164—167.
Лабораторный практикум по болезням рыб. 1983. Под ред. В.А. Мусселиус. М.: Лег. и пищ. пром-сть. С. 28-36.
Ларцева Л.В., Металлов Г.Ф., Проскурина В.В., Болдырева Я.М., Лисицкая И.А. 2004. Ихтиопа-тологические исследования производителей севрюги в дельте Волги // Болезни рыб. Сб. науч. тр. ВНИИПРХ. М.: Спутник. Вып. 79. С. 120-126.
Овчаренко Л.В., Гаврюсева Т.В., Козлов КВ. 2010. Паразитофауна молоди нерки из озера Курильское (Камчатка) и ее влияние на здоровье рыб // Паразиты Голарктики: Сб. науч. статей Междунар. симп. (Петрозаводск, 4—8 октября, 2010 г.). Петрозаводск: Ин-т биол. Карельского науч. центра. Т. 2. С. 22-25.
Определитель паразитов пресноводных рыб фауны СССР. 1984. Паразитические простейшие / Под ред. О.Н. Бауера. Л.: Наука. Т. 1, 431 с.
Определитель паразитов пресноводных рыб фауны СССР. 1987. Паразитические многоклеточные / Под ред. О.Н. Бауера. Л.: Наука, Т. 3, 583 с.
Пугаева В.П., Сазонов A.A., Гаврюсева Т.В. 1995. К вопросу о заболеваемости идущей на нерест горбуши Oncorhynchus gorbuscha, отловленной в Карагинском заливе Берингова моря // Исслед. биол. и динамики числен, пром. рыб камчатского шельфа. Петропавловск-Камчатский: КамчатНИРО. Вып. 3. С. 167-174.
Пугаева В.П., Устименко Е.А., Сазонов А.А., Рудакова С.Л. 2000. Вибриоз у дикой горбуши Oncorhynchus gorbuscha (Walbaum) в прибрежных водах Карагинскош залива // Исследования водных биологических ресурсов Камчатки и северо-западной части Тихого океана. Сб. науч. тр. Камчат. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 5. С.175-180.
Рудакова С.Л. 2002. Изменение экстенсивности поражения эритроцитов VEN-подобными включениями у заводских сеголеток кеты Oncorynchus keta Walbaum (Salmonidae) в процессе роста // Исследования водных биологических ресурсов Камчатки и северо-западной части Тихого океана. Сб. науч. тр. Камчат. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 6. С. 314—317.
Рудакова С.Л. 2003. Некроз гемопоэтической ткани у производителей нерки и предполагаемые источники инфекции // Вопр. рыболовства. Т. 4. № 1 (13). С. 93-102.
Рудакова С.Л. 2004. Анализ развития эпизоотии, вызванной вирусом инфекционного некроза гемопоэтической ткани (IHNV) у мальков нерки Oncorhynchus nerka при искусственном выращивании (Камчатка) // Вопр. рыболовства. Том 5. № 2 (18). С. 362-374.
Рудакова С.Л. 2009. Профилактика и контроль инфекционного некроза гемопоэтической ткани (IHN) на лососевых рыбоводных заводах // Ветеринарная практика. № 1 (44). С. 30-37.
Рудакова С.Л., Бочкова Е.В. 2008. Горизонтальная передача вируса инфекционного некроза гемопоэтической ткани молоди нерки от половозрелых рыб-вирусоносителей // Мат. Межд. конф. «Современное состояние водных биоресурсов». Новосибирск, 26-28 марта 2008 г. Новосибирск: «Агрос». С. 385-387.
Рудакова С.Л., Гаврюсева Т.В., Асеева Н.Л., Устименко Е.А., Овчаренко Л.В. 2009а. К проблеме товарного качества продукции из горбуши Ка-
рагинской подзоны (Камчатка) в 2009 г. // Лососевый бюллетень № 4. Владивосток: ТИНРО-Центр. С.252-256.
