CC BY
39
2016, том 18 [12]
УДК 615.322/ 612.1/615.917
ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ФИТОПРЕПАРАТА
НА БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГЕПАТИТЕ
11 2 Г.Ж. Рахымжан , А.Н. Аралбаева , М.К. Мурзахметова
'Алматинский технологический университет, Алматы, Казахстан 2КазНУ имени аль-Фараби, Алматы, Казахстан
Аннотация. Современный темп жизни ассоциирован с неправильным питанием, снижением качества потребляемой пищи, поступлением в организм токсичных агентов, таких как ксенобиотики из окружающей среды, лекарственные препараты. Данные факторы негативно влияют на весь организм в целом, однако больше всего токсичному воздействию подвержена печень, так как оная является ключевым органом детоксикации различных веществ попадающих в организм. Данная статья посвящена исследованию влияния растительного препарата на функциональное состояние клеток печени на модели острого и хронического гепатита индуцированного четыреххлористым углеродом. В результате исследований выявлено, что использование растительных препаратов позволяет уменьшить повреждающее действие тетрахлорметана, что выражается в снижении значений показателей печеночных проб у животных с острым и хроническим гепатитом.
Ключевые слова: четыреххлористый углерод, фитопрепарат, гепатопротектор, аминотрансферазы, гаммаглутамил-трансфераза.
В современном мире человек испытывает негативное влияние стресс-факторов различного генеза, в том числе и ксенобиотиков [1]. Ухудшение экологической обстановки, использование химических агентов в приготовлении продуктов питания, потребление лекарственных средств и т.п. пагубно сказываются на здоровье человека, и в первую очередь страдает печень, так как она является важным центром детоксикации организма [2; 3]. Применение гепатопротекторных средств одно из путей повышения резистентности печеночных клеток, а вследствие и всего организма влиянию неблагоприятных факторов среды. В роли гепатопротекторов могут выступить различные препараты, но особая роль принадлежит веществам из растительного сырья [4—7]. Соответственно, проблема разработки новых БАД спо-
собствующих поддержанию и улучшению здоровья не теряет своей актуальности.
Целью нашей работы явилось оценка гепато-протекторного потенциала растительного препарата в экспериментальных условиях на модели острого и хронического гепатита.
Материалы и методы. В соответствии с задачами исследования в опытах in vivo было исследовано функциональное состояние гепатоци-тов при остром и хроническом отравлении СС14, а также гепатопротекторного эффекта ранее разработанного растительного препарата в состав которого входит трава душицы обыкновенной, тимьяна ползучего, мать и мачехи, листьев валерианы обыкновенной, липового цвета. Опыты проведены на 120 взрослых (18-месячных) крысах-самцах массой 180—200 г.
~ 46 ~
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ ЭЛ № ФС77-50518 Журнал представлен в НАУЧНОЙ ЭЛЕКТРОННОЙ БИБЛИОТЕКЕ (НЭБ) — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
Since 1999 e-ISSN 2226-7417
Рахымжан ГЖ., АралбаеваА.Н., МурзахметоваМ.К. Оценка влияния фитопрепарата на биохимические...
----—
Для изучения влияния острой интоксикации тетрахлорметаном на фоне действия растительного препарата животных разделили на 4 группы. I группа — контроль, II группе вводили подкожно 50% раствор тетрахлорметана на растительном масле (v/v, 1 : 1), из рассчета 2,0 мл/кг веса животного, животные III группы получали пер-орально фитопрепарат в течение 2-х недель из расчета 200 мг/кг массы тела, на 14-й день им вводили подкожно раствор CCl4, IV группе вводили перорально ФП из рассчета 200 мг/кг массы тела соответственно. На 14-й день крысам IV группы вводили подкожно оливковое масло.
