CC BY
66
УДК 616.25-002:616-006-092.9:615.03
Д.В. Филоненко, Н.В. Андронова, Е.М. Трещалина, Г.К. Герасимова ОЦЕНКА ПЕРСПЕКТИВНОСТИ БИНАРНЫХ КАТАЛИТИЧЕСКИХ СИСТЕМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФТАЛОЦИАНИНОВ И АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ ДЛЯ ВНУТРИПЛЕВРАЛЬНОГО ЛЕЧЕНИЯ ОПУХОЛЕВЫХ ПЛЕВРИТОВ
ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН», Москва
Контактная информация
Филоненко Дмитрий Владимирович, аспирант отделения химиотерапии адрес: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24; тел. +7(499)324-14-09 e-mail: [email protected]
Статья поступила 06.08.2011, подписана в печать 18.01.2012.
Резюме
В работе описана эффективность и токсичность бинарных каталитических систем с терафталом, оксико-баламином или эфитером в качестве катализаторов и аскорбиновой кислотой в качестве восстановителя при внутриплевральном (в/пл) введении мышам с в/пл трансплантированными опухолями. Показано, что с учетом показателей эффективности лечения опухолевого плеврита, индукции плевродеза и «острой» токсичности перспективными для клинического изучения являются Ок+АК и ТФ+АК. Пара ТФ+АК, эффективно индуцирующая плевродез, показала лучшие терапевтические характеристики при молярном соотношении компонентов 1 : 100, терапевтический индекс ТИ >1,5. Эф+АК в использованных дозировках недостаточно эффективна.
Ключевые слова: мыши, модель опухолевого плеврита, бинарная каталитическая система, эффективность, плевродез.
D.V. Filonenko, N.V. Andronova, H.M. Treshalina, G.K. Gerassimova THE VALUE OF BINARY CATALYTIC SYSTEM WITH PHTHALOCYANINES AND ASCORBIC ACID
FOR INTRAPLEURAL TREATMENT OF MALIGNANT PLEURAL EFFUSION
FSBI «N.N. Blokhin RСRC» RAMS, Moscow
Abstract
In work the efficacy and tolerance of the binary catalytic systems with teraftal, oxycobalamin or ephyther as the catalyzators with ascorbic acid as the reducer by the intrapleural administration to mice with i.p. transplanted tumors is described. It was shown through efficacy of malignant pleurisy treatment, pleurodesis inducing and «acute» toxicity that the most perspective for clinical investigation are Oc+AA and Tph+AA.
Tph+AA with molar parity of components as 1:100 demonstrates the best therapeutically data with high pleurodesis inducing, terapeutical index TI>1,5. Eph+AA with the used dosage do not demonstrate enough efficacy.
Key words: mice, experimental malignant pleurisy, binary catalytic system, efficacy, pleurodesis.
Введение
Ранее в эксперименте бинарная каталитическая система ТФ+АК с молярным соотношением компонентов 1 : 10 М/мл и дозовым соотношением 1 : 2,2 мг/кг была охарактеризована как хорошо переносимая и высокоэффективная при внутри-плевральной терапии экспериментальных опухолевых плевритов и индукции плевродеза на мышах [2; 7; 9; 12; 13]. Эти исследования были основанием для начала клинического изучения по 1 фазе ТФ+АК (молярное соотношение 1 : 10) при внутриплевральном введении больным с ОП. При проведении 1 фазы клинического изучения параллельно управляемой лимитирующей токсичности (болевая реакция) при применении БКС у пациентов с ОП был получен объективный противоопухолевый эффект в 80 % случаев в виде частичных ремиссий (осумкование выпота). Указанный эффект каталитической пары адекватен известным средствам лечения ОП в клинике [15-18; 20]. Учитывая результаты исследований in vitro, показавших преимущество при увеличенном молярном соотношении ТФ : АК=1 : 100, в настоящем исследовании нами проведено исследование in vivo при использовании адекватно увеличенных доз на модели ОП и плев-
родеза. Исследования направлены на повышение эффективности лечения. Кроме того, для изучения перспективы применения других катализаторов окисления АК и создания нескольких терапевтических систем лечения больных с ОП, в исследование включены 2 других катализатора - оксикобаламин [8; 10; 22-24] и кобальт.