Рудакова С.Л., Устименко Е.А., Гаврюсева Т.В., Бочкова Е.В. 20096. Эпизоотологические проблемы на лососевых рыбоводных заводах Камчатки и пути их решения // Мат-лы Всерос. конф. с междунар. участием «Проблемы и перспективы использования водных биоресурсов Сибири в XXI веке» (Красноярск, 8-12 декабря 2008 г.). Красноярск: ФГНУ «НИИЭРВ». С. 131-136.
Рудакова С.Л., Устименко Е.А., Гаврюсева Т.В., Сергеенко Н.В., Бочкова Е.В. 2006. Профилактика и контроль заболеваемости молоди на лососевых рыбоводных заводах Камчатки как одно из направлений повышения эффективности воспроизводства // Матер. Междунар. науч.-практ. семинара «Современные проблемы лососевых рыбоводных заводов Дальнего Востока». Петропавловск-Камчатский. С. 87-92.
Рудакова С.Л., Устименко Е.А., Гаврюсева Т.В., Сергеенко Н.В., Линева Г.П., Корнеева С.А., Бочкова Е.В. 2005. Эпизоотическая обстановка на ЛРЗ Камчатки и состояние здоровья производителей, используемых для воспроизводства тихоокеанских лососей в 2004 г. // Расширен, матер. Всерос. науч.-практ. конф. семинара «Эпизоотический мониторинг в аквакультуре: состояние и перспективы». М.: Россельхозакадемия. С. 101-104.
Рязанова Т.В. 2005. Гистопатологические изменения при панцирной болезни у камчатского краба Paralithod.es сат1&скаИси& (ТПезшв, 1815) // Биология моря. Т. 31. № 6. С. 421—428.
Рязанова Т.В. 2006 Гистопатологические изменения у краба-стригуна опилио (СЫопоесе1е$ орШо; ВгасТгуига: Мареке) на западнокамчатском шельфе Охотского моря // Исследования водных биологических ресурсов Камчатки и северо-западной части Тихого океана: Сб. науч. тр. Камчат. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 8. С. 207-216.
Рязанова Т.В. 2008. Синдром «горького краба» у двух видов крабов-литодид в Охотском море // Биология моря. Т. 34. № 6. С. 452—455.
Рязанова Т.В. 2009. Развитие у крабов бактериальных инфекций и газо-пузырьковой болезни вследствие подъема в ловушках // Исследования водных биологических ресурсов Камчатки и северо-западной части Тихого океана. Сб. науч. тр. Камчат. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 13. С. 95-100.
Рязанова Т.В., Елисейкина М.Г. 2010а. Вирусная инфекция у синего краба Paralithodes platypus в Охотском море // Тез. Междунар. конф. «Современное состояние водных биоресурсов» (Новосибирск, 7-9 декабря 2010 г.). Новосибирск: Агрос. С. 211-215.
Рязанова Т.В., Елисейкина М.Г. 20106. Микроспоридии родов Thelohania (Thelohaniidae) и Ameson (Pereziidae) у двух видов крабов-литодид Охотского моря // Биология моря. Т. 36. № 6. С. 429—436.
Рязанова Т.В., Метелев Е.А. 2010. Некоторые данные о распространенности микроспоридий Thelohania sp. среди промысловых крабов Охотского моря // Сб. науч. статей Междунар. симп. «Паразиты Голарктики» (4—8 октября 2010 г.). Петрозаводск: Инт-т биологии Карельского науч. центра. Т. 2. С. 83-85.
Сазонов АЛ., Пугаева В.П., Линева Г.П., Зубаха С.В. 1993. Случаи фурункулеза у кеты Oncorhynchus keta и кижуча Oncorhynchus kisutch на Камчатке // Исслед. биол. и динамики числен, пром. рыб камчатского шельфа. Петропавловск-Камчатский: КамчатНИРО. С. 230-240.
Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб.
1998. Ч. 1. М.: Отдел маркетинга АМБагро, 310 с.