Для оценки гепатопротекторных свойств фитопрепарата при хронической интоксикации тетрахлорметаном животных разделили на 3 группы. I группа — контроль, II группе вводили подкожно 10% раствор тетрахлорметана на растительном масле (v/v, 1 : 1), из рассчета 2,0 мл/кг веса животного в течение 2-х недель., Животным III группы давали перорально фитопрепарат в сочетании с подкожным введением раствора CCl4 в течение 2-х недель.
Для экспериментов кровь получали после усыпления животных этиловым эфиром с последующей декапитацией. Полученную кровь центрифугировали в течение 10 мин при 1000 g. Сыворотку использовали для биохимического анализа.
Определение активности трансфераз (ала-нинаминострасферазы и аспартатаминотрансфе-разы) в сыворотке крови проводили методом Райт-
мана-Френкеля при помощи наборов «АлАТ-01-Витал и АсАТ-01-Витал» фирмы «Витал Диагностике СПб».
Определение уровня щелочной фосфатазы определяли с помощью набора «Щелочная фосфатаза-Витал» и гаммаглутамат трансфе-разы по «конечной точке» определяли с помощью набора «Гамма-ГТ-Витал».
Определение концентрации свободного и общего билирубина в сыворотке крови осуществляли по унифицированному методу Ендрассика-Грофа набором «Билирубин-12-Витал» фирмы «Витал Диагностикс СПб».
Статистическая обработка данных. Результаты статистически обрабатывали с использованием программы Microsoft Excel. С учетом критерия Фишера-Стьюдента зарегистрированные изменения показателей считали достоверными при р < 0.05.
Результаты и обсуждение. Как известно, клиническое значение определения активности печеночных проб заключается в том, что при повреждениях печени наблюдается повышение их уровня. При токсическом гепатите, отмечается функциональная недостаточность печени и угнетение ее функций.
На рисунке 1 приведены результаты анализа активности аминотрансфераз в сыворотке крыс с острым гепатитом.
МЕ/Л
А
350 300 250 200 150 100 50 0
контроль ТХМ ФП ФП+ТХМ
МЕ/Л Б
600
500 400 300 200 100
контроль ТХМ ФП ФП+ТХМ
0
Рис. 1. Уровень АлАт (А) и АсАт (Б) при остром экспериментальном гепатите
По оси абсцисс — группы животных, по оси ординат — активность фермента
~ 47 ~
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ ЭЛ № ФС77-50518 Журнал представлен в НАУЧНОЙ ЭЛЕКТРОННОЙ БИБЛИОТЕКЕ (НЭБ) — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
Since 1999 e-ISSN 2226-7417
On line scientific @ educational Bulletin "Health and Education Millennium", 2016. Vol. 18. No 12
Из рисунка видно, при развитии острого токсического гепатита индуцированного четыреххло-ристым углеродом отмечается повышение активности АлАт и АсАт в 2,5 и 6,9 раза соответственно. Известно, что разрушение клеток печени влечет избыточное попадание названных ферментов в кровь. Показатели уровня аминотрансфераз у животных, которым вводили фитопрепарат оставался в пределах общеустановленной нормы.
При острой интоксикации на фоне приема фитопрепарата отмечено достоверное снижение уровня трансаминаз относительно группы крыс с моделью острого гепатита. Из рисунка видно, что в обоих случаях прием фитопрепарата позволил несколько предовратить повреждения клеток, о чем свидетельствует снижение уровня АсАт и АлАт практически в 2 раза по сравнению с группой с острым гепатитом. Аналогичная тенденция отмечена при исследовании активности щелочной фосфатазы и гамма-глутамилтрансферазы. Как показали анализы, уровень ЩФ увеличился при действии гепатотоксиканта на 67% по сравнению с контролем, и ГГТ на 54,3% соответственно. Использование препарата снижает повреждающее действие ТХМ о чем свидетельствует понижение уровня ЩФ на 22% и ГГТ на 55%. Тем не менее, в группах с острым гепатитом на фоне приема фитопрепарата показатели биохимических показателей превышали уровень АсАт у контрольных
крыс в 1,6 раз, АлАт в 4 раза, ГГТ и ЩФ в 1,2 раза и в 1,3, 1,6 и 1,12 раз соответсвенно верхние границы нормы названных параметров.