Материалы и методы
Препараты
Аптечный препарат аскорбат натрия (АК) 5 % в ампулах по 1,0 мл (РФ) вводили мышам однократно внутриплеврально (в/пл) в дозах от 138 до 1100 мг/кг первой, до катализаторов. Терафтал-лио (ТФ) сер. 020406 получен от Н.А. Оборотовой (лаб. разработки ЛФ НИИ ЭДиТО) во флаконах по 50 мг. Вводили мышам 0,1%-ный раствор в физиологическом растворе хлористого натрия однократно в/пл в дозе 25 мг/кг для обеспечения лучшей переносимости лечения, учитывая потенциальное повышение токсичности при сочетании с большими дозами АК. Оксиколабамин и эфитер для парентерального введения в виде лиофилизированных лекарственных форм во флаконах получены из НИОПИК в достаточном количестве с паспортами.
Мышам вводили Ок в 1%-ной концентрации, Эф - в 5%-ной концентрации в физиологическом растворе. Катализаторы вводили в/пл однократно сразу после АК. Проведено 3 опыта с использованием ТФ+АК в соотношениях 1 : 25-1 : 50-1 : 100 соответственно, [25+138]-[25+275]-[25+550] мг/кг. Ок+АК изучен в дозировках [100+125]-[100+250]-[200+250] мг/кг, Эф+АК - в дозировке [750+268] мг/кг.
Опухолевая модель и животные Для изучения эффективности воздействия в отношении опухолевых плевритов использованы описанная модель ОП на мышах [1; 3; 4; 13; 14; 21]. Для исследований использованы 2-4 пассажи в/б трансплантированной карциномы Эрлиха (под-штамм ELD) из Банка опухолевых штаммов РОНЦ, доноры - мыши-самки BDFj. Опухоль трансплантировали в/пл по стандартной методике, принятой в РОНЦ, лечение начинали через 48 ч. Проведено 2 опыта на 80 мышах-гибридах BDFj $ из разведения РОНЦ, которых содержали в виварии на брикетированных кормах. Для выполнения экспериментов животных ранжировали на 4 группы, по 5-6 особей в каждой. Одну из групп оставляли без лечения и считали контрольной.
Модель плевродеза и животные Для исследований использована описанная модель плевродеза [1; 5; 6; 13; 14; 16] на здоровых мышах-самках BDFb Всего использовано 70 особей. Мышей содержали в виварии РОНЦ. Препараты описаны выше. Введение препаратов выполняли внутри-плеврально однократно в диапазоне доз с увеличенным соотношением с аскорбиновой кислотой соответственно экспериментам на моделях ОП. Для выполнения эксперимента животных распределяли по группам по 6-10 особей в каждой. В качестве контрольного плевросклерозирующего средства использован 3 %-ный раствор тетрациклина. О противоопухолевой активности судили по увеличению продолжительности жизни леченых мышей по сравнению с группами контроля (УПЖ, %; Т/С%). Статистическая обработка данных выполнена с использованием стандартного метода Фишера в модификации Р.Б. Стрелкова и расчетом доверительных интервалов средних сравниваемых величин. О переносимости терапии судили по поведению и состоянию мышей после введения или гибели в течение всего опыта. Наблюдение за мышами продолжали до гибели.
Оценка плевросклерозирующего эффекта Выполнена по 5-бальной шкале [1; 10-12; 19]. Наблюдение за мышами продолжали в течение 2-3 недель (период формирования спаек).
Оценка терапевтического индекса каталитической системы при внутриплевральном введении мышам Для расчета ТИ каталитических систем, эффективных при ОП, проведено определение величины среднесмертельной дозы ТФ и Ок в эффективных сочетаниях с АК при в/пл введении здоровым мышам. Использовано 50 здоровых мышей-самок BDF1, которых содержали в виварии РОНЦ. Для выполнения экспериментов животных распределяли по группам по 6-10 особей в каждой. Препараты описаны выше. Введение препаратов выполняли в/пл однократно. Для оценки «острой» токсичности эффективного сочетания ТФ+АК с молярным соотношением 1 : 100 ТФ вводили в фиксированной дозе 25 мг/кг, а АК вводили в раз-
личных увеличенных соотношениях к ТФ. Соотношение ТФ+АК составило: 1 : 150; 1 : 175; 1 : 225; 1 : 250; 1 : 300. Дозы ТФ+АК составили соответственно: 25+825 мг/кг; 25+962 мг/кг; 25+1238 мг/кг; 25+1375 мг/кг и 25+1650 мг/кг. Отдельно оценили токсичность АК в максимальной дозе, использованной в каталитической паре при достижении адекватного объема вводимого в плевральную полость за счет физиологического раствора. Оценка токсичности выполнена после гибели мышей. Наблюдение за мышами продолжали в течение 2-3 недель. Расчет величин токсических доз выполнен по стандартному методу Литчфилда-Уилкоксона.