Сергеенко Н.В., Гаврюсева Т.В., Устименко Е.А. 2004. Актиномицеты у лососевых рыб Камчатки // Мат-лы Междунар. науч.-практ. конф. «Стратегия развития аквакультуры в условиях XXI века». Минск: Тонпик. С. 347-350.
Сергеенко Н.В., Надеева О.А. 2007. Зараженность тихоокеанских лососей Камчатки патогенными агентами, влияющими на их товарное качество // Вопр. рыболовства. Т. 8. № 3 (31). С. 547-558.
Сергеенко Н.В., Надеева О А., Гаврюсева ТВ. 2008. Санитарно-эпидемиологическое состояние популяций тихоокеанских лососей Камчатки // Матер. Междунар. конф. «Современное состояние водных биоресурсов». Новосибирск: Агрос. С. 387-391.
Сергеенко Н.В., Овчаренко Л.В., Гаврюсева Т.В., Жукова Л.А. 2011. Патогены различной этиологии у горбуши Камчатки // Матер. III Междунар. конф. «Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов» (18-23 июля 2011 г.). Борок. С. 150-153.
Сергеенко Н.В., Пугаева В.П., Устименко Е.А. 2000. Определение патогенности вибрионов, выделенных от горбуши Oncorhynchus gorbuscha
(Walbaum) Карагинского залива // Исследования водных биологических ресурсов Камчатки и северозападной части Тихого океана. Сб. науч. тр. Камчат. НИИ рыб. хоз-ва и океанографии. Вып. 5. С. 185-187.
Справочник ветеринарного врача-ихтиопатолога.
1999. Под ред. П.П. Соторова. М.: Росзооветснаб-пром, 245 с.
Стрелков Ю.А. Наумова А.М. Щелкунов И.С., Головин П.П., Гробов О.Ф. 2005. Эпизоотологи-ческий мониторинг в аквакультуре: итоги работы научно-консультативного совета по болезням рыб // Матер. Всерос. науч.-практ. конф. «Эпизоотологи-ческий мониторинг в аквакультуре: состояние и перспективы» (Москва, 13-14 сентября 2005 г.). М.: Россельхозакадемия. С. 125-128.
Уикли Б. 1975. Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 324 с.
Устименко Е.А. 2006. Признаки бактериальной жаберной болезни у молоди кижуча Oncorhychus kisutsch (Walbaum) на Вилюйском рыбоводном заводе (Камчатка) // Вопр. рыболовства. Т. 7. № 3 (27). С. 436-445.
Устименко Е.А. 2008а. Бактериальные инфекции у молоди нерки на рыбоводных заводах Камчатки // Матер. Междунар. конф. «Современное состояние водных биоресурсов» (Новосибирск, 2628 марта 2008 г.). Новосибирск: Агрос. С. 402—404.
Устименко Е.А. 20086. Бактерии — возбудители заболеваний тихоокеанских лососей на рыбоводных заводах Камчатки // Сб. науч. тр. «Вопросы рыбного хозяйства Беларуси». Минск: РУП «Институт рыбного хозяйства». Вып. 24. С. 496—498.
Устименко Е.А., Винник Н.Г. 2011. Применение пробиотика «Суб-Про» при выращивании молоди кеты на лососевом рыбоводном заводе (Камчатка) // Мат-лы III Междунар. конф. «Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб» (Борок, 18-22 июля 2011 г.). М.: РГАУ-МСХА им. К.А. Тимирязева. С. 263-266.
Устименко Е.А., Гаврюсева Т.В., Сергеенко Н.В. 2003. Признаки алиментарного токсикоза у молоди тихоокеанских лососей на рыбоводных заводах Камчатки // Мат-лы науч.-техн. конф. «Экологические и социально-экономические проблемы Камчатки». Петропавловск-Камчатский: КамчатГТУ. С. 21-32.