Известно, что показателем состояния печени является и уровень билирубина (общий, связанный и свободный) в сыворотке крови. В таблице 1 представлены данные по определению желчного пигмента в сыворотке крови контрольной и опытных групп животных при острой интоксикации тетрахлорметаном на фоне применения растительного препарата. При однократном введении ТХМ наблюдалось повышение уровня общего и свободного билирубина в сыворотке крови при незначительном увеличении связанного билирубина. Это свидетельствует о поражении печени и выходе желчного пигмента в кровь преимущественно в свободной форме, что обуславливает оседание билирубина в тканях и последующей интоксикации организма.
Как видно из таблицы, ФП оказал значительный положительный эффект на состояние органа, что видно по снижению содержания общего и свободного билирубина. Таким образом, можно отметить улучшение состояния гепатоцитов и повышение резистентности печеночных клеток факторам, вызывающим поражение печени. Действие ФП в концентрации 200 мг/кг привело к понижению уровня общего и свободного билирубина практически до контрольных величин.
Таблица 1
в сыворотке крови животных
Группы животных Билирубин (мкмоль/л)
общий связанный свободный
Контроль 20,1 ± 1,05 7,1 ± 0,35 13,0 ± 0,64
ТХМ (2,0 мл/кг) 30,3 ± 1,51* 8,9 ± 0,4* 22,3 ± 0,11*
ФП (200 мг/кг) 19,2 ± 2,0 6,5 ± 0,9 12,7 ± 1,2
ФП (200 мг/кг) + ТХМ 22,1 ± 1,10* 8,4 ± 0,42* 13,7 ± 0,67*
Примечание:*р < 0,005.
Реалии современности таковы, что человечество чаще подвержено хронической интоксикации ксенобиотиками и другими агентами. Поэтому в следующей серии опытов нами был смоделирован эксперимент с развитием хронической формы токсического гепатита. В таблице 2 приведены результаты анализа печеночных проб животных с хроническим гепатитом и длительной интоксикации ТХМ на фоне приема фитопрепарата. Аналогично предыдущей серии опытов активность вышеназванных ферментов и содержания свободного билирубина в сыворотке крови
оставалась высокой при хроническом поступлении гепатотоксиканта в организм. Уровень АсАт превышал значения контроля в группе с моделью хронического гепатита в 3,6 раз, АлАт в 6,4, ЩФ практически в 3 раза и ГГТ в 5,5 раз. Тогда как в группе животных, получавших растительный препарат наряду с введением ТХМ, данные величины были ниже относительно группы, «страдающей гепатитом», в 1,7, 1,2, 1,8 и 2,1 раз соответственно. В таблице 2 представлены результаты исследования уровня АлАт и АсАт при хроническом гепатите.
~ 48 ~
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ ЭЛ № ФС77-50518 Журнал представлен в НАУЧНОЙ ЭЛЕКТРОННОЙ БИБЛИОТЕКЕ (НЭБ) — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
Since 1999 e-ISSN 2226-7417
Рахымжан Г.Ж., АралбаеваА.Н., МурзахметоваМ.К. Оценка влияния фитопрепарата на биохимические...
----■—
Таблица 2
Изменение биохимических показателей сыворотки крови при хроническом экспериментальном гепатите на фоне приема фитопрепарата
Группы АсАт (110—140 Е/л) АлАт (72—196 Е/л) ЩФ (50—120 Е/л) ГГТ Билирубин (мкмоль/л)
свободный связанный
Контроль iiS ± 15 S0 ± 7 109 ± 12 0,3S ± 0,02 13,2 ± 1,5 6,5 ± 0,S
ТХМ 421±10* 514 ±25* 326 ±15* 2,1 ± 0,3* 25,6 ± 2,S* 7,S ± 1,1*
ТХМ+ФП 254 ±12* 423 ±13* 1S4 ±12* 1,1 ± 0,2* 1S,5 ± 1,1* 7,0 ± 0,9*
Примечание: *р < 0,005.