Результаты
Эффективность
каталитических систем на моделях ОП
В первой серии экспериментов показано (табл. 1), что при сочетании ТФ+АК в соотношении 1 : 25 противоопухолевый эффект минимальный, УПЖ=12 %. Увеличение соотношения до 1 : 50 привело к повышению эффективности в 7,5 раз, т.е. УПЖ=91 %. Дальнейшее увеличение соотношения до 1 : 100 привело к получению достоверного УПЖ=155 % (р<0,05), которое было в 1,7 раза больше предыдущего результата. Таким образом, при двукратном увеличении соотношения доз ТФ+АК получено многократное увеличение эффективности, достигшее достоверной значимой величины при оптимальном соотношении ТФ+АК=1 : 100. Переносимость лечения была удовлетворительной, гибели от токсичности не отмечали. При сочетании Ок+АК в дозах 100+125 противоопухолевый эффект достоверный и значимый, УПЖ=94% (р<0,05). При сочетании Эф+АК в дозах 750+268 мг/кг противоопухолевый эффект практически отсутствует, УПЖ=3. Переносимость лечения в обеих парах была удовлетворительной, гибели от токсичности не отмечали. Таким образом, увеличение соотношения агентов в паре ТФ+АК приводит к увеличению эффективности лечения, оптимальной было соотношение 1 : 100 при дозах 25+550 мг/кг.
При использовании Ок в фиксированном соотношении с АК получены сравнимые с ТФ+АК результаты по эффективности. Эф в фиксированном дозовом соотношении с АК был практически неэффективен. Для второго опыта были отобраны эффективные сочетания препаратов с целью воспроизведения и развития эффекта.
Для сочетания ТФ+АК были использованы большие соотношения доз, вплоть до 1 : 200, кратность соотношения доз была 1 : 10.
Во второй серии экспериментов оценена воспроизводимость полученных эффектов. Показано (табл. 2), что при сочетании ТФ+АК в соотношении 1: 10 противоопухолевый эффект минимальный, УПЖ=13 %. Увеличение соотношения до 1 : 100 привело к повышению эффективности в 6,8 раза, т.е. УПЖ=88 %. Дальнейшее увеличение соотношения до 1 : 200 привело к отрицательному результату: у всех мышей развился серозный плеврит как следствие токсического действия биологически активного начала каталитической системы на плевру. В результате серозного плеврита мыши пали на 5-6 сутки.
Резкое ухудшение переносимости ТФ+АК при увеличении дозы АК до 1100 мг/кг расценено как следствие передозировки восстановителя и чрезмерной цитотоксической реакции в плевральной полости.
Таблица 1
Эффективность различных катализаторов окисления аскорбиновой кислоты в сочетаниях с АК на модели опухолевого плеврита ELD (опыт 1)____
Группа(n=5) Сочетание с АК Доза СПЖ*, дни УПЖ, %
Контроль Физ. раствор 0,4 мл 6,6±1,1 [5,5-7,7] -
ТФ+АК 1 : 25 25+138 мг/кг 7,4±2,75 [4,65-10,15] 12
ТФ+АК 1 : 50 25+275 мг/кг 11,8±6,6 [5,2-18,4] 91
ТФ+АК 1 : 100 25+550 мг/кг 16,8±6,6 [10,2-23,4] 155*
Эфитер+АК - 750+268 мг/кг 6,8±1,65 [5,15-8,45] 3
Оксикобаламин+АК - 100+125 мг/кг 11,8±2,2 [9,6-14] 94*
*средняя арифметическая с 95 %-ным ДИ
Таблица 2
Эффективность различных катализаторов окисления аскорбиновой кислоты в сочетаниях с АК на модели опухолевого плеврита ELD (опыт 2)____
Группа Сочетание с АК Доза СПЖ*, дни Т/С, %
Контроль(n=6) Физ. раствор 0,4 мл 6,0±1,3 [4,7-7,3] 100
ТФ+АК (n=5) 1 : 10 25+55 мг/кг 6,8±3,9 [2,9-10,7] 113
ТФ+АК (n=6) 1 : 100 25+550 мг/кг 11,2±6,9 [4,3-18,1] 188
ТФ+АК (n=5) 1 : 200 25+1100 мг/кг 5,4 серозный плеврит 90
*средняя арифметическая с 95 %-ным ДИ
Таблица 3
