CC BY
19
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Материалы и методы. Молодые люди 18—20 лет были двукратно привиты ЖГВ А (H5N2), А (H1N1) pdm2009 или препаратом плацебо. Образцы венозной крови и носовых секретов собирали до вакцинации (день 0), через 21 день после первой вакцинации (день 21), через 21 день после ревакцинации (день 42) и через 42 дня после ревакцинации (день 63). Для определения титров сывороточных и локальных антител использовали РТГА и иммуно-ферментный анализ. Процент вирус-специфичных CD3+CD4+IFNy+ и CD3+CD8+IFNy+ определяли методом проточной цитометрии.
Результаты. Обе ЖГВ стимулировали продукцию как сывороточных, так и локальных антител. У части непривитых людей обнаруживались пере-крестнореагирующие Т-клетки к птичьему вирусу A (H5N2). Такие же клетки к вирусу A (H1N1)pdm2009 выявлялись еще до его эпидемического распространения в 2009—2010 гг. Процент таких предсуществу-ющих клеток существенно варьировал. После первой вакцинации достоверное увеличение уровней клеток происходило к вирусу А (H5N2) у 10—20% волонтеров, к вирусу А (H1N1) — у 38—69% лиц. После ревакцинации эти цифры увеличились до 30—40% и 69—75% соответственно. Выявлена обратная зависимость между уровнями вирусспецифичных Т-клеток до и после вакцинации. Кроме того, введение ЖГВ А (H5N2) индуцировало гетеросубти-пический иммунный ответ к другому сероподтипу вируса гриппа А.
Выводы. Обе изученные вакцины — A/17/Duck/ Potsdam/86/92 (H5N2) и A/17/California/ 2009/38 (H1N1) — индуцировали гуморальный и Т-клеточ-ный иммунный ответ у волонтеров. ЖГВ A (H1N1) стимулировала продукцию вирусспецифичных CD4+ и CD8+ Т-клеток в большей степени, чем A (H5N2). Клетки иммунологической памяти, индуцированные вирусом A/17/Duck/Potsdam/86/92 (H5N2) обладали кроссреактивностью в отношении сезонного штамма A (H1N1).
ОЦЕНКА ЦИТОТОКСИЧНОСТИ И ЦИТОПАТОГЕННОСТИ ГЛИКОПРОТЕИНА КАПСУЛЫ BURKHOLDERIA PSEUDOMALLEI 100 НА МОДЕЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ
Е.В. Пименова, Н.П. Храпова
ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора
На сегодняшний день существует несколько альтернативных способов получения результатов по оценки токсичности различных соединений (химических и биологических). Одним из важных преимуществ моделей in vitro заключается в возможности работы со стандартными перевиваемыми линиями клеточных культур с известными свойствами. Модель in vitro обеспечивает хорошую воспроизводимость на всех этапах работы в связи с их однородной морфологией и характеристиками роста.
В качестве экспериментальной модели использовали культивируемые in vitro клетки линии L929, полученной из банка клеточных культур позвоночных института цитологии РАН, Санкт-Петербург). Пластины с высевами клеточных культур инкубировали в СО2-инкубаторе при 37°С, и насыщении атмосферы 5—7% СО2. Культивирование проводи-
ли в полусинтетической питательной среде DMEM с добавлением 10% эмбриональной сыворотки плодов коровы, 2 mM глютамина, 4 mM пирувата натрия, пенициллин 100 ЕД/мл, стрептомицин 100 мкг/мл. Для пересева клеток использовали раствор трипси-на-версена 1:3.
Проверке цитотоксичности и цитопатогенно-сти подлежали 7 образцов формамидных экстрактов (ФЭ) В. pseudomallei 100, серии 5, 7, 16, 19, 22, 23, 24. Свежеприготовленную взвесь клеток вносили в 24-луночные пластины с концентрацией клеток в каждой лунке 1,6 х 105 в объеме 0,5 мл. Через сутки после образования плотного монослоя в опытные лунки вносили по 40 мкл одного из вариантов антигена. Время прямого контакта клеток-мишеней с антигеном составлял 3 суток; условия инкубации, как описано выше.
Ежедневно в течение срока эксперимента производили подсчет жизнеспособности, оценку роста клеток и оценку повреждения клеток в каждой лунке. После окончания опыта рассчитывали относительные показатели прироста или убывания числа клеток в популяции L929.
К концу 3 суток было зарегистрировано торможение роста популяции в лунках с антигеном серий 5, 16, 19, 24 по сравнению с контрольными лунками, что свидетельствовало об отсроченном цитопатоген-ном эффекте гликопротеина капсулы В. pseudomallei 100 этих образцов 5, 16, 19, 24 на клетки-мишени.
ПУТИ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БЕШЕНСТВА НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ
Е.М. Полещук1, А.А. Девяткин2, М.В. Бекова2, В.Г. Дедков2
1ФБУН Омский НИИприродно-очаговых инфекций Роспотребнадзора
2 ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва
Бешенство включено в кодекс здоровья наземных животных и признано заболеванием, имеющим значение для международной торговли (OIE). Оно входит в пятерку инфекционных болезней, общих для человека и животных, наносящих наибольший экономический ущерб, является серьезной проблемой общественного здравоохранения (WHO). В этих условиях решающую роль играет быстрая и надежная лабораторная диагностика. Бешенство — зооноз, для которого методы диагностики стандартизированы на международном уровне.
На территории России диагностику инфекции определяют ГОСТ 26075-84 и МУ от 14 мая 1997 г., включающие методы: МФА, ИФА, гистологический (обнаружение телец Негри), реакция преципитации, биопроба. Наибольшее распространение в лабораторной практике получили МФА, ИФА, биопроба.
Случайное использование молекулярно-генети-ческих методов, при подтверждении диагноза у людей больных энцефалитом неясной этиологии, позволило констатировать бешенство в трех случаях, дополнительно к данным официальной статистики (Леонова и др., 2009; Дедков и др., 2014), что позже было подтверждено стандартными методами. Эти факты указывают на несомненную роль в диагностике бешенства молекулярно-генетических методов, рекомендованных ВОЗ, в качестве дополнительных.