Устименко Е.В., Карманова И.В., Рязанова Т.В. 2006. Воздействие патогенов различной этиологии на камчатского краба Paralithodes camtschaticus
(Tilesius) в Охотском море / Сб. матер. Междунар. конф. «Современное состояние популяций крабов Баренцева моря и их взаимодействие с донными организмами». Мурманск: ММБИ КНЦ РАН. С.101-103.
Устименко Е.А., Сергеенко Н.В. 2001. Эпизоотическая ситуация на Паратунском экспериментальном лососевом рыбоводном заводе (Камчатка) // Тез. докл. IV регион, конф. по актуальным проблемам экологии, морской биологии и биотехнологии студентов, аспирантов и молодых ученых Дальнего Востока России. Владивосток. С. 120-121.
Устименко Е.А., Сергеенко Н.В. 2011. Возбудитель фурункулеза Aeromonas salmonicida у половозрелой нерки (Oncorhynchus nerka Walbaum) из оз. Азабачье // Вопр. рыболовства. Т. 12. № 3 (47). С.576-586.
Чернышева Н.Б., Кузнецова Е.В., Воронин В.Н., Стрелков Ю.А. 2009. Паразитологическое исследование рыб. Санкт-Петербург: ГОСНИОРХ, 20 с.
Щелкунов И. С. 2004. Весенняя виремия и другие рабдовирусные болезни рыб: от иммунологических к молекулярно-генетическим методам диагностики // Расшир. матер. Всерос. науч.-практ. конф «Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб» (Борок, 16-18 июля 2003 г.). М.: ООО «Авоська». С. 389-404.
Austin В., Austin D.A. 1989. Methods for the microbiological examination of fish and shellfish // Edinburgh EH1 1HX. Scotland, 260 p.
Bancroft D., Stevens A., Turner D.R. 1990. Theory and practice of histological techniques. Edinburgh, London, Melbourne, New York: Churchill Livingstone Inc., 725 p.
Bell T.A., Lightner D. V. 1988. A handbook of normal penaeid shrimp histology. Baton Rouge. Louisiana: The World aquaculture society, 114 p.
Blue book. Suggested procedures for the detection and identification of certain finfish and shellfish pathogens. 1994.4th ed. Ver. I. Fish Health Sec. Am. Fish. Soc., 294 p.
Bochkova E.V., Gavruseva T.V. 2009. Pathogens of pacific herring Clupea pallasii Valenciennes (Clupeidae) in the western part of the Bering Sea (Kamchatka) / Third bilateral conference “Aquatic animal health”, Shepherdstown, West Virginia, 12-20 July, 18 p.
Carlton J.Т., GellerJ.B. 1993. Ecological roulette — the global transport of nonindigenous marine organisms // Science. V. 261. № 5117. P. 78-82.
Ferguson H. W 1995. Systematic pathology of fish. A text and atlas of comparative tissue responses in diseases of Teleosts. Iowa: Iowa State Univ. Press Ames, 267 p.
Fish pathology. 1989. London, Philadelphia, Sydney, Tokyo, Toronto: Stirling Univ, 383 p.
Gavruseva T.V.20W. Pathological analysis of juvenile sockeye salmon (Oncorhynchus nerka Walbaum) from lake Kurilskoe (Kamchatka, Russia) // Proceedings of the third bilateral conference between Russia and the Unated States. 12-20 July 2009. Shepherdstown, West Virginia. Landover, Maryland, USA. P. 123-129.
Gavruseva T.V., Pugaeva V.P., Rudakova S.L., Sazonov A.A. 1997. The first cases of the microspo-ridiosis in the crabs red king Paralithodes camtscha-tica and golden king Lithodes aequispina from the Sea of Okhotsk Diseases of Fish and Shellfish // Abstracts of VIII Intern. Conf. Heriot-Watt University, 40 p.
Glauert A.M. 1991. Fixation, dehydration and embedding of biological specimens. Practical methods in electron microscopy. North-Holland, 207 p.
Holt J.G., Krieg N.R., Sneath PH.A., Staley J.T., Williams S.T. 1994. Bergey's manual of determinative bacteriology. 9th ed. Baltimore: Williams Wilkins, 787 p.