Эффективность различных катализаторов окисления аскорбиновой кислоты в сочетаниях с АК на модели опухолевого плеврита ELD____
Группа Доза СПЖ*, дни УПЖ, %
Контроль(n=6) 0,4 мл 6,0±1,3 [4,7-7,3] -
Оксикобаламин+АК (n=5) 100+125 мг/кг 12,4±7,2 [5,3-19,6] 107
Оксикобаламин+АК (n=6) 100+250 мг/кг 16,0±6,9 [9,1-22,9] 168*
Оксикобаламин+АК (n=5) 200+250 мг/кг 16,8±5,5 [11,3-22,3] 180*
*средняя арифметическая с 95 %-ным ДИ
Таблица 4
Эффективность плевросклерозирующего действия (плевродез) каталитической системой - ТФ в увеличенных соотношениях с АК
Дозы ТФ+АК Молярное соотношение Эффективность плевродеза, баллы (0-5)
25+55 мг/кг 1 : 10 0
25+275 мг/кг 1 : 50 3
25+550 мг/кг 1 : 100 5
*75+165 мг/кг 1 : 10 5
*Исторический конт] золь [2; 7]
Таблица 5
Величины расчетных токсических доз ТФ+АК в соотношениях от 1 : 150 до 1 : 300
Токсическая доза Величина (мг/кг) с 95 %-ным ДИ
ЛД50 1463 [1237 -1688]мг/кг
МПД (ЛД10) 1002[910 - 1102] мг/кг
ЛД16 1103 мг/кг
ЛД84 1822 мг/кг
ЛД100 2002 мг/кг
Таблица 6
Терапевтический индекс каталитической пары при фиксированной дозе ТФ и увеличенной дозе АК
ТФ+АК (1 : 100) 1,82
ТФ+АК (1 : 10) 1,26
Тетрациклин 1,24
Пробит-анализ
♦ Аскорбиновая кислота + терафтал
Рис. Пробит-анализ зависимости падежа мышей от д
При применении Ок+АК в дозах 100+125 мг/кг противоопухолевый эффект высокий, УПЖ=107 % (табл. 3). Увеличение дозировок до 100+250 мг/кг привело к дальнейшему, в 1,6 раза, достоверному УПЖ=168 % (р<0,05). Изменение обеих дозировок препаратов в каталитической паре Ок+АК до 200+250 мг/кг было максимально эффективным и привело к достоверному УПЖ=180 % (р<0,05). Переносимость всех видов лечения была удовлетворительной, гибели от токсичности не было. При использовании каталитической пары Ок+АК в дозах от 100+125 до 200+250 получен высокий достоверный противоопухолевый эффект, близкий по уровню к эффекту каталитической системы ТФ+АК при соотношении 1 : 100, т.е. в дозах 25+550 мг/кг.
Таким образом, эффективность каталитической системы ТФ+АК в отношение ОП/ЕЬБ проявляется увеличением выживаемости животных до 155 % в зависимости от величины примененных доз компонентов системы и возрастающей при увеличении молярного соотношения до 1 : 100. Каталитическая система Ок+АК в дозах (100-200)+(125-250) мг/кг проявляет высокий противоопухолевый эффект с увеличением продолжительности жизни мышей до 180 %, т.е. практически на уровне эффекта ТФ+АК при соотношении 1:100. Переносимость обеих систем удовлетворительная. Каталитическая система Эф+АК не влияет на ОП у мышей. Полученные данные послужили основанием для изучения одной из эффективных каталитических пар на способность индуцировать плевродез.
Индукция плевродеза
с использованием
каталитической системы ТФ+АК
При в/пл введении ТФ+АК в дозах 25+55 мг/кг (молярное соотношение 1 : 10) (табл. 4) плев-розеда не получено, «0 баллов». При дозах 25+275 мг/кг (молярное соотношение 1:50) получено склерозирование плевральной полости на «3 балла». При дозах 25+550 мг/кг (молярное соотношение 1 : 100) получен плевродез, склерозирование «5 баллов». Переносимость схемы при всех соотношениях была удовлетворительной, характерных для болевого плевропульмонального шока явлений не наблюдали, гибели мышей от токсичности не отмечали. При применении схемы с соотношением компонентов 1 : 100 у мышей в течение суток наблюдали увеличение дыхательных экскурсий грудной клетки и уменьшение подвижности.
аскорбиновой кислоты и терафтала.