Следует отметить, что уровень билирубина при xpоническом отравлении четыpеxxлоpистым углеродом остается на высоком уровне, преимущественно с преобладанием свободной формы, тогда как прием растительной композиции значительно снижает уровень пигмента в крови и способствует восстановлению соотношений свободного и связанного билирубина.
Таким образом, как показали наши исследования, при остром и xpоническом гепатите отмечалось нарушение функций печени, о чем свидетельствовали высокие значения анализируемые параметров. Однако превентивный прием фитопрепарата способствует соxpaнению целостности большей части гепатоцитов как при остром, так и при xpоническом отравлении четыpеxxлоpис-тым углеродом, что подтверждается более низкими значениями активности печеночные проб в сыворотке крови.
ЛИТЕРАТУРА
i. Assis D.N., Navarro V.J. Human drug hepato-toxicity: a contemporary clinical perspective // Expert.
Opin Drug. Metab. Toxicol. 2009. Vol. 5, № 5. P. 463— 473.
2. Flora S.J. Role of free radicals and antioxidants in health and disease // Cell Mol. Biol. 2007. Vol. 53, № 1. P. 1—2.
3. Kaufman J.D. Air pollution and mortality: are we closer to understanding the how? // Am J Respir Crit Care Med. 2007. Vol. 176, № 4. P. 325—326.
4. Rates S.M.K. Plants as source of drugs // Toxicon. 2001. Vol. 39, № 5. P. 603—613.
5. Ward F.M., Daly M.J. Hepatic disease // Walker R., Edwards C., editors. Clinical Pharmacy and Therapeutics. Churchill Livingstone: New York, 1999. P. 195—212.
6. Colla G., Rouphael Y., Cardarelli M., Svecova E., Rea E., Lucini L. Effects of saline stress on mineral composition, phenolic acids and flavonoids in leaves of artichoke and cardoon genotypes grown in floating system // J Sci Food Agric. 2013. № 93.Vol. 5. P: 1119—27.
7. Haidara M., Bourdy G., De Tommasi N., Braca A., Traore K., Giani S., Sanogo R. Medicinal Plants Used in Mali for the Treatment of Malaria and Liver Diseases // Nat Prod Commun. 2016. Vol. 11. № 3. P: 339—52.
ESTIMATION OF INFLUENCE OF HERBAL PREPARATION ON BIOCHEMICAL VALUES OF BLOOD AT EXPERIMENTAL HEPATITIS
11 2 G.Zh. Rahymzhan , A.N. Aralbayeva , M.K. Murzahmetova
'Almaty Technological University, Almaty, Kazakhstan 2KazNU named after al Farabi, Almaty, Kazakhstan
Annotation. Modern temp of life associated with wrong nutrition, decreasing of food quality, and supply in organism of toxical agents like xenobiotics from environment or drugs. Such factors affect on whole organism, however liver is exposed to toxical action, because of liver is the main organ responsible to detoxication of different compounds supplying in organism. This article is devoted to issue of influence of herbal preparation on liver functional conditions at the models of acute and chronical hepatitis induced by carbon tetrachloride. Studies show, that the using of herbal preparations can decrease damaging influence of carbon tetrachloride, which indicated as the lowering of biochemical values of blood at animals with acute and chronical hepatitis
Key words: Carbon tetrachloride, phytopreparate, hepatoprotector, aminotransferases, gammaglutamiltransferase.
~ 49 ~
Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор). Свидетельство о регистрации СМИ ПИ ЭЛ № ФС77-50518 Журнал представлен в НАУЧНОЙ ЭЛЕКТРОННОЙ БИБЛИОТЕКЕ (НЭБ) — головном исполнителе проекта по созданию Российского индекса научного цитирования (РИНЦ)