Johnson PT. 1983. Diseases caused by viruses, bacteria, rickettsia and fungi // The Biology of Crustacea. V. 6. New York: Academic Press. P. 1-78.
Kerstin A., Yoshimizu M. 1994. Role of viruses in the induction of skin tumours and tumour-like proliferations offish // Dis. aquat. Org. Vol. 19. P. 215-232.
Lafferty K.D., Porter J. W, Ford S.E. 2004. Are diseases increasing in the ocean? // Ann. Rev. Ecol. Evol. System. V. 35. P. 31-54.
Meyers T.R., Koeneman T.M., Botelho C., Short S. 1987. Bitter crab disease — a fatal dinoflagellate infection and marketing problem for Alaskan tanner crabs Chionoecetes bairdi // J. Dis. Aquat. Org. V. 3. № 3. P. 195-216.
Noga E.J. 1996. Fish diseases. Diagnosis and treatment. Mosby-Year Book, 367 p.
Post G. 1987. Textbook of fish health. Neptune City: T.F.H. Publ., 288 p.
Rudakova S.L., Bochkova E. V. 2009. Analysis of two natural epizootics of infectious hematopoietic necrosis in sockeye salmon fry Oncorhynchus nerka in spawning lake Nachikinskoe (Kamchatka) // Third
bilateral conference “Aquatic animal health”, Shepherdstown, West Virginia, 12-20 July, 45 p.
Rudakova S.L., Bochkova E.V. 2010. Sensitivity of chinook salmon (Oncorhynchus tschawytscha) to infectious hematopoietic necrosis virus (Russia, Kamchatka) // The 6 Int. Symp. on Aquatic Animal Health: Global strategies for a changing environment (Tampa, Florida, September 5-9,2010), 187 p.
Rudakova S.L., Kurath G., Bochkova E.V. 2007. Occurrence and genetic typing of infectious hematopoietic necrosis virus in Kamchatka Russia // J. Dis. Aquat. Org. Vol. 75. P. 1-11.
Ryazanova T. V, Eliseikina M. G., Kukhlevsky A.D., Kharlamenko VI. 2010. Hematodinium sp. infection of red king crab Paralithodes camtschaticus and blue king crab Paralithodes platypus from the northeastern part of the Okhotsk Sea, Russia // J. Invertebrate Pathol. V. 105. № 3. P. 329-334.
Sergeenko N.. Ustimenko E. 2003. Characterization of Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida isolated from salmon spawned in hatcheries on Kamchatka // II Bilateral conference “Aquatic and marine animal health”. Shepherdstown. West Virginia. USA, 49 p.
Sergeenko N.V., Ustimenko E.A. 2005. Characterization of strains of Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida isolated from spawning salmon in fish hatcheries on Kamchatka // Health and Diseases of Aquatic Organisms: Bilateral Perspectives. In: R.C. Cipriano, I.S. Shchelkunov (Eds.). P. 256-259.
Sindermann C.J. 1990. Principal diseases of marine fish and shellfish. Second Ed. USA: Academic Press. V. 1,521 p.
Smail D.A. 1982. Viral erythrocytic necrosis in fish: a re-view // J. Proc. Roy. Soc. Edinburgh. № 8IB. P. 169-176.
Sparks A.K., Morado J.F. 1986. A herpes-like virus disease in the blue king crab Paralithodes platypus // Dis. Aquat. Org. V. 1. № 2. P. 115-122.
Stentiford G.D., Shields J.D. 2005. A review of the parasitic dinoflagellates Hematodinium species and Hematodinium-like infections in marine crustaceans // Dis. Aquat. Org. V. 66. № 1. P. 47-70.
Stewart J.E. 1991. Introductions as factors in diseases of fish and aquatic invertebrates // Canadian Journal of fisheries and aquatic sciences. Suppl. 1. V. 48,110-117 p.