При в/пл введении мышам ТФ+АК в дозах 25+550 мг/кг (молярное соотношение 1 : 100) получен плевродез при удовлетворительной переносимости воздействия с явлениями умеренной кратковременной локальной болезненности. Сравнение полученных результатов с данными при дозах 75+165 мг/кг (молярное соотношение 1 : 10) показало идентичность плевросклерозирующего действия. Таким образом, использование каталитической системы ТФ+АК в увеличенном соотношении с аскорбиновой кислотой дает преимущество в виде существенного 3-кратного уменьшения дозы ТФ для достижения лечебного эффекта.
Оценка терапевтического индекса каталитических систем при в/пл введении Исследования показали, что при в/пл введении мышам ТФ+АК при фиксированной дозе ТФ 25 мг/кг и АК в дозах 825 или 962 мг/кг (молярные соотношения 1 : 150 и 1 : 175) гибели в группах из 6 мышей каждая не зарегистрировано. При фиксированной дозе ТФ 25 мг/кг и АК в дозе 1238 мг/кг (молярное соотношение 1 : 225) пали 2 из 20 мышей, при дозе 1375 мг/кг (молярное соотношение 1 : 250) пали 3 из 6 мышей, а при дозе 1650 мг/кг (молярное соотношение 1 : 250) пали 4 из 6 мышей. Расчет токсических доз, выполненных по результатам опыта, показал (рис. и табл. 5), что для ТФ+АК с фиксированной дозой ТФ и увеличенной дозой АК величина среднесмертельной дозы составляет 25+1463 мг/кг. В данной паре максимально переносимыми дозами являются 25+1002 мг/кг, что по сравнению с эффективной дозировкой для ОП и плевродеза в 1,8 раза больше.
Таким образом, проведенные исследования дали возможность рассчитать терапевтический индекс каталитической системы ТФ+АК при увеличенных соотношениях с АК.
Рассчитанный по соотношению максимально переносимой и эффективной плевросклерозирую-щей дозы АК в каталитической паре с фиксированной дозой ТФ ТИ=1,82 (табл. 6).
При сравнении с каталитической парой при соотношении 1 : 10, где ТИ=1,26, видно, что терапевтическая широта выросла почти в 1,5 раза. Это означает, что при фиксированной относительно невысокой терапевтической дозе ТФ увеличение дозы АК не только не влечет за собой ухудшения переносимости воздействия, но и расширяет терапевтические возможности каталитической системы.
Заключение
Экспериментальное изучение эффективности каталитических систем, в которых в качестве катализаторов выступают ТФ, Ок и Эф, а восстановителем - АК, на экспериментальных моделях опухолевых плевритов и плевродеза с оценкой «острой» токсичности показало, что перспективны для клинического изучения ТФ+АК и ОК+АК.
Эфитер в каталитической паре с АК в использованных дозировках не дает значимого противоопухолевого эффекта на экспериментальной модели ОП. Пара ТФ+АК эффективно индуцирует плевродез с полной облитерацией плевральной полости без признаков плевропульмонального шока. Лучшие терапевтические характеристики ТФ+АК имеет при молярном соотношении компонентов 1 : 100, ТИ улучшается почти в 1,5 раза.
Литература
1. Андронова Н.В. Моделирование и лечение опухолевого плеврита на мышах. Автореферат канд. дисс. - М., 1996. - 24 с.
2. Андронова Н.В., Трещалин И.Д., Трещалина Е.М., Герасимова Г.К. Противоопухолевое и склерозирующее действие каталитической системы терафтал+аскорбиновая кислота // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 1. - С. 13.
3. Андронова Н.В., Трещалина Е.М., Сыркин А.Б. Моделирование опухолевого плеврита на мышах // Вестник ОНЦ АМН России. - 1993. - Вып. 1. - С. 10-3.
4. Андронова Н.В., Трещалина Е.М., Сыркин А.Б. Модель опухолевого плеврита для скрининга // Материалы 1 Съезда Онкологов стран СНГ. - Москва, 1996. - ч.1. - С. 50.
5. Андронова Н.В., Трещалина Е.М., Сыркин А.Б. Модель плевродеза на мышах для отбора склерозирующих веществ // III Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». - Москва, 1996. - ч.1. - С. 6б.
6. Андронова Н.В., Трещалина Е.М., Сыркин А.Б. и др. Сравнительная оценка склерозирующего и токсического действия нового противоопухолевого препарата ЛХТА-3 // Сб. «Химиотерапия опухолей в СССР». -1993. - Вып. 60. - С. 109-15.
7. Бутенин А.В., Ворожцов Г.Н., Золотавкина Ю.Б. и др. Способ подавления роста опухолей. Патент РФ № 2376999. - 2009.
8. Ворожцов Г.Н.; Калиниченко А.Н.; Лужков Ю.М. и др. Эфиры окта-4,5-карбоновой кислоты фталоцианина кобальта, их комплексы включения с пропиленгликолевым эфиром ß-циклодекстрина и способ подавления опухолевого роста. Патент РФ № 2172319. - 2001.
9. Кульбачевская Н.Ю. Токсикологическая характеристика бинарной каталитической системы терафтал+аскорбиновая кислота (клинико-экспериментальное исследование). - Канд. дисс. - 2008. -180 с.
10. Панкратов А.А. Противоопухолевая эффективность и токсичность бинарных каталитических систем на основе металлокомплексов кобальта: Экспериментальное исследование. - Канд. дисс. - 2002. -164 с.
11. Трещалина Е.М. Рациональные подходы к изучению противоопухолевой активности веществ природного происхождения. Автореферат докт. дисс. - М., 2002. - 25 с.
12. Трещалина Е.М. Противоопухолевая активность веществ природного происхождения. - М.: Изд. Практическая медицина, 2005. - 272 с.
13. Трещалина Е.М., Андронова Н.В. Новые модели, созданные в ОНЦ для целей экспериментальной химиотерапии. В юбилейном сборнике «Этюды химиотерапии» под ред. В.А.Горбуновой. - М., 2000. - С. 122-7.
14. Трещалина Е.М., Андронова Н.В., Кобляков В.А., Райхлин Н.Т. Новые модели для экспериментальной химиотерапии опухолей // Вопросы онкологии. - 2001. - Т. 47, № 6. - С. 701-6.
15. Трещалина Е.М., Андронова Н.В., Михайлова Л.М., Бычков М.Б. Эффективность циклоплатама при внутри-плевральном введении // Материалы 1 Съезда Онкологов стран СНГ, Москва, 1996. - ч. 1. - С. 167.
16. Трещалина Е.М., Андронова Н.В., Сыркин А.Б. Использование побочного эффекта циклоплатама при опухолевом плеврите // Тезисы докладов. III Российский национальный Конгресс «Человек и лекарство», Москва, 1996. - С. 292.
17. Трещалина Е.М., Андронова Н.В., Сыркин А.Б., Трещалин И.Д. Противоопухолевое и склерозирующее действие ханерола и мекатрима при внутриплевральном введении мышам. Сб. «Химиотерапия опухолей в СССР». - 1993. - вып. 60. - С. 158-62.
18. Трещалина Е.М., Андронова Н.В., Сыркин А.Б. и др. Эффект нового противоопухолевого препарата ЛХТА-31 при внутриплеврально растущих опухолях мышей. Сб. «Химиотерапия опухолей в СССР». - 1993. -вып. 60. - С. 116-20.
19. Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К. и др. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ. - В кн.: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ/под общей ред. член-корр.РАМН проф. Р.У.Хабриева. - 2 изд. - М.: ОАО изд. «Медицина», 2005. - С. 637-51.
20. Трещалина Е.М., Полоцкий Б.Е., Андронова Н.В., Сыркин А.Б. Доксициклин в лечении опухолевого плеврита при раке легкого // Тезисы докладов IY Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 1996. - С. 296.
21. Treshalina H., Andronova N., Polotsky B., Syrkin A. Experimental malignant pleurisy in mice. Abstracts of Seventh International Congress on anti-cancer treatment. - Paris - France. - 1997. - Р. 242.
22. Чиссов В.И., Панкратов А.А., Болотина Л.В. и др. Бинарная каталитическая терапия злокачественных опухолей с использованием оксикобаламина и аскорбиновой кислоты: от эксперимента к клинике // Медико-Фармацевтический Форум. - 2003. - http://expodata.ru/~expopress/2003/mff/mff03 tez ltherop1.php
23. Чиссов В.И.., Якубовская Р.И., Кармакова Т.А. и др. Бинарные каталитические системы как новые противоопухолевые средства // Российский онкологический журнал. - 2000. - № 6. - С. 23-6.
24. Якубовская Р.И., Панкратов А.А., Чиссов В.И. и др. Разработка методов лечения злокачественных новообразований на основе фотофизических и фотохимических процессов // VII съезд онкологов России. - Сборник материалов. - ч.3. - С. 87-9.
